抗fgfr4抗体及使用方法
【专利摘要】本发明提供了抗FGFR4抗体及其使用方法。
【专利说明】抗FGFR4抗体及使用方法
[0001]对相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2011年4月7日提交的美国专利申请N0.61/473，106的优先权，通过提及而将其内容收入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，已经以ASCII格式经EFS-WEB提交且通过述及完整收入本文。2012年3月22日创建的所述ASCII拷贝命名为P4524R1W0.txt，并且大小为37，020个字节。
发明领域
[0005]本发明涉及抗FGFR4抗体及其使用方法。
[0006]发明背景
[0007]成纤维细胞生长因子(FGF)构成22种具有不同生物学活性的结构相关多肽的一个家族；这些信号传导分子大多数通过结合并活化它们的关联受体(FGFR ;命名为FGFR1-4)(受体酪氨酸激酶的一个家族)来发挥功能(Eswarakumar et al., 2005 ；0rnitzand Itoh, 2001)。这些受体-配体相互作用导致受体二聚化和自我磷酸化、与膜结合的和胞质的辅助蛋白质形成复合物、及启动多种信号传导级联(Powers et al.，2000)。FGFR-FGF信号传导系统通过调节诸如生长、分化、迁移、形态发生、和血管发生等细胞功能/过程在发育和组织修复中发挥重要作用。
[0008]FGFR中的改变(即过表达、突变、易位、和截短)与多种人癌症有关，包括骨髓瘤、乳腺癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌、胰腺癌、和肝细胞癌(Bange et al., 2002 ；Cappellen etal.,1999 ；Chesi et al., 2001 ；Chesi et al.,1997 ；Gowardhan et al., 2005 ；Jaakkolaet al., 1993 ；Jang et al., 2001 ；Jang et al., 2000 ；Jeffers et al., 2002；Xiao etal.，1998)。肝细胞癌(HCC)是全球癌症相关死亡的主要起因之一，每年引起超过50万例死亡(Shariff et al.，2009)。虽然FGFR4在癌症中的作用仍然有待完全阐明，但是数项发现提示这种受体可能是HCC发生和/或发展中的一个重要角色。FGFR4是人肝细胞中存在的优势FGFR同等型(Kan et al.，1999);我们先前还已经报告了肝组织具有FGFR4的最高转录物水平(Lin et al.，2007)。除了在肝癌(以及数种其它类型的人肿瘤)过表达的FGFR4之外，还在HCC患者样品中观察到数种错义遗传改变；值得注意地，鉴定到FGFR4中高度频繁的G388R单核苷酸多态性(与头和颈癌降低的存活，以及结肠、软组织、前列腺、和乳腺癌更具攻击性的表型有关)(Ho et al.，2009)。而且，先前已经证明了 FGF19 (即FGFR4特异性配体)在小鼠中的异位表达促进肝细胞增殖、肝细胞发育异常、和瘤形成(Nicholes etal.，2002)。
[0009]清楚的是仍然需要具有最适于开发成治疗剂的临床属性的药剂。本文所述发明满足了此需求并提供了其它好处。
[0010]通过述及而完整收录本文中引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)。
[0011]发明概述[0012]本发明提供抗FGFR4抗体及其使用方法。
[0013]一方面，本发明提供了与FGFR4结合的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人FGFR4。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人、小鼠和猕猴FGFR4。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体以≤0.05nM的亲和力结合人FGFR4。
[0014]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体对具有图12D所示氨基酸序列的小鼠C3蛋白不发生实质性结合。
[0015]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体结合变性的FGFR4。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体结合还原的、变性的FGFR4。在一些实施方案中，使用Western印迹来测定抗FGFR4抗体对FGFR4的结合。
[0016]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体对包含G165A突变的人FGFR4不发生实质性结合。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体结合与包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170、基本上由成熟人？6?1?4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的多肽。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体结合包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的多肽。
[0017]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体是FGFR4活性的拮抗剂。在一些实施方案中，FGFR4活性为FGF诱导的细胞增殖、FGF对FGFR4的结合、暴露于FGF19的细胞中FGF19介导的对CYP7 α 7表达的抑制、或FGF19诱导的集落形成。在一些实施方案中，FGFl和/或FGF19对FGFR4的结合受到抑制。在一些实施方案中，抑制FGFl结合FGFR4的IC5tl为约
0.1OnM 而抑制 FGF19 结合 FGFR4 的 IC50 为约 0.1OnM0
[0018]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体为单克隆抗体。
[0019]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体为人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体。
[0020]在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体为结合FGFR4的抗体片段。
[0021]在一些实施方案中，该抗体包含(a)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，(b)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6，和(c)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2。
[0022]在一些实施方案中，该抗体包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3。在一些实施方案中，该抗体进一步包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:6。
[0023]在一些实施方案中，该抗体包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:6。在一些实施方案中，该抗体进一步包含SEQ ID N0:9、10、ll和/或12的轻链可变域框架序列。
[0024]在一些实施方案中，该抗体进一步包含SEQ ID NO: 13、14、15和/或16的重链可变域框架序列。
[0025]在一些实施方案中，该抗体包含(a) VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID N0:7具有至少95%序列同一性；(b) VL序列,其与氨基酸序列SEQ ID N0:8具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该抗体包含VH序列SEQID N0:7。在一些实施方案中，该抗体包含VL序列SEQ ID N0:8。
[0026]在一些实施方案中，该抗体包含VH序列SEQ ID N0:7和VL序列SEQ ID N0:8。
[0027]在一些实施方案中，该抗体为全长IgGl抗体。
[0028]本发明还提供了分离的核酸，其编码本文所述任何抗体。
[0029]本发明还提供了宿主细胞，其包含本文所述任何核酸。
[0030]本发明还提供了生产抗体的方法，其包括培养本文所述宿主细胞，使得该抗体生成。在一些实施方案中，该方法进一步包括自该宿主细胞回收该抗体。
[0031 ] 本发明还提供了免疫偶联物，其包含本文所述任何抗体和细胞毒剂。
[0032]本发明还提供了药物配制剂，其包含本文所述任何抗体和药学可接受载体。在一些实施方案中，该药物配制剂进一步包含其它的治疗剂。
[0033]本发明还提供了本文所述任何抗体，其用作药物。
[0034]在一些实施方案中，该抗体用于治疗癌症。
[0035]在一些实施方案中，该抗体用于抑制细胞增殖。
[0036]在一些实施方案中，该抗体用于制备药物。
[0037]在一些实施方案中，该药物用于治疗癌症。
[0038]在一些实施方案中，该药物用于抑制细胞增殖。
[0039]本发明还提供了治疗具有癌症的个体的方法，包括对个体施用有效量的本文所述任何抗体。在一些实施方案中，该方法进一步包括对个体施用其它的治疗剂。
[0040]本发明还提供了在个体中抑制细胞增殖的方法，包括对个体施用有效量的本文所述任何抗体以抑制细胞增殖。
[0041]在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌、肺癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、白血病、子宫内膜癌、结肠癌、前列腺癌、垂体癌、乳房纤维腺瘤、头和颈癌、软组织癌、成神经细胞瘤、黑素瘤、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌和/或肝癌。
[0042]在某些实施方案中，该癌展示FGFR4表达(诸如过表达)、扩增、或活化。在某些实施方案中，该癌展示FGFR4扩增。
[0043]附图简述
[0044]图1:由FGF19介导的肝肿瘤发生需要FGFR4。A，自10月龄FGF19-TG:FGFR4_WT小鼠的肝表面突出的多个、大的、隆起的肿瘤(箭头)(左边小图)。来自10月龄FGF19-TG: FGFR4-K0小鼠的肝(右边小图)。B,与FGFR4-K0或FGFR4-WT小鼠交配的雌性(左边小图)和雄性(右边小图)FGF19-TG或野生型小鼠中的BrdU掺入。C，4月龄用DEN处理的FGF19-TG:FGFR4-WT小鼠的肝表面上的多个、大的、隆起的肿瘤(箭头)。D，用DEN处理的雄性和雌性FGF19-TG小鼠中肝肿·瘤的流行性，通过肉眼和组织学检查测定。E，来自用DEN处理的FGF19-TG或野生型雌性(左边小图)和雄性(右边小图)小鼠的肝重。星号(*)指示自7月时间点无法测量用DEN处理的雄性FGF19-TG小鼠的肝重，因为无一存活超过6月龄。F，用DEN处理的FGF19-TG或野生型雌性(左边小图)和雄性(右边小图)FGFR4-K0小鼠的肝重。
[0045]图2 =LDl结合FGFR4。A，LDl结合人(h)、小鼠(m)、和猕猴(c) FGFR4，但不结合hFGFRl、hFGFR2、或hFGFR3。通过固相结合测定法测定LDl对固定化FGFR Fe嵌合蛋白的结合。B，LD1结合小鼠、猕猴、和人FGFR4的亲和力，通过表面等离振子共振测定。C，LD1对稳定转染HEK293细胞的细胞表面上表达的hFGFR4的结合，通过FACS测定(RFU=相对荧光单位)。D，LDl对固定化的携带点突变的hFGFR4-Flag嵌合蛋白的结合，通过固相结合测定法测量。E，LD1对携带点突变的hFGFR4-Flag嵌合蛋白的结合，通过Western印迹评估。将突变蛋白电泳，并使用LD1、抗FGFR4(8G11)、和抗Flag抗体序贯进行免疫印迹。F，二聚体模型，显示G165 (黑色)在结合至FGF19 (灰色)的FGFR4 (黑色和白色)上的位置。
[0046]图3 =LDl抑制FGFR4活性。A，LDl抑制FGFR4结合FGFl和FGF19，通过固相结合测定法测定。B，LDl抑制稳定表达FGFR4/R1的BaF3细胞由FGFl刺激的增殖。C，LDl抑制稳定表达FGFR4的L6细胞中的FGFR4信号传导。D，肝肿瘤细胞系的一个子集中FGFR4蛋白质的细胞表面表达，使用LDl通过FACS分析测定。
[0047]图4 =LDl在肝癌细胞系中抑制FGFR4生物学活性。A，LDl在HEP3B细胞中抑制FGFR4信号传导，通过Western印迹评估。B, LDl抑制HEP3B细胞中受FGFR4调节的CYP7 α I表达。CYP7a I水平表述为相对于未处理细胞中的水平的倍数表达。C，LDl抑制一组肝癌细胞系中受FGFR4调节的C-Fos表达。结果表述为相对于未处理细胞中的c-Fos水平的倍数表达。D，用FGFR4shRNA多西环素诱导型载体稳定转染的JHH5细胞中通过阻抑FGFR4表达来抑制集落形成。E，LDl抑制HCC细胞系集落形成。F，LDl抑制的肝癌细胞系集落形成的计数。数值表述为不添加LDl的情况下计数的集落数目的百分比。
[0048]图5 =LDl的体内功效。A，LDl抑制小鼠肝中受FGF19调节的c_Fos表达。结果表述为相对于未处理小鼠的肝中的c-Fos水平的倍数表达。B，LDl (30mg/kg;每周两次)在体内抑制HUH7异种移植物肿瘤生长。C，LDl对来自图5B的HUH7异种移植物肿瘤中FGFR4、CYP7 a 1、c-Fos、和egr_l的mRNA表达的影响。D，自用对照抗体处理的用DEN加速的FGF19-TG:FGFR4-WT小鼠的肝表面突出的多个、大的、隆起的肿瘤(箭头)(上部小图)。用LDl处理的用DEN加速的F GF19-TG:FGFR4-WT小鼠的肝(下部小图)。E，用对照抗体、LDU或1A6 (抗FGF19抗体)处理的用DEN加速的FGF19_TG:FGFR4_WT小鼠的肝重。
[0049]图6:FGFR4表达在癌症中失调。A,线-框图(whisker-box plot)显示人肿瘤和正常组织中的FGFR4表达,通过BioExpress数据库的mRNA分析测定。中心线指示中值；框代表第一和第三个四分位数之间的四分位间范围。“线”自四分位间延伸至极值的位置。B,乳腺(100倍放大率)和胰腺(100倍放大率)腺癌和肝细胞癌(200倍放大率和400倍放大率)的样品中的FGFR4免疫染色。C，一组人正常肝和肝肿瘤中的FGFR4mRNA表达，通过qRT-PCR测定。每份样品的数值表述为相对于样品NI中观察到的水平的倍数表达。
[0050]图7:肝癌细胞系中的FGFR表达。A，一组肝肿瘤细胞系中的FGFR4mRNA表达，通过qRT-PCR测定。数值表述为相对于JHH4细胞系中的FGFRl水平的倍数表达。B，与图7A中同一组细胞系中的FGFR4蛋白质表达,通过Western印迹测定。
[0051]图8:LD1在HUH7细胞中抑制FGFR4生物学活性。LDl在HUH7细胞中抑制受FGFR4调节的CYP7 a I阻抑。CYP7 a I水平以相对于未处理细胞中的水平的倍数表达来表述。
[0052]图9 =LDl的体内功效。LDl (30mg/kg)在体内抑制HUH7异种移植物肿瘤生长。以两周一次模态评估了 LDl的抗肿瘤功效。
[0053]图10:抗FGFR4的小鼠和人源化变体的可变域序列。将小鼠LDl和人源化变体hLDl.vB和hLDl.v22的氨基酸序列与曲妥单抗中使用的(A)人卡帕KhuKI^P (B)人VH亚组IlKhuIII)可变域框架比对。以虚线框突显差异，并依照Kabat对位置编号。基于序列、结构和接触 CDR定义的组合(MacCallum RM et al., J of Molec Biol (1996) ; 262:732-45)选择自小鼠LDl嫁接入人可变卡帕I和亚组III共有框架的高变区，并以框标示。人源化期间改变轻链中的三个微调(vernier)位置以恢复亲和力；预期这些位置不是表面暴露的。
[0054]图11:抗FGFR4抗体变体的药动学和分布。(A)使用FGFR4ELISA比较chLDl和hLDl.vB对FGFR4的结合。(B) CRL nu/nu小鼠中HUH7人肝细胞癌异种移植物模型中chLDl、hLDl.vB和媒介的16天肿瘤体积的比较。每周两次以30mg/kg施用抗体(每组10只小鼠)。只有chLDl相对于PBS对照有效降低肿瘤生长(P值=0.014)，而hLDl.vB并非显著有效(P值=0.486)。(C)药动学，给chLDl和hLDl.vBNCR裸小鼠IV服用I或20mg/kg,并使用FGFR4ELISA分析样品。使用IgG ELISA获得相似结果(未显示)。(D) NCR裸小鼠中1251-ChLDl和1251-hLDl.vB的组织分布。给小鼠服用1251-ChLDl或125I_hLDl.vB任一，并在给药后2小时测定每克组织注射剂量百分比(％ID/g)，如方法中所述。
[0055]图12:hLDl.vB和小鼠C3d之间的相互作用的鉴定。(A)在PBS/BSA或NCR裸小鼠、大鼠、人和猕猴血浆中温育48小时后chLDl (阴影线柱)和hLDl.vB (白色柱)的检测。使用FGFR4ELISA测定百分比回收。(B)1251-ChLDl (实线)和125I_hLDl.vB (虚线)的血浆结合分析。迹线偏置(off-set);点指示150kDa峰的位置。将抗体在小鼠血楽:中温育O和48小鼠，接着使用大小排阻HPLC进行分析。对于PBS/BSA、人血浆或猕猴血浆中的温育，见图
15。所有温育在与IgG对应的预期150kDa处产生峰。在含有hLDl.vB的小鼠血浆样品中只观察到更高分子量峰。初始时间点揭示大约270kDa和大约550kDa处另外的峰，而在48小时，只观察到270kDa峰。于pH4温育hLDl.vB/小鼠血浆时未观察到高分子量峰，指示这些高分子量峰的存在是pH依赖性的(图15)。(C)小鼠血浆的免疫沉淀。将chLDl和hLDl.vB在小鼠血浆中于37°C温育24小时，并通过大小排阻HPLC进行分析。然后将蛋白G珠添加至级分，接着进行SDS-PAGE分析。在与hLDl.vB/小鼠血浆样品(道3)中存在的270kDa峰对应的级分中检测到大约37kDa处的条带，但是来自猕猴或人血浆或PBS/BSA的样品中不然(图15)。在单独的小鼠血浆(道4)或与chLDl —起温育的小鼠血浆(道2)中未观察到此条带。道I运行蛋白质分子量标志物。(D)自hLDl.vB免疫沉淀获得的小鼠C3的MS/MS序列覆盖。显示了小鼠C3的序列(SEQ ID N0:38)，并以下划线标示编码C3d的区域。鉴定的肽如下:
[0056]DVPAADLSDQVPDTDSETRIILQGSPVVQMAEDAVDGER(SEQ ID NO:17)
[0057]RQEALELIKKGYTQQLAFK(SEQ ID NO:18)
[0058]AAFNNRPPSTffLTAYVVK(SEQ ID NO:19)
[0059]AANLIAIDSHVLCGAVK(SEQ ID NO:20)
[0060]QKPDGVFQEDGPVIHQEMIGGFR(SEQ ID NO:21)
[0061 ] EADVSLTAFVLIALQEARDICEGQVNSLPGSINKAGEYIEASYMNLQRPYTVAIAGYALALMNK(SEQID NO:22)
[0062]WEEPDQQLYNVEATSY(SEQ ID NO:23)
[0063]YYGGGYGSTQATFMVFQALAQYQTDVPDHK(SEQ ID NO:24)
[0064]GTLSVVAVYHAK(SEQ ID NO:25)
[0065]DLELLASGVDR(SEQ ID NO:26)
[0066]NTLIIYLEK(SEQ ID NO:27)。[0067]图13:亲和力成熟的抗FGFR4变体缺乏C3d结合。(A)FGFR4结合的检测，将chLDl、hLDl.vB和hLDl.v22在NCR裸、C3野生型(wt)和C3ko小鼠血清中温育16小时，之后使用FGFR4ELISA进行评估。将样品针对在PBS/0.5%BSA中温育的相同样品标准化。(B) hLDl.v22缺乏小鼠C3d免疫沉淀。通过SDS-PAGE分析使用chLDl (道2)、hLDl.vB (道3)和hLDl.v22(道4)来自NCR裸小鼠血浆的免疫沉淀。只在hLDl.vB/小鼠血浆样品中检测到~37kDa条带。道I运行蛋白质分子量标志物。
[0068]图14:C3d结合的丧失恢复药动学和功效。⑷C3wt和C3ko小鼠中chLDl和hLDl.vB的药动学分析。以20mg/kg IV服用抗体；使用FGFR4ELISA监测它们在血液中的浓度。C3ko小鼠中hLDl.vB的清除与C3ko和C3wt小鼠二者中的chLDl的清除相似。(B)NCR裸小鼠中chLDlhLDl.vB和hLDl.v22的药动学分析。以20mg/kg IV服用抗体；使用FGFR4ELISA监测它们在血液中的浓度。hLDl.v22的清除与chLDl的清除相似。(C)CRL nu/nu小鼠中HUH7人HCC异种移植物模型中chLDlhLDl.vB和hLDl.v22的比较。每周一次以30mg/kg服用抗体(每组10只小鼠)，并监测肿瘤体积4周。第21天，chLDl和hLDl.v22 (分别为p值=7xl0_7和3χ10_5)相对于PBS对照(空心方形)有效降低肿瘤生长，而hLDl.vB只是略微有效(P 值=0.011)。
[0069]图15:来自体外 (A-B)和体内研究(C)样品的血浆中放射性标记的chLDl和hLDl.vB的大小排阻HPLC分析。将1251-hLDl.vB (A)和1251-ChLDl (B)添加至PBS/BSA或小鼠、人和猕猴血浆，并在O或48小时通过大小排阻HPLC进行分析。所有迹线揭示IgG预期150kDa处的峰(右边的峰)。只在含有hLDl.vB的初始小鼠血浆样品中观察到大约270kDa(中间的峰)和大约550kDa (左边的峰)处更高分子量的峰；在48小时，只观察到另外的270kDa峰。对于PH4.0的小鼠血浆中的hLDl.vB未观察到这些高分子量峰，指示高分子量峰的生成是pH依赖性的。在猕猴或人血浆中或在任何添加chLDl的血浆中未检测到高分子量峰；(C)体内小鼠血浆样品。给小鼠服用~0.lmg/kg抗体，比活性chLDl为12.52 μ Ci/μ g,hLDl.vB为9.99 μ Ci/ug。在0.25、2、5、24、72和120小时收集血清样品。所有迹线揭示峰IgG预期150kDa处的峰(右边的峰)。只在hLDl.vB血清样品中观察到~270kDa (中间的峰)和~550kDa (左边的峰)处更高分子量的峰。对chLDl未观察到高分子量峰。
[0070]图16:免疫沉淀和SDS-PAGE分析。将抗体在血浆中于37°C温育24小时，然后通过大小排阻HPLC进行分级。将蛋白G珠添加至含有高分子量峰的大小排阻HPLC级分。通过SDS-PAGE分析下拉样品(pull-down sample)。⑷体外大鼠血衆；⑶体外称猴血衆；(C)体外人血浆。在与hLDl.vB—起温育的大鼠样品中检测到~37kDa蛋白质，但是在猕猴和人样品中不然(它们各自凝胶的道4)。在任何空白血浆中(每块凝胶的道2)或在chLDl样品中(每块凝胶的道3)没有观察到~37kDa蛋白质的条带。道I运行蛋白质分子量标志物。(D)体内小鼠血浆。如“方法”中所述给小鼠服用hLDl.vB或chLDl。然后将蛋白G珠添加至自给药时间点后2小时收集的血清样品并通过SDS-PAGE进行分析。在hLDl.vB(道3)中观察到~37kDa的条带，但是chLDl血清样品(道2)不然。道I运行蛋白质分子量标志物。
[0071]图17:添加至 C3wt 血清、C3ko 小鼠血清、和 PBS/BSA 的 chLDl 和 hLDl.vB 的 ELISA检测。将抗体在血清或PBS/BSA中温育过夜，然后通过ELISA进行分析。相对于PBS/BSA，在C3ko小鼠血清完全回收hLDl.vB,但是C3wt小鼠血清不然。自所有基质完全回收chLDl。[0072]图18:显示GenBank登录号AAB25788的例示性人FGFR4氨基酸序列。
[0073]发明详述
[0074]1.定义 [0075]出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。
[0076]“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
[0077]“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。
[0078]抗血管发生剂指阻断或在某种程度上干扰血管发育的化合物。抗血管发生因子可以是例如结合涉及促进血管发生的生长因子或生长因子受体的小分子或抗体。在一个实施方案中，抗血管发生剂是结合血管内皮生长因子(VEGF)的抗体，诸如贝伐单抗(AVASTIN? )。
[0079]术语“抗FGFR4抗体”和“结合FGFR4的抗体”指能够以足够亲和力结合FGFR4，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向FGFR4的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗FGFR4抗体结合无关的、非FGFR4的蛋白质的程度小于该抗体对FGFR4的结合的约10%。在某些实施方案中，结合FGFR4的抗体具有< I μ Μ、(ΙΟΟηΜ、≤ ΙΟηΜ、≤ InM、≤ 0.1nM、≤ 0.01nM、或≤ 0.0OlnM(例如 10_8M 或更少，例如 KT8M到10_13M，例如10_9M到I(T13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合在来自不同物种的FGFR4中保守的FGFR4表位。
[0080]本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。
[0081]“抗体片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab’)2 ;双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv);和由抗体片段形成的多特异性抗体。
[0082]与参照抗体“结合相同表位的抗体”指在竞争测定法中将参照抗体对其抗原的结合阻断50%或更多的抗体，且相反，参照抗体在竞争测定法中将该抗体对其抗原的结合阻断50%或更多。本文中提供了例示性的竞争测定法。
[0083]在用于本文时，术语“FGFR4”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)的任何天然FGFR4，除非另有说明。该术语涵盖“全长”，未加工的FGFR4以及FGFR4因细胞中的加工所致的任何形式。该术语还涵盖FGFR4的天然存在变体，例如剪接变体或等位变体。一种例示性人FGFR4的氨基酸序列显示于图18。
[0084]“FGFR4活化”指FGFR4受体的活化或磷酸化。一般而言，FGFR4活化导致信号转导(例如由FGFR4受体的细胞内激酶结构域引起的，磷酸化FGFR4或底物多肽中的酪氨酸残基)。FGFR4活化可以由FGFR4配体(Gas6)结合感兴趣FGFR4受体来介导。Gas6对FGFR4的结合可活化FGFR4的激酶结构域并由此导致FGFR4中酪氨酸残基的磷酸化和/或其它的底物多肽中酪氨酸残基的磷酸化。
[0085]术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长/增殖不受调控的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤(例如何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝 癌(liver cancer)、膀胱癌、肝瘤(h印atoma)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、白血病和其它淋巴增殖性病症、及各种类型的头和颈癌。
[0086]术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。
[0087]“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烧化剂类(alkylating agents),诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺
(cyclophosphamide) (CYTOXANfe)；横酸烷基酯类(alkyl sulfonates),诸
如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙唳类(aziridines),诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines),包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemeIamine)、三乙撑憐酸胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代憐酸胺(triethylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺(trimethylolomelamine);番蒸枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));δ_9_ 四氢大麻酌.(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酌.(dronabinol), MARINOL?);β -拉帕醌(Iapachone)；拉帕醇(Iapachol);秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康
(topotecan) ( HYCAMTIN? )、CPT-1l (伊立替康(irinotecan), CAMPTOSAR?
)、乙酰喜树碱、东莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin ;CC_1065 (包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊苷(teniposide);隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素I和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin (包括合成类似物，KW-2189和CBl-TMl);艾槽塞洛素(eleutherobin) ；pancratistatin ；sarcodictyin ;海绵抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogen mustards),诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆憐酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环憐酉先胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆留醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿啼 P定氮芥(uracil mustard);亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素Y II和加利车霉素ω-- (参见例如 Nicolaou 等人，Angew.Chem Intl.Ed.Engl., 33:183-186(1994) ) ；CDP323, 一种口服α -4整联蛋白抑制剂 ;蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A ;埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素 D (dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 二氮_5_氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN?、吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂(DOXIL?)、脂质体多柔比星TLC D-99 (MYOCET?)、PEG化脂质体多柔比星(C'AELYX_?)、和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcel1mycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酷酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢物类，诸如甲氨蝶 呤、吉西他滨(gemcitabine) ( GEMZAR? )、替加氟(tegafur) ( UFTORAL? )、卡培他滨(capecitabine) (XELODA? )、埃坡霉素(epothilone)和 5_ 氟尿
啼P定(5-FU);叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate) ^票呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-疏基票呤(mercaptopurine)、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鸟 P票呤(thioguanine)；啼卩定类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxif Iuridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(f 1xuridine);雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睾内酯(testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid);醋葡醒内酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酉先丙酸(aminolevulinic acid);恩尿啼唳(eniluracil);安口丫P定(amsacrine) ；bestrabucil ;比生群(bisantrene);依达曲沙(edatraxate)；地憐酉先胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ；依利醋铵(elliptinium acetate) ;epothilone ;依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；轻脲(hydroxyurea);香燕多糖(Ientinan);氯尼达明(1nidamine);美登木素生物减类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌达醇(mopidamol) ； 二胺硝口丫 P定(nitracrine);喷司他丁 (pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(1soxantrone) ;2_ 乙基酸月井(ethylhydrazide);丙卡巴餅(procarbazine) ； PSK? 多糖复合物(JHS NaturalProducts，Eugene，OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲兰(sizofiran);螺方定错(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亚胺醌(triaziquone) ;2，2’，2’ ’ -三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、抚孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine) (ELDISINE?，FILDESIN? );达卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine) ; 二溴甘露醇(mitobronitol) ; 二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman) ;gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) (“Ara_C”)；塞替派(thiotepa)；
类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel) ( TAXOL? )、清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANE?)和多西他塞(doxetaxel) ( TAXOTERE? );苯丁酸氮芥(chlorambucil) ;6_ 硫鸟票呤(thioguanine);疏基票呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate);钼类似物，诸如顺钼(cisplatin)、奥沙利钼(oxaliplatin)(例如ELOXATIN? )和卡钼(carboplatin);长春药类(vincas)，其阻止微
管蛋白聚合形成微管，包括长春碱(vinblastine) (VELBAN?)、长春新碱(vincristine) (ONCOVIN?)、长春地辛(vindesine) (ELDISINE?, FILDESIN?)、
和长春瑞滨(vinorelbine) (NAVELBINE?)；依托泊音(etoposide) (VP-16)；
异环磷酰胺(ifosfamide);米·托蒽酉昆(mitoxantrone);亚叶酸(Ieucovorin)；能灭瘤(novantrone);依达曲沙(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);伊本勝酸盐(ibandronate);拓扑异构酶抑制剂RFS2000 ； 二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)，包
括贝沙罗汀(bexarotene) (TARGRETINfe)； 二勝酸盐类(bisphosphonates),诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如BONEFOS?或OSTAC?)、依替膦酸钠(etidronate) ( DIDROCAL? )、NE-58095、唑来膦酸 / 唑来膦酸盐(zoledronicacid/zoledronate) ( ZO ΜΕΤΑ? )、阿伦膦酸盐(alendronate) ( FO S AM ΑΧ? )、帕米膦酸盐(pamidronate) ( AREDIA? )、替鲁膦酸盐(tiludronatu) ( SKELID? )或利塞膦酸盐(risedronate) ( ACTONEL? );以及曲沙他滨(troxacitabine) (1，3_ 二
氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC- α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗，诸如THERATOPE?疫苗和基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN?疫苗、LEUVECTIN?疫苗和VAXID?.疫苗；拓扑异构酶I抑制剂(例如LUR1OTECAN? ) ；rmRH (例如 ABARELIX? ) ;BAY439006 (sorafenib; Bayer)；SU-11248 (sunitinib, SUTENT?，Pfizer);哌立福辛(perifosine)，C0X-2 抑制剂(如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib)),蛋白体抑制剂(例如PS341);bortezomib ( VELCADE? ); CC1-779 ；tipifarnib (R11577) ；orafenib, ABT510 ；Bcl-2 抑制剂，诸如 oblimersensodium ( GENASENSE? ); pixantrone ；EGFR 抑制剂(见下文定义)；酪氨酸激酶抑制剂(见下文定义)；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，诸如雷帕霉素(rapamycin) (sirolimus, RAPAMUNES；);法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafarnib (SCH6636, SARASARTM);及任何上述各项的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP (环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX (奥沙利钼(ELOXATIN?)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。
[0088]如本文中定义的化疗剂包括起调节、降低、阻断或抑制可促进癌生长的激素效果作用的“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”类。它们自身可以是激素，包括但不限于:具有混合的激动剂/拮抗剂特性的抗雌激素类，包括他莫昔芬(tamoxifen) (NOLVADEX)、
4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene) (FARESTON?)、艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene) (EVISTA?)、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)，和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，诸如SERM3 ;没有激动剂特性的纯的抗雌激素类，诸如氟维司群(fulvestrant) (FASLODEX?)和EM800 (此
类药剂可阻断雌激素受体(ER) 二聚化、抑制DNA结合、提高ER周转、和/或遏制ER水平)；芳香酶抑制剂类，包括类固醇芳香酶抑制剂类，诸如福美坦(formestane)和依西美坦(exemestane) (AROMASIN?)，和非类固醇芳香酶抑制剂类，诸如阿那曲唑
(anastrozole) (ARIMIDEX?)、来曲唑(Ietrozole) (FEMARA?):和氨鲁米特(aminoglutethimide),和其它芳香酶抑制剂类,包括伏氯唑(vorozole) (RIVISOR?)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate) (MEGASE?)、法倔唑(fadrozole)和 4(5)-咪唑；促黄体生成激素释放激素激动剂类，包括亮丙瑞林(Ieuprolide) ( LUPRON?和ELIGARD? )、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)和曲普瑞林(triptorelin);性类固醇类(sex steroids),包括妊娠素类(progestine),诸如醋酸甲地孕酮和醋酸甲轻孕酮(medroxyprogesteroneacetate),雌激素类,诸如二乙基己烯雌酹(diethylstiIbestrol)和普雷马林(premarin),和雄激素类/类视黄酸类,诸如氟甲睾酮(fluoxymesterone)、所有反式视黄酸(transretionic acid)和芬维 A 胺(fenretinide)；奥那司酮(onapristone);抗孕酮类；雌激素受体下调剂类(ERD);抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide);及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。[0089]术语“嵌合”抗体指其中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。
[0090]抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。抗体有5大类:IgA、IgD、IgE、IgGjP IgM，并且这些中的几种可以进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1, IgG2, IgG3、IgG4 JgA1、和IgA2。与不同类免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、Y、和μ。
[0091]术语“细胞抑制剂”指在体外或在体内阻滞细胞生长的化合物或组合物。如此，细胞抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。细胞抑制剂的其它的例子包括通过诱导G0/G1停滞或M期停滞来阻断细胞周期行进的药剂。人源化抗Her2抗体
曲妥单抗(HERCEPTIN?).是诱导G0/G1阻滞的细胞抑制剂的一个例子。经典的M期
阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烧类(taxanes)、和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。某些阻滞Gl的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、顺钼(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5_ 氟尿嘧 P定(5-fIuorouracil)和 ara_C。更多信息可参见 Mendelsohn 和 Israel 编，《The MolecularBasis of Cancer〉〉，第 I 章，题为“Cellcycle regulation, oncogenes, and antieioplasticdrugs”, Murakaini 等，ff.B.Saunders, Philadelphia, 1995,例如第 13 页。紫杉烧类(帕利他塞(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(TAXOTERE?，Rhone-Poulenc Rorer)是帕利他塞(TAXOL?,Bristol-Myers Squibb)的半合成类似物。帕利他塞和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。
[0092]在用于本文时，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于:放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y9°、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素);化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体 '及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
[0093]“展示FGFR4表达、扩增或活化”的癌或生物学样品指在诊断测试中表达(包括过表达)FGFR4，具有扩增的FGFR4基因，和/或以其它方式展现出FGFR4活化或磷酸化的癌或生物学样品。
[0094]“效应器功能”指那些可归于抗体Fe区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括:Clq结合和补体依赖性细胞毒性(CDC) ；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。[0095]药剂(例如药物配制剂)的“有效量”指在必需的剂量和时段上有效实现期望的治疗或预防结果的量。
[0096]本文中的术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链中至少含有恒定区一部分的C端区。该术语包括天然序列Fe区和变体Fe区。在一个实施方案中，人IgG重链Fe区自Cys226，或自Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fe区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定，Fe区或恒定区中的氨基酸残基的编号方式依照EU编号系统，又称作EU 索弓 I,如记载于 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。
[0097]“框架”或“FR”指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。一般地，可变域的FR由4个？1?域组成疋1?1、？1?2、？1?3、和？1?4。因而，HVR和FR序列在VH (或VL)中一般以如下的顺序出现:FR1-H1 (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。
[0098]术语“全长抗体”、“完整抗体”、和“全抗体”在本文中可互换使用，指与天然抗体结构具有基本上类似的结构或者具有含有如本文中所限定的Fe区的重链的抗体。
[0099]术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”、和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中包括具有与在初始转化细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。
[0100]“人抗体”指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
[0101]“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，NIHPublication91-3242, Bethesda MD (1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组κ I。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组III。
[0102]“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其中所有或基本上所有HVR (例如，CDR)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。
[0103]在用于本文时，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变的和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的每个区。一般地，天然的4链抗体包含6个HVR;三个在VH中(H1、Η2、Η3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR 一般包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后一种是最高序列变异性的和/或牵涉抗原识别。例示性高变区存在于氨基酸残基26-32 (LI)、50-52 (L2) ,91-96 (L3)、26-32 (Hl)、53-55 (Η2)、和 96-101 (Η3) (Chothia 和 Lesk, J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。例示性CDR (CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3、CDR-Hl、CDR-H2、和 CDR-H3)存在于氨基酸残基 LI 的 24-34、L2 的 50-56,L3 的 89-97,Hl 的 31_35B、H2 的 50-65、和 H3 的 95-102 (Kabat 等，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版 Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD(1991))。除了 VH 中的 CDRl 外，CDR—般包含形成高变环的氨基酸残基。⑶R还包含“特异性决定残基”，或“SDR”，其是接触抗原的残基。SDR包含在称作缩短的-⑶R，或a-⑶R的⑶R区内。例示性的a-⑶R (a_⑶R-Ll、a_⑶R-L2、a-CDR-L3、a-CDR-Hl、a-CDR-H2、和 a_CDR-H3)存在于 LI 的氨基酸残基 31_34、L2 的 50-55、L3 的 89-96、Hl 的 31-35B、H2 的 50-58、和 H3 的 95-102 (见 Almagro 和 Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633(2008)) ο除非另有指示，可变域中的HVR残基和其它残基(例如，FR残基)在本文中依照Kabat等，见上文编号。
[0104]“免疫缀合物”指与一种或多种异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。
[0105]“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如，牛、绵羊、猫、犬、和马)、灵长类(例如，人和非人灵长类诸如猴)、家兔、和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
[0106]“抑制细胞生长或增殖”意味着将细胞的生长或增殖降低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或100%，而且包括诱导细胞死亡。
[0107]“分离的抗体”指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95%或99%的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如 Flatman 等,J.Chromatogr.B848:79-87 (2007)。
[0108]“分离的核酸”指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。
·[0109]“编码抗FGFR4抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
[0110]如本文中使用的，就本发明抗体而言，短语“很少至没有结合”表示抗体没有显示有生物学意义的量的结合。正如本领域会理解的，可以定量或定性测定活性的量，只要能进行本发明抗体和参照对应物之间的比较。可以依照本领域已知的任何测定法或技术来测量或检测活性，例如本文中描述的那些。对于本发明的抗体及其参照对应物，可以平行地或在分开的运行中测定活性的量。
[0111]在用于本文时，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的生成期间发生的可能的变体抗体外，此类变体一般以极小量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。[0112]“裸抗体”指未与异源模块(例如细胞毒性模块)或放射性标记物缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物配制剂中。
[0113]“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150，000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1、CH2、和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个恒定轻(CL)域。根据其恒定域氨基酸序列，抗体轻链可归入两种类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
[0114]术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信肩、O
[0115]关于参照多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech, Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office, WashingtonD.C.，20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech, Inc.，SouthSan Francisco, California可获得 ALIGN-2程序,或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
[0116]在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算:
[0117]分数X/Y 乘 100
[0118]其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
[0119]术语“药物配制剂”指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。
[0120]“药学可接受载体”指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学可接受载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂、或防腐剂。[0121]在用于本文时，“治疗”(及其语法变化形式，诸如“处理”或“处置”)指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓解症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、减缓疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态、及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生/发展，或用于减缓疾病的进展。
[0122]术语“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-canceixms)和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。
[0123]术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链可变域(分别为VH和VL) —般具有类似的结构,其中每个域包含4个保守的框架区(FR)和3个高变区(HVR) ο (见例如Kindt等KubyImmunology,第6版，W.H.Freeman and C0.,第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，Portolano 等,J.1mmunol.150:880-887 (1993) ; Clarkson等，Nature352:624-628 (1991)。
[0124]在用于本文时，术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可 操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
[0125]“VH亚组III共有框架”包含自Kabat等人的可变重亚组III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VH亚组III共有框架氨基酸序列包含下述序列每一项的至少部分或整个:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO: 13) -H1-WVRQAPGKGLEffV (SEQID NO:14)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO:15)-H3-WGQGTLVTVSS(SEQID NO:16)。
[0126]“VL亚组I共有框架”包含自Kabat等人的可变轻卡帕亚组I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VL亚组I共有框架氨基酸序列包含下述序列每一项的至少部分或整个:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO: 28) -Ll-ffYQQKPGKAPKLLIY (SEQ IDNO:29)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:30)-L3-FGQGTKVEIK(SEQ IDN0:31)。
[0127]术语“消耗性/衰竭性”病症(例如衰竭综合征、恶病质、肌肉减少症(sarcopenia))指由不希望的和/或不健康的体重减轻或体细胞质量减轻引起的病症。在老年人中以及在AIDS和癌症患者中，消耗性疾病可导致不希望的体重减轻，包括脂肪和无脂肪隔室二者。消耗性疾病可以由不当摄食和/或与不适和/或衰老过程有关的代谢变化所致。癌症患者和AIDS患者，以及接受大量手术或具有慢性感染、免疫学疾病、甲状腺功能亢进、克罗恩氏病、心理性疾病、慢性心力衰竭或其它严重创伤的患者经常遭受消耗性疾病，有时也称为恶病质、代谢障碍、和进食障碍。恶病质还表现为高代谢和分解代谢过度。尽管恶病质和消耗性疾病经常互换使用，指消耗性疾患，但是至少有一项研究将恶病质与衰竭综合征区分开，即丧失无脂肪物质，特别是体细胞物质(Mayer, 1999, J.Nutr.129 (ISSupp1.):256S-259S)。肌肉减少症，另一种影响衰老个体的此类病症，通常表现为丧失肌肉物质。如上所述末期消耗性疾病可以在患有恶病质或肌肉减少症的个体中发生。[0128]I1.组合物和方法
[0129]一方面，本发明部分基于多种FGFR4结合剂(诸如抗体及其片段)的鉴定。在某些实施方案中，提供了与FGFR4结合的抗体。本发明的抗体可用于例如癌症、肝病和消瘦(消耗性疾病)的诊断和治疗。
[0130]A.例示性抗FGFR4抗体
[0131]一方面，本发明提供结合FGFR4的分离的抗体。
[0132]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人FGFR4。在一些实施方案中，抗FGFR4抗体以≤0.05nM的亲和力结合人FGFR4。
[0133]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合小鼠FGFR4。
[0134]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合猕猴FGFR4。
[0135]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人、小鼠和猕猴FGFR4。
[0136]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体对人FGFRl、人FGFR2和/或人FGFR3不发生实质性结合。在某个实施方案中，抗FGFR4抗体对人FGFR1、A FGFR2和/或人FGFR3显示很少的结合或不结合。
[0137]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体对小鼠C3蛋白(在一些实施方案中，具有图12D所示氨基酸序列的小鼠C3蛋白)不发生实质性结合。在某个实施方案中，抗FGFR4抗体对小鼠C3蛋白(在一些实施方案中，具有图12D所不氣基酸序列的小鼠C3蛋白)显不很少的结合或不结合。
[0138]在某些实施方案中，该抗FGFR4抗体是人源化抗FGFR4抗体，其中该抗体对人FGFR4的单价亲和力与包含SEQ ID N0:8和7分别所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的单价亲和力基本上相同。在一些实施方案中，该抗FGFR4抗体是人源化的和亲和力成熟的抗体。
[0139]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体是FGFR4活性的拮抗剂。
[0140]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制FGF结合FGFR4。在一些实施方案中，FGFl和/或FGF19对FGFR4的结合受到抑制。在一些实施方案中，抑制FGFl结合FGFR4的IC5tl为约0.ΙΟηΜ。在一些实施方案中，抑制FGF19结合FGFR4的IC5tl为约0.ΙΟηΜ。
[0141]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制细胞增殖。在一些实施方案中，增殖为FGF诱导的细胞增殖。在一些实施方案中，细胞增殖为BAF3/FGFR4转基因细胞增殖。
[0142]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制FGF (例如FGFl)刺激的表达FGFR4的细胞增殖。在一些实施方案中，该细胞为HUH7细胞。
[0143]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制暴露于FGF19的细胞中FGF19介导的对CYP7a 7表达的抑制。
[0144]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制暴露于FGF19的细胞中FGF19诱导的FGFR4、MAPK、FRS2 和 / 或 ERK2 磷酸化。
[0145]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制FGF19诱导的集落形成。在一些实施方案中，集落形成为HCC细胞系集落形成。在一些实施方案中，该HCC细胞系为JHH5。
[0146]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合变性的FGFR4。在一些实施方案中，抗FGFR4抗体结合还原的、变性的FGFR4。在一些实施方案中，使用Western印迹来测定对还原的、变性的FGFR4的结合。[0147]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合在细胞表面表达的FGFR4。在一些实施方案中，该细胞为HUH7或JHH5细胞。
[0148]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体对包含G165A突变的人FGFR4不发生实质性结合。在某些实施方案中，抗FGFR4抗体对包含G165A突变的人FGFR4显示很少的结合或不
结合 ?
[0149]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的多肽。在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145至180、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145至180组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145至180组成的多肽。
[0150]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合与包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的多肽。在某些实施方案中，抗FGFR4抗体结合与包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145-180、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145-180组成或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号145至180组成的序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的多肽。
[0151]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制FGFR4 二聚化。
[0152]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体在FGFR4 二聚化界面处结合。
[0153]在某些实施方案中，抗FGFR4抗体抑制肿瘤生长。在一些实施方案中，肿瘤生长为肝肿瘤生长。
[0154]一方面，本发明提供了抗FGFR4抗体，其包含至少一种、两种、三种、四种、五种、或六种选自下述的HVR: (a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列NHWMN(SEQ ID NO:1) ； (b)HVR_H2，其包含氨基酸序列MILPVDSETTLEQKFKD(SEQ ID N0:2) ; (c)HVR_H3，其包含氨基酸序列GD ISLFDY (SEQ ID N0:3) ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 RTSQDISNFLN(SEQ ID NO: 4)；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列YTSRLHS (SEQ ID NO: 5);和(f) HVR-L3，其包含氨基酸序列QQGNALPYT(SEQ ID NO:6)。
[0155]一方面，本发明提供一种抗体，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VH HVR序列:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3。在一个实施方案中，该抗体包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3。在另一个实施方案中，该抗体包含HVR-H3和HVR-L3，该HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3，该HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 6。在又一个实施方案中，该抗体包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-L2，该HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID N0:3，该HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 6，该HVR-H2包含氨基酸序列SEQ IDNO: 2。在又一个 实施方案中，该抗体包含:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 ； (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2 ;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3。
[0156]另一方面，本发明提供一种抗体，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:6。在一个实施方案中，该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 ； (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQID NO:5 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:6。
[0157]另一方面，本发明的抗体包含:(a)VH结构域，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1, (ii)HVR_H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3 -M (b)VL结构域，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6。
[0158]另一方面，本发明提供一种抗体，其包含:(a)HVR-H1，其包含SEQ IDN0:1的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列；(d)HVR-Ll，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:5的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
[0159]另一方面，抗FGFR4 抗体包含与氨基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNHWMNWVRQAPGKGLEWVGMILPVDSETTLEQKFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGDISLFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7)具有至少 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%,或 100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90%，91%，92%，93%，94%，95%, 96%, 97%, 98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列包含替代(例如保守替代)、插入、或删除，但是包含该序列的抗FGFR4抗体保留结合FGFR4的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID N0:7中替代、插入和/或删除了总共I至10个氨基酸。在某些实施方案中，替代、插入、或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，抗FGFR4抗体包含SEQ IDNO: 7中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特别的实施方案中，该VH包含一种、两种或三种选自下述的HVR: (a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1, (b)HVR_H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3。
[0160]另一方面，提供一种抗FGFR4抗体，其中该抗体包含与氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQDISNFLNWYQQKPGKAFKILISYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNALPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:8)具有至少 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90%，91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列包含替代(例如保守替代)、插入、或删除，但是包含该序列的抗FGFR4抗体保留结合FGFR4的能力。在某些实施方案中，在SEQ IDNO: 8中替代、插入和/或删除了总共I至10个氨基酸。在某些实施方案中，替代、插入、或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，抗FGFR4抗体包含SEQID N0:8中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特别的实施方案中，该VL包含一种、两种或三种选自下述的HVR: (a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 ； (b)HVR_L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6。
[0161]另一方面，提供一种抗FGFR4抗体，其中该抗体包含上文提供的任何实施方案中的VH和上文提供的任何实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别SEQ IDNO: 7和SEQ ID NO: 8中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
[0162]在任何上述实施方案中，抗FGFR4抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗FGFR4抗体包含任何上述实施方案中的HVR，而且进一步包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。本发明的抗体可包含任何合适框架可变域序列，前提是对FGFR4的结合活性得到实质性保留，例如，在一些实施方案中，本发明的抗体包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位、和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位为A，第73位为T和/或第78位为A。在一个实施方案中，这些抗体包含huMAb4D5-8( HERCEPTIN?,Genentech, Inc., South San Francisco, CA, USA)(也可见美国专利 N0.6, 407, 213 和N0.5，821，337 及 Lee et al., J.Mol.Biol.(2004) 340 (5): 1073-1093)的重链可变域框架序列。在一个实施方案中，框架序列包含下述受体人框架:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQID NO:9)-Ll-WYQQKPGKAFKILIS(SEQ ID NO:10)_L2_GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ IDNO:11)-L3-FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:12)。
[0163]在又一个方面，本发明提供与本文中提供的抗FGFR4抗体结合相同表位的抗FGFR4抗体。例如，在某些实施方案中，提供与包含VH序列SEQ ID N0:7和VL序列SEQ IDN0:8的抗FGFR4抗体结合相同表位的抗体。在某些实施方案中，提供结合在图18所示序列(SEQ ID NO:39)的氨基酸145-180组成的FGFR4片段内的表位的抗体。
[0164]在又一个方面，本发明提供与包含VH序列SEQ ID NO: 7和VL序列SEQID NO: 8的抗FGFR4抗体竞争对人FGFR4的结合的抗FGFR4抗体。
[0165]在本发明的又一个方面，依照任何上述实施方案的抗FGFR4抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗FGFR4抗体是抗体片段，例如?1?&13、？&13’、8(^1双抗体、或？(&13’)2片段。在另一个实施方案中，抗体是全长抗体，例如完整IgGl抗体或其它抗体类或同种型，如本文中定义的。
[0166]在又一个方面，依照任何上述实施方案的抗体可单一地或组合地掺入下文1-7节中描述的任何特征:
[0167]1.抗体亲和力
[0168]在某些实施方案中，本文中提供的抗体具有≤ ΙμΜ、≤IOOnM, ^ ΙΟηΜ、≤InM,(0.1nM、≤0.01nM、或≤0.0OlnM的解离常数(Kd)(例如10_8M或更少，例如10-8Μ至10_13M，例如，10_9M 至 I(T13M)。
[0169]在一个实施方案中，Kd是通过如下述测定法所述用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的。通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等，J.Mo 1.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将 MICROTITER'?多孔板(ThermoScientific)用 50mM 碳酸钠(pH9.6)中的 5 μ g/ml 捕捉用抗 Fab 抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23°C)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM1251-抗原与连续稀释的感兴趣Fab (例如与Presta 等，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗 VEGF 抗体，Fab-12 的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如I小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1%聚山梨酯20 (TWEEN-20?)洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液
(MICR0SCINT-20?; Packard)，然后在TOPCOUNT?伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。
[0170]依照另一个实施方案，Kd是使用表面等离振子共振测定法使用BIAcore?-2000 或BIAcore?.-3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)于 25 °C 使用固定化抗原 CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简言之，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIACORE, Inc.)。将抗原用IOmM乙酸钠ρΗ4.8稀释至5 μ g/ml (约0.2 μ M)，然后以5 μ I/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25°C以约25 μ I/分钟的流速注入在含0.05%聚山梨酯20 (TWEEN-20?)表面活性剂的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0.78ηΜ至500ηΜ)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIACORE ? Evaluation Software version3.2)通过同时拟合结合和解离传感
图计算结合速率(kj和解离速率。平衡解离常数(Kd)以比率k Jkm计算。见例如Chen等，J.Mol.Biol.293:865-881 (1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINC0?分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量,在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBSPH7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm，16nm带通)的升高或降低。
[0171]2.抗体片段
[0172]在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab’)2、Fv、和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等Nat.Med.9:129-134 (2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthiin,于 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第 113卷，Rosenburg和Moore 编，(Springer-Verlag, New York),第 269-315 页(1994);还可见 W093/16185;及美国专利N0.5，571，894和5，587，458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利N0.5，869，046。
[0173]双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如 EP404, 097;W01993/01161;Hudson 等，Nat.Med.9:129-134(2003);及 Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448 (1993)。三抗体和四抗体也记载于 Hudson等，Nat.Med.9:129-134 (2003)。
[0174]单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis, Inc., Waltham, MA ;见例如美国专利 N0.6，248，516B1)。
[0175]可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。
[0176]3.嵌合的和人源化的抗体[0177]在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利 N0.4，816，567;及 Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
[0178]在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如⑶R (或其部分)自非人抗体衍生，而FR (或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
[0179]人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008),并且进一步记载于例如 Riechmann等，Nature332:323_329(1988);Queen 等，Proc.Nat’ I Acad.Sc1.USA86:10029-10033(1989);美国专利 N0.5，821，337，7，527，791，6，982，321 和
7,087, 409; Kashmiri 等，Methods36:25-34 (2005)(描述了 SDR(a-CDR)嫁接);Padlan, Mol.1mmunol.28:489-498 (1991)(描述了“重修表面”);Dall ’Acqua 等，Methods36:43-60 (2005)(描述了 “FR 改组”)；及 Osbourn 等，Methods36:61-68 (2005)和 Klimka 等，Β?'-? Cancer, 83:252-260 (2000) (描述了 FR改组的“引导选择”方法)。
[0180]可以用于人源化的人框架区包括但不限于:使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等J.1mmunol.151:2296 (1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍 生的框架区(见例如Carter等Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,89:4285 (1992);及 Presta 等 J.1mmunol.，151:2623 (1993));人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008));和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及 Rosok 等，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
[0181]4.人抗体
[0182]在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de ffinkel, Curr.0pin.Pharmacol.5:368-74(2001)及 Lonberg, Curr.0pin.1mmunol.20:450-459(2008)。
[0183]可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg, Nat.Biotech.23:1117-1125 (2005)。还可见例如美国专利N0.6，075，181和6，150，584，其描述了 XEN0M0USE?技术；美国专利N0.5，770, 429，其描述了 HUMAB?技术；美国专利N0.7，041, 870，其描述了 K-M MOUSE?技术，和美国专利申请公开文本N0.US2007/0061900,其描述了VELOCIMOUSE?技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。
[0184]也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如Kozbor J.1mmunol.，133:3001 (1984) ;Brodeur 等,Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications,第 51-63 页(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及 Boerner 等,J.1mmunol., 147:86 (1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 103:3557-3562 (2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利N0.7，189，826 (其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni，XiandaiMianyixue, 26 (4): 265-268 (2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于 Vollmers 和 Brandlein, Histology and Histopathology, 20 (3): 927-937 (2005)及Vollmers和Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)。
[0185]也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。
[0186]5.文库衍生的抗体
[0187]可以通过对组合文库筛 选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等于Methods in MolecularBiologyl78:1-37 (O’ Brien 等编,Human Press, Totowa, NJ, 2001)，并且进一步记载于例如 McCafferty 等，Nature348:552-554;Clackson 等，Nature352:624-628(1991);Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks 和 Bradbury,于 Methods in MolecularBiology 248: 161-175 (Lo 编，Human Press, Totowa, NJ, 2003) ; Sidhu 等，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004) ; Lee 等，J.Mol.Biol.340(5): 1073-1093(2004) ; Fellouse, Proc.Natl.Acad.Sc1.USAlOl (34): 12467-12472 (2004);及 Lee 等，J.1mmunol.Methods284(1-2): 119-132(2004)。
[0188]在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于 Winter 等,Ann.Rev.Tmmunol., 12:433-455 (1994)的。卩遼菌体通常以单链 Fv (scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等，EMBOJ, 12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由 Hoogenboom 和 Winter, J.Mol.Biol.，227:381-388 (1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如:美国专利N0.5，750, 373、和美国专利公开文本N0.2005/0079574，2005/0119455，2005/0266000，2007/0117126，2007/0160598，2007/0237764，2007/0292936 和 2009/0002360。[0189]认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
[0190]6.多特异性抗体
[0191]在某些实施方案中，本文中提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对FGFR4，而另一种针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合FGFR4的两个不同表位。也可以使用双特异性抗体来将细胞毒剂定位于表达FGFR4的细胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。
[0192]用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见 Milstein 和 Cuello, Nature305:537 (1983))、W093/08829、和Traunecker等，EMBO J.10:3655(1991))、和“突起-入-空穴”工程化(见例如美国专利N0.5，731，168)。也可以通过用于生成抗体Fe-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(W02009/089004A1);交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利N0.4，676，980，及Brennan等，Science, 229:81 (1985));使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等，J.1mmunol.，148 (5): 1547-1553 (1992));使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如 Hollinger 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448 (1993));及使用单链Fv(sFv) 二聚体(见例如 Gruber 等，J.1mmunol., 152: 5368 (1994));及如例如 Tutt等J.1mmunol.147:60(1991)中所描述的,制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。
[0193]本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US2006/0025576A1)。
[0194]本文中的抗体或片段还包括包含结合FGFR4及另一种不同抗原的抗原结合位点的“双重作用FAb”或“DAF”(见例如US2008/0069820)。
[0195]7.抗体变体
[0196]在某些实施方案中，涵盖本文中提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除、和/或插入和/或替代。可以进行删除、插入、和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。
[0197]a)替代、插入、和删除变体
[0198]在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表1中在“保守的替代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。
[0199]表1
[0200]
初始残基例示性替代优选的替代
Ala (A)Val; Leu; HeVal
[0201]
【权利要求】
1.一种结合FGFR4的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人FGFR4。
2.权利要求1的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体以≤InM的亲和力结合人、小鼠和猕猴FGFR4。
3.权利要求2的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体以≤0.05nM的亲和力结合人FGFR4。
4.权利要求1-3任一项的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体对具有图12D所示氨基酸序列的小鼠C3蛋白不发生实质性结合。
5.权利要求1-4任一项的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体对包含G165A突变的人FGFR4不发生实质性结合。
6.权利要求1-5任一项的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体结合与如下序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的多肽:包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170的序列、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的序列或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的序列。
7.权利要求6的分离的抗体，其中该抗FGFR4抗体结合如下多肽:包含成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170的多肽、基本上由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的多肽或由成熟人FGFR4氨基酸序列的氨基酸编号150至170组成的多肽。
8.权利要求1-7任一项的抗体，其中该抗FGFR4抗体是FGFR4活性的拮抗剂。
9.权利要求8的抗体，其中FGFR4活性为FGF诱导的细胞增殖、FGF对FGFR4的结合、暴露于FGF19的细胞中FGF19介导的对CYP7 α 7表达的抑制或FGF19诱导的集落形成。
10.权利要求9的抗体，其中FGFl和/或FGF19对FGFR4的结合受到抑制。
11.权利要求10的抗体，其中抑制FGFl结合FGFR4的IC50为约0.1OnM且抑制FGF19结合 FGFR4 的 IC50 为约 0.1OnM。
12.权利要求1-11任一项的抗体，其为单克隆抗体。
13.权利要求1-11任一项的抗体，其为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
14.权利要求1-11任一项的抗体，其为结合FGFR4的抗体片段。
15.权利要求1-14任一项的抗体，其中该抗体包含(a)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID NO:3，(b)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6，和(c)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQID NO:2。
16.权利要求1-14任一项的抗体，其中该抗体包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQID NO:l，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID NO:3。
17.权利要求16的抗体，其进一步包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQID NO:4 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:6。
18.权利要求1-14任一项的抗体，其包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQID NO:4 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:6。
19.权利要求1-18任一项的抗体，其进一步包含SEQID NO: 9、10、11和/或12的轻链可变域框架序列。
20.权利要求1-19任一项的抗体，其进一步包含SEQID NO: 13、14、15和/或16的重链可变域框架序列。
21.权利要求1-20任一项的抗体，其包含(a)VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95%序列同一性；(b) VL序列,其与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。
22.权利要求21的抗体，其包含VH序列SEQID NO:7。
23.权利要求21的抗体，其包含VL序列SEQID NO:8。
24.一种抗体，其包含VH序列SEQ ID NO: 7和VL序列SEQ ID NO: 8。
25.权利要求1-24任一项的抗体，其为全长IgGl抗体。
26.—种分离的核酸,其编码权利要求1-24任一项的抗体。
27.—种宿主细胞，其包含权利要求26的核酸。
28.一种生产抗体的方法，其包括培养权利要求27的宿主细胞，使得抗体生成。
29.权利要求28的方法，其进一步包括自宿主细胞回收抗体。
30.一种免疫偶联物，其包含权利要求1-24任一项的抗体和细胞毒剂。
31.一种药物组合物,·其包含权利要求1-24任一项的抗体和医学可接受载体。
32.权利要求16的药物组合物，其进一步包含其它的治疗剂。
33.权利要求1-24任一项的抗体，其用作药物。
34.权利要求1-24任一项的抗体，其用于治疗癌症。
35.权利要求1-24任一项的抗体，其用于抑制细胞增殖。
36.权利要求1-24任一项的抗体,其用于制备药物。
37.权利要求36的用途，其中该药物用于治疗癌症。
38.权利要求36的用途，其中该药物用于抑制细胞增殖。
39.一种治疗具有癌症的个体的方法，其包括对个体施用有效量的权利要求1-24任一项的抗体。
40.权利要求39的方法，其进一步包括对个体施用其它的治疗剂。
41.一种在个体中抑制细胞增殖的方法，其包括对个体施用有效量的权利要求1-24任一项的抗体以抑制细胞增殖。
【文档编号】A61K39/395GK103596983SQ201280028220
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年4月6日 优先权日:2011年4月7日
【发明者】M.丹尼斯, L.德斯诺耶尔斯, D.弗伦奇 申请人:基因泰克公司