专利名称：一种高纯度穿山龙总皂苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药成分的制备方法，特别是一种高纯度穿山龙总皂苷的制备方法。
背景技术：
穿山龙为薯菌科(iT/oscoreaceae)植物穿山薯菌(Af1Scoreanipponica Makino)的干燥根莖，别名穿龙骨、穿地龙、狗山药、穿山骨、地龙骨、串山龙等，主产于辽宁、吉林、黑龙江、河北、内蒙古、山西、陕西等省及自治区。穿山龙药材气微、味苦涩、性温，具有活血舒筋、消食利水、祛痰截疟和祛风止痛的功效，常用于治疗风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤和疟疾等症。现代药理学证明，穿山龙总皂苷具有调节免疫、治疗类风湿性关节炎、改善心脑血管功能、祛痰、抗肿瘤等多种药理作用。为了对穿山龙总皂苷进行更深入的药理活性与作用机制研究，为了实现穿山龙总皂苷的推广和应用，建立一种简单、有效的总皂苷纯化工艺具有重要意义。从穿山龙中提取穿山龙总皂苷一般采用传统的柱色谱法，如大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、聚酰胺色谱柱等。利用该方法对穿山龙中的总皂苷进行分离，不仅费时费力，而且分离过程中所使用的有机试剂还会对环境造成污染，同时上述色谱柱对样品均存在一定程度的、不可逆的吸附作用。因此现在需要一种能够解决上述问题的新型穿山龙总皂苷的制备方法
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种简单有效、绿色环保的从穿山龙中提取穿山龙总皂苷的方法。本发明的技术解决方案是:一种高纯度穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于:
a、取穿山龙，按照质量体积比为lg:6-10mL的比例向穿山龙中加入浓度为60%_80%的乙醇，进行热提取，热提取时间为l_3h，将提取液减压浓缩至浸膏，
b、将提取物浸膏与纯水进行混合并混匀，纯水的体积为浸膏体积的3倍以上，在(TC -4°C的条件下低温静置直至分层，弃去上层溶液，重复浸膏与纯水混合后的步骤3-5次，干燥至粉末状，获得目标成分。所述的热提取是在加热回流的状态下进行热提取。所述的热提取操作需进行2-3次，并将每次热提取操作后的提取液合并，减压浓
缩至浸膏。所述的干燥采用的是冷冻真空干燥法。本发明同现有技术相比，具有如下优点:
传统的穿山龙总皂苷的制备方法为柱色谱法，这种方法费时费力，并且在制备过程中需要使用某些有机试剂，如果不对这些有机试剂进行处理则会对周围环境造成污染，但处理这些有机试剂则会增加成本；同时一部分样品还会媳妇在色谱柱上，降低回收率。而本种穿山龙总皂苷的分离制备方法相比于传统的柱色谱法，具有节省操作步骤、不需使用有机试剂、绿色环保等优点，为穿山龙的总皂苷提取提出了全新的思路和方向。
图1为穿山龙总皂苷含量测定中以薯蓣皂苷为对照品的标准曲线。图2为薯蓣皂苷标准品用香草醛-高氯酸法显色后的紫外扫描图。图3为穿山龙总皂苷样品用香草醛-高氯酸法显色后的紫外扫描图。
具体实施例方式下面将说明本发明的具体实施方式
。首先取穿山龙，为了保证提取效果，穿山龙应切成1-2_厚度均匀的切片，或粉碎成粉末状后进行操作，向穿山龙中加入浓度为60%-80%的乙醇，穿山龙和乙醇的质量体积比为Ig:6-10mL，并在加热回流的状态下进行热提取，热提取时间为l_3h，热提取的次数为2-3次，将每次热提取后所获得的提取液进行合并，并减压浓缩至浸膏；然后将浸膏与纯水混合均匀，添加的纯水的体积为浸膏体积的3倍以上，将混合后的液体在(TC -4°C的条件下低温静置，待分层后弃去上层溶液，重新按照上述步骤加入纯水进行水洗操作，进行3-5次水洗操作后，将产物用冷冻真空干燥法干燥至粉末状，获得目标成分。为了检测目标成分中总皂苷的含量，利用薯蓣皂苷作为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法对目标成分中的总皂苷含量进行测定。实施例一
取穿山龙药材800 g， 全部切成厚度为Imm的片状，用4800 mL浓度为60%的乙醇加热回流提取2次，每次2.0 h，将合并后的提取液在60°C的条件下减压浓缩至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL将提取物浸膏1000 mL与3000 mL纯水混匀，4°C静置分层，弃去上层液体，继续加入纯水清洗，重复3次，最后冷冻干燥得到目标成分30.3 g，得率为3.78%。称取薯蓣皂苷对照品10.72 mg，加甲醇定容于50 mL量瓶中，分别取对照品0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8和0.9 mL置于具塞试管中，挥干溶剂，分别加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混匀、密塞。于60°C水浴显色20 min。取出后立即以冰水冷却5 min，再加入5.0 mL冰醋酸摇匀。静置10 min，以空白试剂做参比，测定吸光度。以吸光度值为纵坐标(y)，薯蓣皂苷的浓度为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程y=26.662x — 0.0612 (R2=0.9991)。标准曲线见附图1。分别称取3份约10 g样品置于50 mL容量瓶中，采用甲醇溶液溶解样品并定容。精密量取样品溶液0.5 mL置于具塞试管中，每个样品重复6份。挥干溶剂，分别加入0.8mL的高氯酸和0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混匀、密塞。于60°C水浴显色20 min。取出后立即以冰水冷却5 min，再加入5.0 mL冰醋酸摇匀。静置10 min，以空白试剂作参t匕，进行紫外扫描、测定吸光度值，紫外扫描图见附图2。根据回归方程计算样品中穿山龙总皂苷的含量为74.79±0.04%ο实施例二
取穿山龙药材800 g，全部切成厚度为Imm的片状，用8000 mL浓度为60%的乙醇加热回流提取2次，每次2.0 h，将合并后的提取液在60°C的条件下减压浓缩至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL将提取物浸膏1000 mL与3000 mL纯水混匀，4°C静置分层，弃去上层液体，继续加入纯水清洗，重复3次，最后冷冻干燥得到目标成分23.31 g，得率为2.91%。按照与同实施例一完全相同的步骤和条件进行操作，得到回归方程y=26.662x 一
0.0612 (R2=0.9991) 分别称取3份约10 g样品置于50 mL容量瓶中，甲醇溶解、定容。精密量取样品溶液0.5 mL置于具塞试管中，每个样品重复6份。挥干溶剂，分别加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混匀、密塞。于60°C水浴显色20 min。取出后立即以冰水冷却5 min，再加入5.0 mL冰醋酸摇匀。静置10 min，以空白试剂作参比测定吸光度值。根据回归方程计算样品中穿山龙总皂苷的含量为87.20±0.05%。实施例三
取穿山龙药材800 g，全部切成厚度为Imm的片状，用6400 mL浓度为70%的乙醇加热回流提取3次，每次2.0 h，将合并后的提取液在60°C的条件下减压浓缩至浸膏1000 mL ；然后IOOOmL将提取物浸膏1000 mL与4000 mL纯水混匀，4°C静置分层，弃去上层液体，继续加入纯水清洗，重复3次，最后冷冻干燥得到目标成分24.24 g，得率为3.03%。按照与同实施例一完全相同的步骤和条件进行操作，得到回归方程y=26.662x 一
0.0612 (R2=0.9991)。 分别称取3份约10 g样品置于50 mL容量瓶中，甲醇溶解、定容。精密量取样品溶液0.5 mL置于具塞试管中，每个样品重复6份。挥干溶剂，分别加入0.8 mL的高氯酸和
0.2mL的5%香草醛的冰醋酸溶液，并混匀、密塞。于60°C水浴显色20 min。取出后立即以冰水冷却5 min，再加入5.0 mL冰醋酸摇匀。静置10 min，以空白试剂作参比测定吸光度值。根据回归方程计算样品中穿山龙总皂苷的含量为74.80±0.05%。
权利要求
1.一种高纯度穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于: a、取穿山龙，按照质量体积比为lg:6-10mL的比例向穿山龙中加入浓度为60%_80%的乙醇，进行热提取，热提取时间为l_3h，将提取液减压浓缩至浸膏， b、将提取物浸膏与纯水进行混合并混匀，纯水的体积为浸膏体积的3倍以上，在(TC -4°C的条件下低温静置直至分层，弃去上层溶液，重复浸膏与纯水混合后的步骤3-5次，干燥至粉末状，获得目标成分。
2.根据权利要求1所述的穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于:所述的热提取是在加热回流的状态下进行热提取。
3.根据权利要求2所述的 穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于:所述的热提取操作需进行2-3次，并将每次热提取操作后的提取液合并，减压浓缩至浸膏。
4.根据权利要求3所述的穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于:所述的干燥采用的是冷冻真空干燥法。
全文摘要
本发明公开一种高纯度穿山龙总皂苷的制备方法，其特征在于取穿山龙，按照质量体积比为1g:6-10mL的比例向穿山龙中加入浓度为60%-80%的乙醇，进行热提取，热提取时间为1-3h，将提取液减压浓缩至浸膏；将提取物浸膏与纯水进行混合并混匀，纯水的体积为浸膏体积的3倍以上，在0℃-4℃的条件下低温静置直至分层，弃去上层溶液，重复浸膏与纯水混合后的步骤3-5次，干燥至粉末状，获得目标成分。这是一种简单有效、绿色环保的从穿山龙中提取穿山龙总皂苷的方法。
文档编号A61P19/02GK103083513SQ20131000708
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月9日 优先权日2013年1月9日
发明者彭金咏, 于浩, 尹连红, 郑玲俐, 刘克辛, 许丽娜, 齐艳 申请人:大连医科大学