专利名称：黄芩苷和牛磺酸组合物及其制备药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及黄芩苷和牛磺酸组合物及其用于制备药物的用途。
背景技术：
痴呆是常发于老年期及老年前期的一种中枢神经系统退行性疾病，是以认知功能缺损、记忆障碍、智力减退、人格改变和行为异常为主要特征的一组综合征，终将导致患者的职业和社会生活功能下降或丧失直至死亡。近年来，随着世界人口平均寿命的逐年增加和老龄化问题加剧，其发病率呈现逐年上升的趋势，对人类生活质量的影响乃至生存的威胁也日趋明显。痴呆患者的平均生存期仅为5 6年，已成为仅次于心血管疾病、癌症、脑血管疾病之后导致老年人死亡的第四大疾病。根据病因学、临床表现、病损情况等可分为不同的痴呆亚型:阿尔茨海默病(AD)、血管性痴呆(VaD)、阿尔茨海默病和血管性痴呆的混合型(MIXD)、路易体痴呆(DLB)、帕金森氏病性痴呆(PD)、额颞叶痴呆(FTD)、克罗伊茨费尔特-雅各布病性痴呆(CJD)、正常颅压脑积水性痴呆(NPH)、韦-科二式综合症痴呆(WKS)、亨廷顿舞蹈病相关的痴呆等其他病变。其中AD是最主要的痴呆亚型，约占所有痴呆的60% 70%，其次为VaD或者MIXD。近数十年中，针对痴呆疾病的基础和临床研究均取得了长足的进步，且主要是对最常见的痴呆亚型AD的研究。即便如此，因痴呆的病因和病理机制的复杂性，仍存在各种争议，各种学说同时并存，如“AP学说”、“神经元缺失学说”、“神经纤维缠结学说(如Tua蛋白异常磷酸化)”、“神经递质异常学说(如乙酰胆碱Ach减少)”、“兴奋性氨基酸毒性学说(如谷氨酸Glu功能亢进)”、“自由基和氧化损伤学说”、“糖代谢异常学说”等，并未确指；近期仍无法取得突破性的进展。但痴呆为一组综合征，尽管可由不同或多种病因形成，但其构成的疾病具有相同的症状表现，因此在痴呆的治疗上已达成共识，即治疗痴呆的主要目的是改善症状，包括 提高认知能力和自理能力、改善神经精神行为障碍；改变疾病进展，延缓或阻止痴呆过程的症状恶化或干预关键致病机制的一级预防。根据有效性和安全性数据，已有几种用于改善阿尔茨海默型痴呆症状的药物获得批准，如属于胆碱酯酶抑制剂的多奈哌齐(安理申)、利凡斯的明、加兰他敏和属于谷氨酸受体拮抗剂的美金刚，但已确立的疗效仍是有限的，需要联合其他药物以达到远期治疗效果。基于痴呆的独特的病因学和临床特征，以及目前痴呆领域的研究状态，仍然急需研发不同的药物，或作用于疾病症状改善，或针对其不同病因和病理生理过程的修饰作用。因此AD等痴呆的治疗仍然是一个悬而未决的重要研究领域，也是一个紧迫而棘手的社会及医学难题。
发明内容
本发明的目的是针对上述以AD为主的痴呆治疗难题，经过大量的实验筛选和验证，提供一种可以保护神经细胞损伤、改善学习记忆能力、改善认知功能障碍，从而预防和治疗痴呆的药物组合物。
—方面，本发明提供了黄芩苷和牛磺酸组合物用于制备保护神经细胞损伤药物的用途。另一方面，本发明还提供了黄芩苷和牛磺酸组合物用于制备改善学习记忆能力药物的用途。另一方面，本发明还提供了黄芩苷和牛磺酸组合物用于制备改善认知功能障碍药物的用途。优选的，本发明还提供了黄芩苷和牛磺酸组合物用于制备预防和治疗痴呆药物的用途。优选的，其中所述的痴呆包括阿尔茨海默病性痴呆(AD)、血管性痴呆(VD)、混合性痴呆(MixD)、路易小体痴呆(DLB)、额颞叶痴呆(FTD)、帕金森病性痴呆(PD)、克罗伊茨费尔特-雅各布病性痴呆(CJD)、正常颅压脑积水性痴呆(NPH)、韦-科二式综合症痴呆(WKS)中的任何一种。优选的，其中所述的老年痴呆主要指阿尔茨海默病性痴呆(AD)、血管性痴呆(VaD)、混合性痴呆(MixD)。优选的，其中所述的老年痴呆主要指阿尔茨海默病性痴呆(AD)。优选的，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.9% 60.0%，牛磺酸 0.1 40.0%。优选的，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.0% 90.0%，牛磺酸 1.0% 10.0%。进一步地，本 发明还提供了一种药物制剂，该药物制剂的主要有效成分是黄芩苷和牛磺酸组合物，并与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或可与其配伍的其它药物制备而成，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.9% 60.0%，牛磺酸0.1 40.0%。本发明的黄芩苷和牛磺酸组合物中的黄芩苷是黄芩发挥药效的主要物质基础，具有明显的抗炎抗变态反应、解热、抗菌、抗病毒作用；能有效的清除氧自由基而表现出较强的抗氧化活性；能上调促凋亡基因P53和bax、下调凋亡抑制基因bcl-2和bcl-6的表达，同时抑制肿瘤细胞增殖而具有抗肿瘤作用；抑制细胞内Ca2+超载而表现有抗心律失常以及降压作用；此外还具有保护神经细胞损伤、调节免疫功能等药理作用。而现已上市的以其为主要活性成分的制剂黄芩苷片、黄芩苷胶囊，主要用于急、慢性肝炎及迁延性肝炎的辅助治疗。由此可见，二者之间的功效和治疗目的完全不同。本发明的黄芩苷和牛磺酸组合物中的牛磺酸具有解热抗炎、镇痛镇静、保肝利胆作用；能加速糖酵解、增强糖异生而具有降血糖作用；具有清除自由基、抗氧化作用及抑制细胞内Ca2+超载作用，从而保护心肌细胞，抗心律失常及心衰、延缓高血压及动脉粥样硬化的发生和发展；具有抑制血小板聚集、促进神经系统生长发育和细胞增殖分化等作用。而已上市的以牛磺酸为主要药效活性成分的制剂牛磺酸片、牛磺酸胶囊、牛磺酸颗粒等主要用于缓解感冒初期的发热；以其为药效活性成分之一的复方四维女贞子胶囊主要用于妇女更年期综合征及经前期紧张综合征。由此可见，二者之间的功效和治疗目的完全不同。黄芩苷、牛磺酸组合后具有保护神经细胞作用，具有改善认知功能障碍、提高老年痴呆的学习记忆能力的作用，对老年痴呆具有较好的防治作用，使其比黄芩苷或牛磺酸单独使用作用更强。经过实验数据对比可知，黄芩苷、牛磺酸各自对AP 25_35致SH-SY5Y细胞损伤发挥保护作用的最适浓度分别为40 80 ii mol/L、10 80 ii mol/L。而黄岑苷和牛磺酸以不同配比组合后，各组合物组SH-SY5Y细胞相对存活率均较模型组显著提高。其中40 u mol/L黄岑苷和8 u mol/L牛磺酸配比而成的组合物、48 u mol/L黄岑苷和8 u mol/L牛磺酸配比而成的组合物使细胞存活率较模型对照组分别提高了(90.24±7.46) %、(114.39±10.79) %,高于平行实验中的80 u mol/L黄芩苷对照组(68.62± 11.54) %和20 y mol/L牛磺酸对照组(83.92±20.17)%，说明本发明中组合物对神经细胞损伤具有较强的保护作用，比两者单独使用保护作用要强。经过实验数据对比可知，大鼠脑室注射AP卜42后表现出明显的痴呆症状，认知学习能力显著障碍，大鼠水迷宫实验的逃避潜伏期及平均搜索距离较正常组显著增加，跳台逃避潜伏期和错误次数明显增加而停留潜伏期明显减少。黄芩苷和牛磺酸以6: I配比、18: I配比、2: I配比而成的组合物均能明显减少AP卜42致痴呆大鼠水迷宫实验的逃避潜伏期和平均搜索距离，减少跳台逃避潜伏期和错误次数，而使大鼠的跳台停留潜伏期增力口，且组合物起效快，作用效果明显优于黄芩苷对照组及牛磺酸对照组，并表现出一定的量效趋势。水迷宫和跳台实验是测试大鼠认知功能和学习记忆能力的经典实验，此实验说明以一定配比组成的黄芩苷和牛磺酸组合物能改善AP致痴呆大鼠的认知功能以及学习记忆能力，作用效果优于黄芩苷及牛磺酸单独作用。提示其可有效地用于改善学习记忆及认知功能障碍、防治痴呆。经过实验数据对比可知，模型组KM说明KM小鼠腹腔注射东莨菪碱后，阻滞了胆碱能神经通路M受体，胆碱能神经功能受抑制，小鼠Morris水迷宫实验中逃避潜伏期和平均搜索距离较正常组显著增`加，跳台实验中逃避潜伏期及错误次数也显著增加而停留潜伏期明显降低，小鼠表现出显著的学习工作记忆损害。给予黄芩苷和牛磺酸组合物后，小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期和平均搜索距离较模型组不同程度减少，跳台实验的错误次数和逃避潜伏期明显减少而停留潜伏期显著增加。黄芩苷和牛磺酸以6: I配比、18: I配比、2: I配比而成的组合物逃避潜伏期比模型组分别减少52.76%,73.53%,26.62%,平均搜索距离分别减少39.91 %、47.98%,24.61% ;跳台停留潜伏期比模型组分别增加197.66%,208.43%,85.67%，逃避潜伏期分别减少 65.72%,71.03%,28.65%，错误次数分别减少62.55%,57.40%>30.52%0实验结果表明，黄芩苷和牛磺酸配比而成的组合物能改善大脑中枢胆碱能神经功能，改善因胆碱能神经受损致记忆获得障碍小鼠的学习工作记忆能力和认知能力，提示黄芩苷和牛磺酸组合物可用于改善胆碱能相关的记忆损害和防治老年期痴呆。新的蛋白合成在学习记忆中具有重要作用，记忆的巩固和再现与脑内大分子特别是蛋白质和RNA的合成密切相关。环己亚酰胺是一种蛋白合成抑制剂，可引起脑内与长期记忆相关的蛋白合成减少，阻碍了记忆的形成，而引起大脑的学习和认知功能障碍。因此通过给动物注射环己亚酰胺制备记忆巩固障碍模型模拟痴呆。经过实验数据对比可知，小鼠腹腔注射环己亚酰胺后，Morris水迷宫实验逃避潜伏期和平均搜索距离较正常组分别增加了 273.21%和153.76%，跳台实验中停留潜伏期明显比正常组减少47.87%、逃避潜伏期及错误次数增加502.85%和497.63%，记忆巩固出现障碍，学习工作记忆能力显著下降。给予黄芩苷和牛黄酸组合物的各组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期和平均搜索距离较模型组不同程度减少，跳台实验停留潜伏期较模型组提高，逃避潜伏期和错误次数减少，且作用效果有优于阳性对照药安理申的趋势。实验结果提示，黄芩苷和牛磺酸配比而成的组合物能促进脑内与长期记忆相关的大分子特别是新蛋白质合成，提高记忆巩固障碍小鼠的学习记忆和认知功能，能优效地用于预防和改善学习记忆损害或改善痴呆症状、防治痴呆。D-半乳糖在代谢过程中，形成过量的超氧阴离子自由基，会对组织产生过氧化损害，使机体衰老，引起脑组织及神经元一系列退行性变化，这一过程与老年期痴呆关系密切。因此通过给动物注射D-半乳糖能模拟自然衰老或自由基氧化损伤等所致的痴呆。经过试验数据对比可知，小鼠皮下注射D-半乳糖后，Morris水迷宫实验逃避潜伏期和平均搜索距离较正常组分别增加了 383.92%和625.41%，跳台实验中停留潜伏期明显比正常组减少57.72%、逃避潜伏期及错误次数增加221.57%和921.66%，说明小鼠学习记忆能力显著下降。用黄芩苷和牛磺酸以6: I配比、18: I配比、2: I配比而成的组合物灌胃给小鼠后，小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期和平均搜索距离均较模型组不同程度减少，跳台逃避潜伏期和错误次数亦明显减少而停留潜伏期不同程度提高。Morris水迷宫实验中，黄芩苷和牛磺酸6: I和2: I配比而成的组合物及组合物3组作用与阳性药安理申相当，18: I配比而成的组合物使小鼠逃避潜伏期和平均搜索距离较模型组分别减少68.42%和69.18%，作用效果甚至优于阳性药安理申。跳台实验中，黄芩苷和牛磺酸6: I配比高剂量、中剂量及18: I配比而成的组合物使小鼠停留潜伏期较模型组分别提高93.87%、67.52%和81.45%，逃避潜伏期分别减少61.88%,44.79和55.32%，有优于阳性药安理申(停留潜伏期提高45%、逃避潜伏期减少30.14%)的趋势；其跳台错误次数分别减少52.83%,27.46和25.68%。实验结果显示，黄芩苷和牛磺酸以一定配比而成的组合物能增强机体的抗氧化能力，抑制氧化自由基对机体脑组织损伤，抵抗衰老而保护脑细胞，改善神经元退化和自由基损伤致脑功能衰退小鼠的学习记忆和认知功能，提示其可用于改善痴呆症状、防治痴呆。综上所述，通过体外细胞实验和四种不同病理机制模型的整体体动物实验证明本发明的黄芩苷和牛磺酸组合物能保护神经细胞损伤，能改善因A3沉积、胆碱能神经功能损伤、脑内新蛋白合成减少、衰 老与自由基损伤所致痴呆的学习记忆能力。且效果优于黄芩苷或牛磺酸单独使用。尽管痴呆的病因及病理机制复杂多种，或存在多种学说，例如脑血管病反复发作、“A@学说”、“神经元缺失学说”、“神经纤维缠结学说(如Tua蛋白异常磷酸化)”、“神经递质异常学说(如乙酰胆碱Ach减少)”、“兴奋性氨基酸毒性学说(如谷氨酸Glu功能亢进)”、“自由基和氧化损伤学说”、“糖代谢异常学说”等，但它们所致的各种痴呆的最终病理损伤和临床症状表现都大致相同，最终均是由慢性或进行性大脑损害引起的高级大脑功能障碍的一组症候群，都以记忆、思维、识别、语言、判断等高级大脑神经认知功能明显减退为特点的一组慢性、进行性发展的神经精神衰退性疾病。因此，由本发明中所举实验结果，本领域技术人员可以合理地预期:本发明的黄芩苷和牛磺酸组合物对本发明所列之外的病因及病理机制所致的各种老年期痴呆的学习记忆能力和认知功能均有改善作用。综上所述，本发明的黄芩苷和牛磺酸组合物能用于改善学习记忆和认知功能障碍，对老年期痴呆具有较好的防治作用。根据不同痴呆的病因和发病机制不同，本发明黄芩苷和牛磺酸组合物主要是指用于防治阿尔茨海默病性痴呆(AD)、血管性痴呆(VaD)、混合性痴呆(MixD)，特别是指阿尔茨海默病性痴呆(AD)。又因不同病因及发病机制形成的不同痴呆亚型具有大致相同的最终病理损伤和临床症状表现(如记忆损伤等)，因此预期本发明黄芩苷和牛磺酸组合物亦可用于改善其它各种病因及不同病理机制所致的痴呆的记忆能力和认知功能，改善如下任何一种或几种痴呆的症状:路易小体痴呆(DLB)、额颞叶痴呆(FTD)、帕金森病性痴呆(H))、克罗伊茨费尔特-雅各布病性痴呆(CJD)、正常颅压脑积水性痴呆(NPH)、韦-科二式综合症痴呆(WKS)。而医学和药学研究人员无法预先在不做相关实验以及不结合几种病理机制模型综合分析前提下，预先得知黄芩苷和牛磺酸组合物具有改善学习记忆及认知功能障碍和防治老年痴呆的作用及其上述药物用途。
具体实施例方式所述的黄芩苷、牛磺酸均可以为市场购买，也可采用现有提取、分离、纯化或合成等技术方法制备而得。如:取黄芩，加水煎煮二次，合并滤液，浓缩，盐酸调PH值为I 2，于约75°C条件下，保温沉淀，析出黄芩苷；收集沉淀物加水分散，NaOH溶液调pH值为7，加入等体积乙醇溶解，过滤，滤液用盐酸调pH值为I 2，70°C保温lh，静置，二次沉淀；沉淀物用乙醇反复洗涤、干燥，得黄芩苷粗品；粗品加水分散，加热升温至75°C，NaOH溶液调pH值为7左右，使其溶解，盐酸调pH值为6，加入乙醇使含醇量达70%左右，滤液用盐酸调pH值为2，静置沉淀， 得黄芩苷精品，再用甲醇加热回流反复结晶，得淡黄色细针晶黄芩苷，纯度≥98%。 以下实施例中的黄芩苷、牛磺酸均为市场购买，纯度均彡98%。实施例1将黄芩苷(115.2g)、牛磺酸(76.Sg)以3: 2的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(192g)。实施例2将黄芩苷(144g)、牛磺酸(24g)以6: I的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(168g)。实施例3将黄芩苷(180g)、牛磺酸(20g)以9: I的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(200g)。实施例4将黄芩苷(180g)、牛磺酸(IOg)以18:1的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(190g)。实施例5将黄芩苷(108g)、牛磺酸(54g)以2:1的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(162g)。实施例6将黄芩苷(42.Sg)、牛磺酸(2g)以21.4:1的比例混合，搅拌、研磨、混合均匀后得黄芩苷和牛磺酸组合物(44.Sg)。
下面结合表I给出本发明黄芩苷、牛磺酸重量百分比的一些优选实施例，但本发明两者的组成成份的含量不局限于该表中所列数值，对于本领域的技术人员来说，完全可以在表中所列数值范围的基础上进行合理概括和推理。表I黄芩苷、牛磺酸占组合物的重量百分比)
权利要求
1.一种黄芩苷和牛磺酸组合物用于保护神经细胞损伤的药物用途。
2.一种黄芩苷和牛磺酸组合物用于改善学习记忆能力的药物用途。
3.一种黄芩苷和牛磺酸组合物用于改善认知功能障碍的药物用途。
4.根据权利要求1 3任一项的用途，其特征在于所述的组合物用于制备预防和治疗痴呆药物的用途。
5.根据权利要求4的用途，其特征在于所述的组合物用于制备预防和治疗阿尔茨海默病性痴呆(AD)、血管性痴呆(VaD)、混合性痴呆(MIXD)、路易小体痴呆(DLB)、额颞叶痴呆(FTD)、帕金森病性痴呆(H))、克罗伊茨费尔特-雅各布病性痴呆(CJD)、正常颅压脑积水性痴呆(NPH)、韦-科二式综合症痴呆(WKS)药物的用途。
6.根据权利要求5的用途，其特征在于所述的组合物用于制备预防和治疗阿尔茨海默病性痴呆(AD)、血管性痴呆(VaD)、混合性痴呆(MixD)药物的用途。
7.根据权利要求6的用途，其特征在于所述的组合物用于制备预防和治疗阿尔茨海默病性痴呆(AD)药物的用途。
8.根据权利要求1 7任一项所述的用途，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.9% 60.0%，牛磺酸0.1 40.0%。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.0% 90.0% ，牛磺酸1.0% 10.0%。
10.一种药物制剂，其特征在于所述药物制剂的主要有效成分是黄芩苷和牛磺酸组合物，并与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或可与其配伍的其它药物制备而成，其中所述黄芩苷和牛磺酸组合物由下述重量配比组成:黄芩苷99.9% 60.0%，牛磺酸0.1 40.0%。
全文摘要
本发明涉及一种可以保护神经细胞损伤、改善学习记忆能力、改善认知功能障碍，从而预防和治疗痴呆的黄芩苷和牛磺酸药物组合物。
文档编号A61K31/185GK103191142SQ20131009756
公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月15日 优先权日2013年3月15日
发明者杨小玲, 张占军, 谢宁, 吕武清, 刘地发, 程帆, 王章伟, 欧阳婷, 蒋春红, 王燕平, 崔刚 申请人:江西青峰药业有限公司