专利名称：一种能改善胰岛素抵抗的提取物及其制备方法、应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物制药及分子生物学技术领域，具体涉及一种明日叶与银杏叶本草混合物提取物及其在改善胰岛素抵抗的应用与药物制剂。
背景技术：
糖尿病(diabetes)作为一种常见的内分泌代谢性疾病，是继心血管疾病及癌症之后危害人类健康的第三大疾患。胰岛素抵抗(Insulin Resistance, IR)是指胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态，目前认为，IR不仅是2型糖尿病的发病基础，更是贯穿多种代谢相关疾病的主线，是连接它们的纽带，为这些疾病的共同病理生理基础。中医药对IR的研究虽起步较晚，但近年来的研究渐趋活跃，并逐渐成为中医药防治糖尿病科研的热点。
经研究发现了胃肠内分泌细胞分泌的肽类物质对胰岛素的分泌调节作用。这些肽类物质统称为肠促胰岛素，包括肠抑胃肽(GIP)和胰高血糖素样肽-l(GLP-l)。GLP- I主要由末端空肠、回肠和结肠的L细胞合成和分泌，GIP由十二指肠和空肠上段的肠内分泌K细胞分泌。近年来，已有研究表明糖尿病时可以影响胃肠道和弥漫性神经内分泌系统中的细胞数量、神经内分泌物质含量。给予正常大鼠高脂饮食，可引起GIP分泌过多，进而刺激十二指肠内分泌细胞向K细胞分化，并与胰岛素抵抗有关。临床研究发现，2型糖尿病患者的GLP-I分泌显著减少，GIP的促胰岛素分泌作用消失，促胰素效应受损，对糖尿病病程起到重要作用。与血糖正常者相比，糖尿病患者十二指肠部位GIP-IR细胞、GIP/GLP-1共表达细胞数量均明显增加。这些研究充分说明，肠促胰素分泌细胞的组织学和功能改变在糖尿病病程中发挥了重要作用。因此，设法改变肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平在制备改善胰岛素抵抗的药物中具有广阔的前景。大量流行病学资料显示，胰岛素抵抗在糖尿病及心血管疾病发病之前多年就可存在，常常与肥胖、高血压、高脂血症相伴随。但多数药物(胰岛素、磺脲类、格列酮类)治疗后导致体重进一步增加。此外，二甲双胍可以引起血液中乳酸堆积；噻唑烷二酮类副作用以水肿与体液潴留多见，可能加重充血性心衰；艾塞那肽作为一种新型的合成肠降血糖素类似物，可激动GLP-I受体，产生降血糖和抗糖尿病作用；有资料表明，本药在非糖尿病受试者及2型糖尿病患者中均是一种强效促胰岛素分泌药；但其作为人工合成肽，具有一定免疫原性和低血糖风险。糖尿病及胰岛素抵抗作为一种慢性疾病，中医药在这方面有着极大的优势与潜力。植物中提取的化合物在生物活性方面具有结构明确，毒性小，作用持久、显著等特点。黄酮类化合物普遍分布于植物界中，有着广泛的生物活性。明日叶(angelica keiskei)中文别名为八丈芹、海峰人参和长寿菜，是芹科当归属植物，因其生命力顽强，今日摘叶明日可发新芽，故名明日叶；其主要成分为查耳酮和香豆素类化合物，在抗肿瘤、抗氧化、降血压、降血糖等方面作用显著。银杏叶(ginkgo leaves)又名白果叶，本世纪60年代西德即开始相关研究；其中含有多种药效成分，包括黄酮类化合物、银杏内酯、前花青素多酚等，具有降低血液胆固醇、防治脑梗塞、治疗支气管哮喘、抗自由基过氧化等广泛药理作用。明日叶与银杏均为药食两用植物，作为食品或营养补充剂长期使用，表明其与化学药物相比具有较高的安全性，适合长期服用。因此，将其开发成为改善胰岛素抵抗、降压降脂、治疗糖尿病的药物，具有较好的应用前景。
发明内容
本发明目的是针对现有改善胰岛素抵抗药物多副作用的问题，提供了一种明日叶与银杏叶本草混合物提取物及其在改善胰岛素抵抗的应用与药物制剂，具体为应用提取物影响肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平，研究其在制备改善胰岛素抵抗药物中的应用。本发明选择富含不同黄酮类化合物的明日叶与银杏叶，以不同比例混合，进行提取，获得含有不同比例的黄酮混合物；应用糖尿病小鼠，筛选出协同降糖作用最强的提取物；应用胰岛素抵抗大鼠，观察黄酮混合物改变肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水 平，从而改善胰岛素抵抗，为改善胰岛素抵抗药物研究提供了新的效果显著的药物。一种能改善胰岛素抵抗的提取物及其制备方法、应用是采取以下技术方案实现一种能改善胰岛素抵抗的提取物，其特征在于采用明日叶与银杏叶药材原料提取而成，其中明日叶与银杏叶质量配比为1:0.广10。所述的明日叶与银杏叶质量配比为I :广10。作为本发明的进一步改进，上述提取物按照如下方法制备而成按质量配比称取明日叶与银杏叶，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇，料液比为1:15，于室温下浸泡24小时；回流法提取，提取条件如下温度65°C，提取2次，每次4小时；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。一种能改善胰岛素抵抗的提取物的制备方法，其特征在于按质量配比称取明日叶与银杏叶，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇，料液比为1:15，于室温下浸泡24小时；回流法提取，提取条件如下温度65°C，提取2次，每次4小时；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。所述的一种能改善胰岛素抵抗的提取物在制备用于改善胰岛素抵抗的药物中的应用。所述的能改善胰岛素抵抗的提取物应用，其特征在于所述改善胰岛素抵抗的药物为抗肿瘤、抗氧化、降血压、降血糖的药物，或降低血液胆固醇、防治脑梗塞、治疗支气管哮喘、抗自由基过氧化的药物。有益效果本发明所提供的明日叶与银杏叶本草混合物提取物能够改善胰岛素抵抗；经研究发现，该提取物作用的靶位点为肠促胰素分泌细胞，通过在体影响肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平，从而达到改善胰岛素抵抗的目的。提取物可制备成一种改善胰岛素抵抗的药物尤其是口服药物。胰岛素抵抗的治疗以西药为主，研究热点为肠促胰素。我们将具有降糖作用的两种中草药进行组合，发现其改善胰岛素抵抗的新用途及新作用机制。
以下将结合附图对本发明作进一步说明图I表示大鼠肝脏病理切片图(200 X)图2表示提取物对胰岛素抵抗大鼠血中GLP-UGIP水平的影响(X土SD，N=8)
具体实施例方式下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术解决方案，不是对本技术方案的限制。 本发明中的生物材料来源如下明日叶及银杏叶分别购于青岛及南京先声药店。实施例I 一种能改善胰岛素抵抗的提取物的制备按质量配比称取明日叶100 g、银杏叶10g，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇(料液比为1:15)，于室温下浸泡24小时；回流法提取(温度65°C，提取2次，每次4小时)；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。实施例2 —种能改善胰岛素抵抗的提取物的制备按质量配比称取明日叶50 g、银杏叶50g，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇(料液比为1:15)，于室温下浸泡24小时；回流法提取(温度65°C，提取2次，每次4小时)；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。实施例3 —种能改善胰岛素抵抗的提取物的制备按质量配比称取明日叶10g、银杏100g，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇(料液比为1:15)，于室温下浸泡24小时；回流法提取(温度65°C，提取2次，每次4小时)；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。实施例4明日叶与银杏叶混合物提取物对糖尿病小鼠作用的研究用实施例I中提取方法获得明日叶与银杏叶混合物提取物三份，其明日叶与银杏叶的重量比分别为1:0. I (提取物1)、1:1 (提取物2)、1: 10 (提取物3)。雄性小鼠禁食不禁水12h后，80mg/kg尾静脉注射四氧嘧啶，l_3h内灌胃50%葡萄糖。72h后，毛细管眼后静脉丛采血，用血糖仪检测动物血糖，血糖3 11. lmmol/L为造模成功，造模成功小鼠随机分为模型组(M)、盐酸二甲双胍组(Y)、提取物1(H1)、提取物2(H2)、提取物3 (H3)，另取十只正常小鼠作为正常对照组(C)。受试药小鼠灌胃给药28.5ml/kg，折合成相同的生药剂量10g/kg，阳性对照组灌胃150mg/kg盐酸二甲双胍，正常对照组和模型组给予同量生理盐水。每天一次，连续7天。末次给药前禁食8h，测定给药前空腹血糖(Oh)及末次给药后0. 5h、lh、2h、4h的血糖值。实验结果显示，模型组与正常对照组相比较，血糖水平显著升高，表明造模成功。与模型组比较，提取物在给药7天后，末次给药前(Oh)就能显著性改变血糖水平，末次给药后2h、4h能极其显著的改变血糖水平，见表I。表I提取物对糖尿病小鼠血糖水平的影响(X土S，n=12)
权利要求
1.一种能改善胰岛素抵抗的提取物，其特征在于采用明日叶与银杏叶药材原料提取而成，其中明日叶与银杏叶质量配比为1:0.广10。
2.根据权利要求I所述的能改善胰岛素抵抗的提取物，其特征在于所述明日叶与银杏叶的质量配比为I :广10。
3.根据权利要求I所述的能改善胰岛素抵抗的提取物，其特征在于所述明日叶与银杏叶提取物主要成分为明日叶总黄酮和银杏叶总黄酮。
4.如权利要求广3中任一项所述的能改善胰岛素抵抗的提取物，其特征在于按照如下方法制备而成按质量配比称取明日叶与银杏叶，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇，料液比为1:15，于室温下浸泡24小时；回流法提取，提取条件如下温度65°C，提取2次，每次4小时；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。
5.权利要求广3中任一项所述的能改善胰岛素抵抗的提取物的制备方法，其特征在于按质量配比称取明日叶与银杏叶，将明日叶与银杏叶进行混合，加入60%乙醇，料液比为1:15，于室温下浸泡24小时；回流法提取，提取条件如下温度65°C，提取2次，每次4小时；减压抽滤；合并滤液，旋转蒸发仪蒸发水分，浓缩制成浸膏。
6.权利要求f3中任一项所述的能改善胰岛素抵抗的提取物在制备用于改善胰岛素抵抗的药物中的应用。
7.如权利要求7所述的提取物的应用，其特征在于所述改善胰岛素抵抗的药物为抗肿瘤、抗氧化、降血压、降血糖的药物，或降低血液胆固醇、防治冠心病、心绞痛、脑梗塞、治疗支气管哮喘、抗自由基过氧化的药物。
全文摘要
本发明提供一种能改善胰岛素抵抗的明日叶和银杏叶本草混合物提取物，即采用重量比为1:0.1~10的明日叶与银杏叶药材原料提取而成，其主要成分为明日叶总黄酮和银杏叶总黄酮；同时提供此种提取物的制备方法。通过应用糖尿病小鼠和胰岛素抵抗大鼠模型，发现此提取物具有显著降糖作用，并能够影响在体肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平，从而治疗胰岛素抵抗，可开发为改善和治疗胰岛素抵抗的药物，故本发明同时提供此提取物在用于改善胰岛素抵抗的药物中的应用。
文档编号A61K36/16GK102935099SQ20121051246
公开日2013年2月20日 申请日期2012年12月4日 优先权日2012年12月4日
发明者戴丽, 季晖, 谭佳妮, 唐建兴, 李文雯, 陈同 申请人:中国药科大学