用于治疗hsf1相关疾病的有机组合物的制作方法
【专利摘要】本公开内容涉及应用治疗有效量的HSF?RNAi剂治疗热激因子1(HSF1)相关疾病的方法，所述疾病诸如癌症、自身免疫疾病和病毒疾病。
【专利说明】用于治疗HSF1相关疾病的有机组合物
[0001]发明背景
[0002]HSFl是热激应答(其中多个基因应答于温度升高和其它应激而被诱导)的主要调节物。在人和其它脊椎动物中，于非休克(non-shock)温度下,HSFl组成性产生,但是无活性并且被蛋白HSP90结合。在升高的温度下，HSFl被HSP90释放，从细胞质移动到细胞核，并三聚化。该活性HSFl结合DNA中的热激元件(HSE)并活化由RNA聚合酶II对热激基因的转录。HSE具有三个NGAAN重复的共有序列，并且存在于HSP90、HSP70和HSP27基因的启动子区域中。在热激应答休止期间，HSFl被促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和糖原合酶激酶3(GSK3)磷酸化，并且回到无活性状态。HSFl的生物化学情况被描述于Chu等1996J.Biol.Chem.271:30847-30857 ；Huang 等 1997J.Biol.Chem.272:26009-26016 ；以及Morimoto 等 1998Nat.Biotech.16:833-838 中。
[0003]HSFl与另外的因子相互作用。HSFl与DNA修复所涉及的DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)结合。HSFl是促分裂原活化蛋白激酶的靶，并且其活性在RNA信号级联放大有活性时被下调。
[0004]人中另外的热激因子蛋白包括HSF2、HSF3和HSF4。HSF1、HSF2和HSF3是热激基因表达的正调节物，而HSF4是负调节物。HSF1、HSF2和HSF4在对其它热激蛋白的转录控制中具有作用。多种HSF蛋白共享约40%的序列同一性。
[0005]HSFl牵连于若干种疾病，包括癌症和自身免疫以及病毒疾病。HSFl和(其表达被HSFl增加的)其它热激蛋白过量表达于或以其他方式牵连于乳腺癌、子宫内膜癌、纤维肉瘤、胃癌、肾癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、神经外胚层癌、成神经细胞瘤、尤文氏肉瘤、前列腺癌、 皮肤癌、鳞状细胞癌和睾丸癌，白血病(例如早幼粒细胞白血病)和霍奇金氏病。
[0006]不希望被特定理论束缚的情况下，本发明认为热激蛋白(HSP)尽管在转化期间触发凋亡信号，但其可阻断凋亡途径，并且允许恶性细胞出现。HSP表达还可提供对癌细胞的保护，以抵挡治疗例如化疗和过热疗法，这通过阻挠这些方式(modalities)的促凋亡(pro-apoptotic)影响来实现。
[0007]因为HSFl对HSPs正调控，因此存在对调节HSFl的疗法的需要。
[0008]发明概述
[0009]本文公开内容提供了抑制HSFl的RNAi (RNA干扰)剂。HSFl是热激应答(其中多个基因应答于温度升高和其它应激而被诱导)的主要调节物
[0010]HSFl牵连于几类HSFl相关疾病，包括癌症和自身免疫以及病毒疾病。HSFl和(其表达被HSFl增加的)其它热激蛋白过量表达于或以其他方式牵连于乳腺癌、子宫内膜癌、纤维肉瘤、胃癌、肾癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、神经外胚层癌、成神经细胞瘤、尤文氏肉瘤、前列腺癌、皮肤癌、鳞状细胞癌和睾丸癌，白血病(例如早幼粒细胞白血病)和霍奇金氏病。HSFl的RNAi剂可用于治疗这些疾病。
[0011]因为HSFl对HSP正调控，因此存在对调节HSFl的疗法的需要。本文公开内容的RNAi剂对HSFl是特异的，并且可降低HSFl的表达。这些RNAi剂因此可用于治疗癌症和自身免疫以及病毒疾病。[0012]本公开内容提供了可用于降低受试者(例如哺乳动物，诸如人)中HSFl水平的特异性RNAi剂和方法。本公开内容具体提供了包含HSFl的至少15个或更多个连续核苷酸的双链RNAi剂，用于RNA干扰介导抑制HSFl基因。具体而言，本公开内容提供了这样的RNAi剂，所述RNAi剂包含15个或更多个连续核苷酸，所述连续核苷酸与例如表Al、1、2、3、
4、5、6或7提供的RNAi剂(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的连续核苷酸存在O、
1、2或3个核苷酸的差异。在一个实施方案中，RNAi剂可以包含每条链少于30个核苷酸，诸如18-23个核苷酸，和/或19-21个核苷酸，和/或诸如例如表Al、l、2、3、4、5、6或7提供的那些(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA,例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)。
[0013]双链RNAi剂可以在3’和/或5’端的一端或两端具有一个或两个平端和/或1、
2、3或4个核苷酸(即，l-4nt)的突出端。双链RNAi剂还可以任选的包含一个或两个3’帽和/或一个或多个修饰的核苷酸。本文提供的修饰的序列变体包括其余相同，但含有用相应的修饰核苷酸对天然存在的核苷酸的取代的序列。提供了几种双链核苷酸序列中每一种双链核苷酸序列的7种修饰。本文提供的任何RNAi剂序列均可以与任何修饰或修饰集、5’和/或3’端帽、平末端和/或5’和/或3’端的额外突出、配体、药物载体或其他处理组合使用，条件是这些组合不相互排斥(例如，包含两条链的RNAi剂不能同时定义为具有两个平端和两个突出端)。
[0014]RNAi剂可以仅含有天然存在的核糖核苷酸亚基，或者在一个或多个取代的核苷酸亚基上含有一个或多个对糖、磷酸或碱基的修饰，不论所述亚基包含核糖核苷酸亚基还是脱氧核糖核苷酸亚基。在一个实施方案中，所公开的RNAi剂的修饰变体包括这样的RNAi剂，所述RNAi剂具有相同的序列(例如相同的碱基序列)，但在一个或多个核苷酸亚基上具有对一个或多个糖或磷酸的一个或多个修饰。在一个实施方案中，修饰改善RNAi剂的功效、稳定性和/或降低RNAi剂的免疫原性。本公开内容的一个方面涉及包含至少一个非天然核碱基的双链寡核苷酸。在某些实施方案中，非天然的核碱基是二氟甲苯基、硝基吲哚基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。在特定的实施方案中，非天然的核碱基是二氟甲苯基。在某些实施方案中，两条寡核苷酸链中仅一条链含有非天然的核碱基。在某些实施方案中，两条寡核苷酸链都含有非天然的核碱基。
[0015]RNAi剂可以任选的与经选择用来改善一种或多种特征的配体(例如，胆固醇或其衍生物)连接，所述特征诸如为RNAi剂的稳定性、分布和/或细胞摄入。RNAi剂可以是分离的或者是本文描述方法使用的药物组合物的一部分。特别的是，所述药物组合物可以配制成用于向肺或鼻道递送，或者配制成用于肠胃外施用。药物组合物可以任选的包含两种或多种RNAi剂，每种RNAi剂针对HSFlmRNA的相同、重叠或不同的区段。如果组合物包含靶向相同序列的两种或多种RNAi剂，则该两种或多种RNAi剂例如可以在修饰方式上不同。任选的，药物组合物可以进一步包含用于任何HSFl相关疾病的任何已知治疗，或与所述HSFl相关疾病的任何已知治疗联合使用。
[0016] 本公开内容还提供了用于降低细胞中的HSFlmRNA水平的方法，特别是在以HSFl的过量表达或活性过高为特征的疾病的情况下。本公开内容还涵盖了治疗具有这样的病理学状态的人受试者的方法，所述状态至少是部分由HSFl的表达、过量表达或活性过高(例如，升高的或过量的活性)介导的，该方法包括向受试者施用治疗有效量的HSFlRNAi剂的步骤。此类方法包括向受试者施用本公开内容的RNAi剂之一的步骤，如下文进一步所述。本方法利用了选择性降解细胞中的靶RNA的RNA干扰所涉及的细胞机制，并且包括将细胞与本公开内容的RNAi剂之一接触的步骤。此类方法可以直接在细胞上实施，或者可以在哺乳动物受试者上实施，后者是通过向所述受试者施用本公开内容的RNAi剂/药物组合物之一。降低细胞中的靶HSFlmRNA导致所产生的编码HSFl蛋白质的量降低。
[0017]本公开内容的方法和组合物(例如方法和HSFlRNAi剂组合物)可以以本文描述的任何剂量和/或制剂使用，以及用本文描述的任何施用途径使用。
[0018]本公开内容的一个或多个实施方案的细节描述在附图和下文的说明中。不彼此排斥的多个实施方案的元素(例如，修饰、末端帽、配体、序列、RNAi剂的组合等)可与彼此组合。因此，本公开内容补足了包含一种或多种HSFlRNAi剂的任何组合物，其中所述HSFlRNAi剂包含第一链和第二链，其中⑴(a)第一链的序列包含15个连续nt，其与本文公开的任何RNAi剂的第一链序列有0、1、2或3个nt不同；或(b)第一链的序列包含本文公开的任何RNAi剂第一链序列的15个连续nt ； (c)第一链序列包含本文公开的任何RNAi剂的第一链序列；或(d)第一链序列是本文公开的任何RNAi剂的第一链序列；其中(2)该RNAi试剂可具有任何修饰、平末端、突出端、5’端帽、3’端帽、配体或本文公开的任何其他变体或修饰，或其任意组合物，条件是这些组合不相互排斥(例如，包含两条链的RNAi剂不能同时定义为具有两个平端和两个突出端)。根据说明书、附图、表格、序列、实施例、摘要和权利要求书，本公开内容的其他特征、目标和优点是显而易见的。例如，本文公开的任何RNAi剂序列可与本文公开的修饰集或末端帽相结合。任何修饰组合、5’末端帽和/或3’末端帽可与本文公开的任何RNAi剂序列一起应用。本文公开的任何RNAi剂(具有任何修饰组合或末端帽，或没有任何修饰或末端帽)可与本文公开的任何其他RNAi试剂或其他治疗组合物或方法相组合。
[0019]附图简述
[0020]图1 描述了多种修饰的核苷酸:U002、U003、U004、U005、C004、C005、A004、A005、G005和G004，其可用于本文公开的RNAi剂。
[0021 ] 图2A至2G示出了多种HSFlRNAi剂在体外Hela细胞中的活性，如实施例2A所详述的那样。
[0022]发明详述:
[0023]本公开内容包含了针对HSFl的RNAi剂，所述RNAi剂用于治疗HSFl相关疾病(例如，与HSFl中的突变和/或改变的表达、水平和/或活性相关的疾病，和/或通过调控HSFl的表达、水平和/或活性可治疗的疾病)，诸如癌症、自身免疫和病毒疾病。本公开内容还提供了治疗具有这样的病理学状态的人受试者的方法，所述状态至少是部分由HSFl的表达介导的，该方法包括向受试者施用治疗有效量的HSFlRNAi剂的步骤。
[0024]本公开内容的多个实施方案包括以下。
[0025]在一个实施方案中，本公开内容涉及包含用于RNA干扰介导抑制HSFl基因的RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，所述至少15个连续的核苷酸与选自本文任何序列(例如表Al、l、2、3、4、5、6或7提供的那些[或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T])的针对HSFl的RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中有义链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的有义链存在O、1、2或3个核苷酸的差异，且其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与上述RNAi剂的反义链存在O、1、2或3个核苷酸的差异。另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含第一链和第二链，其中第一链序列包含本文提供的任何序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的第一链的序列。另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含第一链和第二链，其中第一链序列是本文提供的任何序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的第一链的序列。
[0026]HSFlRNAi剂显示于下表中:
[0027]表Al.多种 HSFlRNAi 剂的 SEQ ID NO 和位置。
[0028]表1.HSFlRNAi剂靶向序列。
[0029]表2.未修饰的HSFlRNAi剂序列。
[0030]表3.实施例修饰的HSFlRNAi剂序列。
[0031]表4.包含重叠序列的HSFlRNAi剂集。
[0032]表5.HSFlRNAi剂对GTL-16细胞的体外活性。
[0033]表6.HSFlRNAi剂对SK-BR-3细胞的体外活性。
[0034]表?.HSFlRNAi剂对GTL-16和SK-BR-3细胞的体外活性。
[0035]本公开内容的多个实施方案。
[0036]在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的特定组合物，所述RNAi剂包含反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，所述至少15个连续的核苷酸与选自表Al、l、2、3、4、5、6或7的任意一个或多个序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，所述至少15个连续的核苷酸与选自表Al、l、2、3、4、5、6或7的任意一个或多个序列(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的反义链存在O、1、2或3个核苷酸 的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中有义链包含至少15个连续的核苷酸，所述至少15个连续的核苷酸与选自表Al、l、2、3、4、5、6或7的任意一个或多个序列(或者,如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)的针对HSFl的RNAi剂的有义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，且其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与上述RNAi剂的反义链存在O、1、2或3个核苷酸的差异。具体双链体包括上面提供的那些特定双链体以及在表Al、l、2、3、4、5、6或7中的任一个或多个中列出(或者，如果提供的是DNA序列，则为这些序列的RNA等价物或相应于这些序列的RNA，例如含RNA核苷酸而非DNA，以及用U替换T)。上述每一组合物的其他修饰变体(例如，包含一个或多个修饰碱基的变体)也作为本公开内容的一部分。还考虑了下述RNAi剂:其包含第一链和第二链，其中该第一链和/或第二链包含本文所列任何针对HSFl的RNAi剂第一链和/或第二链的序列。在多个实施方案中，该RNAi剂用于抑制HSFl基因。
[0037]下表Al提供了 HSFl的多种RNAi剂靶及未修饰的和示例性的修饰的有义链和反义链的序列SEQ ID NO。表1提供了每一 RNAi剂在HSFl基因中的位置；HSF1基因中的位置相应于HSFlRNAi剂名称的前缀。
[0038]表1提供了各RNAi剂的靶序列；表2提供了各RNAi剂的未修饰变体；表3提供了每一特定RNAi剂的示例性修饰变体；以及表4提供了这些RNAi剂的重叠部分。表5_7提供了各RNAi剂的活性水平。
[0039]注意本文各表中所列RNAi剂包含多组双链体，其中组中的每一双链体具有特定的一组修饰。例如，所有具有前缀hs_HSFl_175的RNAi剂具有相同的序列(核苷酸序列或碱基序列)，尽管 hs_HSFl_175_A22_S26、hs_HSFl_175_A25_S27、hs_HSFl_175_A81_S26、hs_HSFl_175_A48_S26、 hs_HSFl_175_A82_S36、hs_HSFl_175_A83_S36 和 hs_HSFl_175_A84_S36可能具有不同的多组修饰。
[0040]类似地:
[0041]所有具有前缀hs_HSFl_517的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0042]所有具有前缀hs_HSFl_562的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0043]所有具有前缀hs_HSFl_751的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0044]所有具有前缀hs_HSFl_755的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0045]所有具有前缀hs_HSFl_846的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0046]所有具有前缀hs_HSFl_1360的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0047]所有具有前缀hs_HSFl_2030的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0048]所有具有前缀hs_HSFl_2034的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。[0049]所有具有前缀hs_HSFl_2138的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0050]所有具有前缀hs_HSFl_2153的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0051]所有具有前缀hs_HSFl_2154的RNAi剂具有相同的核苷酸序列，尽管它们可能具有不同的修饰。
[0052]特定的双链体包括以下的双链体，其中每种双链体靶向一个序列，包含一组SEQID NO，其中第一个SEQ ID NO对应于靶的第一链(例如，反义链)，而第二个SEQ ID NO对应于靶的第二链(例如，有义链):hs_HSFl_175_A22_S26 (SEQ ID NOs.12 和 96) ；hs_HSF1_175_A25_S27 (SEQ ID N0s.24 和 108) ；hs_HSFl_175_A81_S26 (SEQ ID N0s.36 和 120)；hs_HSFl_175_A48_S26(SEQ ID NOs.48 和 132) ；hs_HSFl_175_A82_S36(SEQ ID NOs.60和 144) ；hs_HSFl_175_A83_S36(SEQ ID NOs.72 和 156) ；hs_HSFl_175_A84_S36(SEQ IDNOs.84 和 168) ；hs_HSFl_517_A22_S26(SEQ ID NOs.4 和 88) ；hs_HSFl_517_A25_S27(SEQID NOs.16 和 100) ；hs_HSFl_517_A81_S26(SEQ ID NOs.28 和 112) ；hs_HSFl_517_A48_S26 (SEQ ID NOs.40 和 124) ；hs_HSFl_517_A82_S36 (SEQ ID NOs.52 和 136) ；hs_HSFl_517_A83_S36(SEQ ID NOs.64 和 148) ；hs_HSFl_517_A84_S36(SEQ ID NOs.76 和 160) ；hs_HSF1_562_A22_S26(SEQ ID NOs.1和 85) ；hs_HSFl_562_A25_S27(SEQ ID NOs.13 和 97)；hs_HSFl_562_A81_S26(SEQ ID NOs.25 和 109) ；hs_HSFl_562_A48_S26(SEQ ID NOs.37和 121) ；hs_HSFl_562_A82_S36(SEQ ID NOs.49 和 133) ；hs_HSFl_562_A83_S36(SEQ IDNOs.61和 145) ；hs_HSFl_562_A84_S36(SEQ ID NOs.73和 157) ；hs_HSFl_751_A22_S26(SEQID NOs.2和 86) ；hs_HSFl_751_A25_S27(SEQ ID NOs.14和 98) ；hs_HSFl_751_A81_S26(SEQID NOs.26 和 110) ；hs_HSFl_751_A48_S26(SEQ ID NOs.38 和 122) ；hs_HSFl_751_A82_S36 (SEQ ID NOs.50 和 134) ；hs_HSFl_751_A83_S36 (SEQ ID NOs.62 和 146) ；hs_HSFl_751_A84_S36(SEQ ID NOs.74 和 158) ；hs_HSFl_755_A22_S26(SEQ ID NOs.3 和 87) ；hs_HSF1_755_A25_S27(SEQ ID NOs.15和 99) ；hs_HSFl_755_A81_S26(SEQ ID NOs.27和111)；hs_HSFl_755_A48_S26 (SEQ ID NOs.39 和 123) ；hs_HSFl_755_A82_S36(SEQ ID NOs.51和 135) ；hs_HSFl_755_A83_S36(SEQ ID NOs.63 和 147) ；hs_HSFl_755_A84_S36(SEQ IDNOs.75 和 159) ；hs_HSFl_846_A22_S26(SEQ ID NOs.5 和 89) ；hs_HSFl_846_A25_S27(SEQID NOs.17 和 101) ；hs_HSFl_846_A81_S26(SEQ ID NOs.29 和 113) ；hs_HSFl_846_A48_S26 (SEQ ID NOs.41 和 125) ；hs_HSFl_846_A82_S36 (SEQ ID NOs.53 和 137) ；hs_HSFl_846_A83_S36(SEQ ID NOs.65 和 149) ；hs_HSFl_846_A84_S36(SEQ ID NOs.77 和 161) ；hs_HSF1_1360_A22_S26(SEQ ID NOs.6 和 90) ；hs_HSFl_1360_A25_S27 (SEQ ID NOs.18 和 102)；hs_HSFl_1360_A81_S26(SEQ ID NOs.30 和 114) ；hs_HSFl_1360_A48_S26(SEQ ID NOs.42和 126) ；hs_HSFl_1360_A82_S36(SEQ ID NOs.54 和 138) ；hs_HSFl_1360_A83_S36(SEQID NOs.66 和 150) ；hs_HSFl_1360_A84_S36(SEQ ID NOs.78 和 162) ；hs_HSFl_2030_A22_S26 (SEQ ID NOs.7 和 91) ；hs_HSFl_2030_A25_S27 (SEQ ID NOs.19 和 103) ；hs_HSFl_2030_A81_S26(SEQ ID NOs.31 和 115) ；hs_HSFl_2030_A48_S26(SEQ ID NOs.43 和 127) ；hs_HSF1_2030_A82_S36(SEQ ID NOs.55 和 139) ；hs_HSFl_2030_A83_S36(SEQ ID NOs.67 和151) ；hs_ HSFl_2030_A84_S36 (SEQ ID NOs.79 和 163) ；hs_HSFl_2034_A22_S26(SEQ IDNOs.8和 92) ；hs_HSFl_2034_A25_S27(SEQ ID NOs.20和 104) ；hs_HSFl_2034_A81_S26(SEQID NOs.32 和 116) ；hs_HSFl_2034_A48_S26(SEQ ID NOs.44 和 128) ；hs_HSFl_2034_A82_S36(SEQ ID NOs.56 和 140) ；hs_HSFl_2034_A83_S36(SEQ ID NOs.68 和 152) ；hs_HSF1_2034_A84_S36 (SEQ ID NOs.80 和 164) ；hs_HSFl_2138_A22_S26 (SEQ ID NOs.9 和 93)；hs_HSFl_2138_A25_S27(SEQ ID NOs.21和 105) ；hs_HSFl_2138_A81_S26(SEQ ID NOs.33和 117) ；hs_HSFl_2138_A48_S26 (SEQ ID NOs.45 和 129) ；hs_HSFl_2138_A82_S36(SEQID NOs.57 和 141) ；hs_HSFl_2138_A83_S36 (SEQ ID NOs.69 和 153) ；hs_HSFl_2138_A84_S36(SEQ ID NOs.81 和 165) ；hs_HSFl_2153_A22_S26(SEQ ID NOs.10 和 94) ；hs_HSF1_2153_A25_S27(SEQ ID NOs.22 和 106) ；hs_HSFl_2153_A81_S26(SEQ ID NOs.34和 118) ；hs_HSFl_2153_A48_S26(SEQ ID NOs.46 和 130) ；hs_HSFl_2153_A82_S36 (SEQID NOs.58 和 142) ；hs_HSFl_2153_A83_S36(SEQ ID NOs.70 和 154) ；hs_HSFl_2153_A84_S36 (SEQ ID NOs.82 和 166) ；hs_HSFl_2154_A22_S26 (SEQ ID NOs.11 和 95) ；hs_HSF1_2154_A25_S27(SEQ ID NOs.23 和 107) ；hs_HSFl_2154_A81_S26(SEQ ID NOs.35 和119) ；hs_HSFl_2154_A48_S26(SEQ ID NOs.47 和 131) ；hs_HSFl_2154_A82_S36(SEQ IDNOs.59 和 143) ；hs_HSFl_2154_A83_S36 (SEQ ID NOs.71 和 155) ；hs_HSFl_2154_A84_S36 (SEQ ID NOs.83 和 167)。
[0053]特定的双链体包括以下的双链体，其中每种双链体(例如，RNAi剂)包含一组SEQ ID NO，其中第一个SEQ ID NO对应于第一链而第二个SEQ ID NO对应于第二链，其中该序列不必然被修饰:hs_HSFl_175_A22_S26(SEQ ID NOs.180 和 264) ；hs_HSFl_175_A25_S27 (SEQ ID NOs.192 和 276) ；hs_HSFl_175_A81_S26 (SEQ ID NOs.204 和 288) ；hs_HSF1_175_A48_S26(SEQ ID NOs.216 和 300) ；hs_HSFl_175_A82_S36(SEQ ID NOs.228和 312) ；hs_HSFl_175_A83_S36(SEQ ID NOs.240 和 324) ；hs_HSFl_175_A84_S36(SEQID NOs.252 和 336) ；hs_HSFl_517_A22_S26(SEQ ID NOs.172 和 256) ；hs_HSFl_517_A25_S27 (SEQ ID NOs.184 和 268) ；hs_HSFl_517_A81_S26 (SEQ ID NOs.196 和 280) ；hs_HSF1_517_A48_S26(SEQ ID NOs.208 和 292) ；hs_HSFl_517_A82_S36(SEQ ID NOs.220和 304) ；hs_HSFl_517_A83_S36(SEQ ID NOs.232 和 316) ；hs_HSFl_517_A84_S36(SEQID NOs.244 和 328) ；hs_HSFl_562_A22_S26(SEQ ID NOs.169 和 253) ；hs_HSFl_562_A25_S27(SEQ ID NOs.181 和 265) ；hs_HSFl_562_A81_S26(SEQ ID NOs.193 和 277) ；hs_HSF1_562_A48_S26(SEQ ID NOs.205 和 289) ；hs_HSFl_562_A82_S36(SEQ ID NOs.217和 301) ；hs_HSFl_562_A83_S36(SEQ ID NOs.229 和 313) ；hs_HSFl_562_A84_S36(SEQID NOs.241 和 325) ；hs_HSFl_751_A22_S26(SEQ ID NOs.170 和 254) ；hs_HSFl_751_A25_S27 (SEQ ID NOs.182 和 266) ；hs_HSFl_751_A81_S26 (SEQ ID NOs.194 和 278) ；hs_HSF1_751_A48_S26(SEQ ID NOs.206 和 290) ；hs_HSFl_751_A82_S36(SEQ ID NOs.218和 302) ；hs_HSFl_751_A83_S36(SEQ ID NOs.230 和 314) ；hs_HSFl_751_A84_S36(SEQID NOs.242 和 326) ；hs_HSFl_755_A22_S26(SEQ ID NOs.171 和 255) ；hs_HSFl_755_A25_S27 (SEQ ID NOs.183 和 267) ；hs_HSFl_755_A81_S26 (SEQ ID NOs.195 和 279) ；hs_HSF1_755_A48_S26(SEQ ID NOs.207 和 291) ；hs_HSFl_755_A82_S36(SEQ ID NOs.219和 303) ；hs_HSFl_755_A83_S36(SEQ ID NOs.231 和 315) ；hs_HSFl_755_A84_S36(SEQID NOs.243 和 327) ；hs_HSFl_846_A22_S26(SEQ ID NOs.173 和 257) ；hs_HSFl_846_A25_S27 (SEQ ID NOs.185 和 269) ；hs_HSFl_846_A81_S26 (SEQ ID NOs.197 和 281) ；hs_HSF1_846_A48_S26(SEQ ID NOs.209 和 293) ；hs_HSFl_846_A82_S36(SEQ ID NOs.221 和305) ；hs_HSFl_846_A83_S36(SEQ ID NOs.233 和 317) ；hs_HSFl_846_A84_S36(SEQ IDNOs.245 和 329) ；hs_HSFl_1360_A22_S26(SEQ ID NOs.174 和 258) ；hs_HSFl_1360_A25_S27(SEQ ID NOs.186 和 270) ；hs_HSFl_1360_A81_S26(SEQ ID NOs.198 和 282) ；hs_HSF1_1360_A48_S26(SEQ ID NOs.210 和 294) ；hs_HSFl_1360_A82_S36(SEQ ID NOs.222和 306) ；hs_HSFl_1360_A83_S36(SEQ ID NOs.234 和 318) ；hs_HSFl_1360_A84_S36(SEQID NOs.246 和 330) ；hs_HSFl_2030_A22_S26(SEQ ID NOs.175 和 259) ；hs_HSFl_2030_A25_S27(SEQ ID NOs.187 和 271) ；hs_HSFl_2030_A81_S26(SEQ ID NOs.199 和 283) ；hs_HSF1_2030_A48_S26(SEQ ID NOs.211 和 295) ；hs_HSFl_2030_A82_S36(SEQ ID NOs.223和 307) ；hs_HSFl_2030_A83_S36(SEQ ID NOs.235 和 319) ；hs_HSFl_2030_A84_S36(SEQID NOs.247 和 331) ；hs_HSFl_2034_A22_S26(SEQ ID NOs.176 和 260) ；hs_HSFl_2034_A25_S27(SEQ ID NOs.188 和 272) ；hs_HSFl_2034_A81_S26(SEQ ID NOs.200 和 284) ；hs_HSF1_2034_A48_S26(SEQ ID NOs.212 和 296) ；hs_HSFl_2034_A82_S36 (SEQ ID NOs.224和 308) ；hs_HSFl_2034_A83_S36(SEQ ID NOs.236 和 320) ；hs_HSFl_2034_A84_S36(SEQID NOs.248 和 332) ；hs_HSFl_2138_A22_S26(SEQ ID NOs.177 和 261) ；hs_HSFl_2138_A25_S27(SEQ ID NOs.189 和 273) ；hs_HSFl_2138_A81_S26(SEQ ID NOs.201和 285) ；hs_HSF1_2138_A48_S26(SEQ ID NOs.213 和 297) ；hs_HSFl_2138_A82_S36(SEQ ID NOs.225和 309) ；hs_HSFl_2138_A83_S36(SEQ ID NOs.237 和 321) ；hs_HSFl_2138_A84_S36(SEQID NOs.249 和 333) ；hs_HSFl_2153_A22_S26(SEQ ID NOs.178 和 262) ；hs_HSFl_2153_A25_S27(SEQ ID NOs.190 和 274) ；hs_HSFl_2153_A81_S26(SEQ ID NOs.202 和 286) ；hs_HSF1_2153_A48_S26(SEQ ID NOs.214 和 298) ；hs_HSFl_2153_A82_S36(SEQ ID NOs.226和 310) ；hs_HSFl_2153_A83_S36(SEQ ID NOs.238 和 322) ；hs_HSFl_2153_A84_S36 (SEQID NOs.250 和 334) ；hs_HSFl_2154_A22_S26(SEQ ID NOs.179 和 263) ；hs_HSFl_2154_A25_S27(SEQ ID NOs.191 和 275) ；hs_HSFl_2154_A81_S26(SEQ ID NOs.203 和 287) ；hs_HSF1_2154_A48_S26(SEQ ID NOs.215和 299) ；hs_HSFl_2154_A82_S36(SEQ ID NOs.227 和311) ；hs_HSFl_2154_A83_S36 (SEQ ID NOs.239 和 323);以及 hs_HSFl_2154_A84_S36 (SEQID NOs.251和335)。在多个这些实施方案中，该第一链和第二链分别为反义链和有义链，或该第二链和第一链分别为反义链和有义链。本公开内容还包括这些双链体的修饰变体(例如，具有一个或多个修饰的双链体)。
[0054]特定的双链体包括以下的双链体，其中每种双链体(例如，RNAi剂)包含一组SEQID NO，其中第一个SEQ ID NO对应于第一链而第二个SEQ ID NO对应于第二链，其中该序列是被修饰的:hs_HSFl_175_A22_S26(SEQ ID NOs.348和 432) ；hs_HSFl_175_A25_S27 (SEQID NOs.360 和 444) ；hs_HSFl_175_A81_S26(SEQ ID NOs.372 和 456) ；hs_HSFl_175_A48_S26 (SEQ ID NOs.384 和 468) ；hs_HSFl_175_A82_S36 (SEQ ID NOs.396 和 480) ；hs_HSF1_175_A83_S36(SEQ ID NOs.408 和 492) ；hs_HSFl_175_A84_S36(SEQ ID NOs.420和 504) ；hs_HSFl_517_A22_S26(SEQ ID NOs.340 和 424) ；hs_HSFl_517_A25_S27(SEQID NOs.352 和 436) ；hs_HSFl_517_A81_S26(SEQ ID NOs.364 和 448) ；hs_HSFl_517_A48_S26 (SEQ ID NOs.376 和 460) ；hs_HSFl_517_A82_S36 (SEQ ID NOs.388 和 472) ；hs_HSF1_517_A83_S36(SEQ ID NOs.400 和 484) ；hs_HSFl_517_A84_S36(SEQ ID NOs.412和 496) ；hs_HSFl_562_A22_S26(SEQ ID NOs.337 和 421) ；hs_HSFl_562_A25_S27(SEQID NOs.349 和 433) ；hs_HSFl_562_A81_S26(SEQ ID NOs.361 和 445) ；hs_HSFl_562_A48_S26 (SEQ ID NOs.373 和 457) ；hs_HSFl_562_A82_S36 (SEQ ID NOs.385 和 469) ；hs_HSF1_562_A83_S36(SEQ ID NOs.397 和 481) ；hs_HSFl_562_A84_S36(SEQ ID NOs.409和 493) ；hs_HSFl_751_A22_S26(SEQ ID NOs.338 和 422) ；hs_HSFl_751_A25_S27(SEQID NOs.350 和 434) ；hs_HSFl_751_A81_S26(SEQ ID NOs.362 和 446) ；hs_HSFl_751_A48_S26(SEQ ID NOs.374 和 458) ；hs_HSFl_751_A82_S36(SEQ ID NOs.386 和 470) ；hs_HSF1_751_A83_S36(SEQ ID NOs.398 和 482) ；hs_HSFl_751_A84_S36(SEQ ID NOs.410和 494) ；hs_HSFl_755_A22_S26(SEQ ID NOs.339 和 423) ；hs_HSFl_755_A25_S27(SEQID NOs.351 和 435) ；hs_HSFl_755_A81_S26(SEQ ID NOs.363 和 447) ；hs_HSFl_755_A48_S26 (SEQ ID NOs.375 和 459) ；hs_HSFl_755_A82_S36 (SEQ ID NOs.387 和 471) ；hs_HSF1_755_A83_S36(SEQ ID NOs.399 和 483) ；hs_HSFl_755_A84_S36(SEQ ID NOs.411和 495) ；hs_HSFl_846_A22_S26(SEQ ID NOs.341 和 425) ；hs_HSFl_846_A25_S27(SEQID NOs.353 和 437) ；hs_HSFl_846_A81_S26(SEQ ID NOs.365 和 449) ；hs_HSFl_846_A48_S26 (SEQ ID NOs.377 和 461) ；hs_HSFl_846_A82_S36 (SEQ ID NOs.389 和 473) ；hs_HSF1_846_A83_S36(SEQ ID NOs.401 和 485) ；hs_HSFl_846_A84_S36(SEQ ID NOs.413和 497) ；hs_HSFl_1360_A22_S26(SEQ ID NOs.342 和 426) ；hs_HSFl_1360_A25_S27(SEQID NOs.354 和 438) ；hs_HSFl_1360_A81_S26(SEQ ID NOs.366 和 450) ；hs_HSFl_1360_A48_S26(SEQ ID NOs.378 和 462) ；hs_HSFl_1360_A82_S36(SEQ ID NOs.390 和 474) ；hs_HSF1_1360_A83_S36(SEQ ID NOs.402 和 486) ；hs_HSFl_1360_A84_S36(SEQ ID NOs.414和 498) ；hs_HSFl_2030_A22_S26(SEQ ID NOs.343 和 427) ；hs_HSFl_2030_A25_S27(SEQID NOs.355 和 439) ；hs_HSFl_2030_A81_S26(SEQ ID NOs.367 和 451) ；hs_HSFl_2030_A48_S26(SEQ ID NOs.379 和 463) ；hs_HSFl_2030_A82_S36(SEQ ID NOs.391 和 475) ；hs_HSF1_2030_A83_S36(SEQ ID NOs.403 和 487) ；hs_HSFl_2030_A84_S36(SEQ ID NOs.415和 499) ；hs_HSFl_2034_A22_S26(SEQ ID NOs.344 和 428) ；hs_HSFl_2034_A25_S27(SEQID NOs.356 和 440) ；hs_HSFl_2034_A81_S26(SEQ ID NOs.368 和 452) ；hs_HSFl_2034_A48_S26(SEQ ID NOs.380 和 464) ；hs_HSFl_2034_A82_S36(SEQ ID NOs.392 和 476) ；hs_HSF1_2034_A83_S36(SEQ ID NOs.404 和 488) ；hs_HSFl_2034_A84_S36(SEQ ID NOs.416和 500) ；hs_HSFl_2138_A22_S26(SEQ ID NOs.345 和 429) ；hs_HSFl_2138_A25_S27(SEQID NOs.357 和 441) ；hs_HSFl_2138_A81_S26(SEQ ID NOs.369 和 453) ；hs_HSFl_2138_A48_S26(SEQ ID NOs.381 和 465) ；hs_HSFl_2138_A82_S36(SEQ ID NOs.393 和 477) ；hs_HSF1_2138_A83_S36(SEQ ID NOs.405 和 489) ；hs_HSFl_2138_A84_S36(SEQ ID NOs.417和 501) ；hs_HSFl_2153_A22_S26(SEQ ID NOs.346 和 430) ；hs_HSFl_2153_A25_S27 (SEQID NOs.358 和 442) ；hs_HSFl_2153_A81_S26(SEQ ID NOs.370 和 454) ；hs_HSFl_2153_A48_S26(SEQ ID NOs.382 和 466) ；hs_HSFl_2153_A82_S36(SEQ ID NOs.394 和 478) ；hs_HSF1_2153_A83_S36(SEQ ID NOs.406 和 490) ；hs_HSFl_2153_A84_S36(SEQ ID NOs.418和 502) ；hs_HSFl_2154_A22_S26(SEQ ID NOs.347 和 431) ；hs_HSFl_2154_A25_S27(SEQID NOs.359 和 443) ；hs_HSFl_2154_A81_S26(SEQ ID NOs.371 和 455) ；hs_HSFl_2154_A48_S26(SEQ ID NOs.383 和 467) ；hs_HSFl_2154_A82_S36(SEQ ID NOs.395 和 479) ；hs_HSF1_2154_A83_S36(SEQ ID NOs.407和 491);和 hs_HSFl_2154_A84_S36(SEQ ID NOs.419和503)。在多个这些实施方案中，该第一链和第二链分别为反义链和有义链，或该第二链和第一链分别为反义链和有义链。本公开内容还包括这些双链体的修饰变体(例如，具有相同核苷酸序列但具有不同修饰的双链体)。
[0055]除了所述示例性修饰外，可应用提供的核苷酸序列获得其他修饰变体。
[0056]表Al.针对 HSFl 的 RNAi 剂 SEQ ID NOs。
[0057]表Al提供了:序列名称(其中每一序列名称由hs_HSFl_*开始,其中*为每一行中提供的名称 ji^n“175_A22_S26” 与 “hs_HSFl_175_A22_S26” 相同，等等)；靶序列(AS，反义链；以及有义链)；作为未修饰序列提供的RNAi剂序列(反义和有义)；作为示例性修饰变体提供的RNAi剂序列(反义和有义)；以及HSFl基因中的位置。注意有时通过它们的位置来称呼双链 体时，例如“hs_HSFl_175”有时简称为HSF1-175 ;“hs_HSFl_517”有时简称为HSF1-517，等等。
[0058]
【权利要求】
1.包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与表Al提供的HSFl特异性RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
2.权利要求1的组合物，其中所述组合物还包含HSFl的第二种RNAi剂。
3.权利要求1的组合物，其中所述RNAi剂包含至少一个修饰的主链和/或至少一个2’ -修饰的核苷酸。
4.权利要求1的组合物，其中所述RNAi剂与一种或多种选自以下的试剂连接:一种或多种诊断性化合物、报告基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或稀有核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基、无羁萜、无羁萜-3 β-醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、葡聚糖、普鲁兰多糖、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。
5.包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含第一链和第二链，其中所述第一链和第二链分别包含与表Al提供的HSFl特异性RNAi剂的第一链和第二链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
6.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含HSFl的第二种RNAi剂。
7.权利要求1的组合物，其中所述RNAi剂包含硫代磷酸酯和/或2’-修饰的核苷酸。
8.权利要求1的组合物，其中所述RNAi剂与一种或多种选自以下的试剂连接:一种或多种诊断性化合物、报告基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或稀有核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基、无羁萜、无羁萜-3 β-醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、葡聚糖、普鲁兰多糖、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。
9.治疗个体的HSFl相关疾病的方法，包括步骤:向个体施用治疗有效量的包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与表Al提供的HSFl特异性RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
10.权利要求9的方法，其中所述HSFl相关疾病是癌症、或自身免疫疾病或病毒疾病。
11.权利要求9的方法，其中所述方法还包括施用癌症、或自身免疫疾病或病毒疾病的其他治疗的步骤。
12.权利要求11的方法，其中所述方法还包括施用其他针对HSFl的RNAi剂的步骤。
13.抑制个体HSFl基因表达的方法，包括步骤:向个体施用治疗有效量的包含RNAi剂的组合物，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与表Al提供的HSFl特异性RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
14.权利要求13的方法，其中所述HSFl相关疾病是癌症、或自身免疫疾病或病毒疾病。
15.用于RNAi制剂的药物，其包含RNAi剂，所述RNAi剂包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与表Al提供的HSFl 特异性RNAi剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
16.在药学上有效制剂中的任何上述组合物。
17.权利要求1的组合物，用于治疗个体HSFl相关疾病的方法中，所述方法包括施用治疗有效量的权利要求1的组合物至个体的步骤。
18.权利要求1的组合物的用途，用于制备治疗HSFl相关疾病的药物。
19.权利要求1的组合物，其中所有的嘧啶都是2’O-甲基修饰的核苷酸。
20.权利要求5的组合物，其中所有的嘧啶都是2’O-甲基修饰的核苷酸。
21.权利要求11的方法，其中所述其他治疗是HSP90抑制剂。
22.权利要求21的方 法，其中所述HSP90抑制剂是AUY922。
【文档编号】A61P37/06GK103930547SQ201280053243
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2012年8月30日 优先权日:2011年9月2日
【发明者】陈锦云, K·甘姆帕, D·许斯肯, F·P·斯泰格迈尔, M·斯塔普, C·瓦热塞, J·魏勒, W·周 申请人:诺华股份有限公司