使用生物标志的测定法和方法

专利名称：使用生物标志的测定法和方法
技术领域：
本文所述的发明涉及用于检测可预示哺乳动物细胞对Apo2L/TRAIL和/或死亡受体激动剂抗体的敏感性的生物标志的方法和测定法。
背景技术：
本技术领域中已鉴定了多种属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族的配体和受体。这样的配体包括肿瘤坏死因子a (“TNF-a ”)、肿瘤坏死因子P (“TNF_P ”或“淋巴毒素-a ”)、淋巴毒素-P (“LT-P ”)，CD30配体，CD27配体，CD40配体，0X-40配体，4-1BB配体，LIGHT, Apo-I配体(也称Fas配体或CD95配体)，Apo-2配体(也称Apo2L或TRAIL)，Apo-3 配体(也称 TWEAK)，APRIL, OPG 配体(也称 RANK 配体，ODF，或 TRANCE)，和 TALL-I (也称 BlyS，BAFF 或 THANK)(参考例如 Ashkenazi，Nature Review,2:420-430 (2002)；Ashkenazi 和Dixit, Science, 281:1305-1308 (1998) ；Ashkenazi Dixit, Curr. Opin. CellBiol. ,11:255-260 (2000) ；Golstein, Curr.Biol. ,7:750-753(1997)ffallach, CytokineReference, Academic Press, 2000, 377-411 页:Locksley 等人，Cell, 104:487-501 (2001)；Gruss 和 Dower, Blood, 85: 3378-3404 (1995) ；Schmid 等人，Proc. Natl. Acad. Sci.,83:1881 (1986) ；Dealtry 等人，Eur. J. Immunol. , 17:689 (1987) ；Pitti 等人，J. Biol.Chem. ,271 :12687-12690(1996) ；ffiley 等人，Immunity,3:673-682 (1995) ；Browning 等人，Cell, 72:847-856 (1993) ;Armitage 等人 Nature，357:80-82 (1992);公开于 1997 年 I月 16 日的 W 97/01633 ;公开于 1997 年 7 月 17 日的 TO97/25428，Marsters 等人，Curr.Biol. ,8:525-528(1998) ；Chicheportiche 等人，Biol. Chem.，272:32401-32410 (1997)；Hahne 等人，J. Exp. Med.，188:1185-1190 (1998) ；1998 年7 月 2 日公开的 W098/28426 ；
1998年 10 月 22 日公开的 TO98/46751 ；1998 年5 月 7 日公开的 TO/98/18921 ；Moore等人，Science, 285: 260-263 (1999) ；Shu 等人，J. Leukocyte Biol.，65:680 (1999)；Schneider 等人，J. Exp. Med.，189:1747-1756 (1999) ；Mukhopadhyay 等人，J. Biol. Chem.，274:15978-15981(1999))。由这样的TNF家族配体所介导的多种细胞应答的诱导，典型地是由它们与特定的细胞受体的结合所引发的。某些，但不是所有的TNF家族配体结合细胞表面的“死亡受体”并通过其诱发多种生物活性，以活化胱天蛋白酶(caspases)或执行细胞死亡或凋亡途径的酶(Salvesen等人，Cell, 91:443-446 (1997))。目前已鉴定的TNF受体超家族成员包 TNFRl, TNFR2, TACI, GITR, CD27, 0X-40，CD30, CD40, HVEM, Fas (也称 Apo-I 或 CD95)，DR4(也称 TRAIL-R1)，DR5 (也称 Apo-2 或 TRAIL-R2)，DcRl, DcR2,护骨蛋白(OPG)，RANK和 Apo-3 (也称 DR3 或 TRAMP)(参见例如，Ashkenazi, Nature Reviews, 2:420-430 (2002)；Ashkenazi 和 Dixit, Science, 281:1305-1308 (1998) ；Ashkenazi 和 Dixit, Curr. Opin. CellBiol. ,11:255-260 (2000) ；Golstein, Curr. Biol. ,7:750-753(1997)Wallach, CytokineReference, Academic Press, 2000, 377-411 页；Locksley 等人，Cell, 104:487-501 (2001)；Gruss 和 Dower, Blood, 85: 3378-3404 (1995) ；Hohman 等人，I. Biol. Chem.,264:14927-14934(1989)出rockhaus 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. ,87:3127-3131 (1990)；1991年 3 月 20 日公开的 EP 417. 563 Loetscher 等人，Cell, 61:351 (1990) ;Schall 等人，Cell,61:361(1990) ；Smith 等人，Science, 248:1019-1023 (1990) :Lewis 等人，Proc. Natl.Acad. Sci. ,88:2830-2834(1991) ；Goodwin 等人，Mol. Cell. Biol. , 11:3020-3026(1991)；Stamenkovic 等人，EMBO T. , 8 : 1403-1410 (1989) Mallett 等人,EMBO T.,9:1063-1068(1990) ；Anderson 等人，Nature,390:175-179(1997) ；Chicheportiche 等人，T. Biol. Chem. , 272:32401-32410 (1997) ；Pan 等人，Science, 276:111-113 (1997)；Pan 等人，Science,277:815-818(1997) ；Sheridan 等人，Science,277:818-821(1997)；
Degli-Esposti 等人，I. Exp. Med. ,186:1165-1170 (1997) ；Marsters 等人，Curr. Biol.,7:1003-1006(1997) ;Tsuda 等人，BBRC, 234:137-142 (1997) ；Nocentini 等人，Proc. Natl.Acad. Sci. , 94:6216-6221 (1997) ；vonBulow 等人，Science, 278:138-141 (1997))。上述的TNF受体家族成员大部分具有共同的细胞表面受体典型结构,包括胞外、跨膜和胞内区，而其它的成员则天然地作为缺少跨膜和胞内区的可溶性蛋白出现。典型的TNFR的胞外部分含有从NH2末端开始的多个富半胱氨酸域(CRD)的重复氨基酸序列模式。称为Apo_2L或TRAIL的配体是在数年前作为TNF细胞因子家族的成员被鉴定的(参见例如，Wiley 等人，Immunity, 3:673-682 (1995) ；Pitti 等人，J. Biol. Chem.，271:12697-12690(1996) ；W0 97/01633 ；W0 97/25428 ; 1998 年 6 月 9 日授权的美国专利5，763，223 ;2001年9月4日授权的美国专利6，284，236)。全长天然序列的人Apo2L/TRAIL多肽是281个氨基酸长的II型跨膜蛋白。某些细胞通过酶切割这种多肽的胞外区(Mariani等人，J. Cell. Biol.，137:221-229 (1997))可以产生天然可溶形式的该多肽。对可溶形式的Apo2L/TRAIL的晶体学研究揭示了与TNF和其它相关蛋白的结构类似的同源三聚体结构的存在(Hymowitz 等人，Molec. Cell,4:563-571 (1999) ;Cha 等人，Immunity,11:253-261(1999) ；MongkoIsapaya 等人，Nature StructuralBiology,6:1048(1999)；Hymowitz 等人，Biochemistry, 39:633-644 (2000))。但是与其它 TNF 家族成员不同，Apo2L/TRAIL被发现具有独特的结构特征，即三个半胱氨酸残基(在同源三聚体中每个亚基的第230位)共同与一个锌原子配位，且锌结合对三聚体的稳定性和生物活性是重要的(Hymowitz 等人，同上；Bodmer 等人，J. Biol. Chem.，275:20632-20637 (2000))。文献中已经报道，Apo2L/TRAIL可能在免疫系统调节，包括自身免疫疾病例如类风湿性关节炎中起作用[参见例如，Thomas等人，J. Immunol.，161:2195-2200 (1998)；Johnsen 等人，Cytokine, 11:664-672 (1999) ；Griffith 等人，J. Exp. Med.，189:1343-1353(1999) ;Song 等人，J. Exp. Med.，191:1095-1103 (2000)]。可溶性形式的Apo2L/TRAIL也被报道在多种癌细胞中，包括结肠、肺、乳腺、前列腺、膀胱、肾、卵巢和脑肿瘤，以及黑色素瘤、白血病和多发性骨髓瘤中诱导凋亡(参见例如，Wiley等人，同上；Pitti等人，同上;2000年2月29日授权的美国专利6，030，945 ；2004年 6 月 8 日授权的美国专利 6，746，668 ;Rieger 等人，FEBS Letters, 427:124-128 (1998)；Ashkenazi 等人，J. Clin. Invest. , 104:155-162 (1999) ；ffalczak 等人，Nature Med.,5:157-163 (1999) ；Keane 等人，Cancer Research,59:734-741 (1999) ；Mizutani 等人，Clin.Cancer Res. ，5:2605-2612(1999) ；Gazitt, Leukemia,13:1817-1824(1999) ；Yu等人，Cancer Res. , 60:2384-2389 (2000) ；Chinnaiyan 等人，Proc. Natl. Acad. Sci.,97:1754-1759 (2000) ) 0在鼠肿瘤模型中进行的体内研究进一步提示，Apo2L/TRAIL单独地或与化学治疗或放射治疗组合使用时可产生显著的抗肿瘤作用(参见例如，Ashkenazi等人，同上；ffalzcak 等人，同上；Gliniak 等人，Cancer Res. , 59:6153-6158 (1999)；Chinnaiyan 等人，同上；Roth 等人，Biochem. Biophys. Res. Comm.，265:1999 (1999) ；PCT 申请US/00/15512 ；PCT申请US/01/23691)。与多种肿瘤细胞相反，大多数正常的人细胞种类似乎对某些重组形式的Apo2L/TRAIL的凋亡诱导具有抗性(Ashkenazi等人，同上；Walzcak等人，同上)。Jo等人报道，一种带多组氨酸标签的可溶形式的Apo2L/TRAIL在体外诱导了正常的分离的人类而不是非人类肝细胞的凋亡(Jo等人，Nature Med.，6:564-567 (2000)；另参见 Nagata，Nature Med.，6:502-503 (2000))。人们认为特定的重组 Apo2L/TRAIL 制备物在生化性质或相对正常细胞对疾病细胞的生物活性方面可能有变化，这依赖于例如标签分子的存在或缺失，锌含量，和％三聚体含量(参见，Lawrence等人，NatureMed.,Letter to the Editor, 7:383-385 (2001) ;Qin等人，Nature Med. , Letterto the Editor,7:385-386(2001))。已经发现Apo2L/TRAIL与至少5种不同的受体结合。结合Apo2L/TRAIL的受体中的至少两种含有功能性的胞质死亡域(death domain)。一种这样的受体被称为“DR4”(或者 TR4 或TRAIL-R1) (Pan 等人，Science, 276:111-113 (1997);另见 1998 年 7 月 30 日公开的W098/32856 ; 1999 年 7 月 29 日公开的 TO99/37684 ;2000 年 12 月 7 日公开的 WO 00/73349 ；2002年8月13日授权的US6, 433，147 ；2002年10月8日授权的US6, 461，823，和2002年I 月 29 日授权的 US6，342，383)。另一种这样的Apo2L/TRAIL受体被称为DR5 (其也被称为Apo_2 ；TRAIL-R或 TRAIL-R2，TR6, Tango-63, hAP08, TRICK2 或 KILLER)(参见例如,Sheridan 等人，Science,277:818-821 (1997), Pan 等人，Science,277:815-818(1997)，1998 年 11 月19 日公开的 W098/51793 ；1998 年 9 月 24 日公开的 W098/41629 ；Screaton 等人，Curr.Biol. ,7:693-696(1997) ;Walczak 等人，EMBO I. ,16:5386-5387(1997) :Wu 等人，NatureGenetics, 17:141-143(1997) ;1998年8月 20 日公开的TO98/35986 ;1998年 10月 14 日公开的 EP870，827 ; 1998 年 10 月 22 日公开的 TO98/46643 ; 1999 年 I 月 21 日公开的 TO99/02653 ；
1999年 2 月 25 日公开的 W099/09165 ; 1999 年 3 月 11 日公开的 W099/11791 ;2002 年 8 月 13日公开的 US 2002/0072091 ；2001 年 12 月 7 日公开的 US 2002/0098550 ；2001 年 12 月 6 日授权的US6, 313，269 ;2001年8月2日公开的US 2001/0010924 ；2003年7月3日公开的US2003/01255540 ；2002 年 10 月 31 日公开的 US 2002/0160446, 2002 年 4 月 25 日公开的 US2002/0048785 ；2002 年 2 月授权的 US 6，342，369 ；2003 年 5 月 27 日授权的 US 6，569，642，
2000年 6 月 6 日授权的 US 6，072，047，2003 年 11 月 4 日授权的 US 6，642，358 ;2004 年 6月I日授权的IS 6，743，625)。和DR4类似，DR5被报道含有胞质死亡域，并能够在结合配体时(或结合模拟该配体的活性的分子，例如激动剂抗体(agonist antibody)时)传递凋亡信号。Hymowitz 等人，Molecular Cell,4:563-571 (1999)描述了 Apo_2L/TRAIL 和 DR5 之间形成的复合物的晶体结构。在配体结合时，DR4和DR5都可独立地通过称为FADD/Mortl的含死亡域的衔接分子募集并活化凋亡起始因子(apoptosis initiator)胱天蛋白酶_8，从而引发凋亡[Kischkel 等人，Tmmunitv,12:611-620(2000) ；Sprick 等人，Tmmunitv,12:599-609(2000) :Bodmer 等人，Nature Cell Biol. ,2:241-243 (2000) ] 据报道Apo2L/TRAIL还结合被称为DcRl，DcR2和OPG的受体，这些受体被认为起信号传递的抑制物而非转导物(transducers )的作用(参见例如DCRl (也称 TRID，LIT 或 TRAIL-R3)[Pan 等人，Science,276:111-113(1997) ；Sheridan 等人，Science,277:818-821 (1997) ；McFarlane 等人，T. Biol. Chem. ,272:25417-25420(1997)；Schneider 等人，FEBS Letters, 416:329-334 (1997) ;Degli_Esposti 等人，I. Exp. Med.,186:1165-1170(1997)；及 Mongkolsapaya 等人，T. Immunol. , 160:3-6(1998) ；DCR2 (又 称 TRUNDD 或 TRAIL-R4) [Marsters 等人，Curr. Biol. ,7:1003-1006(1997) ；Pan 等人，FEBS Letters,424:41-45(1998) ；Degli-Esposti 等人，Immunity, 7:813-820 (1997) I,和OPG [Simonet等人，同hi。与DR4和DR5相反，DcRl和DcR2受体不传递凋亡信号。文献中报道了某些结合DR4和/或DR5受体的抗体。例如，针对DR4受体且在某些哺乳动物细胞中具有激动或凋亡活性的抗DR4抗体在例如1999年7月29日公开的W99/37684 ；2000 年 7 月 12 日公开的 TO00/73349 ；2000 年 7 月 12 日公开的 W 03/066661中有记载。还参见例如 Griff ith 等人,T. TmMinoI. , 162:2597-2605 (1999) ； Chuntharapai等人，I. Immunol. ,166:4891-4898(2001) ;2002 年 12 月 2 日公开的 WO 02/097033 ；2003年5月22日公开的WO 03/042367 ；2003年5月8日公开的W003/038043 ；2003年5月8日公开的WO 03/037913。同样，某些抗DR5抗体也已被描述，参见例如，1998年11月8日公开的 WO 98/51793 !Griffith 等人，I. Immunol. , 162:2597-2605 (1999) ;Ichikawa 等人，Nature Med. , 7:954-960 (2001) ;Hylander 等人,“An Antibody to DR5 (TRAIL-receptor2)Suppresses the Growth of Patient Derived Gastrointestinal Tumors Grown inSCIDmice，，,摘要，2d International Congress on Monoclonal Antibodies inCancers, 2002年8月29日至9月I日，Banff, Alberta,加拿大；2003年5月8日公开的WO 03/038043 ；2003年5月8日公开的WO 03/037913。另外，还描述了某些与DR4和DR5受体有交叉反应性的抗体(参见例如，2001年6月26日授权的美国专利6，252，050)。某些哺乳动物细胞的瘤性转化在特定情况下与唾液酰Lewis A和唾液酰LewisX抗原的表达的特征性改变相关联。相对高量的唾液酰Lewis A/X在例如某些人类结肠、胰腺和胃的腺癌中出现，而且使用针对这些抗原上的糖结构的抗体的测定法已经被用作胰腺和胃肠癌的检测手段(参见例如，Ugorski等人，Acta Biochimica Polonica,49:2:303-311 (2002) )0这些糖类肿瘤标志的表达水平也已经和临床结果、患者存活时间和转移性疾病的指标相互关联起来。唾液酰Lewis A和唾液酰Lewis X都已被证明与一类糖结合蛋白家族结合,这类蛋白称为选择素，与细胞从血流外渗有关。一些报道提出唾液酰Lewis A和X是E-选择素的配体，而且可能负责人癌细胞对内皮的黏着。呈现于癌细胞表面的唾液酸化Lewis结构被糖蛋白和糖脂的糖链所携带，并与呈现于内皮细胞上的E-选择素结合。因此，选择素及其糖配体可能在转移过程中的肿瘤细胞的选择性归巢(homing)中起重要作用。唾液酰Lewis A和X的生物合成被认为依赖于细胞类型特异性和发育阶段特异性的酶将岩藻糖从鸟苷二磷酸-岩藻糖(GDP-Fuc)通过a (1,3)和a (1,4)键最终添加到唾液酸化的前体上，该步骤被a -I, 3/1，4-岩藻糖基转移酶(a -I, 3/1，4Fuc_T，FUT)所催化。目前已经克隆和定性了数种岩藻糖基转移酶基因。这些基因(FUT 3-7)和它们的酶产物(Fuc-TIII-VII)的表达似乎是组织特异性的。由这5种基因编码的酶名为FUTIIL FUTIV，FUTV，FUTVI 和 FUTVII。编码 FUTIII，FUTV 和 FUTVI 的三个基因位于染色体19pl3.3上邻近的物理位置。生化和分子克隆研究提示，唾液酰Lewis A/X部分的谱系特异性(lineage-specific)的表达是由a-1，3_岩藻糖基转移酶基因的谱系特异性的表达所决定的，这些基因的酶产物作用于组成性地表达的寡糖前体以产生定位于表面的(surface-localized)唾液酰Lewis A/X决定簇(determinants)。负责上皮组织中的 活性的人岩藻糖基转移酶是FUT3和FUT6。FUT3[又称Lewis a -(1，3/1，4)岩藻糖基转移酶基因]和FUT6[血浆a-(l，3)岩藻糖基转移酶基因]的转录物在正常和转化的组织中都存在。岩藻糖基转移酶转录物也在多种腺癌细胞系中普遍存在，其中在结肠癌中具有显著的FUT3和6的高表达(参见例如Ugorski等人，Acta Biochimica Polonica,49:303-311 (2002) ；Nakamori 等人，Pis. 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Clin. Invest. , 1999,同上；ffalczak 等人，Nature Med. , 1999，同上)是抵抗的。因此，通过进行某种测定方法检查哺乳动物组织或细胞样品的特定生物标志的表达，就可以方便和高效地得到对于评估治疗患者的合适或有效的疗法有用的信息。例如，从检测哺乳动物组织或细胞样品中的FUT3或FUT6表达的测定所得的信息，可以为内科医生提供有用的数据，这些数据可以用来为患有例如癌症等疾病的病人确定最佳的治疗方案(使用Apo2L/TRAIL或死亡受体激动剂抗体)。本发明提供预测哺乳动物组织或细胞样品(例如癌细胞)对Apo2L/TRAIL或死亡受体激动剂抗体的敏感性的方法。在某些实施方案中，所述方法包括得到哺乳动物组织或细胞样品并检查该组织或细胞的岩藻糖基转移酶3或岩藻糖基转移酶6的表达。所述方法还 包括检查该组织或细胞的其它生物标志例如唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表达。这些方法可以以多种测定模式实施，包括检测mRNA表达的测定，检测酶活性存在的酶测定，免疫组化测定和本文中描述的其它测定。确定这样的生物标志在所述组织或细胞中的表达可预示所述组织或细胞样品是否将对凋亡诱导剂例如Apo2L/TRAIL及死亡受体抗体敏感。在可选的实施方案中，还可以检查所述组织或细胞的DR4，DR5，DcRl或DcR2受体的表达。本发明的其它方法包括在哺乳动物组织或细胞样品中诱导凋亡的方法，其包括下列步骤得到哺乳动物组织或细胞样品，检查该组织或细胞的一种或多种生物标志，例如岩藻糖基转移酶3，岩藻糖基转移酶6，唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的表达，并且一旦确定了所述组织或细胞样品表达所述一种或多种生物标志，则使组织或细胞样品暴露于有效量的Apo2L/TRAIL或死亡受体激动剂抗体。检查一种或多种生物标志的表达的方法中的步骤可以以多种测定模式进行，包括检测mRNA表达的测定，检测酶活性存在的酶测定，和免疫组化测定。在可选的实施方案中，所述方法还包括检查组织或细胞样品的DR4，DR5, DcRl,或DcR2受体的表达。任选地,所述组织或细胞样品包括癌组织或细胞。本发明的其它方法包括治疗哺乳动物中的疾病，例如免疫相关的疾病或癌症的方法，包括下列步骤得到哺乳动物组织或细胞样品，检查该组织或细胞的一种或多种生物标志，例如岩藻糖基转移酶3,岩藻糖基转移酶6,唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表达，并且一旦确定了所述组织或细胞样品表达所述一种或多种生物标志，则对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL或死亡受体激动剂抗体。检查一种或多种生物标志的表达的方法中的步骤可以以多种测定模式进行，包括检测mRNA表达的测定，检测酶活性存在的酶测定，和免疫组化测定。在可选的实施方案中，所述方法还包括检查组织或细胞样品的DR4，DR5，DcRl，或DcR2受体的表达。任选地，这些方法包括治疗哺乳动物中的癌症。任选地，所述方法除了施用有效量的Apo2L/TRAIL和/或死亡受体激动剂抗体以外，还包括对所述哺乳动物施用化学治疗剂或放射治疗。进一步的实施方案由下面的权利要求更具体地公开 I.预测哺乳动物组织或细胞样品对Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步骤得到哺乳动物组织或细胞样品；检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，其中，所述一种或多种生物标志的表达预示所述组织或细胞样品对Apo2L/TRAIL的凋亡诱导活性敏感。2.权利要求I的方法,其中所述一种或多种生物标志的表达是通过检测岩藻糖基转移酶3或岩藻糖基转移酶6的mRNA表达来检查的。3.权利要求I的方法，其中所述一种或多种生物标志的表达是通过免疫组化检测唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表达来检查的。4.权利要求I的方法，还包括检查所述组织或细胞样品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受体的表达的步骤。5.权利要求I的方法，其中组织或细胞样品包括癌组织或细胞。6.权利要求5的方法，其中所述癌细胞是结肠、结肠直肠、胃肠或胰腺的癌细胞或组织。7.在哺乳动物组织或细胞样品中诱导凋亡的方法，包括下列步骤得到哺乳动物组织或细胞样品；检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达,及检测到所述一种或多种生物标志的表达后，使所述组织或细胞样品暴露于有效量的 Apo2L/TRAIL。8.权利要求7的方法，其中所述一种或多种生物标志的表达是通过检测岩藻糖基转移酶3或岩藻糖基转移酶6的mRNA表达来检查的。9.权利要求7的方法，其中所述一种或多种生物标志的表达是通过免疫组化检测唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表达来检查的。10.权利要求7的方法，还包括检查所述组织或细胞样品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受体的表达的步骤。11.权利要求7的方法，其中组织或细胞样品包括癌组织或细胞。12.权利要求11的方法，其中所述癌细胞是结肠、结肠直肠、胃肠或胰腺的癌细胞或组织。13.权利要求7的方法，其中所述细胞被暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽，该Apo2L/TRAIL 多肽包括图 I (SEQ ID NO: I)的氨基酸 114-281。14.治疗哺乳动物中的疾病，例如免疫相关疾病或癌症的方法，包括下列步骤得到所述哺乳动物的组织或细胞样品；检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达,及检测到所述一种或多种生物标志的表达后，对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL。15.权利要求14的方法，其中所述一种或多种生物标志的表达是通过检测岩藻糖基转移酶3或岩藻糖基转移酶6的mRNA表达来检查的。16.权利要求14的方法，其中所述一种或多种生物标志的表达是通过免疫组化检测唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表达来检查的。17.权利要求14的方法，还包括检查所述组织或细胞样品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受体的表达的步骤。18.权利要求14的方法，其中组织或细胞样品包括癌组织或细胞。19.权利要求18的方法，其中所述癌细胞或组织包含结肠、结肠直肠、胃肠或胰腺的癌细胞或组织。20.权利要求14的方法，其中对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL多肽，该Apo2L/TRAIL 多肽包括图 I (SEQ ID NO: I)的氨基酸 114-281。21.权利要求14的方法，其中还对所述哺乳动物施用化学治疗剂或放射疗法。22.权利要求14的方法，其中还对所述哺乳动物施用细胞因子、细胞毒剂或生长抑制剂。23.权利要求7的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽连接于聚乙二醇分子。24.权利要求14的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽连接于聚乙二醇分子。25.权利要求6的方法，其中所述癌细胞是结肠或结肠直肠癌细胞。26.权利要求I的方法，其中所述Apo2L/TRAIL是包含图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281的多肽，或其生物活性片段。27.权利要求26的方法，其中所述Apo2L/TRAIL是包括图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸114-281的多肽。28.权利要求12的方法，其中所述癌细胞是结肠或结肠直肠癌细胞。29.权利要求20的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽由图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸114-281组成。30.预测哺乳动物的结肠或结肠直肠癌细胞对Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步骤得到哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞；
检查所述癌细胞以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，其中所述一种或多种生物标志的表达预示所述癌细胞对Apo2L/TRAIL的凋亡诱导活性敏感。31.在哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞中诱导凋亡的方法，包括下列步骤得到哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞；检查所述癌细胞以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，及在检测所述一种或多种生物标志表达后，将所述癌细胞暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽。
32.权利要求31的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281，或其具有凋亡活性的片段。33.权利要求32的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽连接于聚乙二醇分子。34.权利要求32的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸 114-281。35.治疗哺乳动物中结肠或结肠直肠的癌症的方法，包括下列步骤得到所述哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞样品；检查所述癌细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达,及在检测所述一种或多种生物标志表达后，对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL。36.权利要求35的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281，或其具有凋亡活性的片段。37.权利要求36的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽连接于聚乙二醇分子。38.权利要求36的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括图I (SEQ IDNO: I)的氨基酸 114-281。


图I显示人Apo-2配体cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO: 2)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: I).第447位核苷酸处的“N”表示该核苷酸碱基可以是“T”或“G”。图2A和2B显示全长人DR4cDNA的核苷酸序列(SEQ ID N0:4)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:3)。Pan等人，Science, 276: 111 (1997)中也分别报道了人DR4的核苷酸
和氨基酸序列。图3A显示如1998年11月19日的WO 98/51793所公开的人DR5的411个氨基酸的序列(SEQ ID N0:5)。人DR5的转录剪接变体是本领域已知的。该DR5剪接变体编码图3B和3C所示的人DR5的440个氨基酸的序列(SEQID N0:6)，如1998年8月20日的WO98/35986所公开的。图3D-l、3D-2和3D-3显示全长人DcRIcDNA的核苷酸序列(SEQ IDN0:7)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:8)。WO 98/58062中也分别描述了人DcRl (特别是其各个域)的核苷酸和氨基酸序列。
图3E-1和3E-2显示全长人DcR2cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:10)。WO 99/10484中也分别描述了人DcR2 (特别是其各个域)的
核苷酸和氨基酸序列。图4显示全长人(1，3/1，4)岩藻糖基转移酶(FUT3)cDNA的核苷酸序列(SEQ IDNO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: 12)。这些序列对应于GenBank登录号HSU27328，并在例如 Kukowska-LatalIo 等人，Genes Dev. 1990Aug ；4 (8) : 1288-303 中有记载。图5显示全长人a (1,3)岩藻糖基转移酶(FUT6) cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: 12)。这些序列对应于GenBank登录号HSU27333，并在例如 Koszdin 和 Bowen, Biochem Biophys ResCommun. 1992Aug 31 ; 187 (I) : 152-7 中有记载。图6提供分析28个结肠或结肠直肠癌细胞系对Apo2L (+0. 5%胎牛血清“FBS”或10%FBS)或DR5单克隆抗体“mab”(交联的“XL”或非交联的，+0. 5%胎牛血清“FBS”或10%FBS)的凋亡活性的敏感性或抗性，及其FUT 3、FUT 6、唾液酰Lewis A和唾液酰LewisX的表达，所得数据的汇总表。图7提供不同的结肠或结肠直肠癌细胞系对DR5抗体的抗性及由定量PCR测量的FUT3的表达的比较。图8提供不同的结肠或结肠直肠癌细胞系对DR5抗体(加上交联物)的敏感性或抗性及由FACS确定的唾液酰Lewis X或A的表达的比较。图9A显示分析不同的结肠或结肠直肠癌细胞系的敏感性或抗性与FUT3表达之间的相关性的Spearman等级相关性检验。图9B显示分析不同的结肠或结肠直肠癌细胞系的敏感性(“sens”)或抗性(“res”)的Fisher’ s Exact检验结果，和FUT3和唾液酰Lewis A/X的表达与各细胞系对DR5抗体凋亡活性的敏感性之间的统计学显著性。图10比较不同的结肠或结肠直肠癌细胞系的DcRl或DcR2受体的表达(由定量PCR确定)及特定的细胞系对Apo2L或DR5抗体的状态(敏感或抵抗)。图11比较不同的结肠或结肠直肠癌细胞系的DcRl或DcR2受体的表达(由FACS确定)及特定的细胞系对Apo2L或DR5抗体的状态(敏感或抵抗)。图12A和12B显示在4种结肠直肠细胞癌细胞系CaCo2，SW 1417，DLD_1，和Colo205中对唾液酰Lewis A和X的免疫组化染色，及其与唾液酰Lewis A和X的表达(如FACS测量的)的关联和与对Apo2L的敏感性的关联。图13是显示正常结肠粘膜、正常肝组织、原发性结肠癌和结肠癌转移的组织样品中的唾液酰Lewis A和X的表达的IHC实验的总结。发明详述本文所描述或引用的技术和程序是通常为本领域技术人员所充分理解，并使用常规的方法普遍采用的，例如被广泛使用的、由Sambrook等人，Molecular Cloning:ALaboratory Manual 第二版(1989)Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold SpringHarbor，N. Y所描述的分子克隆方法。除了另有说明的以外，涉及使用可商购的试剂盒和试剂的程序通常按照制造商给定的规程和/或参数进行，视何者适用而定。在描述本发明的方法和测定法以前，应当理解本发明不应局限于所描述的具体的方法、操作规程、细胞系、动物属或种，构建体和试剂，因为这些理所当然是可以变化的。还应当理解这里所用的术语只是为了描述具体的实施方案，并非意在限制本发明的范围，该范围仅由所附权利要求所限定。应当指出，本文中和所附的权利要求中使用的单数形式(“a”，“an”，“the”)包括复数的被指称事物，除非上下文明确地另有指示。因此，例如，“遗传改变”(“a geneticalteration”)包括多个这样的改变，而“探针”(“a probe”)包括一个或多个探针及其为本领域技术人员所知的等同物，等等。本文中提到的所有出版物在此都通过引用并入本文，以公开并描述连同这些出版物被引用的方法和/或材料。本文所引用的出版物，被引用的是其在本发明的申请日之前的公开。这里的一切都不应被理解为承认本发明人无权基于更早的优先权日期或在先的发明日期使这些出版物日期提前。另外，真实的出版日期可能和所示的不同，需要独立的核实。
定义本文的术语“Apo2L/TRAIL”、“Apo-2L”和“TRAIL”是用来指包括图I所示的氨基酸序列中的氨基酸残基114-281 (含)，95-281 (含)，残基92-281 (含)，残基91-281 (含)，残基41-281 (含)，残基15-281 (含)，或残基1-281 (含)，及上述序列的生物活性片段，缺失、插入或替代性变体。在一个实施方案中，所述多肽序列包括图I的残基114 - 281，及任选地，由图I的残基114 - 281组成。任选地，所述多肽序列包括图I的残基92-281或残基91-281。Apo-2L多肽可以由图I所示的天然核苷酸序列编码。任选地，编码图I中Proll9残基的密码子可以是“CCT”或“CCG”。在其它的实施方案中，所述片段或变体是生物活性的，且与任一上述的Apo2L/TRAIL序列具有至少约80%的氨基酸序列同一性，更优选至少约90%的同一性，更优选地，具有至少95%，96%，97%，98%，或99%的序列同一性。任选地，所述Apo2L/TRAIL多肽被在严紧条件下与图I提供的编码核苷酸序列杂交的核苷酸序列所编码。该定义涵盖Apo2L/TRAIL的替代性变体，其中它的至少一个天然氨基酸被替代为丙氨酸残基。具体的Apo2L/TRAIL的替代性变体包括至少一个氨基酸被替代为丙氨酸残基的变体。这些替代性变体包括例如标识为“D203A”、“D218A”和“D269A”的那些变体。该术语被用来标识第203、218和/或269位(使用图I所示的编号)的天冬氨酸被替代为丙氨酸残基的Apo2L/TRAIL变体。可选地，所述Apo2L/TRAIL变体可包含公开的PCT申请WO 01/00832的表I中所述的一种或多种丙氨酸替代。替代性变体包括2001年I月4日公开的WO 01/00832的表I指明的残基替代。该定义还涵盖从Apo2L/TRAIL源分离的，或通过重组或合成方法制备的天然序列的Apo2L/TRAIL。本发明的Apo2L/TRAIL包括PCT申请 TO97/01633 和 W097/25428 中公开的、称为 Apo2L/TRAIL 或 TRAIL 的多肽。术语“Apo2L/TRAIL”或“Apo2L”用来泛指Apo2L/TRAIL的形式，包括该多肽的单体、二聚体或三聚体形式。Apo2L序列中提到的所有氨基酸残基的编号都使用根据图I的编号，除非另有特别说明。例如，“D203”或“Asp203”指图I中提供的序列的第203位的天冬氨酸残基。术语“Apo2L/TRAIL胞外域”或“Apo2L/TRAIL ECD”是指 Apo2L/TRAIL 的基本上没有跨膜和胞质域的形式。通常，ECD将具有少于1%的所述跨膜和胞质域，且优选地，将具有少于0. 5%的所述域。应当理解，对本发明的多肽而言，任何被鉴定的跨膜域都是根据本领域中鉴定那种疏水域的常规标准鉴定的。跨膜域的确切边界可以是变化的，但最有可能是在最初鉴定的域的任一末端处不多于约5个氨基酸的变化。在优选的实施方案中，ECD由所述多肽的可溶性胞外域序列组成，基本上没有跨膜和胞质或胞内域(而且不是膜结合的)。具体的Apo-2L/TRAIL胞外域序列在PCT申请W097/01633和W097/25428中有描述。术语“Apo2L/TRAIL单体”或“Apo2L单体”指Apo2L的胞外域序列的共价链。术语“Apo2L/TRAIL 二聚体”或“Apo2L 二聚体”指通过二硫键共价键连接的2个Apo-2L单体。用于本文的该术语包括游离存在的Apo2L 二聚体和三聚体形式的Apo2L中的Apo2L 二聚体(即，与另一第三Apo2L单体联合)。术语“Apo2L/TRAIL 聚集体(aggregate)” 用于指自联合(self-associated)的较高级寡聚体形式的Apo2L/TRAIL，例如Apo2L/TRAIL三聚体，其形成例如六聚体和九聚体形式的Apo2L/TRAIL。使用本领域已知的方法和测定法(及使用可商购的材料),例如天然(native)大小排阻HPLC (“SEC”)、使用十二烷基硫酸钠的变性大小排阻色谱(“SDS-SEC”)，反相HPLC和毛细管电泳，可以确定Apo2L/TRAIL单体、二聚体或三聚体(及其它聚集体)的存在和数量。“Apo-2配体受体”包括本领域称为“DR4”和“DR5”的受体，其多核苷酸和多肽序列分别如图2A-图3E-2所示。Pan等人描述了被称为“DR4”的TNF受体家族成员(Pan等人，Science, 276:111-113(1997);另参见 1998 年 7 月 30 日公开的 W098/32856 ;1999 年 7 月 29日公开的WO 99/37684 ;2000年12月7日公开的TO 00/73349 ;2002年8月13日授权的US6，433，147 ;2002 年 10 月 8 日授权的 US 6，461，823，2002 年 I 月 29 日授权的US6, 342，383)。Sheridan 等人，Science, 277:818-821 (1997)和 Pan 等人，Science,277:815-818 (1997)描述了另一种Apo2L/TRAIL的受体(1998年11月19日公开的W098/51793 ; 1998年9月24日公开的W098/41629)。该受体被称为DR5(该受体又被称为Apo_2 ；TRAIL-R,TR6,Tango-63,hAP08, TRICK2 或 KILLER ；Screaton 等人，Curr. Biol. ,7:693-696(1997) ;Walczak 等人，EMBO I. , 16:5386-5387 (1997) :Wu等人，Nature Genetics, 17:141-143(1997) ;1998年8 月20日公开的W098/35986 ; 1998年10月14日公开的EP870，827 ; 1998年10月22日公开的W098/46643 ; 1999 年 I 月 21 日公开的 TO99/02653 ; 1999 年 2 月 25 日公开的 TO99/09165 ；
1999年 3 月 11 日公开的 TO99/11791 ；2002 年 8 月 13 日公开的 US 2002/0072091 ；2002年 12 月 7 日公开的 US 2002/0098550 ;2001 年 12 月 6 日授权的 US 6，313，269 ;2001 年 8月2日公开的US 2001/0010924 ；2003年7月3日公开的US ；2002年10月31日公开的US 2002/0160446, 2002 年 4 月 25 日公开的 US2002/0048785 ；2003 年 5 月 27 日授权的 US6，569，642，2000 年 6 月 6 日授权的 US 6，072，047，2003 年 11 月 4 日授权的 US 6，642，358)。如上所述，其它Apo_2L受体包括DcRl,DcR2,和OPG (参见,Sheridan等人，同上；Marsters等人，同上jPSimonet等人，同上)。术语“Apo-2L受体”当用于本文时，包括天然序列的受体和受体变体。这些术语涵盖在多种哺乳动物,包括人类中表达的Apo_2L受:体。Apo_2L受体可以如多种人类组织谱系中天然存在的那样内源表达，或通过重组或合成方法表达。“天然序列的受体”包括与来自自然界的Apo-2L受体具有相同氨基酸序列的多肽。因此，天然序列的Apo-2L受体可具有来自任何哺乳动物的天然存在的Apo-2L受体的氨基酸序列。这样的天然序列Apo-2L受体可以从自然界分离或者可以通过重组或合成手段生产。术语“天然序列Apo-2L受体”特别涵盖该受体的天然存在的截短的或分泌形式(例如，含有例如胞外域序列的可溶形式)，天然存在的变体形式(例如以可选方式剪接的形式)和天然存在的等位变体。受体变体可包括天然序列Apo-2L受体的片段或缺失突变体。图3A显示人DR5的411个氨基酸的序列，如WO 98/51793于1998年11月19日所公开的。人DR5转录剪接变体是本领域已知的。该DR5剪接变体编码图3B和3C所示的人DR5的440个氨基酸的序列，如WO 98/35986于1998年8月20日所公开的。“死亡受体抗体”在本文中用来泛指针对肿瘤坏死因子受体超家族中的并含有可传递凋亡信号的死亡域(death domain)的受体的抗体,这样的抗体包括DR5抗体和DR4抗体。“DR5受体抗体”，“DR5抗体”，或“抗-DR5抗体”用来广义地指结合至少一种形式的DR5受体或其胞外域的抗体。可选地,该DR5抗体与异源序列或分子连接或融合。优选地，该异源序列允许或帮助所述抗体形成较高级或寡聚复合物。可选地，DR5抗体结合DR5受体，但不与任何其它Apo-2L受体(例如DR4，DcRl，或DcR2)结合或交叉反应。可选地，所 述抗体是DR5信号传递活性的激动剂。可选地，本发明的DR5抗体以约0. InM到约20mM的浓度范围结合DR5受体，如BIAcore结合测定所测得的。可选地，本发明的DR5抗体显示约0. 6nM到约18mM的Ic50值,如BIAcore结合测定所测得的。“DR4受体抗体”，“DR4抗体”，或“抗-DR4抗体”用来广义地指结合至少一种形式的DR4受体或其胞外域的抗体。可选地,该DR4抗体与异源序列或分子融合或连接。优选地，该异源序列允许或帮助所述抗体形成较高级或寡聚复合物。可选地，DR4抗体结合DR4受体，但不与任何其它Apo-2L受体(例如DR5，DcRl，或DcR2)结合或交叉反应。可选地，所述抗体是DR4信号传递活性的激动剂。可选地，本发明的DR4抗体以约0. InM到约20mM的浓度范围结合DR4受体，如BIAcore结合测定所测得的。可选地，本发明的DR4抗体显示约0. 6nM到约18mM的Ic50值,如BIAcore结合测定所测得的。术语“激动剂”是在最广义的意义上使用的，包括任何在体外、体内或原位部分地或完全地增强、刺激或活化Apo2L/TRAIL，DR4或DR5的一种或多种生物活性的分子。这样的Apo2L/TRAIL与DR4或DR5结合的生物活性的例子包括凋亡和文献中报道的其它活性。所述激动剂可以直接或间接的方式起作用。例如，激动剂可直接结合DR4或DR5，导致受体活化或信号转导，结果起到在体外、原位或体内部分地或完全地增强、刺激或活化DR4或DR5的一种或多种生物活性的作用。所述激动剂也可以例如刺激另一种效应分子，然后该分子导致DR4或DR5活化或信号转导，结果间接地起到在体外、原位或体内部分地或完全地增强、刺激或活化DR4或DR5的一种或多种生物活性的作用。本文认为激动剂可充当增强分子(enhancermolecule),间接地起增强或增加DR4或DR5活化或活性的作用。例如，所述激动剂可增强哺乳动物中内源Apo-2L的活性。这可以通过,例如,预先复合(pre-complexing)DR4或DR5，或通过稳定DR4或DR5受体与其各自配体的复合物(例如稳定Apo_2L和DR4或DR5形成的天然复合物)来实现。本申请中使用的术语“生物标记”泛指一种分子，包括基因、蛋白质、糖结构，或糖月旨，其在哺乳动物组织或细胞中的表达可以通过标准方法(或本文中公开的方法)测定，且该表达可预示哺乳动物组织或细胞对Apo2L/TRAIL或死亡受体抗体的敏感性。本发明所考虑的这样的生物标志包括但不限于“(1，3/1，4)岩藻糖基转移酶”或“FUT3”，“a (1,3)岩藻糖基转移酶”或“FUT6”，“唾液酰Lewis A”，和“唾液酰Lewis X”。可选地，该生物标志测得的表达高于对照组织或细胞样品中观察到的表达。可选地，例如，通过PCR或FACS测定所测得的该生物标志在待测组织或细胞样品中的表达，比在对照组织或样品中观察到的表达高至少50倍，或优选至少100倍。可选地，通过IHC测定所测得的该生物标志的表达，其着色强度(stainingintensity)得分将至少为2或更高。"(1,3/1,4)岩藻糖基转移酶”或“FUT3”在本文中用来指这样的分子其具有如本文所述的结构特征，且可选地催化岩藻糖残基从供体底物GDP-岩藻糖转移给受体底物，与GlcNAc形成a 3或a 4键连接(FUT III - VII及IX)。人FUT3的DNA序列和氨基酸序列在图4中给出。这些序列对应于GenBank登录号HSU27328,并在例如Kukowska-Latallo等人，Genes Dev. 1990 Aug ;4 (8) : 1288-303中有描述。FUT通常是存在于高尔基体空泡中的II型跨膜糖蛋白，典型地由N末端胞质尾部、跨膜区和高尔基体中朝向腔内的催化域组成。在跨膜区和催化域之间是称为主干(stem)的区域(Paulson和Colley, J. Biol. Chem.,264:17615-17618(1989))。
“a (1,3)岩藻糖基转移酶”或“FUT6”在本文中用来指这样的分子，其在结构上与例如图5给出的人FUT6的DNA序列及氨基酸序列相关。这些序列对应于GenBank登录号 HSU27333,并在例如 Koszdin 和 Bowen, BiochemBiophys Res Commun. 1992Aug 31 ；187(1) :152-7中有描述。FUT 6通常在上皮细胞和肝、肾及胃肠组织中，特别是胃、空肠和结肠中表达(并且通常在脾、肺和子宫颈中表达最少)。通常在脑、肾上腺皮质或外周血淋巴细胞中检测不到FUT 6。“唾液酰Lewis A” (sialyl Lewis A)在本文中用于指具有下述序列或结构的四糖碳水化合物结构或抗原，其可以为膜结合的，或者为可溶性形式，在例如血浆中循环NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>3 [Fuc a I—>4] GlcNAc ^ I—>R
(NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>3 (Fuc a I—>4) GlcNAc ^ I—>R)
OH
AcHN. OHF
\IOH
COO-I
Neu ca2-3Gaipi-3GlcNAd^ Fuca1-4“唾液酰Lewis X” (sialyl Lewis X)在本文中用于指具有下述序列或结构的四糖碳水化合物结构或抗原，其可以为膜结合的，或者为可溶性形式，在例如血清中循环NeuAc a 2—>3Gal P I—>4 [Fuc a I—>3] GlcNAc P I—>R(NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>4 (Fuc a I—>3) GlcNAc ^ I—>R)
权利要求
1.预测哺乳动物组织或细胞样品对Apo2L/TRAIL的敏感性的方法,包括下列步骤 得到哺乳动物组织或细胞样品； 检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，其中，所述一种或多种生物标志的表达预示所述组织或细胞样品对Apo2L/TRAIL的凋亡诱导活性敏感。
2.在哺乳动物组织或细胞样品中诱导凋亡的方法，包括下列步骤 得到哺乳动物组织或细胞样品； 检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达,及 检测所述一种或多种生物标志的表达后，使所述组织或细胞样品暴露于有效量的Apo2L/TRAIL。
3.治疗哺乳动物中的疾病，例如免疫相关疾病或癌症的方法，包括下列步骤 得到所述哺乳动物的组织或细胞样品； 检查所述组织或细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达,及 检测所述一种或多种生物标志的表达后，对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL。
4.预测哺乳动物的结肠或结肠直肠癌细胞对Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步骤 得到哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞； 检查所述癌细胞以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，其中所述一种或多种生物标志的表达预示所述癌细胞对Apo2L/TRAIL的凋亡诱导活性敏感。
5.在哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞中诱导凋亡的方法，包括下列步骤 得到哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞； 检查所述癌细胞以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，及 在检测所述一种或多种生物标志表达后，将所述癌细胞暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽。
6.治疗哺乳动物中结肠或结肠直肠的癌症的方法，包括下列步骤 得到所述哺乳动物结肠或结肠直肠癌细胞样品； 检查所述癌细胞样品以检测选自岩藻糖基转移酶3、岩藻糖基转移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一种或多种生物标志的表达，及 在检测所述一种或多种生物标志表达后，对所述哺乳动物施用有效量的Apo2L/TRAIL。
全文摘要
本申请涉及使用生物标志的测定法和方法。提供了检查哺乳动物组织或细胞样品中一种或多种生物标志的方法和测定法。根据所公开的方法和测定法，检测到一种或多种这样的生物标志的表达预示或表明所述组织或细胞样品将对凋亡诱导剂例如Apo2L/TRAIL和抗DR5激动剂抗体敏感。可被检查的特定生物标志包括岩藻糖基转移酶，特别是岩藻糖基转移酶3(FUT3)和/或岩藻糖基转移酶6(FUT6)，例如唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原。还提供了试剂盒和制品。
文档编号A61K38/19GK102978277SQ20121046161
公开日2013年3月20日 申请日期2005年8月3日 优先权日2004年8月6日
发明者克劳斯.W.瓦格纳 申请人:健泰科生物技术公司