专利名称：新山楂酸衍生物、其制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，涉及新的山楂酸衍生物及其制备方法，以及新化合物在抗肿瘤方面的应用。
背景技术：
山楂酸为齐墩果烷型五环三萜类化合物，存在于油橄榄、藿香根、大花紫薇、石榴花、水杨梅等植物中。由于山楂酸的化学结构中存在活泼的双键、羟基、羧基官能团，因而具有广泛的生物学活性，如抗HIV、抗肿瘤、抗II型糖尿病、抗氧化等作用。
发明内容
本发明的目的是提供了一类新的山楂酸衍生物。本发明的另一个目的是提供了新山楂酸衍生物的制备和抗肿瘤用途。本发明是通过如下技术方案完成的，具体内容包括:山楂酸的微生物转化反应、产物提取分离及结构鉴定、体外抗肿瘤活性评价。(I)山楂酸的微生物转化反应将山楂酸溶于乙醇溶液中，配成浓度为10 30g/L的底物溶液，加入到在25
28°C，150 250rpm/min条件下培养了 I 3天的微生物中，转化反应条件为:25 28°C，150 250rpm/min, 7 10 天。
(2)产物的提取分离纯化转化结束后，用乙酸乙酯等有机溶剂萃取，减压浓缩，经硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱分离纯化得到化合物1、化合物2。(3)新化合物体外抗肿瘤活性评价将新化合物作用于人肺癌细胞A-549、人胃癌细胞SGC-7901、人宫颈癌细胞Hela，评价其抗肿瘤效果。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步说明，但其并不限制本发明的保护范围。实施例1新化合物1、2的制备及提取分离在10瓶IOOOml (每瓶400mL培养基)的三角瓶中以2%的接种量接入总状共头霉Syncephalastrum racemosum 3.2500 菌种，置恒温振荡器中，180rpm、27°C培养 72 小时后加入500mg底物山楂酸(溶于30ml乙醇中，每瓶加入2ml)，继续培养10天。发酵完成后，过滤菌丝体，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，菌丝体干燥后粉碎，用500mL乙酸乙酯超声提取三次，每次30min，合并乙酸乙酯萃取液与提取液，置旋转蒸发仪上浓缩至小体积，干燥，得转化反应提取物(1.62g)。将提取物用少量丙酮溶解，两倍硅胶拌样，32g硅胶分离，石油醚/四氢呋喃梯度洗脱(从20: I到I: 1，共2400ml)，收集到五个流分:A (581.9mg)，B (61.1mg)，C (136.7mg)为未反应的山楂酸，D (98.8mg)，E (433.4mg)，流分D用半制备型高效液相色谱仪制备，流动相:乙腈/水(1:1)，流速:3mL/min,检测波长210nm,得到化合物I (17.6mg),流分E用半制备型高效液相色谱仪制备，流动相:甲醇/水(72: 28)，流速:3mL/min，检测波长210nm，得到化合物2 (45.2mg)。实施例2新化合物I结构鉴定新化合物I为无色针状结晶，HR-ES1-MS给出487.3444 ([M-H]-)，结合1H-NMR和13C-NMR推断确定分子式为C3tlH47O5。1H-NMIUeOOMHz, pyridine_d5)中，显示该化合物有七组甲基氢信号 δ 0.99 (3Η, s)，L02(3H，s)，L 08 (3H，ο)，L 28 (6H，s), 1.30 (6Η, ο);低场处有一活泼氢信号:S 5.53 (s)，推测可能是双键上的氢。13C-NMR中显示两个不饱和碳原子δ 123.1和δ 144.4，一个羧基碳原子δ 179.7。综合以上信息可以推断该化合物为齐墩果烷型五环三萜酸类化合物。依据HSQC、HMBC谱可以对化合物I的碳氢作进一步的归属。与山楂酸比较，1H-NMR谱中，化合物I在5 3.99 (dt, J = 7.0,10.0Hz)出现一个氢信号；13C-NMR谱中，在δ 72.8处出现一个连氧碳信号，在HSQC谱中二者相关，同时C-20和C-22分别向低场位移6.2ppm和8.9ppm,以上数据说明C-21位连有羟基，H_21ax与H_22ax的耦合常数为10.0Hz，确定该羟基为β型，综上，确定化合物I的结构为:2 α，3β，
21β -三羟基-12-烯-28-齐墩果酸，为一新化合物，其1H-NMR谱、13C-NMR谱信号归属见表
1表1.化合物I的1H NMR和13C NMR数据
权利要求
1.新的山楂酸衍生物，其特征在于该化合物具有化学通式(I)所示的化学结构:
2.根据权利要求1所述的新的山楂酸衍生物的制备方法是通过微生物酶对山楂酸进行结构修饰。
3.根据权利要求2所述的新的山楂酸衍生物的制备方法为:以山楂酸为底物，利用微生物酶对底物进行生物转化，利用乙酸乙酯对发酵液中的转化产物进行萃取，利用硅胶柱层析、凝胶色谱和高效液相色谱进行转化产物的制备分离。
4.根据权利要求2所述的对山楂酸进行结构修饰的微生物为总状共头霉。
5.根据权利要求1所述的新的山楂酸衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，涉及化学结构通式为式(1)所示的两种新化合物1和2的制备；本发明还涉及该新化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。其制备方法是利用发明人筛选的对山楂酸具有结构修饰能力的总状共头霉菌种，在优化条件下发酵培养，对山楂酸进行转化7～10天，转化产物用有机溶剂萃取，分离纯化得到两个新的山楂酸衍生物。
文档编号A61K31/56GK103214543SQ20121056999
公开日2013年7月24日 申请日期2012年12月25日 优先权日2012年12月25日
发明者冯旭, 储智勇, 汪家春, 郭飞飞, 邹赢锌, 栾洁, 张术, 陈雅琳, 陈松, 李代萍 申请人:中国人民解放军海军医学研究所