专利名称：miR-21小分子抑制剂及应用的制作方法
技术领域：
微小RNAOnicroRNA或miRNA)是指长度约21 25nt的某些特殊的小型非编码RNA组成的家族，这些miRNA能够识别特定的目标mRNA，并在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的过程，并与个体发育、干细胞分化和疾病发生密切相关。miRNA最初的转录结构是ー个发夹结构的pr1-miRNA,经过Drosha酶加工后得到pre-miRNA,通过依赖RanGTP/exportin5 (Exp5)的转运机制完成preniRNA转运出核，经过Dicer酶切后pre-miRNA降解成约22nt的单链RNA形成成熟的miRNA ;成熟的miRNA在RISC中能够识别特定的目标mRNA的3' UTR区域。每个miRNA具有数十种到甚至更多的蛋白表达调控革巴点，而甸一种蛋白表达有可能同时受到多个miRNA的调控。miRNA在大小、结构和功能方面存在着高度的保守性，组成了物种进化过程中细胞高度复杂的RNA表达调控网络。目前研究发现，miRNA在肿瘤、心脑血管疾病、免疫系统疾病等中存在着特异性的表达谱。因此，miRNA在以上相关疾病的发病机制、早期诊断以及寻找新的治疗策略的研究中意义重大。
背景技术：
miR-21是较早发现的人类miRNA之一，与许多种肿瘤和心脑血管疾病关系密切。以胶质瘤为例,Ciafrg等人通过对胶质瘤手术标本以及胶质母细胞瘤细胞系的miRNA表达谱的分析，证实miR-21作为表达上调的miRNA代表，在胶质瘤组织中的表达水平是瘤周“正常组织”表达水平的1. 8^9. 3倍；而在胶质母细胞瘤细胞系中，其表达水平比正常脑组织表达水平要高1. 6倍。反义miR-21下调miR-21表达水平，可以使胶质瘤细胞增殖侵袭能力下降，肿瘤细胞凋亡増加， 肿瘤体内生长受到抑制。因此，如能有效调控miR-21水平，则极其有助于推动肿瘤和心脑血管疾病的治疗发展。目前，下调miRNA表达水平的方法，主要有化学合成寡核苷酸和构建载体2个方法。化学合成寡核苷酸采用反义miRNA来阻断特定miRNA的活性。对于载体而言，主要是构建质粒或者病毒系统来表达与miRNA前体的茎环结构互补的siRNA。但这些方法因为价格较昂贵，目前大多处于实验室阶段，还无法真正用于临床治疗。因此，发现新的手段来下调miRNA水平，成为极为迫切的研究領域。
发明内容
本发明目的是解决目前下调miR-21方法价格昂贵且未真正应用于临床的问题，提供一种下调miR-21新方法即miR-21小分子抑制剂。本发明的ー种miR-21小分子抑制剂为2，4_ ニ氨基代-1，3_ ニ氮杂己环_5_臆，化学式为C5H11N5，分子量为141. 17434g/mol，是ー种六元杂环有机化合物，其碳氮环结构类似于嘧啶，1、3位含有两个氮原子，2、4、5、6号位置上均为碳原子，各原子均由单键连接。2、4号位置上分別连有ー个氨基取代基，5号位置上则连有一个腈基取代基。化学结构式为
权利要求
1.一种miR-21小分子抑制剂，其特征是抑制剂为2，4_ 二氨基代-1，3-二氮杂己环-5-腈， 化学结构式为
2.如权利要求1所述的抑制剂，其特征是2，4-二氨基代-1，3- 二氮杂己环-5-腈与miR-21 接位结合能力 Ki=L 49nM, deltaG=-12. 04kcal/mol。
3.miR-21小分子抑制剂2，4- 二氨基代_1，3- 二氮杂己环-5-腈抑制剂应用，下调miR-21小分子，抑制肿瘤细胞生长。
4.miR-21小分子抑制剂2，4- 二氨基代-1，3- 二氮杂己环_5_腈应用于抑制肿瘤细胞的药物。
5.miR-21小分子抑制剂2，4- 二氨基代-1，3- 二氮杂己环_5_腈应用于胶质瘤U87、LN229细胞系、乳腺癌MCF-7细胞系或胃癌SGC7901细胞的药物。
全文摘要
本发明涉及一种miR-21小分子抑制剂及应用。本发明药物是能特异性抑制miR-21表达，进而促进多种肿瘤细胞凋亡的化合物2，4-二氨基代-1,3-二氮杂己环-5-腈。2，4-二氨基代-1,3-二氮杂己环-5-腈与miR-21接位结合能力Ki=1.49nM,deltaG=-12.04kcal/mol。其制备包括将化合物2，4-二氨基代-1,3-二氮杂己环-5-腈溶于去离子水中配成母液，后按一定比例加入肿瘤细胞(胶质瘤、胃癌和乳腺癌)培养体系，能特异性的抑制miR-21表达，而基本不影响其他miRNA表达。同时细胞周期出现G0/G1期阻滞，细胞凋亡百分比例明显增加，对肿瘤实现更有效的抑制。
文档编号A61P35/00GK103044338SQ201210535759
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者康春生, 张军霞, 史振东, 韩磊, 浦佩玉 申请人:天津医科大学总医院