产生体液和细胞毒性t淋巴细胞（ctl）免疫应答的合成纳米载体的制作方法

产生体液和细胞毒性t淋巴细胞（ctl）免疫应答的合成纳米载体的制作方法
【专利摘要】披露了用于在一名受试者中产生体液和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答的方法和相关组合物。
【专利说明】产生体液和细胞毒性τ淋巴细胞(CTL)免疫应答的合成纳
米载体
[0001]相关申请
[0002]本申请在35U.S.C.§ 119下要求各自于2011年7月29日提交的美国临时申请61/513，496,61/513, 526以及61/513，527的权益，其中每一项的全部内容通过引用结合在此。
发明领域
[0003]本发明涉及用于在受试者中产生体液和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答的方法和相关组合物。通常，用合成纳米载体组合物产生体液和CTL免疫应答，这些合成纳米载体组合物包含一种蛋白质，该蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位。
[0004]发明背景
[0005] 经典地，疫苗已经促进了一个部分的免疫系统，例如产生由对一种抗原的抗体组成的一种体液免疫应答，或可替代地，活化对一种抗原的一种CTL应答。额外地，常规疫苗通常不以最佳方式靶向感兴趣的细胞(如APC)的作用位点。需要用于最佳地有效地活化这些部分的免疫系统以有效地产生免疫应答和/或减少脱靶效应和毒性的方法和组合物。

【发明内容】

[0006]在此提供了用于在一名受试者中产生体液和CTL免疫应答的方法和相关组合物。在一个方面，提供了一种方法，该方法包括鉴别需要对一种第一蛋白质的一种体液和CTL免疫应答的一名受试者，和向该受试者给予一种组合物，该组合物包含被偶合到该第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸。在另一个实施例中，DLS分布的平均值通过在此提供的这种方法的实例中的任一者测定。此类实例在下文进行更详细描述。在一个实施例中，该组合物以有效产生对该第一蛋白质的一种体液和CTL免疫应答的量给予。
[0007]在另一个方面，提供了一种方法，该方法包括向该受试者给予一种组合物，该组合物包含一群被偶合到一种第一蛋白质的合成纳米载体；其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，并且其中该组合物根据一种疫苗接种方案给予。
[0008]在另一个方面，提供了一种方法，该方法包括向该受试者给予一种组合物，该组合物包含一群被偶合到一种第一蛋白质的合成纳米载体；其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位；其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，并且其中该组合物根据一种方案给予，该方案先前显不在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
[0009]在一个实施例中，在此提供的这些方法进一步包括鉴别需要对该第一蛋白质的一种体液和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答的一名受试者。在另一个实施例中，该组合物根据一种疫苗接种方案给予。在又另一个实施例中，该组合物根据一种方案给予，该方案先前显示在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
[0010]在另一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种佐剂。在另一个实施例中，该方法进一步包括给予一种或多种佐剂。在另一个实施例中，该一种或多种佐剂包括模式识别受体的刺激剂或激动剂、矿物盐、明矾、与肠细菌的单磷酰脂质(MPL)A组合的明矾、MPL? (AS04)、AS15、皂甙、QS-21、Quil-A, ISCOM、ISCOMATRIX?、MF59?,Montanide?ISA51、Montanide?) ISA720、AS02、脂质体和脂质体配制品、AS01、合成的或特别制备的微颗粒和微载体、淋病奈瑟菌(N.gonorrheae)或沙眼衣原体的源于细菌的外膜泡、壳聚糖颗 粒、贮存形成剂、PlunMiid:嵌段共聚物、特异性修饰或制备的肽、胞壁酰二肽、氨基烷基氨基葡糖苷4-磷酸酯、RC529、细菌类毒素、毒素片段、Toll样受体2、3、4、5、7、8、9的激动剂和/或其组合；腺嘌呤衍生物；免疫刺激DNA ;免疫刺激RNA ;咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合环烷基咪唑并吡啶胺、1，2-桥接咪唑并喹啉胺；咪喹莫特；瑞喹莫德；DC表面分子⑶40的激动剂；1型干扰素；聚1:C ;细菌脂多糖(LPS) ；VSV-G ；HMGB-1 ;鞭毛蛋白或其部分或衍生物；包含CpG的免疫刺激DNA分子；从坏死细胞释放的促发炎刺激物；尿酸盐晶体；补体级联的活化组分；免疫复合物的活化组分；补体受体激动剂；细胞因子；或细胞因子受体激动剂。在又另一个实施例中，该一种或多种佐剂包括Toll样受体2、3、4、7、8或9的激动剂。在再另一个实施例中，该一种或多种佐剂包括一种咪唑并喹啉或氧代腺嘌呤。在一个实施例中，该咪唑并喹啉包括瑞喹莫德或咪喹莫特。
[0011]在另一个实施例中，该一种或多种佐剂被偶合到该群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
[0012]在再另一个实施例中，该组合物进一步包含另一群合成纳米载体或该方法进一步包括给予另一群合成纳米载体，并且该一种或多种佐剂被偶合到该另一群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
[0013]在另一个实施例中，该一种或多种佐剂不被偶合到一种合成纳米载体。
[0014]在另一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种额外的抗原或该方法进一步包括给予一种或多种额外的抗原。在一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括至少一个体液表位和/或至少一个MHC I类限制性表位。在另一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。在一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括一种第二蛋白质。在另一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括一个体液表位和/或一个MHC I类限制性表位。在再另一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括一个体液表位和一个MHC I类限制性表位。在又另一个实施例中，该一种或多种额外的抗原包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。
[0015]在一个实施例中，该一种或多种额外的抗原被偶合到这些合成纳米载体。
[0016]在另一个实施例中，该组合物进一步包含另一群合成纳米载体或该方法进一步包括给予另一群合成纳米载体，并且该一种或多种额外的抗原被偶合到该另一群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
[0017]在再另一个实施例中，该一种或多种额外的抗原不被偶合到一种合成纳米载体。
[0018]在一个实施例中，这些合成纳米载体和/或其他合成纳米载体包括一种聚合纳米颗粒、一种金属纳米颗粒、一种树枝状聚合物、一种巴克球、一种纳米线、一种病毒样颗粒或一种肽或蛋白质颗粒。在另一个实施例中，这些合成纳米载体和/或其他合成纳米载体包括一种或多种聚合物。在又另一个实施例中，该一种或多种聚合物包括一种聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基噁唑啉或聚乙烯亚胺。在再另一个实施例中，该一种或多种聚合物包括一种聚酯。在一个实施例中，该聚酯包括一种聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚己内酯。在另一个实施例中，该聚酯被偶合到一种聚醚。在又另一个实施例中，该聚醚包括聚乙二醇。
[0019]在一个实施例中，该第一蛋白质和/或一种或多种额外的抗原是与癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病相关的抗原。在另一个实施例中，该第一蛋白质和/或一种或多种额外的抗原是与人类免疫缺陷性病毒(HIV)、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种 披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染相关的抗原。
[0020]在另一个实施例中，该受试者患有或有风险患有癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病。在又另一个实施例中，该受试者患有或有风险患有HIV、痕疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
[0021]在再另一个实施例中，所产生的这些体液和CTL免疫应答是临床上有效的。在一个实施例中，这些免疫应答可在该受试者中有效治疗或预防癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病。在另一个实施例中，这些免疫应答可在该受试者中有效治疗或预防HIV、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
[0022]在一个实施例中，该组合物进一步包含一种药学上可接受的赋形剂。
[0023]在另一个实施例中，该组合物是无菌的。
[0024]在另一个实施例中，该组合物从一种冻干形式复水。
[0025]在另一个方面，提供了一种剂型，该剂型包含所提供的这些组合物中的任一者。
[0026]在又另一个方面，提供了一种疫苗，该疫苗包含所提供的这些组合物和剂型中的
任一者。[0027]在又另一个实施例中，该组合物通过静脉内、经口、皮下、经肺、鼻内、皮内、经粘膜、粘膜内或肌肉内给予来给予。
[0028]在再另一个方面，提供了一种方法，该方法包括将在此提供的这些组合物中的任一者给予一名对其有需要的受试者。在一个实施例中，该受试者是一名人类。在另一个实施例中，该受试者患有或有风险患有癌症。在再另 ^实施例中，该受试者患有或有风险患有一种感染或传染病。在又另一个实施例中，该受试者患有或有风险患有一种非自身免疫或退打性疾病。在又另个实施例中，该受试者患有或有风险患有HIV。在另个实施例中，该受试者患有或有风险患有痕疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
[0029]在这些在此提供的方法中的任一者的一个实施例中，所提供的这些组合物中的任一者可以根据一种疫苗接种方案向一名受试者(如一名人类)给予。
[0030]在该在此提供的方法中的任一者的另一个实施例中，所提供的这些组合物中的任一者可以根据一种方案向一名受试者给予，该方案先前显不在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
[0031]在另一个方面，所提供的这些方法中的任一者可以进一步包括评估该受试者中的该体液和CTL免疫应答。用于评估该体液和CTL免疫应答的这些方法可以是在此提供的这些方法中的任一者。
[0032]在又另一个方面，提供了一种方法，该方法包括制备在此提供的这些组合物中的任一者和评估一种体液和CTL免疫应答的产生。在一个实施例中，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的合成纳米载体，该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。在另一个实施例中，被偶合到该第一蛋白质的该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂和/或该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸。
[0033]在一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于治疗或预防中。
[0034]在另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位,该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于在此提供的这些方法中的任一者中。
[0035]在又另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于疫苗接种中。
[0036]在再另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于在一名受试者中对该第一蛋白质产生一种体液和CTL免疫应答。在一个实施例中，这些免疫应答是临床上有效的。在另一个实施例中，这些免疫应答可各自有效获得针对一种疾病的免疫性。
[0037]在另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位,该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于治疗或预防以下的一种方法中:癌症、一种感染或传染病、一种非自身免疫或退行性疾病、HIV、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
[0038]在再另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表 位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20n m到250nm的最大尺寸，该组合物用于一种治疗或预防方法中，该方法包括通过静脉内、经口、皮下、经肺、鼻内、皮内、经粘膜、粘膜内或肌肉内给予来给予。
[0039]在又另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于制造一种药剂(例如一种疫苗)，用于在此提供的这些方法中的任一者中。
[0040]在另一个方面，提供了一种组合物，该组合物如关于在此提供的这些组合物或方法中的任一者定义而使用，其中该组合物是在此提供的这些组合物中的任一者。
[0041]图式简要说明
[0042]图1示出了在一个初免与一个加强(在第28天)疫苗接种方案之后第12、26、43以及57天产生的抗体滴度。
[0043]图2示出了在一个初免与一个加强(在第14天)疫苗接种方案之后第26和34天产生的抗体滴度。
[0044]图3示出了被偶合到卵白蛋白(0VA)的合成纳米载体对局部记忆CTL应答的诱导。
[0045]图4示出了被偶合到卵白蛋白的合成纳米载体对中心CTL应答的诱导。
[0046]图5示出了具有卵白蛋白和佐剂的合成纳米载体组合物对中心CTL诱导的诱导。
[0047]图6示出了在一个初免与两个加强(在第14和28天)疫苗接种方案之后第25和42天产生的抗体滴度。
[0048]图7示出了由NC-R848+NC-0VA在单次注射之后产生的抗体滴度。示出了每个实验组的单独的滴度和平均值。纳米载体=NC=NP。
[0049]图8示出了在用NC-R848+NC-0VA单次免疫之后的体内特异性细胞毒性。示出了每个组的平均值与标准偏差。
[0050]图9示出了在用携带CpG与0VA的纳米载体对比游离CpG (5 X)与OVA (5 X)免疫后的抗卵白蛋白抗体滴度。
[0051]图10示出了通过用携带CpG与0VA的纳米载体对比游离CpG(5X)与OVA(5X)免疫在引流淋巴结和脾脏中对0VA特异性CTL应答的诱导。
[0052]图11示出了在用携带CpG与0VA的纳米载体对比游离CpG(5X)与0VA(5X)免疫后的全身地诱导的体外0VA特异性CTL的扩增。左侧Y轴(暗条纹条):SIINFEKL(SEQID NO:1)特异性CD8+细胞在扩增后的分数；右侧Y轴(亮条纹条):以扩增后与扩增前SIINFEKL(SEQ ID NO:1)特异性CTL的比例形式呈现的扩增潜力。
[0053]发明详细说明
[0054]在详细说明本发明之前，应当理解本发明并不局限于具体举例说明的材料或工艺参数，因为这些当然可以变化。还应当理解在此使用的术语只是为了说明本发明的特定实施例的目的，并且不打算对使用替代性术语描述本发明进行限制。
[0055]在此引用的所有公布、专利以及专利申请，无论上文还是下文，都出于所有目的特此通过引用以其全文结合在此。
[0056]除非
【发明内容】
另外明确规定，否则如在本说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个/ 一种(a/an)”和“该(the) ”包括复数指示物。举例来说，提及“一种聚合物”包括两种或更多种此类分子的混合物或单个聚合物种类的不同分子量的混合物，提及“一种合成纳米载体”包括两种或更多种此类合成纳米载体的混合物或多个此类合成纳米载体，提及“一种DNA分子”包括两种或更多种此类DNA分子的混合物或多个此类DNA分子；提及“一种佐剂”包括两种或更多种此类佐剂分子的混合物或多个此类佐剂分子，等等。
[0057]如在此所使用，术语“包含(comprise) ”或其变体，如“包含了(comprises) ”或“包含着(comprising) ”意在表明包括任何列举的整体(例如，一个特点、元件、特征、特性、方法/工艺步骤或限制)或整体的群组(例如，多个特点、多个元件、多个特征、多个特性、多个方法/工艺步骤或多个限制)，但是不排除任何其他整体或整体的群组。因此，如在此所使用，术语“包含着”是包含性的但是不排除额外的、未列举的整体或方法/工艺步骤。
[0058]在这些在此提供的组合物和方法中的任一者的实施例中，“包含着”可用“基本上由......组成(consisting essentially of)” 或“由......组成(consisting of)” 来替换。
短语“基本上由……组成”在此用以要求限定的一个或多个整体或步骤，以及不实质上影响所要求的发明的特征或功能的那些。如在此所使用，术语“组成(consisting)”用以表明仅存在所列举的整体(例如，一个特点、元件、特征、特性、方法/工艺步骤或限制)或整体的群组(例如，多个特点、多个元件、多个特征、多个特性、多个方法/工艺步骤或多个限制)。
[0059]A.前言
[0060]用治疗性或预防性疫苗治疗具挑战性的疾病(如HIV、疟疾、乙型肝炎以及癌症)可以由组合的体液与CTL免疫应答增强，或在一些情况下需要组合的体液与CTL免疫应答。虽然已经提议了疫苗方法用于产生一种组合的CTL与体液免疫应答，但替代的方法可以在临床功效、安全性和/或可制造性方面提供有价值的改善。在此提供了用于使用合成纳米载体组合物的方法，和相关组合物，认为这些组合物先前尚未显示可产生强烈并且有效的体液和CTL免疫应答。此类组合物可以有效地靶向感兴趣的免疫细胞以产生更有效的免疫应答。
[0061]诸位发明人已经意外地并且令人惊讶地发现，通过实践在此披露的本发明，可以克服以上指出的问题和限制。具体地说，已经意外地并且令人惊讶地发现，有效的体液和CTL免疫应答可以由合成纳米载体产生，一种蛋白质被偶合到这些合成纳米载体，该蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸。因此，在一个方面，提供了一种方法，该方法包括给予这种组合物。在一个实施例中，该方法包括鉴别需要对一种第一蛋白质的一种体液和CTL免疫应答的一名受试者，和向该受试者给予一种组合物，该组合物包含此类合成纳米载体。在一些实施例中，该组合物的量可有效产生对该第一蛋白质的一种体液和CTL免疫应答。在另一个实施例中，该方法包括根据一种方案向一名受试者给予这种组合物，该方案先前显不在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
[0062]在实施例中，所产生的这些免疫应答是临床上有效的。在一些实施例中，给予这些组合物的该受试者可能患有或有风险患有癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病。在其他实施例中，该受`试者可能患有或有风险患有HIV、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
[0063]在其他实施例中，这些组合物根据一种疫苗接种方案向一名受试者(如一名人类)给予。
[0064]现在将在下文更详细地说明本发明。
[0065]B.定义
[0066]“佐剂”意指不构成一种特异性抗原、但是加强对一种伴随给予的抗原的一种免疫应答的强度和寿命的一种药剂。此类佐剂可以包括但不限于:模式识别受体(如Toll样受体、RIG-1和N0D样受体(NLR))的刺激剂、矿物盐(如明矾，与肠细菌(如大肠杆菌(Escherihia coli)、明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)或弗氏志贺氏杆菌(Shigella flexneri))的单磷酰脂质(MPL) A组合的明矾，或分别与MPL? (AS04)、以上提到的细菌的MPL A特异组合的明矾)、皂甙(如 QS-21、Quil-A、ISCOM、ISCOMATRIX?)、乳液(如 MF59?、Momanide⑧ ISA51 以及ISA720)、AS02 (QS21 +角%烯+MPL?)、脂质体和脂质体配制品(如AS01)、合成的或特别制备的微颗粒和微载体(如淋病奈瑟菌(N.gonorrheae)、沙眼衣原体和其他细菌的源于细菌的外膜泡(0MV))、或壳聚糖颗粒、贮存形成剂(如Phimnn_嵌段共聚物)、特异性修饰或制备的肽(如胞壁酰二肽)、氨基烷基氨基葡糖苷4-磷酸酯(如RC529)、或蛋白质(如细菌类毒素或毒素片段)。“皂甙-胆固醇佐剂”是通过与胆固醇混合而稳定的皂甙佐剂。此类佐剂包括例如ISC0M和ISCOMATRIX佐剂。优选地，在一些实施例中，在此提供的这些合成纳米载体不是或不包括此类佐剂。在其他实施例中，在此提供的这些组合物不包括此类佐剂。[0067]在实施例中，佐剂包括模式识别受体(PRR)(包括但不限于Toll样受体(TLR)，特别是TLR2、3、4、5、7、8、9和/或其组合)的激动剂。在其他实施例中，佐剂包括Toll样受体3的激动剂、Toll样受体7和8的激动剂或Toll样受体9的激动剂；优选地，这些列举的佐剂包括咪唑喹啉，如R848 ;腺嘌呤衍生物，如在美国专利6，329，381 (住友制药株式会社(Sumitomo Pharmaceutical Company))、比戛迪克(Biggadike)等人的美国公开专利申请2010/0075995或坎伯斯(Campos)等人的W02010/018132中披露的那些；免疫刺激DNA ;或免疫刺激RNA。在特定实施例中，合成纳米载体合并了化合物作为佐剂，它们是toll样受体(TLR)7&8的激动剂(“TLR7/8激动剂”)。有效用的是托马伊(Tomai)等人的美国专利6，696，076中披露的TLR7/8激动剂化合物，包括但不限于咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合环烷基咪唑并吡啶胺以及1，2_桥接咪唑并喹啉胺。优选的佐剂包括咪喹莫特和瑞喹莫德(也称为R848)。在特定实施例中，佐剂可以是DC表面分子CD40的激动剂。在某些实施例中，为了刺激免疫性而不是耐受性，合成纳米载体合并了促进DC成熟(对于引发初始T细胞是需要的)和细胞因子(如促进抗体免疫应答的I型干扰素)的产生的佐剂。在实施例中，佐剂还可以包括免疫刺激RNA分子(例如但不限于dsRNA、聚I:C或聚I --聚C12U (可获得为AmpliycW ,聚1:C和聚I --聚C12U两者均称为TLR3刺激剂))、和/或在以下中披露的那些:F.海尔(F.Heil)等人，“通过Toll样受体7和8的种属特异性识别单链 RNA (Species-Specific Recognition of Single-Stranded RNA viaToll-like Rec印tor7and8) ”，《科学》(Science)，303 (5663)，1526-1529 (2004) ；J.沃尔默(J.Vollmer)等人通过化学修饰的核糖核苷和寡核糖核苷酸进行的免疫调节(Immunemodulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides)”,W02008033432A2 ；A.福斯巴赫(A.Forsbach)等人，“含有特异性序列基元并且靶向Toll样受体8路径的免疫刺激性寡核糖核苷酸(Immunostimulatory oligoribonucleotidescontaining specific sequence motif(s)and targeting the Toll-likereceptor8pathway) v, W02007062107A2 ；E.乌尔曼(E.Uhlmann)等人，“具有增强的免疫刺激活性的修饰的寡核糖核苷酸类似物(Modified oligoribonucleotide analogs withenhanced immunostimulatory activity) ”，美国专利申请公开 US2006241076 ；G.利普福德(G.Lipford)等人，“免疫刺激性病毒RNA寡核苷酸和用于治疗癌症和感染的用途(Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides and use for treating cancer andinfections) ", W02005097993A2 ；G.利普福德等人，“包含G，U的免疫刺激性寡核糖核苷酸、组合物以及筛选法(Immunostimulatory G, U-containing oligoribonucleotides,compositions, and screening methods)，，，W02003086280A2。在一些实施例中，佐剂可以是TLR-4激动剂，如细菌脂多糖(LPS)、VSV-G和/或HMGB-1。在一些实施例中，佐剂可以包括TLR-5激动剂(如鞭毛蛋白或其部分或衍生物)，包括但不限于美国专利6，130，082、6，585，980以及7，192，725中所披露的那些。在特定实施例中，合成纳米载体合并了 Toll样受体(TLR) -9的配体，如包含CpG的免疫刺激DNA分子，这些分子诱导I型干扰素分泌并且刺激T和B细胞活化，从而使抗体产生和细胞毒性T细胞应答增加(科瑞格(Krieg)等人，细菌DNA中的CpG基元触发直接B细胞活化(CpG motifs in bacterial DNA triggerdirect B cell activation),《自然》(Nature), 1995.374:546-549 ;朱(Chu)等人，CpG 寡脱氧核苷酸充当接通T辅助细胞1型(Thl)免疫性的佐剂(CpG oligodeoxynucleotidesact as adjuvants that switch on T helper 1 (Thl) immunity)，〈〈实验医学杂志》(J.Exp.Med.)，1997.186:1623-1631 ;利普福德(Lipford)等人，包含CpG的合成寡核苷酸促进对蛋白质抗原产生的B细胞和细胞毒性T细胞应答:一种新型疫苗佐剂(CpG-containingsynthetic oligonucleotides promote B and cytotoxic T cell responses to proteinantigeh:a new class of vaccine adjuvants)，〈〈欧洲免疫学杂志〉〉(Eur.J.1mmunol.)，1997.27:2340-2344 ;罗曼(Roman)等人，免疫刺激DNA序列充当促进T辅助细胞1型的佐 剂(ImmunostimulatoryDNA sequences function as Τ helper-l-promotingadjuvants)，《自然医学》(Nat.Med.)，1997.3:849-854 ;戴维斯(Davis)等人，CpG DNA 是用重组乙型肝炎表面抗原免疫的小鼠中特异性免疫的有效增强剂(CpG DNA is a potentenhancer of specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis Bsurface antigen)，《免疫学杂志》(J.1mmunol.)，1998.160:870-876 ;利普福德等人，作为免疫细胞活化剂的细菌DNA (Bacterial DNA as immune cell activator),《微生物学趋势》(Trends Microbiol)，1998.6:496-500 ;科瑞格等人的美国专利 6，207，646 ;塔克(Tuck)等人的美国专利7，223，398 ;凡涅斯特(Van Nest)等人的美国专利7，250，403 ;或科瑞格等人的美国专利7，566，703。 [0068]在一些实施例中，佐剂可以是从坏死细胞释放的促发炎刺激物(例如尿酸盐晶体)。在一些实施例中，佐剂可以是补体级联的活化组分(例如⑶21、⑶35，等)。在一些实施例中，佐剂可以是免疫复合物的活化组分。这些佐剂还包括补体受体激动剂，如结合到CD21或CD35的分子。在一些实施例中，该补体受体激动剂诱导了合成纳米载体的内生补体调理作用。在一些实施例中，佐剂是细胞因子，它们是由细胞释放并且对细胞-细胞相互作用、通讯以及其他细胞的行为具有特异性作用的小蛋白质或生物因子(在5kD-20kD的范围内)。在一些实施例中，该细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白或适体。
[0069]在实施例中，至少一部分剂量的佐剂可以被偶合到合成纳米载体上，优选地，全部剂量的佐剂被偶合到合成纳米载体上。在其他实施例中，至少一部分剂量的佐剂不被偶合到合成纳米载体上。在实施例中，该用量的佐剂包括两种或更多种类型的佐剂。举例来说，而没有限制，可以组合作用于不同TLR受体的佐剂。作为一个实例，在一个实施例中，可以将TLR7/8激动剂与TLR9激动剂组合。在另一个实施例中，可以将TLR7/8激动剂与TLR4激动剂组合。在又另一个实施例中，可以将TLR9激动剂与TLR3激动剂组合。
[0070]“给予”或“给药”意指以药理学上有用的方式提供一种物质(如药物)给一名受试者。
[0071]“有效量”是在此提供的组合物产生一种或多种所希望的应答(如一种或多种所希望的免疫应答)的任何量。这个量可以用于体外或体内目的。出于体内目的，该量可以是临床医生认为可能对需要对单个蛋白质的一种体液免疫应答和一种CTL免疫应答的一名受试者具有临床益处的量。临床医生认为可能对这种受试者具有临床益处的有效量在此还称为“临床有效量”。在实施例中，由在此提供的一种组合物引发的体液免疫应答和CTL免疫应答在这些部分的免疫系统中的每一者中都产生临床作用。在其他实施例中，临床有效量是可以有助于治疗患有一种疾病或病状的一名受试者的有效量，其中对单个蛋白质的一种体液免疫应答和一种CTL免疫应答将提供益处。在一些实施例中，此类受试者包括患有或有风险患有癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病的受试者。在其他实施例中，此类受试者包括患有或有风险患有HIV、痕疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染的受试者。
[0072]有效量包括涉及在此提供的这些组合物之一所给予的产生针对一个体液表位的一种体液免疫应答和针对一个MHC I类限制性表位的一种CTL免疫应答的量。可以通过常规方法监测一名个体的体液和CTL免疫应答。有效产生如在此提供的所希望的免疫应答的量还可以是在此提供的组合物产生一种所希望的治疗终点或一种所希望的治疗结果的量。在一个实施例中，有效量是针对一种疾病或导致如在此提供的一种疾病的药剂提供有效免疫性的量。在另一个实施例中，免疫性在该受试者中持续至少6、12、18、24、36、48、60个或更多个月。在再另一个实施例中，免疫性由于根据一种疫苗接种方案给予在此提供的一种组合物而产生或持续。
[0073]有效量当然将取决于所治疗的特定受试者；病状、疾病或病症的严重程度；个体患者的参数，包括年龄、身体状况、体型以及体重；治疗持续时间；并行治疗(如果有)的性质；特定给药途径以及健康开业医师的知识和专业技能内的类似因素。这些因素为本领域普通技术人员所熟知，并且可以仅用常规实验方法解决。总体上优选的是使用最大剂量，即根据正确医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员应了解，出于医学原因、心理原因或实际上任何其他原因，患者可以坚持较低剂量或耐受剂量。
[0074]总体而言，本发明组合物的剂量可以在从约10μ g/kg到约100，000 μ g/kg的范围内。在一些实施例中，剂量可以在从约0.lmg/kg到约100mg/kg的范围内。在再其他实施例中，剂量可以在从约0.lmg/kg到约25mg/kg、约25mg/kg到约50mg/kg、约50mg/kg到约75mg/kg或约75mg/kg到约100mg/kg的范围内。作为替代方案，剂量可以基于合成纳米载体的数目给予。举例来说，有用的剂量包括每次剂量大于106、107、108、109或101°个合成纳米载体。有用的剂量的其他实例包括每次剂量从约1X106到约1X10'约1X107到约
1X 109或约1 X 108到约1 X 109个合成纳米载体。
[0075]“抗原 ”意指可以产生一种或多种免疫应答的任何抗原。该抗原可以是产生一种体液和/或CTL免疫应答的抗原。此类抗原包括但不限于蛋白质、肽、小分子、寡糖以及碳水化合物。在一些实施例中，这种抗原包括一种非蛋白质抗原(即不是一种蛋白质或肽抗原)。在一些实施例中，产生一种体液免疫应答的抗原包括与一种感染因子缔合的一种碳水化合物。在一些实施例中，产生一种体液免疫应答的抗原包括与一种感染因子缔合的一种糖蛋白或糖肽。该感染因子可以是一种细菌、病毒、真菌、原生动物或寄生虫。抗原可以是B细胞或T细胞抗原。[0076]用于在此提供的本发明方法中的这些合成纳米载体组合物被偶合到一种抗原，该抗原是包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位的一种蛋白质，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。在一些实施例中，此类组合物可以包括一种或多种额外的抗原，该一种或多种额外的抗原也可以受此限制但不一定如此。用于在此提供的方法和组合物中的该一种或多种额外的抗原可以是包括以下的任何抗原:包括体液表位和/或MHC I类限制性表位的抗原。该一种或多种额外的抗原还可以包括MHC II类限制性表位。在其他实施例中，该一种或多种额外的抗原可以是产生一种体液免疫应答的任何抗原。在再其他实施例中，该一种或多种额外的抗原可以是在此描述的T细胞抗原中的任一者，包括一种CD-1限制性抗原。仍在其他实施例中，该一种或多种额外的抗原可以是一种蛋白质、肽、小分子、寡糖以及碳水化合物。
[0077]在实施例中，包括蛋白质(该蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位)的抗原被偶合到这些合成纳米载体。在其他实施例中，抗原不被偶合到这些合成纳米载体。仍在其他实施例中，抗原被封装在这些合成纳米载体中。“抗原的一种或多种类型”意指共享相同的或实质上相同的抗原特征的分子。
[0078]在此提供的一种疾病、病症或病状的“相关抗原”是可以针对、由于或结合该疾病、病症或病状；该疾病、病症或病状(或一种症状或其作用)的原因产生一种不希望的免疫应答；和/或可以产生作为该疾病、病症或病状的一种症状、结果或作用的一种不希望的免疫应答的抗原。在一些实施例中，如在癌症的情况下，此类抗原表达于病变的细胞(如癌症或肿瘤细胞)之中或之上但不表达于正常或健康细胞(或非病变的细胞)之中或之上。此类抗原还可以包括一种抗原，该抗原表达于病变的细胞之中或之上和正常或健康细胞(或非病变的细胞)之上，但与表达于正常或健康细胞(或非病变的细胞)之上相比，以更大水平表达于病变的细胞之中或之上。优选地，与在此提供的一种疾病或病状相关的一种抗原的使用不会针对正常或健康细胞产生实质性或有害免疫应答，或将针对该疾病或病状产生胜于针对正常或健康细胞(或非病变的细胞)的任何免疫应答的一种有益免疫应答。在一些实施例中，与在此提供的一种疾病或病状相关的抗原是被偶合到合成纳米载体的蛋白质，这些蛋白质包括体液和/或MHC I类限制性表位。在其他实施例中，此类蛋白质包括一个体液和一个MHC I类限制性表位。在再其他实施例中，此类蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。抗原(包括前述蛋白质)的实例在此提供在别处。
[0079]“至少一部分剂量”意指剂量的至少某一部分，范围高达包括所有剂量。
[0080]一名“有风险”的受试者是一名健康开业医师认为有机会患有如在此提供的疾病或病状的受试者。
[0081]“B细胞抗原”意指由B细胞识别或在B细胞中触发一种免疫应答的任何抗原(例如由B细胞或其上的受体特异性识别的抗原)。在一些实施例中，是T细胞抗原的抗原也是B细胞抗原。在其他实施例中,Τ细胞抗原并不也是B细胞抗原。Β细胞抗原包括但不限于蛋白质、肽、小分子、寡糖以及碳水化合物。
[0082]“偶合(Couple) ”或“被偶合(Coupled) ”或“偶合了(Couples)”(等等)意指使一个实体(例如一个部分)与另一者在化学上缔合。在一些实施例中，偶合是共价偶合，意指偶合在两个实体之间存在共价键的情况下发生。在非共价的实施例中，非共价偶合通过非共价相互作用介导，这些非共价相互作用包括但不限于电荷相互作用、亲和相互作用、金属配位、物理吸附、主客体相互作用、疏水性相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华相互作用、磁相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合。在实施例中，封装是偶合的一种形式。
[0083]“细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答”意指对细胞毒性T细胞、优选对一个表位(如一个MHC I类限制性表位)具有特异性的细胞毒性T细胞的任何刺激、诱导或增殖。在实施例中，该表位是或具有与在此提供的疾病或病状中的任一者相关的一种抗原。用于评估CTL免疫应答的方法为本领域的普通技术人员已知。实例中提供这种方法的实例。
[0084]“剂型”意指在一种培养基、载体、媒剂或装置中的适用于给予一名受试者的一种药理学和/或免疫学活性物质。
[0085]“封装”意指将至少一部分的物质封闭在合成纳米载体内。在一些实施例中，一种物质被完全封闭在合成纳米载体内。在其他实施例中，被封装的物质的大部分或全部不暴露于合成纳米载体外的局部环境。在其他实施例中，不超过50 %、40 %、30 %、20 %、10 %或5% (重量/重量)暴露于该局部环境。封装不同于吸收，吸收是将物质的大部分或全部安置在合成纳米载体的表面上，并且使得该物质暴露于该合成纳米载体外的局部环境。
[0086]“表位”也称为抗原决定簇，是抗原的由免疫系统识别、由例如抗体、B细胞或T细胞特异性识别的部分。如在此所用，“体液表位”是由抗体或B细胞识别的表位，而“MHC I类限制性表位”是由发现于有核细胞上的MHC I类分子向免疫细胞呈递的表位。“MHC II类限制性表位”是由发现于抗原呈递细胞(APC)上(如在专业抗原呈递免疫细胞上，如在巨噬细胞、B细胞以及树突状细胞上；或在非造血细胞上，如肝细胞)的MHC II类分子向免疫细胞呈递的表位。
[0087]许多表位为本领域的普通技术人员所熟知，并且根据本发明的一些方面合适的示例性表位包括但不限于免疫表位数据库(Immune Epitope Database) (www.1mmuneepitope.0rg,维塔 R(Vita R),扎雷布斯基 L(Zarebski`` L),戈林鲍姆 JA(GreenbaumJA)，埃马米 H(Emami H)，霍夫 I (Hoof I)，萨利米 N(Salimi N)，达姆莱 R(Damle R)，塞特(Sette A),彼得 B (Peters B).免疫表位资料库 2.0 (The immune epitope database2.0).《核酸研究》(Nucleic Acids Res.)2010年1月;38(数据库专刊):D854_62 ;其全部内容以及2011年8月IEDB2.4版的所有数据库条目和特别是其中披露的所有表位通过引用结合在此)中列出的那些。表位还可以用公开可获得的算法来鉴别，这些算法是例如以下文献中所述的算法:王P (Wang P)，西德尼J (Sidney J)，金姆Y(Kim Y)，塞特A (Sette A)，隆德 0(Lund 0)，尼耳森 M(Nielsen Μ)，彼得 B(Peters Β).2010.用于 HLA DR、DP 以及 DQ 分子的妝结合预测(peptide binding predictions for HLA DR, DP and DQ molecules).《BMC 生物信息学》(BMC Bioinformatics) 2010，11:568 ;王 P,西德尼 J，道 C(Dow C)，莫特B(Moth6 B)，塞特A，彼得B.2008.MHC II类肽结合预测的系统评估和共同方法的评估(A systematic assessment of MHC class II peptide binding predictions andevaluation of a consensus approach).《PLoS 计算生物学》(PLoS Comput Biol).4 (4):el000048 ;尼耳森M，隆德0.2009.NN比对.用于MHC II类肽结合预测的基于人工神经网络白勺t匕对算法(NN_align.An artificial neural network-based alignment algorithmfor MHC class II peptide binding prediction).《BMC 生物信息学》.10:296 ;尼耳森M，伦德高Caundegaaixl C)，隆德0.2007.使用一种新颖稳定矩阵比对方法SMM比对来预测 MHC II 类结合亲和力(Prediction of MHC class II binding affinity usingSMM-align，a novel stabilization matrix alignment method).《BMC 生物信息学》.8:238 ;布伊HH(Bui HH)，西德尼J，彼得B，萨蒂亚默西M(Sathiamurthy Μ)，萨尼奇A(SinichiA)，i自顿 KA(Purton KA)，莫特 BR，基萨里 FV(Chisari FV)，沃特金斯 DI (Watkins DI)，塞特A.2005.《免疫遗传学》(Immunogenetics).57:304-314 ;斯图尔尼奥洛 T (Sturniolo Τ)，博诺 E(Bono E)，丁 J(Ding J)，拉德里扎尼 L(Raddrizzani L)，图雷西 0(Tuereci 0)，沙欣 U (Sahin U)，布拉森勒 M(Braxenthaler M)，加拉齐 F (Gallazzi F)，普罗蒂 MP (ProttiMP)，塞尼加利亚F(Sinigaglia F)，哈默J(Hammei' J).1999.使用DNA微阵列和虚拟HLAII类矩阵产生组织特异性和混杂的HLA配体数据库(Generation oftissue-specific andproniscuous HLA ligand databases using DNA microarrays and virtual HLA classIImatrices).《自然生物技术》(Nat Biotechmol).17 (6):555-561 ;尼耳森 M，伦德高C，沃宁 P (Woming P)，劳艾莫勒 SL (Lauemoller SL)，兰伯思 K (Lamberth K)，布斯 S (BuusS)，布伦纳克S(Brunak S)，隆德0.2003.使用具有新颖序列图示的神经网络可靠预测T细胞表位(Reliable prediction of T-cell epitopes using neural networks withnovel sequence representations).《蛋白质科学》(Protein Sci) l2:1007_1017 ;布伊HH，西德尼J，彼得B，萨蒂亚默西M，萨尼奇A，珀顿KA，莫特BR，基萨里FV，沃特金斯DI，塞特A.2005.特异性MHC结合预测工具的自动化产生和评估:ARB矩阵应用(Automatedgeneration and evaluation of specific MHC binding predictive tools:ARB matrixapplications).《免疫遗传学》57:304-314 ;彼得B，塞特A.2005.用稳定矩阵法产生说明生物过程的序列特异性的定量模型(Generating quantitative models describingthe sequence specificity of biological processes with the stabilized matrixmethod).《BMC 生物信息学》6:132 ;周 PY(Chou PY)，法斯曼 GD (Fasman GD).1978.从蛋白质的氨基酸序列预测其二级结构(Prediction of the secondary structure ofproteins from their amino acid sequence).《酶学和分子生物学相关领域的进展》(AdvEnzymol Relat Areas Mol Biol) 47:45-148 ;埃米尼 EA (Emini EA)，休 JV (Hughes JV)，i白洛DS(Perl0w DS)，博格J(B0ger J).1985.通过病毒特异性合成肽诱导A型肝炎病毒中和抗体(Induction of hepatitis A virus-neutralizing antibody by a virus-specificsynthetic peptide).《病毒学杂志》(JVirol) 55:836-839 ;卡普拉斯 PA (Karplus PA)，舒尔兹 GE(Schulz GE).1985.预测蛋白质的链柔性(Prediction of chain flexibility inproteins).《自然科学》(Naturwissenschaften) 72:212-213 ;科拉斯卡 AS (Kolaskar AS)，唐安卡PC(Tongaonkar PC).1990.—种用于预测蛋白质抗原上的抗原决定簇的半经验法(A sem1-empirical method for prediction of antigenic determinants on proteinantigens).《FEBS 通讯》(FEBS Lett) 276:172-174 ;帕克 JM (Parker JM)，郭 D (Guo D)，霍奇斯RSOtodges RS).1986.衍生自高效液相色谱肽保留数据的新亲水性等级:所预测的表面残基与抗原性和X射线衍生的可接近位点的相关性(New hydrophilicity scalederived from high-performance liquid chromatography peptide retention data:correlation of predicted surface residues with antigenicity and X-ray-derivedaccessible sites).《生物化学》(Biochemistry) 25:5425_5432 ;拉森 JE (Larsen JE),隆德0,尼耳森M.2006.用于预测线性B细胞表位的改进的方法(Improved method forpredicting linear B-cell epitopes).《免疫组研究》(Immunome Res) 2:2 ;波诺马连科JV (Ponomarenko JV)，伯恩PE (Bourne PE).2007.抗体-蛋白质相互作用:基准数据集和予页测工具评估(Antibody-protein interactiohs:benchmark datasets and predictiontools evaluation).《BMC 结构生物学》(BMC Struct Biol) 7:64 ;哈斯特安徒生 P (HasteAndersen P)，尼耳森M，隆德0.2006.使用蛋白质3D结构预测不连续B细胞表位中的残基(Prediction of residues in discontinuous B-eell epitopes using protein3Dstructures).《蛋白质科学》15:2558- 2567 ;波诺马连科JV，布伊H，李W(Li W)，富塞德N(Fusseder N)，伯恩PE，塞特A，彼得Β.2008.ElliPro:一种用于预测抗体表位的新的基于结构的工具(ElliPro:a new structure-based tool for the prediction of antibody印itopes).《BMC生物信息学》9:514 ;尼耳森M，伦德高C，布利克T(Blicher ^，彼得^塞特A,爵斯特森S(Justesen S)，布斯S以及隆德0.2008.《PLoS计算生物学》.4 (7) el000107.定量预测肽与具有已知序列的任何HLA-DR分子的结合:NetMHCIIpan(Quantitativepredictions of peptide binding to any HLA-DR molecule of known sequence:NetMHCIIpan);所述文献中每一者的全部内容都通过引用结合在此用于披露用于鉴别表位的方法和算法。
[0088]“产生”意指本身直接地或间接地(例如但不限于依赖于一方的言词或行动采取一种作用的一个无关第三方)引起针对一个表位发生的作用，如一种免疫应答(如一种体液免疫应答或一种CTL免疫应答)。
[0089]“体液免疫应答”意指引起B细胞产生或刺激和/或抗体产生的任何免疫应答。优选地，体液免疫应答对本发明的组合物内所包含或在实施本发明方法期间所给予的表位具有特异性。用于评估是否诱导一种体液应答的方法为本领域普通技术人员所已知。抗体产生在此被称为“抗体应答”。“抗体滴度”意指产生可测量水平的抗体。优选地，抗体应答或抗体滴度的产生是在人类中。在一些实施例中，抗体是某种同种型的抗体，如IgG或其子类。用于测量抗体滴度的方法在本领域已知并且包括酶联免疫吸附分析(ELISA)。用于测量抗体滴度的方法还在实例中略为详细地进行了描述。优选地，抗体应答或抗体滴度对如在此提供的一个表位具有特异性。在实施例中，抗体应答可以例如被定量为抗体数目、抗体浓度或滴度。这些值可以是绝对的或它们可以是相对的。用于定量一种抗体应答的分析包括抗体捕获分析、酶联免疫吸附分析(ELISA)、抑制液相吸附分析(ILPAA)、火箭免疫电泳(RIE)分析以及线免疫电泳(LIE)分析。当将一种抗体应答与另一种抗体应答相比较时，优选地使用相同类型的数值(例如滴度)和测量方法(例如ELISA)来进行比较。
[0090]举例来说，用于测量抗体滴度的ELISA方法可以由以下步骤组成:(i)制备ELISA板涂层材料，以使得感兴趣的抗体靶被偶合到基质聚合物或其他合适材料；(?)在水溶液(如PBS)中制备涂层材料并且将涂层材料溶液递送到多孔板的孔中，以便使涂层沉积到多孔板上过夜；(iii)用洗涤缓冲液(如0.05%吐温-20 (Tween-20)于PBS中)彻底地洗涤多孔板以去除过量涂层材料；(iv)通 过施用稀释剂溶液(如10%胎牛血清于PBS中)阻断板的非特异性结合；(v)用洗涤缓冲液从板洗涤阻断/稀释剂溶液；(vi)视需要用稀释剂稀释含有抗体和适当标准物(阳性对照)的一个或多个血清样品以获得使ELISA应答适当地饱和的浓度；(vii)连续稀释多孔板上的血浆样品，以便涵盖适用于产生ELISA应答曲线的浓度范围；(viii)孵育板以提供抗体-靶结合；(ix)用洗涤缓冲液洗涤板以去除未与抗原结合的抗体；(X)添加适当浓度的在相同稀释剂中的二级检测抗体，如能够结合初级抗体的生物素偶合的检测抗体；(xi)与所施用的检测抗体一起孵育板，接着用洗涤缓冲液洗涤；(xii)添加将与发现于生物素标记的抗体上的生物素结合的酶(如抗生蛋白链菌素-HRP (辣根过氧化物酶))并且进行孵育；(xiii)洗涤多孔板；(xiv)添加一种或多种基质(如TMB溶液)到板；(XV)当完成彩色显影时，施用终止溶液(如2N硫酸)；(xvi)在关于基质的特定波长(450nm,扣除在570nm下的读数)下读取板孔的光学密度；(xvi)将合适的多参数曲线拟合应用于数据，并且将半数最大有效浓度(EC50)定义为曲线上获得板标准物的半数最大0D值处的浓度。
[0091]“鉴别”是使得临床医生识别受试者是可以受益于在此提供的方法和组合物的受试者的任何作用或作用组。优选地，所鉴别的受试者是需要对单个蛋白质的一种体液免疫应答和CTL免疫应答的受试者。此类受试者包括患有或有风险患有在此提供的疾病或病状中任一者的任何受试者。作用或作用组可以是本身直接地或间接地(例如但不限于依赖于一方的言词或行动采取一种作用的一个无关第三方)。
[0092]“感染”或“传染病”是由微生物、病原体或其他因子(如细菌、真菌、朊病毒或病毒)引起的任何病状或疾病。
[0093] “合成纳米载体的最大尺寸”意指一种纳米载体沿着该合成纳米载体的任一轴测量的最大尺寸。“合成纳米载体的最小尺寸”意指一种合成纳米载体沿着该合成纳米载体的任一轴测量的最小尺寸。举例来说，对于球形合成纳米载体，合成纳米载体的最大和最小尺寸应该是实质上一致的，并且应该是其直径的大小。类似地，对于立方形合成纳米载体，合成纳米载体的最小尺寸应该是它的高度、宽度或长度中最小的那个，而合成纳米载体的最大尺寸应该是它的高度、宽度或长度中最大的那个。在一个实施例中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最小尺寸等于或大于lOOnm。在一个实施例中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最大尺寸等于或小于5 μ m。优选地，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最小尺寸大于llOnm,更优选大于120nm,更优选大于130nm,并且再更优选大于150nm本发明的合成纳米载体的最大尺寸与最小尺寸的纵横比可以取决于实施例而变化。举例来说，合成纳米载体的最大尺寸与最小尺寸的纵横比可以从1: 1到1，000, 000: 1、优选从1: 1到100，000: 1、更优选从1: 1到10，000: 1、更优选从1: 1到1000: 1、再更优选从1: 1到100: 1、并且又更优选从1: 1到10: 1变化。优选地，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最大尺寸等于或小于3 μ m、更优选等于或小于2 μ m、更优选等于或小于1 μ m、更优选等于或小于800nm、更优选等于或小于600nm、并且再更优选等于或小于500nm。在优选的实施例中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最小尺寸等于或大于lOOnm、更优选等于或大于120nm、更优选等于或大于130nm、更优选等于或大于140nm、并且仍更优选等于或大于150nm。通过将这些合成纳米载体悬浮在一种液体(通常是水性)介质中，并且使用动态光散射(DLS)(例如使用一台Brookhaven ZetaPALS仪器)获得合成纳米载体尺寸的测量值。举例来说,可以将合成纳米载体的悬浮液从水性缓冲液中稀释到纯化水中以达到约0.01到0.lmg/mL的最终的合成纳米载体悬浮液浓度。可以将该稀释的悬浮液在一个合适的比色皿中直接制备，或转移到该比色皿中以用于DLS分析。然后可以将该比色皿放置在DLS中，使之平衡到受控的温度，并且然后扫描充分的时间以在介质的粘度和样品的折射率的适当输入的基础上获得稳定并且可再现的分布。然后报告有效直径，或分布的平均值。合成纳米载体的“尺寸”或“大小”或“直径”意指使用动态光散射获得的粒度分布的平均值。
[0094]“MHC”是指主要组织相容性复合体，一种见于大多数脊椎动物中的编码MHC分子的大基因组区域或基因家族，这些MHC分子展示在细胞表面上的经加工蛋白质的片段或表位。细胞表面上MHC:肽的呈递允许由免疫细胞、通常是T细胞监视。存在两大类MHC分子:I类和II类。通常，I类MHC分子发现于有核细胞上并且将肽呈递于细胞毒性T细胞。II类MHC分子发现于某些免疫细胞(主要是巨噬细胞、B细胞以及树突状细胞，统称为APC)上。MHC区域中最知名的基因是编码细胞表面上的抗原呈递蛋白的予组。在人类中，这些基因被称为人类白细胞抗原(HLA)基因。
[0095]“药学上可接受的赋形剂”意指与所列举的合成纳米载体一起使用以配制这些组合物的药理学上非活性的材料。药学上可接受的赋形剂包括本领域中已知的多种材料，包括但不限于糖类(如葡萄糖、乳糖等)、防腐剂(如抗微生物剂)、复水助剂、着色剂、盐水(如磷酸盐缓冲的盐水)以及缓冲液。
[0096]“一种或多种蛋白质”意指所具有的分子量典型地大于1000道尔顿的包含主要通过相邻氨基酸残基的羧基与氨基之间的肽键接合在一起的氨基酸残基的化合物。蛋白质还可以包括额外的键结结构，如二级结构、三级结构等等。出于不同的目的，如稳定或偶合，蛋白质中的某些肽键可以由其他键类型替代。当偶合到合成纳米载体时，优选地，存在偶合到每个合成纳米载体的 多个复本的蛋白质。
[0097]“方案”是指给一名受试者的一种或多种物质的任何给药方案。给药方案可以包括给药的量、频率和/或模式。在一些实施例中，这种方案可以用于向一名或多名测试受试者给予本发明的一种或多种组合物。然后可以评估这些测试受试者中的免疫应答以确定该方案是否可有效产生一种或多种所希望的免疫应答。不是或除了前述免疫应答，还可以评估任何其他治疗性和/或预防性作用。可以使用在此提供的或以其他方式本领域中已知的方法中的任一者来确定一种方案是否具有一种所希望的作用。举例来说，可以从已经根据一种特定方案给予了在此提供的一种组合物的一名受试者获得一群细胞，以便确定特异性免疫细胞、细胞因子、抗体等是否产生、活化等。对于检测免疫细胞的存在和/或数目的有用的方法包括但不限于流式细胞学方法(例如FACS)和免疫组织化学方法。用于免疫细胞标记的特异性染色的抗体和其他黏合剂是可商购的。此类试剂盒典型地包括用于多种抗原的着色试剂，这些着色试剂允许对来自一群不同类的细胞的所希望的细胞群体进行基于FACS的检测、分离和/或定量。
[0098]“受试者”意指动物，包括温血哺乳动物，如人类和灵长类动物；禽类；家庭驯养动物或农用动物，如猫、狗、绵羊、山羊、牛、马以及猪；实验动物，如小鼠、大鼠以及天竺鼠；鱼；爬行动物；动物园动物和野生动物；等。
[0099]“一种或多种合成纳米载体”意指在自然中未发现的、并且具有小于或等于5微米大小的至少一个尺寸的离散物体。白蛋白纳米颗粒通常被包括为合成纳米载体，然而在某些实施例中，合成纳米载体并不包括白蛋白纳米颗粒。在实施例中，合成纳米载体不包括壳聚糖。在某些其他实施例中，合成纳米载体不包括壳聚糖。在其他实施例中，本发明的合成纳米载体不是基于脂质的纳米颗粒。在其他实施例中，本发明的合成纳米载体不包括磷脂。
[0100]合成纳米载体可以是但不限于一个或多个基于脂质的纳米颗粒(在此也称为脂质纳米颗粒，即构成其结构的大多数物质是脂质的纳米颗粒)、聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、基于表面活性剂的乳液、树枝状聚合物、巴克球、纳米线、病毒样颗粒(即主要由病毒结构蛋白质构成但不具有感染性或具有低感染性的颗粒)、基于肽或蛋白质的颗粒(在此也称为蛋白质颗粒，即构成其结构的大多数物质是肽或蛋白质的颗粒)(如白蛋白纳米颗粒)和/或使用纳米材料的组合产生的纳米颗粒(如脂质-聚合物纳米颗粒)。合成纳米载体可以具有多种不同的形状，包括但不限于球状、立方形、金字塔形、长方形、圆柱形、环形等。根据本发明的合成纳米载体包括一个或多个表面。可以适用于本发明的惯例中的示例性合成纳米载体包括:(1)格里夫(Gref)等人的美国专利5，543，158中披露的生物可降解纳米颗粒，(2)索尔兹曼(Saltzman)等人的已公布的美国专利申请20060002852的聚合纳米颗粒，(3)德西蒙(DeSimone)等人的已公布的美国专利申请20090028910的用平版印刷法建构的纳米颗粒，(4)冯安德里安(von Andrian)等人的W02009/051837的披露，(5)佩纳德斯(Penades)等人的已公布的美国专利申请2008/0145441中披露的纳米颗粒，(6)德洛斯里奥斯(de los Rios)等人的已公布的美国专利中请20090226525中披露的蛋白质纳米颗粒，(7)西贝(Sebbel)等人的已公布的美国专利申请20060222652中披露的病毒样颗粒，
(8)巴赫曼(Bachmann)等人的已公布的美国专利申请20060251677中披露的与核酸偶合的病毒样颗粒，(9)W02010047839A1或W02009106999A2中披露的病毒样颗粒，(10) P.保利赛利(P.Paolicelli)等人，“可以有效地缔合并且递送病毒样颗粒的经过表面修饰的基于PLGA 的纳米颗粒(Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can EfficientlyAssociate and Deliver Virus-like Particles) ”，《纳米医学》(Nanomedicine)，5 (6):843-853(2010)中披露的纳米沉淀的纳米颗粒，或(11)美国公布2002/0086049中披露的凋亡细胞、凋亡小体或合成或半合成模拟物。在实施例中，合成纳米载体可以具有大于1: 1、1: 1.2,1: 1.5,1: 2、1: 3、1: 5、1: 7、或大于 1: 10 的纵横比。
[0101]具有等于或小于约lOOnm、优选等于或小于lOOnm的最小尺寸的根据本发明的合成纳米载体不包含具有使补体活化的羟基的表面，或可替代地包含主要由不是使补体活化的羟基的部分组成的表面。在一个优选的实施例中，具有等于或小于约lOOnm、优选等于或小于lOOnm的最小尺寸的根据本发明的合成纳米载体不包含实质上使补体活化的表面，或可替代地包含主要由不实质上使补体活化的部分组成的表面。在一个更优选的实施例中，具有等于或小于约lOOnm、优选等于或小于lOOnm的最小尺寸的根据本发明的合成纳米载体不包含使补体活化的表面，或可替代地包含主要由不使补体活化的部分组成的表面。在实施例中，合成纳 米载体排除了病毒样颗粒。在实施例中，当合成纳米载体包括病毒样颗粒时，这些病毒样颗粒包括非天然佐剂(意指VLP包含除VLP制造期间所产生的天然存在的RNA以外的佐剂)。在实施例中，合成纳米载体可以具有大于1: 1、1: 1.2,1: 1.5、1: 2、1: 3、1: 5、1: 7、或大于1: 10的纵横比。
[0102]“T细胞抗原”意指由T细胞识别并且触发T细胞中的免疫应答的任何抗原(如这样一种抗原:该抗原通过与I类或II类主要组织相容性复合体分子(MHC)结合或与CD1复合体结合的抗原或其一部分的呈递而被T细胞或NKT细胞上的T细胞受体特异性地识别)。在一些实施例中，是T细胞抗原的抗原也是B细胞抗原。在其他实施例中，T细胞抗原并不也是B细胞抗原。T细胞抗原通常是蛋白质或肽。T细胞抗原可以是刺激CD8+T细胞应答、⑶4+T细胞应答或两者的抗原。因此，在一些实施例中，纳米载体可以有效地刺激两种类型的应答。
[0103]在一些实施例中，T细胞抗原是T辅助细胞抗原(即通过刺激辅助性T细胞，可以产生对一种B细胞抗原、优选一种无关的B细胞抗原的增强的应答的抗原)。在实施例中，T辅助细胞抗原可以包括一种或多种获自或衍生自以下物质的肽:破伤风类毒素、埃-巴二氏病毒、流感病毒、呼吸道合胞体病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、白喉类毒素或PADRE肽(从赛特(Sette)等人的美国专利7，202，351的工作中知晓)。在其他实施例中，T辅助细胞抗原可以包括一种或多种脂质或糖脂，包括但不限于:α -半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)、α-键联的鞘糖脂(来自鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonasspp.))、半乳糖苷二酰基甘油(来自伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi))、脂磷酸聚糖(来自杜氏利什曼虫(Leishmania donovani))以及磷脂酰肌醇四甘露糖苷(PIM4)(来自麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae))。对于作为T辅助细胞抗原有用的额外的脂质和/或糖脂，参看V.塞昂多罗(V.Cerundolo)等人，“开发疫苗接种策略中的不变NKT细胞(Harnessing invariant NKT cells in vaccination strategies.)，，，〈〈自然免疫学评论》(Nature Rev Immun)，9:28-38 (2009)。在实施例中，CD4+T细胞抗原可以是从一个来源(如一个天然来源)获得的CD4+T细胞抗原的衍生物。在此类实施例中，CD4+T细胞抗原序列(如与MHC II结合的那些肽)可以与从该来源获得的抗原具有至少70%、80%、90%或95%的一致性。在实施例中，T细胞抗原、优选T辅助细胞抗原可以被偶合到合成纳米载体或与合成纳米载体解除偶合。在一些实施例中，T细胞抗原被封装在这些组合物的合成纳米载体中。
[0104]“疫苗”意指改进了对具体病原体或疾病的免疫应答的物质的组合物。疫苗典型地含有刺激受试者的免疫系统以将`特异性抗原识别为外来物质并且将它从受试者身体消除的因子。疫苗还建立了免疫‘记忆’，因此如果一个人再次受到激发，抗原将会被快速识别并且被应答。疫苗可以是预防性的(例如阻止由任何病原体引起的以后的感染)、或治疗性的(例如用于治疗癌症的针对肿瘤特异性抗原的疫苗)。在实施例中，疫苗可以包含根据本发明的剂型。
[0105]“疫苗方案”或“疫苗接种方案”是一种或多种疫苗接种的计划，该计划包括疫苗剂量的数目和计时。通常，疫苗接种方案旨在针对一种疾病或病状的发展获得免疫性。优选地，疫苗方案是通过体液和CTL部分的免疫系统获得免疫性的疫苗方案。
[0106]C.用于本发明方法的组合物
[0107]在此提供了用于有效的体液和CTL免疫应答产生的方法和相关组合物。已经发现，偶合有一种蛋白质的合成纳米载体可以用于产生有效并强烈的体液和CTL免疫应答，该蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中这些合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸。所提供的这些组合物可以用于多种所希望的临床终点，如用于疫苗接种。
[0108]根据本发明，可以使用多种多样的合成纳米载体。在一些实施例中，合成纳米载体是球形或球状体。在一些实施例中，合成纳米载体是平坦的或板状的。在一些实施例中，合成纳米载体是立方体或立方形。在一些实施例中，合成纳米载体是卵形或椭圆形。在一些实施例中，合成纳米载体是圆柱体、圆锥或金字塔。
[0109]在一些实施例中，希望使用一群在大小、形状和/或构成方面相对一致的合成纳米载体，这样每一合成纳米载体具有类似特性。举例来说，基于合成纳米载体的总数，至少80 %、至少90 %或至少95 %的合成纳米载体可以具有落在合成纳米载体的平均直径或平均尺寸的5 %、10 %或20 %之内的最小尺寸或最大尺寸。在一些实施例中，一群合成纳米载体就大小、形状和/或构成而论可以是不均匀的。
[0110]合成纳米载体可以是实心的或空心的，并且可以包括一个或多个层。在一些实施例中，每一层相对于另一或其他层都具有独特的构成和独特的特性。为了给出但是一个实例，合成纳米载体可以具有一个核/壳结构，其中核是一层(例如一个聚合物核)并且壳是一个第二层(例如一个脂质双层或单层)。合成纳米载体可以包括多个不同的层。
[0111]在一些实施例中，合成纳米载体可以包括金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒等。在一些实施例中，非聚合的合成纳米载体是非聚合组分的聚集体，如金属原子(例如金原子)的聚集体。
[0112]在一些实施例中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种脂质。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一种脂质体。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一个脂质双层。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一个脂质单层。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一种胶束。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一个核，该核包含由一个脂质层(例如脂质双层、脂 质单层等)环绕的一种聚合物基质。在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一个非聚合核(例如金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒、骨颗粒、病毒性颗粒、蛋白质、核酸、碳水化合物等)，该核由一个脂质层(例如脂质双层、脂质单层等)环绕。
[0113]在一些实施例中，合成纳米载体可以包括一种或多种聚合物。在一些实施例中，这种聚合物可以由一个涂层(例如脂质体、脂质单层、胶束等)环绕。在一些实施例中，这些合成纳米载体的不同的要素(即组分)可以与聚合物偶合。
[0114]在一些实施例中，一个组分可以与一个聚合物基质共价缔合。在一些实施例中，共价缔合通过连接物介导。在一些实施例中，一个组分可以与一个聚合物基质非共价缔合。举例来说，在一些实施例中，一个组分可以被封装在聚合物基质内、被聚合物基质环绕、和/或被分散遍及聚合物基质。可替代地或额外地，一个组分可以通过疏水性相互作用、电荷相互作用、范德华力等与聚合物基质缔合。
[0115]常规地，已知多种多样的聚合物和从这些聚合物形成聚合物基质的方法。总体而言，聚合物基质包括一种或多种聚合物。
[0116]在此提供的这些合成纳米载体可以是聚合纳米载体。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包括两种或更多种单体的共聚物。在序列方面，共聚物可以是随机的、嵌段的，或包括随机序列与嵌段序列的组合。典型地，根据本发明的聚合物是有机聚合物。[0117]在一些实施例中，这些合成纳米载体包括一种或多种聚合物，该一种或多种聚合物包括一种聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺或聚醚或其单元。在其他实施例中，该聚合物包括聚(乙二醇)(PEG)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或一种聚己内酯或其单元。在一些实施例中，优选该聚合物是生物可降解的。因此，在这些实施例中，优选如果该聚合物包括一种聚醚(如聚(乙二醇))或其单元，那么该聚合物包括一种聚醚与一种生物可降解聚合物的一种嵌段共聚物，以使得该聚合物是生物可降解的。在其他实施例中，该聚合物不仅仅包括一种聚醚或其单元，如聚(乙二醇)或其单元。该一种或多种聚合物可以被包含在聚合的合成纳米载体内或可以被包含在许多其他不同类型的合成纳米载体中。
[0118]适用于本发明中的聚合物的实例还包括但不限于聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1，3-二噁烷-2-酮))、聚酸酐(例如聚(癸二酸酐))、聚富马酸丙酯、聚酰胺(例如聚己内酰胺)、聚缩醛、聚醚、聚酯(例如聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-共-乙交酯、聚己内酯、聚羟基酸(例如聚(β-羟基烷酸酯))、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯以及聚胺、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物以及聚(乙亚胺)、聚(乙亚胺)-PEG共聚物。
[0119]在一些实施例中，根据本发明的聚合物包括根据21C.F.R.§ 177.2600已通过美国食品与药品管理局(FDA)批准用于人类的聚合物，包括但不限于聚酯(例如聚乳酸、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚己内酯、聚戊内酯、聚(1，3_ 二噁烷-2-酮))；聚酸酐(例如聚(癸二酸酐))；聚醚(例如聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；以及聚氰基丙烯酸酯。
[0120]在一些实施例中，聚合物可以是亲水性的。举例来说，聚合物可以包含阴离子基团(例如磷酸根、硫酸根、羧酸根)；阳离子基团(例如季胺基)；或极性基团(例如羟基、硫醇基、胺基)。在一些实施例中，包括亲水性聚合物基质的合成纳米载体在该合成纳米载体内产生亲水性环境。在一些实施例中，聚合物可以是疏水性的。在一些实施例中，包括疏水性聚合物基质的合成纳米载体在该合成纳米载体内产生疏水性环境。聚合物的亲水性或疏水性的选择可以影响被合并(例如偶合)在合成纳米载体内的物质的性质。
[0121 ] 在一些实施例中，聚合物可以用一个或多个部分和/或官能团修饰。根据本发明，可以使用多个部分或官能团。在一些实施例中，可以用聚乙二醇(PEG)、用碳水化合物、和/或用衍生自多糖的非环状聚缩醛修饰聚合物(巴比索夫(Papisov)，2001，《ACS研讨会系列》(ACS Symposium Series), 786:301)。可以使用格里夫(Gref)等人的美国专利第5543158号或冯安德里安(Von Andrian)等人的W0公布W02009/051837中的全部传授内容进行某些实施例。
[0122]在一些实施例中，可以用脂质或脂肪酸基团修饰聚合物。在一些实施例中，脂肪酸基团可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或二十四烷酸中的一种或多种。在一些实施例中，脂肪酸基团可以是棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、α-亚油酸、亚油酸、花生四烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一种或多种。
[0123]在一些实施例中，聚合物可以是聚酯，包括包含乳酸和乙醇酸单元的共聚物，如聚(乳酸-共-乙醇酸)和聚(丙交酯-共-乙交酯，在此统称为“PLGA”；和包含乙醇酸单元的均聚物，在此称为“PGA” ；以及包含乳酸单元的均聚物，如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯以及聚-D，L-丙交酯，在此统称为“PLA”。在一些实施例中，示例性聚酯包括例如聚羟基酸；PEG共聚物和丙交酯与乙交酯的共聚物(例如PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物以及其衍生物。在一些实施例中，聚酯包括例如聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]以及其衍生物。[0124]在一些实施例中，聚合物可以是PLGA。PLGA是一种生物相容的并且生物可降解的乳酸与乙醇酸的共聚物，并且多种形式的PLGA的特征在于乳酸:乙醇酸的比率。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D，L-乳酸。可以通过改变乳酸:乙醇酸的比率调整PLGA的降解速率。在一些实施例中，根据本发明，将使用的PLGA的特征在于乳酸:乙醇酸比率是约85: 15、约 75: 25、约 60: 40、约 50: 50、约 40: 60、约 25: 75 或约 15: 85。
[0125]在一些实施例中，聚合物可以是一种或多种丙烯酸聚合物。在某些实施例中，
[0126]丙烯酸聚合物包括例如丙烯酸与甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯以及包含一种或多种上述聚合物的组合。丙烯酸聚合物可以包括丙烯酸和甲基丙烯酸酯与低含量季铵基团的全聚合共聚物。
[0127]在一些实施例中，聚合物可以是阳离子型聚合物。总体而言，阳离子型聚合物能够缩合和/或保护核酸(例如DNA或其衍生物)的带负电的链。包含胺的聚合物(如聚(赖氨酸)(泽纳(Zauner)等人，1998,《先进药物递送评论》(Adv.Drug Del.Rev.), 30:97 ;和卡巴诺夫(Kabanov)等人，1995,《生物结合化学》(Bioconjugate Chem.), 6: 7)、聚(乙亚胺)(PEI ;博塞夫(Boussif)等人，1995，《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.)，美国(USA)，1995,92:7297)以及聚(酰胺基胺)树枝状聚合物(库沃斯卡_拉塔罗(Kukowska-LatalΙο)等人，1996,《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.),美国，93:4897 ;唐(Tang)等人，1996，《生物结合化学》，7:703 ;以及汉斯勒(Haensler)等人，1993，《生物结合化学》，4:372))在生理pH值下带正电，与核酸形成离子对，并且在多种细胞系中介导转染。在实施例中，这些合成纳米载体可以不包括(或可以排除)阳离子型聚合物。
[0128]在一些实施例中，聚合物可以是带有阳离子侧链的可降解聚酯(普特南(Putnam)等人，1999,《大分子》(Macromolecules) ,32:3658 ;巴雷拉(Barrera)等人，1993,《美国化学会志》(J.Am.Chem.Soc.), 115:11010 ;权(Kwon)等人，1989，《大分子》，22:3250 ;林(Lim)等人，1999，《美国化学会志》，121:5633 ；以及周(Zhou)等人，1990，《大分子》，23:3399)。这些聚酯的实例包括聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)(巴雷拉等人，1993，《美国化学会志》，115:11010)、聚(丝氨酸酯)(周等人，1990，《大分子》，23:3399)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(普特南等人，1999，《大分子》，32:3658 ;和林等人，1999，《美国化学会志》，121:5633)以及聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(普特南等人，1999，《大分子》，32:3658 ;和林等人，1999，《美国化学会志》，121:5633)。
[0129]这些和其他聚合物的特性以及用于制备其的方法在本领域中是熟知的(参看例如美国专利 6，123，727 ;5，804，178 ;5，770，417 ;5，736，372 ;5，716，404 ;6，095，148 ；5，837，752 ;5，902，599 ;5，696，175 ;5，514，378 ;5，512，600 ;5，399，665 ;5，019，379 ；5,010, 167 ；4, 806,621 ;4，638，045 ;以及 4，946，929 ;王(Wang)等人，2001，《美国化学会志》，123:9480 ;林等人，2001，《美国化学会志》，123:2460 ;朗格尔(Langer)，2000，《化学研究评述》 (Acc.Chem.Res.) ,33:94 ;朗格尔，1999,《控释杂志》(J.Control.Release) ,62:7 ;以及乌利希(Uhrich)等人，1999,《化学评论》(Chem.Rev.),99:3181)。更总体而言，《聚合物科学以及聚合物胺和铵盐的简明百科全书》(Concise Encyclopedia of PolymerScience and Polymeric Amines and Ammonium Salts),戈萨尔斯(Goethals)编，培格曼出版社(Pergamon Press), 1980 ;《聚合原理》(Principles of Polymerization),奥迪安(Odian),约翰威利父子出版公司(John Wiley & Sons),第四版,2004 ;《当代聚合物化学》(Contemporary Polymer Chemistry),奥科克(Allcock)等人，普伦蒂斯霍尔出版社(Prentice-Hall), 1981 ;戴明(Deming)等人，1997,《自然》(Nature), 390:386 ;以及美国专利6，506，577,6, 632，922,6, 686，446以及6，818，732中描述了用于合成某些合适聚合物的多种方法。
[0130]在一些实施例中，聚合物可以是直链或分支链聚合物。在一些实施例中，聚合物可以是树枝状聚合物。在一些实施例中，聚合物可以彼此实质上交联。在一些实施例中，聚合物可以实质上不交联。在一些实施例中，聚合物可以根据本发明使用而不进行交联步骤。进一步理解的是，合成纳米载体可以包含嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物、和/或任何上述和其他聚合物的加合物。本领域的普通技术人员应认识到在此列出的聚合物代表可以根据本发明使用的聚合物的示例性不详尽清单。
[0131]在一些实施例中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种两亲实体。在一些实施例中，两亲实体可以促进具有增加的稳定性、改进的均匀性或增加的粘性的合成纳米载体的制造。在一些实施例中，两亲实体可以与脂质膜(例如脂质双层、脂质单层等)的内表面缔合。本领域中已知的多种两亲实体适用于制造根据本发明的合成纳米载体。此类两亲实体包括但不限于磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC) ;二油烯基磷脂酰基乙醇胺(DOPE) ;二油烯基氧丙基三乙基铵(D0TMA) ;二油酰基磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰基甘油(DPPG);十六烷醇；脂肪醇，如聚乙二醇(PEG);聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸，如棕榈酸或油酸；脂肪酸；月旨肪酸甘油单酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯(Span?g5)甘氨胆酸酯；脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Span?20 );聚山梨醇酯20( Tween?20 );聚山梨醇酯60 ( Tween?60 );聚山梨醇酯65 ( T\veen?65 );聚山梨醇酯80 ( Tween?80 );聚山梨醇酯85(Tween?85 );聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，如脱水山梨糖醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；双十六烷基磷酸酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；硬脂酰胺；十二烷胺；十六烷胺；乙酰基棕榈酸酯；蓖麻油酸甘油酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蘧酸异丙酯；泰洛沙泊(tyloxapol);聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-单硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性剂特性的合成的和/或天然的洗涤剂；脱氧胆酸酯；环糊精；离液序列高的盐；离子对试剂；以及其组合。两亲实体组分可以是不同两亲实体的混合物。本领域的普通技术人员应认识到这是具有表面活性剂活性的物质的示例性的非详尽清单。任何两亲实体都可以用于制造根据本发明使用的合成纳米载体中。
[0132]在一些实施例中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生的天然碳水化合物。在某些实施例中，碳水化合物包括单糖或二糖，包括但不限于:葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖(cellbiose)、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺以及神经氨酸。在某些实施例中，碳水化合物是一种多糖，包括但不限于支链淀粉、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基纤维素(HC)、甲基纤维素(MC)、右旋糖酐、环葡聚糖、糖原、羟乙基淀粉、卡拉胶、多聚糖(glycon)、直链淀粉、壳聚糖、N, 0-羧甲基壳聚糖、藻胶和海藻酸、淀粉、甲壳质、菊糖、魔芋、葡萄甘露聚糖(glUC0_annan)、石耳素、肝素、透明质酸、凝胶多糖以及黄原胶。在实施例中，这些合成纳米载体并不包括(或特异性地排除)碳水化合物，如多糖。在某些实施例中，该碳水化合物可以包括一种碳水化合物衍生物，如一种糖醇，包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇以及乳糖醇。 [0133]用于根据本发明的方法中的组合物包含合成纳米载体与药学上可接受的赋形剂(如防腐剂、缓冲液、盐水或磷酸盐缓冲的盐水)的组合。可以使用常规药物制造和混合技术制造这些组合物，以实现有用的剂型。在一个实施例中，将合成纳米载体与防腐剂一起悬浮于无菌的供注射用的盐水溶液中。
[0134]在实施例中，在制备作为载体的合成纳米载体以用于疫苗中时，用于将组分偶合到合成纳米载体的方法可以是有用的。如果组分是小分子，那么在组装合成纳米载体之前将组分连接到聚合物上可能具有优势。在实施例中，制备具有用于将组分偶合到合成纳米载体上的表面基团的合成纳米载体也可能是一个优势，该制备通过使用这些表面基团而不是将组分连接到聚合物上并且随后在建构合成纳米载体时使用这个聚合物结合物来进行。
[0135]在某些实施例中，偶合物可以是共价连接物。在实施例中，根据本发明的组分可以通过1，2，3-三唑连接物共价偶合到外表面上，该连接物通过纳米载体表面上的叠氮基与包含炔基的组分进行1，3_偶极环加成反应或通过纳米载体表面上的炔烃与包含叠氮基的组分进行1，3-偶极环加成反应形成。此类环加成反应优选在铜(I)催化剂以及合适的Cu(I)_配体和将Cu(II)化合物还原成催化活性的Cu(I)化合物的还原剂存在下执行。这种Cu(I)催化的叠氮-炔烃环加成反应(CuAAC)也可以称为点击反应。
[0136]额外地，共价偶合物可以包括共价连接物，它包括酰胺连接物、二硫基连接物、硫醚连接物、腙连接物、酰肼连接物、亚胺或肟连接物、脲或硫脲连接物、脒连接物、胺连接物以及磺酰胺连接物。
[0137]酰胺连接物通过一种组分上的胺与一种第二组分(如纳米载体)的羧酸基团之间的酰胺键形成。连接物中的酰胺键可以用被适当保护的氨基酸或抗原或佐剂以及被活化的羧酸(如被N-羟基琥珀酰亚胺活化的酯)使用任何常规酰胺键形成反应制备。
[0138]二硫基连接物通过在例如R1-S-S-R2的形式的两个硫原子之间形成二硫(S_S)键制备。二硫键可以通过包含硫醇基/巯基(-SH)的抗原或佐剂与聚合物或纳米载体上另一个被活化的硫醇基或包含硫醇基/疏基的纳米载体与包含被活化的硫醇基的组分进行硫醇交换形成。[0139]三唑连接物(特别是R1和R2可以是任何化学实体的形式
【权利要求】
1.一种方法，包括:鉴别需要对一种第一蛋白质的一种体液和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答的一名受:试者，和 向该受试者给予一种组合物，该组合物包含被偶合到该第一蛋白质的一群合成纳米载体；其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸。
2.—种方法，包括:向该受试者给予一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体；其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，并且其中该组合物根据一种疫苗接种方案给予。
3.一种方法，包括:向该受试者给予一种组合物，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体；其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，并且其中该组合物根据一种方案给予，该方案先前显示在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中该方法进一步包括鉴别需要对该第一蛋白质的一种体液和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答的一名受试者。
5.如权利要求1或3所述的方法，其中该组合物根据一种疫苗接种方案给予。
6.如权利要求1或2所述的方法，其中该组合物根据一种方案给予，该方案先前显示在一名或多名测试受试者中产生对该第一蛋白质具有特异性的一种体液和CTL免疫应答。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该组合物以有效产生对该第一蛋白质的一种体液和CTL免疫应答的量给予。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含一种或多种佐剂。
9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括给予一种或多种佐剂。
10.如权利要求8或9所述的方法，其中该一种或多种佐剂包括模式识别受体的刺激剂或激动剂、矿物盐、明矾、与肠细菌的单磷酰脂质(MPL)A组合的明矾、MPL? (AS04)、AS15、皂甙、QS-21、Quil-A、ISCOM、ISCOMATRIX?、MF59TM、Montamdc K ISA51、Montaimlc?ISA720、AS02、脂质体和脂质体配制品、AS01、合成的或特别制备的微颗粒和微载体、淋病奈瑟菌或沙眼衣原体的源于细菌的外膜泡、壳聚糖颗粒、贮存形成剂、Phronie?嵌段共聚物、特异性修饰或制备的肽、胞壁酰二肽、氨基烷基氨基葡糖苷4-磷酸酯、RC529、细菌类毒素、毒素片段、Toll样受体2、3、4、5、7、8、9的激动剂和/或其组合；腺嘌呤衍生物；免疫刺激DNA ;免疫刺激RNA ;咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合环烷基咪唑并吡啶胺、1，2-桥接咪唑并喹啉胺；咪喹莫特；瑞喹莫德；DC表面分子CD40的激动剂；1型干扰素；聚1:C ;细菌脂多糖(LPS) ；VSV-G ；HMGB-1 ;鞭毛蛋白或其部分或衍生物；包含CpG的免疫刺激DNA分子；从坏死细胞释放的促发炎刺激物；尿酸盐晶体；补体级联的活化组分；免疫复合物的活化组分；补体受体激动剂；细胞因子；或细胞因子受体激动剂。
11.如权利要求10所述的方法，其中该一种或多种佐剂包括Toll样受体2、3、4、7、8或9的激动剂。
12.如权利要求10所述的方法，其中该一种或多种佐剂包括一种咪唑并喹啉或氧代腺嘌呤。
13.如权利要求12所述的方法，其中该咪唑并喹啉包括瑞喹莫德或咪喹莫特。
14.如权利要求8-13中任一项所述的方法，其中该一种或多种佐剂被偶合到该群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
15.如权利要求8-13中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含或该方法进一步包括给予另一群合成纳米载体，并且其中该一种或多种佐剂被偶合到该另一群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
16.如权利要求8-13中任一项所述的方法，其中该一种或多种佐剂不被偶合到一种合成纳米载体。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含一种或多种额外的抗原。
18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括给予一种或多种额外的抗原。
19.如权利要求17或18所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原包括一种第二蛋白质。
20.如权利要求17-19中任一项所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原包括一个体液表位和/或一个MHC I类限制性表位。
21.如权利要求20所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原包括一个体液表位和一个MHC I类限制性表位。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位。
23.如权利要求17-22中任一项所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原被偶合到这些合成纳米载体。
24.如权利要求17-22中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含或该方法进一步包括给予另一群合成纳米载体，并且其中该一种或多种额外的抗原被偶合到该另一群合成纳米载体的这些合成纳米载体。
25.如权利要求17-22中任一项所述的方法，其中该一种或多种额外的抗原不被偶合到一种合成纳米载体。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中这些合成纳米载体和/或其他合成纳米载体包括一种聚合纳米颗粒、一种金属纳米颗粒、一种树枝状聚合物、一种巴克球、一种纳米线、一种病毒样颗粒或一种肽或蛋白质颗粒。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中这些合成纳米载体和/或其他合成纳米载体包括一种或多种聚合物。
28.如权利要求27所述的方法，其中该一种或多种聚合物包括一种聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基噁唑啉或聚乙烯亚胺。
29.如权利要求27或28所述的方法，其中该一种或多种聚合物包括一种聚酯。
30.如权利要求29所述的方法，其中该聚酯包括一种聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚己内酯。
31.如权利要求29或30所述的方法，其中该聚酯被偶合到一种聚醚。
32.如权利要求31所述的方法，其中在该聚醚中包括聚乙二醇。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中该第一蛋白质和/或一种或多种额外的抗原是与癌症、一种感染或传染病、一种非自身免疫或退行性疾病、HIV、疟疾、利什曼病、人类丝状病毒、披衣病毒、α病毒、沙粒病毒、布尼亚病毒、黄病毒、人类乳头瘤病毒、人类A型流感病毒、乙型肝炎或丙型肝炎相关的抗原。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中该受试者患有或有风险患有癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病。
35.如权利要求34所述的方法，其中该受试者患有或有风险患有HIV、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所产生的该体液和该CTL免疫应答是临床上有效的。
37.如权利要求36所述的方法，其中该体液和该CTL免疫应答在该受试者中有效治疗或预防癌症、一种感染或传染病或一种非自身免疫或退行性疾病。
38.如权利要求37所述的方法，其中该体液和该CTL免疫应答有效治疗或预防HIV、疟疾、利什曼病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染。
39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含一种药学上可接受的赋形剂。
40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中该组合物是无菌的。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中该组合物从冻干形式复水。
42.如权利要求1-41中任一项所述的方法，其中该组合物是一种剂型。
43.如权利要求1-42中任一项所述的方法，其中该组合物是一种疫苗。
44.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中该组合物通过静脉内、经口、皮下、经肺、鼻内、皮内、经粘膜、粘膜内或肌肉内给予来给予。
45.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于治疗或预防中。
46.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于如权利要求1_44中任一项所限定的方法中。
47.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于疫苗接种中。
48.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于在一名受试者中对该第一蛋白质产生一种体液和CTL免疫应答。
49.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸,该组合物用于治疗或预防癌症、一种感染或传染病、一种非自身免疫或退行性疾病、HIV、疟疾、利什曼`病、一种人类丝状病毒感染、一种披衣病毒感染、一种α病毒感染、一种沙粒病毒感染、一种布尼亚病毒感染、一种黄病毒感染、一种人类乳头瘤病毒感染、一种人类Α型流感病毒感染、一种乙型肝炎感染或一种丙型肝炎感染的一种方法中。
50.一种组合物，包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于一种治疗或预防方法中，该方法包括通过静脉内、经口、皮下、经肺、鼻内、皮内、粘膜内、经粘膜或肌肉内给予来给予。
51.一种组合物的用途，该组合物包含被偶合到一种第一蛋白质的一群合成纳米载体，其中该第一蛋白质包括至少一个体液表位和至少一个MHC I类限制性表位，该至少一个体液表位与该至少一个MHC I类限制性表位不是相同表位，其中该群合成纳米载体不包括一种皂甙-胆固醇佐剂，并且其中该群合成纳米载体使用动态光散射获得的粒度分布平均值具有从20nm到250nm的最大尺寸，该组合物用于制造一种药剂、例如一种疫苗，用于如权利要求1-44中任一项所限定的方法中。
52.—种如权利要求45-50中任一项所限定而使用的组合物或如权利要求51所述的用途，其中该组合物如权利 要求1-44中任一项所限定。
【文档编号】A61K9/16GK103702687SQ201280037441
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2012年7月27日 优先权日:2011年7月29日
【发明者】大卫·H·阿尔特罗伊特, 康林·奥尼尔, 彼得·伊雷因斯基 申请人:西莱克塔生物科技公司