专利名称：一种丹酚酸a组合物及其制备药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种丹酚酸A组合物及其制备药物用途。
背景技术：
脑血管病又称脑卒中，是由各种病因使供应脑部血液的血管发生病变所致的一种神经系统疾病。其主要病因为脑动脉系统病损(如脑动脉硬化)等原因导致的脑动脉管腔狭窄、血管痉挛、闭塞或破裂、血流减少或完全阻塞，脑部血液循环和功能障碍，脑组织受损而发生的一系列症状。主要包括缺血性和出血性脑血管病。其中(ICVD，又称缺血性卒中)占80 左右。缺血性脑血管病是指局部脑组织包括神经细胞、胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发生的变性、坏死或一过性的功能丧失。血管内血栓形成、栓塞、血管狭窄导致的脑动脉阻塞是缺血性脑卒中的主要原因。缺血引起脑神经细胞损伤和死亡的作用机制多样、复杂，缺血性脑卒中(即脑缺血)后，由于脑部缺乏血液和氧气的供应，导致大脑能量代谢失衡，产生一系列病理性损伤，如氧化应激、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、炎症反应等，从而导致神经元的大量死亡。它是临床上的常见病、多发病，死亡率及致残率很高，现已经成为世界公认的三大致死疾病之一。临床上治疗主要是溶栓、挽救缺血区域(半暗带)的濒临死亡的神经元和促进损伤后神经功能的恢复。防治缺血性脑血管疾病是目前人类迫切需要解决的医学难题。目前美国FDA仅批准了组织纤溶酶原活化因子(tPA)用于中风后的溶栓治疗，但其治疗时间窗很窄，只有在中风4.5小时内使用才有效；而且还存在出血以及缺血再灌加重脑损伤的危险性。而目前针对缺血性中风治疗的神经保护药包括钙通道阻断剂如尼莫地平、谷氨酸受体拮抗剂如地佐环平(dizocilPine)、抗氧化剂或自由基清除剂如依达拉奉、NO信号传导通路调节剂芦贝鲁哩(Lubeluzole)以及炎症抑制剂恩莫单抗(enlimomab)等。但它们中有的治疗作用不确切或特异性不强，有的毒副作用较大、耐受性小，有的还处于临床前或临床研究阶段，很难在防治缺血性脑卒中发挥积极影响。因而，研发出快速有效、安全稳定的防治脑缺血药物迫在眉睫。在此领域中医药发挥了不可忽视的积极作用。丹参制剂是我国心脑血管疾病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我国用量最大、销售额最高、制剂生产厂最多，临床剂型最全的中药之一。丹参有效化学成分主要有两大类:脂溶性丹参酮类化合物和水溶性酚酸类化合物。研究表明:丹酚酸类在抗肝脏损伤、抗 动脉粥样硬化及细胞凋亡以及改善记忆功能障碍等方面有着显著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最强，丹酚酸A结构如下:
权利要求
1.种丹酚酸A组合物，其特征在于:该组合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C组成；其中 所述丹酚酸A的分子式=C26H22Oltl，分子量:494.45，结构如下:
2.据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A93% 98%，紫草酸0.1% 2.0%，迷迭香酸0.1% 2.0%，丹酚酸B0.1% 2.0%，丹酚酸C0.1% 3%。
3.据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1% 1.5%，迷迭香酸0.1% 1.5%，丹酚酸B0.1% 1.5%，丹酚酸 C0.1% 2.0%。
4.据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95% 96%，紫草酸0.1% 1.2%，迷迭香酸0.1% 1.2%，丹酚酸B0.1% 1.2%，丹酚酸 C0.1% 1.5%。
5.利要求1 4任一项所述组合物的制备方法，所述组合物采用如下步骤制备获得: (1)提取:丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液； (2)转化:将步骤⑴得到的提取液 ，调pH至3.5 6.5，加摩尔百分比为0.1% 3.0%的催化剂，在100 140°C加热I 6小时; (3)纯化: a.将步骤(2)得到的溶液，调pH至2.5 4.5，离心，上清液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，用水洗脱后，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液； b.将步骤a得到的洗脱液用葡聚糖凝胶LH-20或0DS-C18或聚酰胺层析柱分离，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液； c.将步骤b得到的洗脱液调pH至2.0 4.0，经有机溶剂萃取，分离有机溶剂相； d.将步骤c得到的溶液用硅胶层析柱分离，用洗脱剂洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A的洗脱液； (4)干燥:将步骤d得到的洗脱液，减压回收洗脱剂，再加水溶解，用真空干燥、喷雾干燥或微波真空干燥，得所述丹酚酸A组合物。
6.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(I)中所述的水提取方法为:取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约2mm颗粒，每次加3 15倍量水提取，共提取I 3次，每次提取I 4小时；提取液减压浓缩至相对密度1.10 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在30% 80%，离心，上清液减压回收乙醇并浓缩至无醇味，所述水提取采用煎煮提取或45 95°C水温浸提取，同时以10 50转/分速度搅拌，得丹参提取液。
7.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(I)中所述的醇提取方法为:取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约2mm颗粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小时，共提取I 3次；减压回收乙醇，得丹参提取液。
8.据权利要求5所述的制备方法，其中步骤(I)中的提取液中丹酚酸B浓度为Img/ml 30mg/ml或加水稀释至lmg/ml 30mg/ml。
9.据权利要求8所述的制备方法,其中提取液中丹酹酸B浓度为5mg/ml 20mg/ml或加水稀释至5mg/ml 20mg/ml。
10.据权利要求5所述的制备方法，其中步骤(2)中的催化剂是氯化铁、三氯化钌、氯化铝、氯化锌、氯化钯中的一种或几种，催化剂与丹酚酸B的摩尔百分比为0.1% 3.0%。
11.据权利要求10所述的制备方法，其中催化剂与丹酚酸B的摩尔百分比为0.5% 2.0%。
12.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤a中所述大孔树脂柱为HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、或D101、AB-8 ;所述洗脱剂为水及不同比例的水与乙醇，并且先用水、10 40%乙醇洗脱，再用20 60 %乙醇洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味。
13.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤b中的所述洗脱剂为水及不同比例的水与乙醇，并且先用水、20 60%乙醇溶液洗脱除杂，再用40 90%乙醇溶液洗脱，高效液相检测丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味。
14.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤c中所述的有机溶剂为叔丁基甲基醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲酸乙酯。
15.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤d中所述洗脱剂为石油醚、正戊烷、正庚烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸乙酯、叔丁基甲基醚组成的两相溶剂。
16.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述微波真空干燥的温度:20-100°C，回差温度1-5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分钟。
17.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述真空干燥的温度:50°C 90°C，真空度-0.07Mpa以上，功率:1 60KW，干燥2 20小时。
18.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述喷雾干燥的进风口温度:150°C 350°C，出风口温度:70°C 95°C，喷雾速度:1 300ml/min。
19.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于pH调节剂为磷酸、盐酸、硫酸或醋酸。
20.据权利要求1 4任一项所述的组合物的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法测定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，测定条件如下: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 检测波长286nm ;流速1.0ml/min ;柱温30°C ； 理论塔板数按丹酚酸A计应不低于10000 ； 对照品溶液的制备精密称取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C对照品适量至容量瓶中，加甲醇制成混合对照品溶液； 供试品溶液的制备:精密称取样品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度，即得； 洗脱以甲醇为流动相A，以0.1 0.5%磷酸为流动相B，按下述条件进行梯度洗脱，运行60分钟； 0 10分钟时，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分钟时，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分钟时，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20% ； 测定法:分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，计算丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
21.种丹酚酸A组合物制剂，该制剂以权利要求1 4任一项所述的丹酚酸A组合物为主要活性成分。
22.利要求1 4任一项所述的丹酚酸A组合物用于制备预防和/或治疗缺血性脑血管病药物的用途。
23.据权利要求22的用途，其中所述缺血性脑血管病主要包括脑血栓、脑缺血再灌注损伤、脑栓塞、颅外颈动脉和脑基底 动脉的粥样硬化或狭窄、腔隙性脑梗塞、短暂性脑缺血性发作、血管性痴呆中的任意一种或几种。
24.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于改善脑缺血后的神经功能症状的用途。
25.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于保护缺血脑组织损伤的用途。
26.据权利要求25的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于保护血脑屏障的用途。
27.据权利要求25的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于减少缺血脑组织梗死范围的用途。
28.据权利要求25的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于减轻缺血脑组织水肿的用途。
29.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于挽救缺血半暗带的用途。
30.据权利要求29的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于促进脑部血管的新生和侧枝循环的建立的用途。
31.据权利要求30的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于增加脑组织微血管密度的用途。
32.据权利要求30的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于促进血管内皮生长因子表达的用途。
33.据权利要求30的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于促进碱性成纤维细胞生长因子蛋白表达的用途。
34.据权利要求29的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于增加缺血半暗带脑血流量用途。
35.据权利要求29的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于改善脑组织能量代谢用途。
36.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于抑制缺血后脑组织神经元损伤或死亡的用途。
37.据权利要求36的用途，其中所述丹酚酸A组合物用于抑制脑组织神经细胞凋亡的用途。
38.据权利要求36的用途，其中所述丹酚酸A组合物用于增强脑组织内源性神经营养因子表达的用途。
39.据权利要求36的用途，其中所述丹酚酸A组合物用于抑制脑组织炎症损伤的用途。
40.据权利要求36的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于抑制脑组织神经细胞内Ca2+超载的用途。
41.据权利要求36的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于改善脑组织内单胺类神经递质紊乱的用途。
42.据权利要求36的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于抑制脑组织兴奋性氨基酸毒性的用途。
43.据权利要求36的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于抑制脑组织氧自由基损伤的用途。
44.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于保护脑血管内皮细胞的用途。
45.据权利要求44的用途，其中所述丹酚酸A组合物用于保护脑微血管内皮细胞损伤的用途。
46.据权利要求22或23的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于预防和/或治疗血栓的用途。
47.据权利要求46的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于抑制血栓形成的用途。
48.据权利要求46的用途，其中所述的丹酚酸A组合物用于溶解血栓的用途。
49.据权利要求46的用途，其中所述丹酚酸A组合物用于改善血液流变学的用途。
全文摘要
本发明涉及一种丹酚酸A的组合物，该组合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C组成，其中所述的组合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％，及其制备药物的用途。
文档编号A61P25/28GK103083299SQ20121049032
公开日2013年5月8日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者杨小玲, 吕武清, 蔡元魁, 李志勇, 程帆, 欧阳婷, 张功俊 申请人:蒋春红