低剂量il-2用于治疗自身免疫相关病症或炎性病症的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗自身免疫疾病和炎性疾病的新疗法。更具体来说，本发明涉及使用低剂量白介素-2治疗I型糖尿病和其他自身免疫疾病和/或炎性疾病。
【专利说明】低剂量IL-2用于治疗自身免疫相关病症或炎性病症的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及新的基于IL-2的人类疾病疗法。更具体来说，本发明涉及人类对象中自身免疫疾病、免疫相关疾病或炎性疾病、包括炎症的低剂量IL-2疗法。
【背景技术】
[0002]在几乎30年前鉴定出白介素-2 (IL-2) [I]，并且由于其在体外刺激T淋巴细胞的能力，最初被称为T细胞生长因子。它是报道分子量在约13kda至17kda之间[2]并且等电点为约6至8.7的蛋白质。
[0003]在临床上，IL-2已被用于在癌症和传染病中增强效应子免疫应答[3，4]。它现在被批准用于在人类中治疗癌症。
[0004]在其登记的适应症之一肾细胞癌(RCC)的辅助治疗中，不到10%的患者对治疗有响应。IL-2的这种受限的效能现在部分地用下述最新发现来解释，即IL-2也在调节T细胞(Treg)的外周存活和抑制性功能中发挥重要作用[5，6]，所述调节T细胞已知抑制抗肿瘤效应子应答。
[0005]事实上，在效应T细胞(Teff)和Treg两者的免疫应答期间，IL-2/IL-2受体(IL-2R)信号传导是重要 的。一方面，大范围IL-2R信号传导，对于表现出增强功能活性的终端分化的短寿命Teff细胞的发育以及引发正确的T细胞记忆来说是必需的[7]。另一方面，IL-2/IL-2R信号传导对于Treg发育和体内稳态来说是必不可少的，正如由IL-2敲除小鼠缺乏Treg这一事实所显示的。值得注意的是，IL-2或IL-2R缺陷小鼠能够增强效应子免疫应答，正如由它们发生严重的T-细胞介导的自身免疫疾病(AID)所明显证实的。
[0006]IL-2信号传导异常的这些不同结果，目前用IL-2/IL-2R信号传导的定量和定性差异两者调节Treg和Teff这一事实来解释。Treg显得需要低的IL-2/IL-2R信号传导阈值来支持其发育和外周稳态[6]。已显示，IL-2给药在小鼠和人类中引起Treg的显著扩增和活化[3，4，8]。
[0007]目前，IL-2继续被专门用于癌症免疫疗法，并且在人类自身免疫疾病或更广义来说由不想要的免疫应答引起的人类疾病中的应用，尚未被研究。这是由于与这样的治疗相关的、认识到的和预计的风险。事实上，IL-2刺激Teff的能力带有活化刚好介导所述疾病的效应T细胞而使疾病加重的风险。
[0008]发明概述
[0009]本发明的目的涉及一种用于在人类对象中减少或阻止不想要的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药能够有效刺激调节T淋巴细胞(Treg)而基本上不诱导效应T淋巴细胞(Teff)的量的白介素-2 (IL-2)。
[0010]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中减少或阻止不想要的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药能够有效刺激调节T淋巴细胞(Treg)而基本上不诱导与IL-2相关的副作用的量的白介素-2 (IL-2)。[0011]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中减少或阻止不想要的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药能够有效刺激调节T淋巴细胞(Treg)而基本上不诱导效应T淋巴细胞(Teff)和与IL-2相关的副作用的量的白介素-2 (IL-2)。
[0012]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中减少或阻止不想要的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药能够在所述对象中有效地使调节T淋巴细胞(Treg)与效应T淋巴细胞(Teff)之间的平衡(或比率)(Treg/Teff平衡)朝向Treg移动的量的白介素 ~2 (IL-2)。
[0013]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中减少或阻止不想要的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药能够有效地提高所述对象中调节T淋巴细胞(Treg)与效应T淋巴细胞(Teff)之间的平衡(或比率)的量的白介素-2 (IL-2)。
[0014]本发明提出了新的基于IL-2的疗法。本发明第一次显示出，IL-2可以用作通过特异性Treg扩增/活化起作用的一类新的免疫调节和抗炎性药物。
[0015]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症的方法，所述方法包括向所述对象给药能够在所述对象中有效地使调节T淋巴细胞(Treg)与效应T淋巴细胞(Teff)之间的平衡(Treg/Teff平衡)朝向Treg移动的量的白介素-2 (IL-2)。
[0016]本发明的另一个目的涉及一种用于在人类对象中治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症的方法，所述方法包括向所述对象给药能够有效地刺激调节T淋巴细胞(Treg)而基本上不诱导效应T淋巴细胞(Teff)和/或有效地降低炎症的量的白介素_2(IL-2)。
[0017]本发明可用于这 些病症的治愈性或预防性治疗。更具体来说，本发明的方法在对象中阻止自身免疫、免疫相关或炎性病症的发生或发展。
[0018]IL-2通常被重复地给药。
[0019]根据权利要求1，白介素-2在治疗自身免疫、免疫相关或炎性病症中的应用，其中它以约0.05至约2百万国际单位(MIU)/m2/天的剂量，优选以约0.1或0.2至约IMUI/m2/天或低于约3.5MIU/天的剂量给药。
[0020]在优选实施方式中，它以约3MIU/天的剂量或以低于约2MIU/天的剂量，优选以约0.1MIU至约2MIU/天之间、优选约0.3MIU至约IMIU/天之间的剂量给药。
[0021]所述治疗优选地可以至少包含第一疗程，在所述第一疗程中白介素-2在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药。优选地，随后在2至4周后进行维持剂量给药。所述维持剂量能每周一次或每月一次或两次给药。
[0022]在优选实施方式中，所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中，在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约0.2MUI/Hi2的白介素-2，并在I至3周后进行约0.2MUI/m2的维持剂量给药，所述维持剂量能每I至3周重复给药。在优选情况下，所述对象是成人，当每日剂量为0.2MUI/m2时其被给药约0.3MUI。
[0023]在另一种优选实施方式中，所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中，在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约0.6MUI/m2的白介素_2，并在2至4周后进行约0.6MUI/m2的维持剂量给药，所述维持剂量能每2至4周重复给药。在优选情况下，所述对象是成人，当每日剂量为0.6MUI/m2时其被给药约1ΜΠ。
[0024]在另一种优选实施方式中，所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中，在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还更优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约1.8MUI/m2的白介素-2，并在约I至2个月后进行约1.8MUI/m2的维持剂量给药，所述维持剂量能每I至2个月重复给药。在优选情况下，所述对象是成人，当每日剂量为1.8MUI/m2时其被给药约3MUI。
[0025]一般来说，IL-2优选以D/10至20父0、优选地0/5至IOXD的剂量给药，其中D是在Treg中启动⑶25表达的上调而不诱导Treg扩增的最低剂量。优选地，⑶25表达的上调为至少33%、优选地至少50%。
[0026]本发明在人类对象中刺激调节T淋巴细胞(Treg)而基本上不诱导效应T淋巴细胞(Teff )。本发明的方法能够在所述对象中增加Treg/Teff平衡或增加强力抑制性Treg细胞群体数量。
[0027]IL-2还被给药用于在人类对象中减轻或预防炎症。
[0028]本发明可用于治疗或预防与不想要的免疫应答相关或由其引起的任何病征。它特别适用于治疗炎症、免疫相关或自身免疫疾病，包括但不限于HCV相关脉管炎、眼色素层炎、肌炎、I型糖尿病、系统性红斑狼疮、系统性脉管炎、银屑病、过敏症、哮喘、克隆病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、自身免疫性甲状腺病、神经退行性疾病、阿兹海默病、移植物抗宿主疾病、自发性流产和同种异体移植排斥。
[0029]本发明的另一 个主题是一种用于确定在使用IL-2治疗的患有自身免疫、免疫相关或炎性病症的患者中IL-2治疗方案或剂量是否必须修改的方法，所述方法包括监测Treg的量和/或Treg中CD25的表达水平，其中Treg的量和/或Treg中CD25的表达水平低于对照值意味着要提高IL-2的剂量。
[0030]图例说明
[0031]图1:低剂量IL-2对HCV相关的自身免疫性脉管炎的生物标志物的影响
[0032]示出了 HCV病毒载量(图A)、冷球蛋白(图B)和C4补体血清水平(图C)随时间过程的变化。数据被表示成平均值土标准误差(n=10，*:P<0.05，**:P<0.01，*#:P<0.001)。
[0033]图2:低剂量IL-2对淋巴细胞亚群的影响
[0034]示出了CD4+T 细胞中的 CD4+CD25 高 CD127-Foxp3+ 和 CD8+T 细胞中的⑶8+CD25+Foxp3+的百分率(图A)、总体Treg/Teff比率(图B)、CD19+总B细胞和边缘区B细胞的绝对数量(图C)以及NK细胞和CD56toight NK细胞的绝对数量(图D)随时间过程的变化。数据被表示成平均值土标准误差(n=10，*:P<0.05，#P〈0.01，:P<0.001)。
[0035]图3.通过流式细胞术对⑶4+Treg进行表型表征。示出了用于鉴定⑶3+⑶4+T子集的代表性淋巴细胞门(gate)。在CD3+CD4+T细胞中，Treg被鉴定为CD25*CD127_FoxP3+细胞。
[0036]图4.Treg细胞在IL_2治疗下的HCV相关自身免疫性脉管炎患者中的抑制活性
[0037]测定FACS纯化的Treg在同种异体刺激下，在不同比例(1/1至1/8)下抑制自身效应T细胞增殖的能力。结果用cpm表示。示出的实验代表4。
[0038]图5.通过流式细胞术对⑶8+Treg进行表型表征。示出了用于鉴定⑶3+⑶8+Treg的代表性淋巴细胞门。在⑶3+⑶8+T细胞中，Treg被鉴定为⑶25+FoxP3+细胞。
[0039]图6.通过流式细胞术对⑶19+B细胞子集进行表征
[0040]B细胞子集群体被定义为未接触抗原的细胞(IgD+⑶27_)、记忆细胞(IgDTD27+)、边缘区细胞(IgD+CD27+)。
[0041]图7:通过PBMC的转录组学分析揭示出低剂量IL-2诱导炎性的整体降低
[0042]IL-2治疗之前和之后的分级聚类(图A)突显出主要影响B细胞相关基因和前炎性基因的基因下调。数据挖掘鉴定出NFKB途径是前炎性应答降低的中心(图B)。在IL-2治疗的患者中，下调的基因用红色框表示。转录特征区中存在的基因(图A)用实心圆框示意表示。2个基因产物之间的转录后活化(例如通过磷酸化、切断等)用尖锐的箭头表示，并且实心箭头表示直接转录活化。虚线箭头表示间接信号传导。
[0043]表(图C)示出了这些数据的ICA的结果。示出了在IL-2治疗组中上调或下调特征的数量，所述特征对于与炎性、免疫应答和自身免疫疾病(I型糖尿病、系统性红斑狼疮、自身免疫性甲状腺病)、移植(移植物抗宿主疾病和同种异体移植排斥)或炎性感染相关的疾病(美洲锥虫病、利什曼病、幽门螺旋杆菌感染、疟疾、变形虫病、志贺氏菌病，其都以高度炎症为特征)相关的GO术语和KEGG途径来说显著富集。作为对照，将同样数量的随机挑取的GO术语和细胞周期相关GO术语及对照病理一起，进行试验。对于每个GO术语或KEGG途径来说，Khi2检验的P-值指示与总体上调(2527)或下调的(3429)特征相比，上调或下调的特征的可能的富集偏倚。
[0044]图8:低剂量IL-2在I型糖尿病患者中诱导Treg。
[0045]图8示出了在用0. 33、I或3MUI/天的IL-2 (Proleukin?)给药5天的患者中的Treg/TCD4比率。在不同剂量下Treg增加峰值相当相似，但是效应的持续时间是剂量依赖性的，并为确定维持治疗的时间安排提供了信息(即剂量越低，维持注射之间的延迟越短)。
[0046]图9:低剂量IL-2不降低C-肽生产。
[0047]图9A示出了在用IL-2(Proleukin?.)给药5天的患者中的Treg/TCD4比率。图9B示出了在同一患者中，在IL-2给药之前和之后血清C-肽的浓度。在治疗期间存在Treg的增加，其与2个月时C-肽生产的增加相关联。
[0048]发明详述
[0049]本发明第一次出人意料地显示，在人类自身免疫患者中通过低剂量IL-2免疫疗法可以在体内扩增非常强的抑制性Treg而不扩增Teff，也没有不利事件发生。
[0050]IL-2被专门用于癌症免疫治疗，并且尚未在人类中在人自身免疫疾病中被单独研究。事实上，IL-2刺激Teff的能力带有激活刚好介导自身免疫的效应T细胞的风险。在这里，我们示出了 IL-2可以在诱导Treg而不诱导Teff的条件下使用的生物学证据，其与显示出没有观察到与免疫激活相关的不利事件的临床证据相一致。根据本发明，IL-2明显使Treg/Teff平衡向有利于Treg的方向倾斜，正如也由IL-2疗法期间炎性环境的总体降低所支持的。
[0051 ] 在HCV相关患者的第一个试验中，本发明人显示，低剂量IL-2耐受良好，诱导Treg细胞的急剧和选择性的增加，并在80%的患者中引起临床改善。
[0052]使用5天的1.5MIU/天的疗程治疗，在所有患者中观察到Treg的明显增加(增加
2倍)，并且没有副作用。在另外的5天的3MIU/天的疗程后，观察到Treg的进一步增加。[0053]我们的结果显示，所述治疗耐受良好，并且粒细胞、红细胞或肝脏酶系没有明显变化。此外，在1.5MIU/天的剂量下，没有观察到诸如虚弱、注射位点处的短暂局部反应、流感样综合征、肌肉痛或高血压的副作用。
[0054]重要的是，在整个治疗和跟踪期间，没有出现指示病理性T细胞活化的生物学或临床征兆。
[0055]5天的1.5M IU/天的疗程，代表了到目前为止出于在人类中诱导Treg目的的具有已证明的效能和安全性的最低IL-2剂量。
[0056]此外，本发明第一次揭示了 IL-2的显著的抗炎活性。我们的无监督转录组分析显示出与许多自身免疫疾病和炎性疾病以及免疫相关疾病例如移植物抗宿主疾病和同种异体移植排斥相关的特征/途径的清楚的下调。通过这项显示出可以在人类中使用IL-2来刺激Treg而不刺激Teff的研究，本发明人提出低剂量IL-2治疗将深刻地改变所有这些疾病的预防和治疗模式。
[0057]本发明人进一步在另一种自身免疫疾病即I型糖尿病中试验了低剂量IL-2，从而证实了低剂量IL-2在治疗自身免疫、免疫相关或炎性病症中的重要性。
[0058]因此，本发明提供了使用IL-2治疗自身免疫、免疫相关或炎性病症的新的治疗方法。本发明公开了 IL-2在低剂量下，能够在患有自身免疫、免疫相关或炎性病症的对象中有效地活化或扩增抑制性Treg细胞群体,而基本上不活化效应T细胞。
[0059]对象是任何人类患者，不论其年龄或性别。在特定实施方式中，患者可以是儿童或青少年。
[0060]白介素-2 (IL-2)
[0061 ] 在本发明的情形中，术语“ IL-2”是指任何来源的IL-2，包括哺乳动物来源例如人类、小鼠、大鼠、灵长动物和猪，并且可以是天然的或通过重组或合成技术获得的，包括通过微生物宿主生产的重组IL-2多肽。IL-2可以是或包含天然多肽序列，或者可以是天然IL-2多肽的活性变体。优选地，IL-2多肽或活性变体源自于人类来源，并包括重组人类IL-2，特别是由微生物宿主生产的重组人类IL-2。
[0062]IL-2的活性变体已在文献中公开。天然IL-2的变体可以是其片段、类似物和衍生物。“片段”是指只包含完整多肽序列的一部分的多肽。“类似物”是指包含带有一个或多个氨基酸置换、插入或缺失的天然多肽序列的多肽。突变蛋白和假肽是类似物的具体实例。“衍生物”包括任何修饰的天然IL-2多肽或其片段或类似物，例如糖基化、磷酸化、与另一种多肽或分子融合、聚合等，或通过化学或酶改性或添加，以改进IL-2的性质(例如稳定性、特异性等)。参比IL-2多肽的活性变体一般与参比IL-2多肽的氨基酸序列具有至少75%、优选地至少85%、更优选地至少90%的氨基酸序列同一性。
[0063]用于确定变体IL-2多肽是否有活性的方法在本领域中是可用的，并且在本发明中具体描述。活性变体最优选地是活化Treg的变体。
[0064]IL-2 变体的实例公开在例如 EP109748、EP136489、US4, 752，585、EP200280 或EP118, 617 中。
[0065]优选地，我们使用重组IL-2，即通过重组DNA技术制备的IL_2[9]。用于表达编码IL-2的重组DNA的宿主生物体可以是原核生物(细菌例如大肠杆菌)或真核生物(例如酵母、真菌、植物细胞或哺乳动物细胞)。用于生产IL-2的方法已被描述在例如US4，656，132、US4, 748，234、US4, 530，787 或 US4, 748，234 中，在此引为参考。
[0066]在优选实施方式中，本发明使用人类来源的IL-2或其活性变体，更优选地是通过重组生产的。人类IL-2的核苷酸和氨基酸序列分别公开在例如Genbank ref3558或P60568中。本发明更优选地使用人类IL-2。
[0067]在本发明中使用的IL-2荧光处于基本上纯的形式，例如纯度为95%或以上，更优选地96、97、98或99%纯。
[0068]对于在本发明中的使用来说，IL-2通常不与Teff抑制性药剂组合或联合给药。然而，尽管不是优选的或要求的，但可以考虑药物组合。
[0069]IL-2可以以单体蛋白或多体蛋白形式使用。
[0070]IL-2是可商购的，包括用于制药应用的，它被批准在人类患者中使用。适合的商品化形式包括例如:
[0071]- ProlcLikiii K.，_ ?种重组的人类 IL-2 组合物，
[0072]- Aldesleukin?, —种在大肠杆菌中生产的非糖基化的des-丙氨酰-1，丝氨酸-125人类白介素_2，
[0073]- Roncoleukin?,在酵母中生产的重组人类IL-2。
[0074]白介素-2可以单独或与任何其他治疗活性剂组合使用。
[0075]在优选实施方 式中，当用于预防或治疗I型糖尿病时，IL-2不与雷帕霉素组合给药。
[0076]调节T细朐
[0077]调节T细胞是具有免疫抑制性活性的T淋巴细胞。天然Treg是特征为⑶4+⑶25+Foxp3+的细胞。表现出Treg遗传缺陷的人类和小鼠发生多种T-细胞介导的器官特异性自身免疫疾病。Treg的定量或定性缺乏已在许多人类自身免疫疾病中描述，包括系统性红斑狼疮(SLE)U型糖尿病、多发性硬化症、眼色素层炎和肌炎。相反，在这些疾病的大多数动物模型中，Treg的添加/恢复引起临床改善。
[0078]Treg也在炎性疾病的控制中发挥重要作用，尽管它们在这样的疾病中的作用方式尚未被很好地理解。事实上，在大多数炎性疾病中，耗尽Treg使疾病恶化，而添加Treg使疾病减轻。这显示在例如动脉粥样硬化的情形中。尽管这种疾病最初不是炎性疾病，但它的发展涉及炎性组分/回路。在自发发生动脉粥样硬化的载脂蛋白E (ApoE)缺陷小鼠中，耗尽Treg使斑块形成明显加重，而注射多克隆Treg明显改善这种疾病。
[0079]大多数Treg是⑶4+细胞，尽管也存在具有抑制活性的⑶8+Foxp3+T淋巴细胞的少见群体。
[0080]效应T细朐
[0081]在本申请的情形中，“效应T细胞”(或“Teff”)是指Treg之外的常规T淋巴细胞(在文献中有时也称为Tconv)，其表达一种或多种T细胞受体(TCR)并执行效应细胞功能(例如细胞毒性活性、细胞因子分泌、抗自身识别等)。根据本发明，人类Teff的主要群体包括⑶4+T辅助性淋巴细胞(例如ThO、Thl、Thl7)和⑶4+或⑶8+细胞毒性T淋巴细胞，并且它们可以对自身或非自身抗原具有特异性。
[0082]在自身免疫疾病的具体情形中，TefT细胞包括负责或参与所述疾病的T细胞群体。例如，这样的T细胞群体包括识别自身抗原例如甲状腺抗原、关节抗原、β_郎格罕氏胰岛抗原等的T淋巴细胞。在GVHD疾病中，Teff细胞包括来自于移植物的T淋巴细胞。
[0083]Treg的诜择件扩增
[0084]在本发明的情形中，Treg的刺激(或诱导或活化或扩增)是指在患者中，在数量和活性方面Treg细胞相对于Teff的比例的任何增加，其通过抑制性测定法或通过反映出Treg活性的分子例如⑶25、即IL-2受体的α链的表达来测试。所述比例的增加优选地为与治疗前水平相比增加至少20%，更优选地至少40%，甚至更优选地至少60%。在特定且优选的实施方式中，刺激是指Treg/Teff平衡向Treg方向移动或Treg/Teff比率的增加。
[0085]本发明的本质方面事实上在于在患有自身免疫、免疫相关或炎性病症的人类患者中，在体内刺激Treg而基本上不诱导Teff的能力。
[0086]Treg的诱导(或活化或扩增)可以按照实施例中所公开的，通过例如测量来自于治疗对象的样品中Treg的数量(例如基于⑶25、FoxP3……的表达)和/或Treg的活性来测量。不存在Teff的显著诱导(或活化或扩增)也可以按照实施例中所公开的，通过例如测量来自于治疗对象的样品中Teff的数量和/或Teff的活性来测量。优选地，不存在显著诱导表明目标TefT细胞群体没有获得活化标志物例如⑶25、⑶69和/或HLA-DR，或者正如通过全转录组分析所评估的。用于检测、测量和定量Treg和TefT细胞的详细方法本身在本领域中是公知的，并且某些公开在实施例中。
[0087]Treg的刺激,可以通过患者中Treg计数的增加、通常增加至少10%,或通过活化标志物例如CD25的表达强度的增加来测量。不存在TefT诱导，通常意味着作为治疗的结果所述对象中Teff细胞群体没有增加超过10%。
[0088]Treg的刺激和 不存在Teff的显著诱导，优选地通过治疗对象中Treg/Teff的比率或平衡的测量来评估。这种平衡根据例如在来自于对象的样品中Treg的数量和Teff的数量来计算。如实施例中所示，在治疗患者中，这样的平衡通常增加至少20%，更优选地至少30%、40% 或 60%。
[0089]人类对象中Treg的基线百分数，即Treg/CD4+Teff的比率，为约4.6±0.6%(患有自身免疫疾病的患者中的基线％可能低得多，如实施例1中所示，其中患有HCV诱导的自身免疫性脉管炎的患者仅具有3.6%±0.23的基线百分数水平，尽管依赖于测量的技术情况，这些数量在不同实验室中可能变化)。
[0090]在这种应用中呈现的结果表明，在使用1.5MIU/天的I个疗程后，Treg的基线％获得2倍(100%)增加，在继续治疗后其可能进一步扩大。根据给药方案，已经获得超过300%的增加。在患有TlD的患者中，在15天的疗程后观察到类似的2倍增加，不论使用何种剂量(0.33、I 和 3MIU/天)。
[0091]在优选实施方式中，方法使对象中Treg/Teff比率增加20%、30%、40%、50%、75%、100%或以上。
[0092]此外，本发明显示出不仅⑶4+Treg增加，而且具有⑶8+的Treg稀有种群也增加。
[0093]在特定实施方式中，本发明增加循环的CD4+CD25高CD127-FoXp3+Treg。
[0094]在另一种特定实施方式中，本发明增加循环的⑶8+CD25SFOXp3+Treg。
[0095]另一个重要方面是扩增的Treg细胞群体是高度抑制性的。事实上，下面呈现的结果显示，在按照本发明治疗后，对TefT细胞具有强抑制活性的Treg被活化。在我们的研究中，在经典的抑制性测定法中，在1/8的Treg/Teff比例下可以检测到显著的抑制活性(>75%)，而来自于未治疗的正常个体在1/2至1/4的比例下给出这样的抑制。
[0096]因此，本发明允许在患有自身免疫疾病的人类对象中显著增加Treg，而不显著改变或活化效应T淋巴细胞。在优选实施方式中，本发明的方法是使对象中的CD25+Foxp3+Treg增加至少30%，并使所述对象中目标Teff的增加低于5%的方法。
[0097]此外，本发明出人意料地显示，在优选的给药剂量下，本发明的基于IL-2的疗法基本上不引起动脉高压、头痛、恶心、关节痛、肌肉痛或流感样综合征，也没有如FDA的IL-2产品特征概况(IL-2Summary of Product Charasteristics)中描述的许多其他IL-2的已知副作用。因此，可以在患有免疫相关病症的人类对象中使用IL-2疗法，而基本上不活化Teff细胞，也基本上不诱导与IL-2相关的副作用，同时非常显著地诱导Treg和抗炎性效应。
[0098]IL-2 剂量
[0099]对于在本发明中的使用来说，IL-2以有效活化Treg而基本上不活化Teff的剂量给药。结果是对象中Treg/Teff平衡的急剧增加。
[0100]有效剂量可以由医生根据本申请中包含的信息进行调整。具体来说，利用在患有自身免疫疾病的患者中IL-2可以在活化Treg并且基本上不活化Teff的条件下给药这一本发明的知识，专业技术人员可能能够为每位患者和每种状况调整剂量。
[0101]通常，IL-2以约0.05MIU/m2/天至约2MIU/m2/天、优选地0.2至约lMIU/m2/天的剂量给药。
[0102]因此，给药的IL-2量优选地取决于对象的身体表面积。身体表面积(BSA)是人体的测量或计算表面积。
[0103]已经发表了不经直`接测量而获得BSA的各种计算方法:
[0104]Dubois&Dubois公式[18]常用于成年人中:
[0105]
【权利要求】
1.白介素-2在人类对象中治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以在所述对象中增加调节T淋巴细胞(Treg)与效应T淋巴细胞(Teff )之间的平衡(Treg/Teff比率)的量给药白介素_2。
2.权利要求1的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以约0.05MIU/m2/天至约2MIU/m2/天、优选约0.2MUI/m2/天至约IMUI/m2/天的剂量给药白介素-2。
3.权利要求1或2的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以低于约3.5MIU/天的剂量给药白介素_2。
4.权利要求3的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以约3MIU/天的剂量给药白介素-2。
5.权利要求3的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以低于约2MIU/天的剂量给药白介素-2 (IL-2)。
6.权利要求5的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以约0.05MIU/天至约2MIU/天之间的剂量给药白介素_2 (IL-2)。
7.权利要求6的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以约0.3MIU/天至约IMIU/天之间的剂量给药白介素-2 (IL-2)。
8.权利要求1至7任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中IL-2被重复地给药。
9.权利要求1至8任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药白介素_2，并且优选在I至4周后进行维持给药。
10.权利要求1至9任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约0.2MUI/m2的白介素_2，并且在I至3周后给药约0.2MUI/m2的维持剂量，所述维持剂量能每I至3周重复。
11.权利要求10的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述对象是成人，当每日剂量为0.2MUI/m2时其被给药约0.3MUI。
12.权利要求1至9任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约0.6MUI/m2的白介素_2，并且在约2至4周后给药约0.6MUI/m2的维持剂量，所述维持剂量能每2至4周重复。
13.权利要求12的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述对象是成人，当每日剂量为0.6MUI/m2时其被给药约IMUI。
14.权利要求1至4任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗至少包含第一疗程，在所述第一疗程中在至少连续3天期间、优选连续3至7天期间、还优选连续4至5天期间每日一次给药剂量为约1.8MUI/m2的白介素_2，并且在约I或2个月后给药约1.8MUI/m2的维持剂量，所述维持剂量能每I或2个月重复。
15.权利要求14的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述对象是成人，当每日剂量为1.8MUI/m2时其被给药约3MUI。
16.权利要求1的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以D/10至20XD的剂量，优选以D/5至IOXD的剂量给药IL-2，其中D是在Treg中启动⑶25表达的上调而不诱导Treg扩增的最低剂量。
17.权利要求16的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中以使⑶25的上调增加至少33%、优选增加至少50%的剂量给药IL-2。
18.权利要求1至17任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗是治疗性的。
19.权利要求1至17任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗是预防性的。
20.权利要求1至17任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述治疗阻止所述自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症的发生或发展。
21.权利要求1至20任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症选自I型糖尿病、HCV相关脉管炎、眼色素层炎、肌炎、系统性红斑狼疮、系统性脉管炎、银屑病、过敏症、哮喘、克隆病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、自身免疫性甲状腺病、自身炎性疾病、神经退行性疾病、阿兹海默病、移植物抗宿主疾病、自发性流产和同种异体移植排斥。
22.权利要求21的白介素-2在治疗或预防自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是I型糖尿病。
23.权利要求22的白介素-2在治疗或预防自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述对象处于发生I型糖尿病的风险下，并且使用IL-2的治疗在所述对象中预防糖尿病的发作。
24.权利要求22的白介素-2在治疗或预防自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中待治疗对象显示出IL-2生产不足以及残余的胰岛素生产。
25.权利要求21的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是类风湿性关节炎。
26.权利要求21的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是多发性硬化症。
27.权利要求21的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是银屑病。
28.权利要求21的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是系统性红斑狼疮。
29.权利要求21的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述病症是阿兹海默病。
30.权利要求1至29任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中通过注射或通过口、鼻或体表施用来给药白介素_2。
31.权利要求1至29任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中通过皮下途径给药白介素-2 (IL-2)。
32.权利要求1至31任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中所述Treg/Teff比率增加至少20%、优选增加至少50%、甚至更优选增加至少 100%ο
33.权利要求1至31任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中在不显著诱导效应T淋巴细胞(Teff)的情况下，调节T淋巴细胞(Treg)被刺激。
34.权利要求1至33任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中在不诱导动脉高压、关节痛、肌肉痛或流感样综合征的情况下，Treg被刺激。
35.权利要求1至34任一项的白介素-2在治疗自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症中的应用，其中白介素-2在可药用载体或赋形剂中被给药。
36.一种用于确定在使用IL-2治疗的患有自身免疫病症、免疫相关病症或炎性病症的患者中IL-2治疗方案或剂量是否必须进行修改的方法，所述方法包括监测Treg的量和/或Treg中⑶25的表达水平，其中Treg的量和/或Treg中⑶25的表达水平低于对照值意味着要提高IL-2的剂量。`
【文档编号】A61P37/08GK103732241SQ201280012853
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2012年3月9日 优先权日:2011年3月11日
【发明者】大卫·克拉茨曼, 大卫·萨阿顿, 帕特里斯·卡库, 米谢勒·罗森瓦吉, 埃利亚内·皮亚焦, 吉尔贝·邦西蒙, 克洛德·贝尔纳 申请人:公共事业救济局-巴黎医院, 巴黎第六大学, 法国国家卫生及研究医学协会