靶向连接蛋白的反义化合物及其使用方法

专利名称：：靶向连接蛋白的反义化合物及其使用方法
技术领域：
：本发明披露的内容涉及和描述利用化合物来调节间隙连接相关的蛋白质表达的试剂、组合物以及方法。这些试剂、组合物、以及方法可用于，例如，体内和体外组织工程，包括例如在皮肤中、角膜组织中、以及与眼有关的外科手术。
背景技术：
：由于生病或损伤引起的组织或器官衰竭是世界范围内的主要健康问题，除了进行器官或组织移植外，很少有完全康复的选择。但是，寻找合适供体的难题意味着这种选择对于大多数患者来说是不可利用的。目前正在研究用作替代的组织工程或重建，由此形成合成或半合成组织或器官仿制品，其是全功能性的或者生长为希望的功能性。尤其是这种技术变得日益重要的一个领域是眼角膜。角膜移植是世界范围内进行的最常见形式的固体器官移植。仅在美国和英国每年就进行约80，000例。诸如屈光角膜切除术(PRK)和激光原位角膜磨削术(LASIK)的用来矫正近视的屈光性手术(refractivesurgery)的流行，导致了用于移植的合适角膜的短缺，这些角膜用于手术或疾病过程后的组织重建以及用于体内组织操作处理以设计变化(engineerchange)。另外,大约5%有激光手术经历的患者体验到意外的结果。角膜是透明的组织，其包括眼睛外膜的中部六分之一。其一致的结构和功能为眼睛提供了清晰的折射界面、抗张强度，并且保护眼睛免于外部因素。角膜由三个不同的主要细胞层构成:上皮、间质、以及内皮(Pepose,J.S.etal.,“Thecornea;Adler’sPhysiologyoftheeye:Clinicalapplication，，，9thed.St.Louis:MosbyYearBook,1992,29-47;Spencer,ff.H.,“Thecornea;OphthalmicPathology:anatlasandtextbook”，4thed.，Philadelphia:W.B.SaundersC0.，1996，157-65)。另外，后弹性膜(Descemet’smembrane)、鲍曼层(Bowman’slayer)、以及基底膜是以一些方式来源于这些主要细胞层之一的结构。角膜上皮是直接接触外部环境的层。它是一种分层鳞状、非角质化的结构，在鼠和人体中，厚度范围分别是40到ΙΟΟμπι。其包括:通常由两到三层扁平鳞状细胞形成的表面区、由两或三层多面翼细胞(polyhedralwingcell)形成的中间区、以及由单排柱状细胞构成的基底区。层状角膜上皮的特征是作为“紧密”离子转运功能的合胞体(syncitium)，其用作眼表面的保护性屏障以及附属液体分泌层，该分泌层有助于角膜内皮对间质水合的调节，并因此有利于保持角膜的透明。已证实角膜上皮具有的独特和专一化性质对作为眼睛主要折射元件的角膜的运转(operation)来说是必需的。因此不管任何环境应力下保持其层状结构就很重要。角膜表面的外伤特别普遍；例如，小擦伤、眼睛感染和疾病、化学或机械意外事故以及手术实施都会损伤角膜。角膜外伤伤口愈合后的一个主要并发症是由于组织重新形成(reorganization)而丧失视敏度。有眼愈合问题的危险的患者包括那些经过手术的人。这样的手术的实例包括但不限于有或没有晶状体置换的白内障摘除术、诸如穿透性角膜移植术(PKP)的角膜移植或其它穿透性手术、准分子激光屈光性角膜切除术、青光眼滤过术、放射状角膜切除术、以及用来矫正屈光或替换晶状体的其它类型手术。角膜提供了外部光学平滑面(externalopticallysmoothsurface),以将光传送到眼中。手术破坏了将角膜固定为其标准构型的力。对白内障患者，在边缘区进行全部厚度的手术切口。角膜在其愈合时收缩，从而引起组织的局部变形以及受影响区的视野内的伴随变形(散光)。其它角膜中的手术伤口会引发伤口愈合过程，其引起角膜曲率的预定局部移动。这些技术中最为广泛知晓的是放射状角膜切开术(RK)，其中，产生了几个部分厚度切口而引起中心角膜扁平化。但是，这种技术由于缺乏可预知的结果和视力上的显著波动(两者都与伤口愈合的性质和程度有关)而受限(Jesteretal.，Cornea(1992)11:191)。例如，在大多数RK患者中观察到在初始视力提高中具有伴随的退化的角膜组织的外围隆起中的复位(reduction)(McDonnellandSchanzlin,Arch.0phthalmol.(1998)，106:212)。角膜中的伤口愈合也很缓慢，并且不完全愈合往往与视敏度的不稳定性有关(具有从早晨到夜晚视力上的波动，以及在超过几星期到几个月的时间发生飘动(drifting)视敏度)，这可能是34%或更多进行过放射状角膜切开术的患者手术后一年抱怨波动视力的原因(Waringetal.,Amer.J.0phthalmol.(1991)111:133)。同样，如果角膜伤口未能彻底愈合，那么可能会发生伤口“裂开”，从而会导致渐进的远视作用。多达30%经过RK手术的患者遭受与伤口裂开有关的远视飘移之苦(Dietzetal.,Ophthalmology(1986)93:1284)。外伤后的角膜再生较复杂并且还未很好地被理解。其涉及三种组织的再生:上皮、间质以及内皮。三种主要的细胞间发信号的途径被认为可以调节组织再生:一个通过生长因子(Baldwin,H.C.andMarshall,J.,ActaOphthalmol.Scand.,(2002)80:238-47)、细胞因子(Ahmadi,A.J.andJakobiec,F.A.,Int.0phthalmol.Clinics,(2002)42(3):13-22)以及趋化因子(chemokine)(Kurpakus-ffheater,M,etal.,Biotech.Histochem,(1999)74:146-59)来介导；另一种通过细胞基质相互作用来介导(Tanaka,T.,etal.,Jpn.J.0phthalmol.,(1999)43:348-54);以及另一种通过间隙连接和通道形成蛋白的连接蛋白家族来介导。间隙连接是细胞膜结构，其有利于直接的细胞间通讯。间隙连接通道由两个连接子形成，每个连接子由六个连接蛋白亚单位组成。每个六聚体连接子与相对膜中的连接子对接以形成单个间隙连接。可在整个身体中发现间隙连接通道。诸如角膜上皮的组织，例如，具有六到八个细胞层，然而在不同层中表现不同的间隙连接通道，其中在基底层中为连接蛋白-43以及从基底层到中部翼细胞层为连接蛋白-26。总体来说，连接蛋白是一种蛋白质家族，通常根据它们的分子量来命名或基于种系发生分为α、β以及Y子类。到目前为止，确定了20个人类和19个鼠类同种型(isoform)(ffillecke,K.etal.,Biol.Chem.，(2002)383，725-37)，这可能表示每个不同的连接蛋白可以进行功能专化。不同组织和细胞类型具有连接蛋白表达的特征模式并且已表明诸如角膜的组织在损伤或移植以后会改变连接蛋白的表达模式(Qui,C.etal.，(2003)CurrentBiology,13:1967-1703;Branderetal.,(2004),JInvestDermatol.122(5):1310-20)。外伤后角膜再生过程会导致角膜透明度的丧失并因此影响屈光手术的结果。目前对于损伤角膜的治疗通常包括角膜移植或试图将角膜细胞/组织用于重建。但是，在诸如准分子激光屈光角膜切除术的外科手术以后，对角膜和周围软组织的术后外伤经常会导致瘢痕形成，这是由于与细胞外基质的改变有关的细胞增多；包括在激光所致的损伤处的上皮细胞生长模式(patterning)、肌纤维母细胞分化、间质重建、以及上皮增生的变化。在严重的脊髓损伤中，无论是通过横断、挫伤或加压而发生的病理变化，都共有一些与术后瘢痕形成和组织重建的相似性。在损伤后24-48小时内，损伤会扩展并显著增大受影响区域的尺寸。可能涉及间隙连接介导的副作用(bystandereffect)(Lin,J.H.etal.,1998,NatureNeurosc1.1:431-432),通过该副作用间隙连接通道将神经毒素和韩波(calciumwave)从损伤位置扩展到其它健康组织。这伴随着特征性的炎性肿胀。脊髓中的损伤区被腔或结缔组织瘢痕代替，这两者都阻碍轴突再生(McDonald，J.W.etal,(Septemberl999)ScientificAmerican.55-63;Ramer,M.S.etal.,SpinalCord.(2000)38:449-472;Schmidt,C.E.andBaierLeach,J.;(2003)Ann.Rev.Biomed.Eng.5:293-347)。尽管用一些当前治疗方式取得了进步，但是对脊髓修复的主要限制仍然保持，这包括侵入性介入本身会进一步扩大损伤以及神经胶质瘢痕形成，这会阻碍修复过程以及冒进一步丧失神经功能的危险(Raisman,GJ.RoyalSoc.Med.96:259-261)。已利用反义技术来调节与病毒、真菌以及代谢病有关的基因表达。美国专利第5，166，195号提出了HIV的寡核苷酸抑制剂。美国专利第5，004，810号提出了用来杂交单纯疱疹病毒Vmw65mRNA并抑制复制的寡聚物。还参见Becker等于2000年I月27日提交的题为“FormulationsComprisngAntisenseNucleotidestoConnexins，，的专利申请W000/44409(其全部内容以引用方式并入本文)，该专利描述了利用反义(AS)寡聚脱氧核苷酸来下调连接蛋白的表达，以治疗大脑、脊髓或视神经中的局部神经元损伤，促进伤口愈合并减少在手术或烧伤以后的皮肤组织的瘢痕形成。但是，仍然需要克服许多难题。例如，经常是这种情形:在非靶细胞类型中的特定基因产物的下调可能是有害的。其它需要克服的难题包括这样的ODN(未修饰的磷酸二酯低聚物)的短暂半衰期通常具有仅20分钟的胞内半衰期，这是因为胞内核酸酶降解(Wagnerl994，见前)以及它们连贯且可靠地传递到靶组织。因此，需要并且存在对于用于上述问题的化合物开发的许多可能优点。在此将描述并要求保护这样的化合物、相关组合物、以及它们的使用方法。
发明内容在此描述并要求保护的本发明具有许多特性和实施例，包括但不限于在本
发明内容中提出或描述或参照的那些特性和实施例。在此描述并要求保护的发明不限于或受限于在本
发明内容中确定的特性或实施例，其仅用于说明而不是用于限制的目的。本文提供了对组织工程很有用的化合物，包括反义化合物。还提供了反义化合物以及用来减少与眼科手术有关的组织损伤的方法。这些方法包括，例如，将足以抑制患者眼中或与患者眼有关的细胞中的连接蛋白表达的量的反义化合物给予患者的眼。虽然优选抑制连接蛋白的表达，但是可以想象到其它蛋白质可以是化合物(包括反义化合物)调节的靶，这些化合物单独使用或者和抑制人类连接蛋白表达的反义或其它化合物一起使用。在一些实施例中，眼科操作是眼外科手术，包括但不限于准分子激光屈光角膜切除术、白内障摘除术、角膜移植、矫正屈光的手术、放射状角膜切开术、青光眼过滤术、角膜移植术、准分子激光屈光角膜切除术、角膜移植、矫正屈光的手术、眼表面瘤切除术、结膜或羊膜移植、翼状胬肉和睑裂斑切除术、眼整形手术、眼睑瘤切除术、用于先天性异常的重建眼睑手术、外翻和内翻眼睑修复、斜视手术(眼肌肉)、或任何穿透性眼外伤。通常，至少部分核苷酸序列因连接蛋白而众所周知，其中抑制表达是所希望的。优选地，将反义化合物靶向一个或多个具体的连接蛋白同种型。反义化合物可以靶向的连接蛋白的具体同种型包括(不限于)43、37、31.1、以及26。优选但不要求靶向的连接蛋白是人类的。例如，连接蛋白(例如人类的)可以具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列(nucleobasesequence)。在一些实施例中，反义化合物靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白。在一些其它实施例中，将第二反义化合物给予患者(例如眼)，其中一个或多个其它反义化合物靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白(例如人类的)。至少第二反义化合物可以(例如)靶向不同于第一反义化合物靶向的连接蛋白。可用于本发明各个方面的反义化合物类型的实例包括反义寡核苷酸、反义多核苷酸、脱氧核酶、吗啉代寡核苷酸、dsRNA、RNAi分子、siRNA分子、PNA分子、DNA酶、以及5，-端-突变的Ul小核RNA、以及前述的类似物；以及本文提供的或本
技术领域：
中知晓的其它化合物；包括但不限于(例如)非特定的解偶联剂，如辛醇、硝酸甘油(glycerhetinicacid)、以及庚醇。在一些实施例中(例如)反义化合物是反义寡核苷酸，其包括天然存在的核酸碱基以及未修饰的核苷间键合(linkage)。在其它实施例中(例如)反义化合物是反义寡核苷酸，其包括至少一个修饰的核苷间键合(包括那些借助硫代偶磷酸酯键合的核苷间键合)。合适的反义化合物还包括(例如)寡核苷酸，其包括至少一个修饰的糖部分。合适的反义化合物还包括(例如)寡核苷酸，其包括至少一个修饰的核酸碱基。在一些实施例中，将本文提供的反义化合物结合另一种化合物给予，例如可用于减少组织损伤、减少炎症、促进愈合、或一些具有其它所希望活性的化合物。在另一个方面,本发明包括通过将反义化合物给予患者来治疗受治疗者(例如患者)的方法。在一些实施例中，本文提供的反义化合物是通过局部或表面方式来给予。本文提供的反义化合物也可(例如)全身地或通过眼内注射方式给予。可以将本文提供的反义化合物在预定时间给予患者，例如，相对于伤口的形成，如进行眼科操作(例如手术)的时间。例如，反义化合物可以在进行眼科操作之前、眼科操作期间、或眼科操作之后给予。反义化合物(例如)可在进行眼科操作之前或之后几分钟或几小时内给予受治疗者。在一些实施例中，反义化合物在进行眼科操作之后给予，以及例如反义化合物在操作的约4小时内、操作的约3小时内给予、以及更通常地在眼科操作的约2小时内、或眼科操作的约I小时内给予。在另一方面，本文提供的反义化合物可用一定方法给予以影响组织工程。例如，本文提供的反义化合物可以结合增加患者角膜组织厚度的方法给予。这样的方法可能(可能不)与眼科操作(例如手术)有关。作为实例，本文提供的反义化合物可以结合一种方法来给予，该方法促进愈合或在与患者角膜有关的细胞(例如角膜细胞)中防止组织损伤。在一些实施例中，例如，反义化合物减少瘢痕形成。在一些实施例中，例如，反义化合物减少炎症。在一些实施例中，例如，反义化合物促进伤口愈合。在一些优选实施例中,例如,反义化合物结合外科移植手术一起使用。在一些实施例中，例如，反义化合物靶向连接蛋白43并被给予用来调节上皮基细胞分化和生长。在一些实施例中，例如，反义化合物靶向连接蛋白31.1并被给予用来调节外层角质化。根据一些实施例，例如，眼科操作是白内障摘除术。在其它实施例中，例如，眼科操作是角膜移植。在其它实施例中，例如，眼外科手术是矫正屈光的外科手术。在另一些实施例中，例如，眼科操作是放射状角膜切开手术。在另一些实施例中，例如，眼科操作是青光眼滤过手术。在其它实施例中，例如，眼科操作是角膜移植术。在其它实施例中，例如，眼科操作是眼表面瘤切除术。在其它实施例中，例如，眼科操作是结膜或羊膜移植。在其它实施例中，例如，眼科操作是翼状胬肉和睑裂斑切除。在其它实施例中，例如，眼科操作是眼整形手术。在其它实施例中，例如，眼科操作是眼睑肿瘤切除。在其它实施例中，例如，眼科操作是用于先天性异常的重建眼睑手术。在其它实施例中，例如，眼科操作是外翻和内翻眼睑修复。在其它实施例中，例如，眼科操作是斜视手术(眼肌)。在其它实施例中，例如，眼科操作是穿透性眼创伤。在一些进一步实施例中，例如，利用化合物以及组合物来促进愈合或在与角膜有关的细胞中防止组织损伤，其中与角膜有关的细胞可以是眼中的任何细胞，包括但不限于角膜细胞。本文提供的药剂(包括反义化合物)可增加患者角膜组织的厚度。在一些实施例中，例如，反义化合物结合另一种可用于减少组织损伤或促进愈合的化合物一起使用。例如，可将反义化合物结合生长因子、细胞因子、或类似物一起给予。在另一方面，例如，提供了用于减少与眼科手术有关的组织损伤的药物组合物。适当配制药物组合物，例如，用于表面或局部给予患者的眼，该药物组合物包括足够量的反义化合物以在与患者眼有关的细胞中抑制人类连接蛋白的表达。反义化合物(例如)优选靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白(例如人类的)。在一些实施例中，例如，反义化合物是药物组合物的形式，该药物组合物包括药用载体或赋形剂，以及药剂或反义化合物的存在量可以有效促进患者伤口的愈合。在一些实施例中，药物组合物可以是，例如，适用于局部给药的形式，包括适用于表面或局部地给予患者眼的形式。在一些进一步实施例中，例如，组合物和制剂可以是凝胶、乳膏形式，或者本文描述的或本领域无论是目前或将来知道的任何形式。在另一方面，本发明包括药物组合物，该药物组合物包括反义化合物。在一个实施例中，例如，提供的药物组合物用于减少与眼科操作(例如，手术)有关的组织损伤，使得制成的药物组合物用于表面或局部给予患者的眼，并且该药物组合物包括足够量的反义化合物以在与患者眼有关的细胞中抑制人类连接蛋白的表达。在一些实施例中，例如，反义化合物靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白(例如人类的)。在一些实施例中，例如，药物组合物包括药用载体，其包含缓冲的普卢兰尼克酸(pluronicacid)或凝胶。在一个具体实施例中,这包括例如,在磷酸缓冲盐溶液中高达约30%的普卢兰尼克酸。在另一方面，提供了设计反义寡核苷酸的方法，其中反义寡核苷酸靶向一种或多种连接蛋白。该方法可包括所选参数的优化，如热稳定性、亲合力、以及特定寡核苷酸与所选择靶的特异性。该方法可用于选择和开发包含一个或多个特别希望的多核苷酸序列的反义寡核苷酸。反义寡核苷酸的试验可结合该方法来进行，例如，用于它们剪切mRNA或阻断连接蛋白翻译的能力。图1示出了屈光角膜切除手术12小时后对照和经反义寡核苷酸处理的眼睛的角膜的体内共焦显微图像。图2示出了准分子激光光切除术(excimerlaserphotoablation)后24小时对照(2A、2B、2C)和经反义寡脱氧核苷酸处理的鼠角膜(2D、2E)的角膜重建的组织检查。图3提供了显微图像，示出了准分子激光切除术后24小时的连接蛋白43对照(3A、3B、3C)和经反义寡脱氧核苷酸处理的角膜(3D、3E、3F)的表达。结果表明了连接蛋白43的蛋白水平在用抗连接蛋白430DN处理以后而降低并导致间质中更小程度的细胞募集(cellrecruitment)。图4示出了利用α平滑肌肌动蛋白抗体进行手术后I星期的成肌纤维细胞标记。图4Α、4Β、以及4C作为对照；而4D、4E以及4F是经反义(化合物)处理的角膜。图5示出了屈光角膜切除手术24小时(5A-5D)以及48小时(5E-5H)后，对照(5A、5B)以及经连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸处理的角膜的层粘连蛋白-1标记。在24小时时对照在切除区域(5A)的边缘处具有很少和/或不均匀的层粘连蛋白沉淀并且中部更多(5B)，而经反义化合物处理的角膜在这两个区(5C、)中均显示出层粘连蛋白更规则的沉淀。在48小时时对照仍然不具有连续的层粘连蛋白沉淀(5E-切除区的边缘；图5F-中心)并且其极不均匀(5E)。相反，经反义ODN处理的角膜在伤口边缘(5G)以及中心(5H)具有连续且相对均匀的基膜。图6示出了层粘连蛋白-1不规则量化的示图。图7示出了在对照培养物中(7A)和在用抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸三次处理24小时以后(7B)、以及连接蛋白31.1特异性反义(化合物)处理以后(7C、7D)，连接蛋白26与43的免疫组织化学标记。图8示出了来源于在放入培养基24小时后的P7幼鼠(ratpups)的脊髓节段。对照节段(I)是肿胀的(箭头)，伴随组织从切开端挤出。虚线表示最初切除。组织检查表明细胞有空泡和水肿(edemic)。第五天这些节段具有全部激活的小胶质细胞和很少存活的神经元。相反，相比于具有最小细胞水肿和空泡的对照(P〈0.001)，经反义处理的节段(2)具有显著减少的肿胀。即使在培养基中20天后，灰质中的神经元仍然有活力，其中激活的小胶质细胞限于外部边缘。图9示出了来源于对照处理的节段(9A)和连接蛋白43反义处理的节段(9B)的神经元。对照节段中的神经元有空泡并且水肿，并且破坏周围组织，但在处理节段中的神经元显得健康并且有活力。图10描述了放入培养基5天后在靠近培养的脊髓节段端部的MAP-2免疫标记。对照节段具有很少有活力的神经元和很少MAP-2标记(16%显示出任何(any)MAP-2标记)(10A)，而66%的处理节段的暴露于介质和/或接近残余白质物质的切开端具有MAP-2表达区域。图11描述了脱氧核酶在体外选择性地剪切靶连接蛋白-43mRNA的特定区。在体外从质粒转录2.4kb大鼠连接蛋白-43mRNA(IlA)和1.2kb小鼠连接蛋白_43mRNA(IlB)并且用各种脱氧核酶培育I小时。大鼠mRNA(IlA)的区896-953是不确定的，因为没有脱氧核酶设计用于小鼠相应的区。小鼠mRNA(IlB)中的区367-466的脱氧核酶剪切并不匹配来自大鼠连接蛋白_43mRNA的结果，可能由于在大鼠mRNA中存在5’非翻译区的200个碱基对。具有单点突变的有缺陷对照脱氧核酶(df605以及df783)表明这样的分剪切是特异的。由小鼠dzl007和dzl028还观察到一些由脱氧核酶对小鼠mRNA的非特异错误启动。总的来说，靶向526-622、783-885、以及1007-1076碱基区的脱氧核酶在大鼠和小鼠mRNA物种中表现出显著的剪切。图12描述了在体外脱氧核酶选择性地剪切靶连接蛋白-26mRNA的特定区。在体外从质粒转录0.7kb大鼠(12A)和小鼠(12B)连接蛋白-43mRNA并且用各种脱氧核酶培育I小时。剪切结果表明啮齿动物连接蛋白26mRNA在318-379和493-567碱基区中具有至少两个被脱氧核酶靶向的区。具有单点突变的有缺陷对照脱氧核酶(df351以及df379)表明这样的剪切是特异的。图13示出了反义寡聚物穿透和在培养达I小时的角膜中的稳定性。Cy3标记的寡聚物显示出用普卢兰尼克凝胶传递I小时后的点状核和细胞质粒标记(13A)。在角膜上皮中I小时后，可见的Cy3穿透速度为10-15μm。Taqman标记寡聚物探针用来测量在上皮细胞中的反义寡聚物的稳定性，其中在每个面板显示出向红色的5nm光发射光谱的情况下使用λ扫描(13Β)。完整的Taqman探针显示出荧光共振能量传递，其中TAMRA的红色荧光表示在灰度(13D)上，而断裂产物表示为如从FAM所期望的绿色荧光(也在灰度上示出(13C))。细胞中有效反义寡聚物浓度可以比通过荧光技术可检测的浓度更低。图14描述了不同反义寡聚物对连接蛋白-43(明，灰度)和连接蛋白-26(暗，灰度)蛋白表达的作用通过体外脱氧核酶mRNA剪切显示出来。图14A示出了在基细胞中正常连接蛋白-43的蛋白表达(明，灰度)和在普卢兰尼克凝胶对照处理的角膜上皮的基细胞至中间细胞中连接蛋白-26的蛋白表达(暗，灰度)。asl4(14B)、as769(14D)、as892(14F)(这三个在体外都不表现出脱氧核酶剪切)以及DBl有义对照(14H)寡聚物不影响活体外培养基中两种连接蛋白的表达。as605(14C)、as783(14E)以及DBl(14G)(这三个都表现出积极的体外脱氧核酶剪切)仅在处理的角膜的上皮细胞中表现出特异连接蛋白-43降低。图15示出了连接蛋白-43反义寡聚物选择性地减少在大鼠角膜中的连接蛋白-43蛋白表达。每个点代表单个不同处理的角膜。实心点(黑色，DBl、as605、as783、as885、as953以及asl076)表示当与白色点(DBl有义、asl4、as769以及as892)相比较时，连接蛋白-43表达平均减少36%到85%。通过脱氧核酶三次预测化验预测所有反义寡聚物具有很少或没有作用，表示平均85%到134%的正常连接蛋白-43表达。所有实验都用DBl有义处理的介质连接蛋白-43密度进行取准，并且结果是两个负寡聚物(as769和as892)表现出比DBl有义对照处理更大的连接蛋白-43密度。图16描述了利用实时PCR评价的在用反义或有义寡聚物处理的大鼠角膜中连接蛋白-43mRNA水平的对比。将水平表达为仅普卢兰尼克凝胶处理的角膜的百分数。用体外化验预测为功能性的三种反义寡脱氧核苷酸DBlAs、As605以及As783(黑色条)，将连接蛋白43mRNA表达分别减少到46.8%,44%以及25%的正常(仅凝胶，空白条)水平(#p〈0.001)。对DBl有义对照寡聚物(106%)看不到减少(空白条DBl有义)。在体外脱氧核酶三次预测化验中不表现出Cx43cRNA的任何剪切的As769用作阴性对照(148%)(空白条As769)。图17描述了在用反义或有义(对照)寡聚物处理并利用实时PCR评价的大鼠角膜中连接蛋白26mRNA水平的对比。将水平表达为仅普卢兰尼克凝胶处理的角膜的百分数(仅凝胶空白条)。As330和As375分别将Cx26mRNA表达减少到33%和71%(**ρ〈0.001)(黑色条)。对于Rv330有义寡聚物观察不到减少(109%)(Rv330空白条)。具体实施例方式本发明的实施可使用各种在本领域技术范围内的分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学、核酸化学、以及免疫学的传统技术。这样的技术在文献中进行了全面的解释，并且包括但不限于(仅通过举例的方式)MolecularCloning:ALaboratoryManual,secondedition(Sambrooketal.，1989)和MolecularCloning:ALaboratoryManual,thirdedition(SambrookandRussel,2001),在这里共同地和单独地称为“Sambrook”；01igonucleotideSynthesis(M.J.Gait,ed.,1984)；AnimalCellCulture(R.1.Freshney,ed.,1987)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.ffeir&C.C.Blackwell,eds.)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.Miller&M.P.Calos,eds.,1987)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubeletal.,eds.,1987,包括2001通过的增编)；PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullisetal.,eds.,1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal.,eds.,1991)；TheImmunoassayHandbook(D.Wild,ed.,StocktonPressNY,1994)；BioconjugateTechniques(GregT.Hermanson,ed.,AcademicPress,1996)；MethodsofImmunologicalAnalysis(R.Masseyeff,ff.H.Albert,andN.A.Staines,eds.,ffeinheim:VCHVerlagsgesellschaftmbH,1993),HarlowandLane(1988)Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPublications,NewYork,以及HarlowandLane(1999)UsingAntibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY(在这里共同地和单独地称为HarlowandLane),Beaucageetal.eds.,CurrentProtocolsinNucleicAcidChemistryJohnffiley&Sons,Inc.,NewYork,2000);以及Agrawal,ed.，ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs,SynthesisandPropertiesHumanaPressInc.,NewJersey,1993)。定义在进一步从总体上和用各种非限制性具体实施例来描述本发明之前，提出了在描述本发明的上下文中所使用的一些术语。除非另有说明，当在本文中和所附权利要求中使用时，以下术语具有下述含义。未在下面或说明书中其它地方定义的那些术语具有该
技术领域：
公认的含义。“反义化合物”包括不同类型的分子，这些分子的作用是抑制基因表达、翻译、或起作用，包括那些用于治疗应用的通过mRNA的序列特异靶向起作用的分子。因此反义化合物包括，例如，主要的基于核酸的基因沉默(gene-silencing)分子，如化学修饰的反义寡脱氧核糖核酸(0DN)、核酶以及siRNA(Scherer,L.J.andRossi,J.J.NatureBiotechnol.21:1457-1465(2003)。反义化合物还可包括反义分子如妝核酸(PNA)(Braasch,D.A.andCorey,D.R.,Biochemistry4I,4503-4510(2002)),吗啉代二氨基憐酸酯(morpholinophosphorodiamidate)(Heasman,J.,Dev.Biol.,243,209-214(2002),DNA酶(Schubert,S.etal.,NucleicAcidsRes.31，5982-5992(2003)。Chakraborti，S.andBanerjea,A.C.,Mol.Ther.7,817-826(2003),Santoro,S.ff.andJoyce,G.F.Pr0.NatIAcad.Sc1.USA94,4262-4266(1997)，以及最近开发的5’-端-突变的Ul小核RNA(Fortes,P.etal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA100，8264-8269(2003))。术语“反义序列”指的是具有反义化合物活性的多核苷酸并且包括但不限于(例如)与RNA序列互补或部分互补的序列。因此反义序列包括，例如，包括结合mRNA或其部分以通过核糖体阻断mRNA转录的核酸序列。反义方法通常在本领域中是熟知的。参见，例如，PCT公开W094/12633、以及Nielsenetal.,1991，Science254:1497;01igonucleotidesandAnalogues,APracticalApproach,editedbyF.Eckstein,IRLPressatOxfordUniversityPress(1991)；AntisenseResearchandApplications(1993,CRCPress)。如在本文中所使用的，“信使RNA”不仅包括利用三个字母遗传密码来编码蛋白的序列信息，而且包括相关的形成5’-非翻译区、3’-非翻译区、以及5’-帽区的核糖核苷酸序列，以及形成各种第二结构的核糖核苷酸序列。寡核苷酸可根据本发明来制成，这些寡核苷酸整个或部分靶向任何这些序列。总之，核酸(包括寡核苷酸)可描述为“DNA类似物”卿，具有2’-脱氧糖和(通常)是T而不是U碱基)或“RNA类似物”(即，具有2’-羟基或2’-修饰糖和(通常)U而不是T碱基)。核酸螺旋可采用超过一种类型的结构，最通常是A-和B-型。通常认为具有B-型类似结构的寡核苷酸是“DNA类似物”并且那些具有A-型类似结构的寡核苷酸是“RNA类似物”。术语“互补”通常指的是在容许的盐和温度条件下通过碱基配对的多核苷酸的自然结合。例如，序列“A-G-T”结合互补序列“T-C-A”。在两个单链分子之间的互补性可以是“部分的”，使得只有一些核酸结合，或可以是“完全的”，使得在单链分子之间存在整个互补性。在核酸分子之间的互补程度对它们之间杂交的效率和强度有显著影响。“可杂交”和“互补”是这样的术语，其用来表明足够程度的互补性以致在DNA或RNA靶标和寡核苷酸之间产生稳定的(和)结合。应该理解寡核苷酸不需要100%互补其靶核酸序列就可以杂交，并且还应该理解结合可以是靶标特异性的，或可以结合其它非靶标分子，只要非特异结合不显著或不希望地阻碍治疗的或其它的目标。寡核苷酸用来干扰靶标分子的正常功能，以引起活性丧失或减小(dimunition),并且优选存在足够程度的互补性，以避免在希望特异结合的条件下，即，在体内化验或治疗处理的情形、或体外化验的情形中的生理条件下、在化验进行的条件下，寡核苷酸非特异或不希望地结合非靶标序列。在本发明一些实施例的范围内，不需要完全互补。通常优选具有足够互补性的多核苷酸以在生理条件下形成解链温度高于20°C、30°C、或40V的双链体。“病症”是得益于用本发明的分子或组合物进行治疗的任何状况，包括本文描述或要求的那些状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理状况。使寡核苷酸“靶向”选择的核酸靶标可以是多步过程。该过程可从识别其功能将要调节的核酸序列开始。这可以是(例如)细胞的基因(或由该基因形成的mRNA)，其表达与特殊疾病状态、或来源于感染物的外来核酸(RNA或DNA)有关。靶向过程还可包括在核酸序列内确定用于发生寡核苷酸相互作用的部位或多个部位，以产生所希望的效应，即，蛋白表达的抑制、减少的蛋白检出、或其它活性调节。一旦确定靶位或多个靶位，则选择反义化合物(例如，寡核苷酸)，这些化合物足够地或所希望地互补于靶标，即充分杂交并具有足够的或换句话说所希望的特异性，以产生所希望的调节。在本发明中，靶标包括编码一种或多种连接蛋白的核酸分子。靶向过程还可包括确定发生反义相互作用的部位或多个部位，以产生所希望的效应。优选的基因内部位例如是包括基因的开放阅读框(ORF)的翻译起始或终止密码子的区。翻译起始密码子通常是5’AUG(在转录的mRNA分子中；在相对应的DNA分子中的5’-ATG),并且还可称为“AUG密码子”、“起始密码子”或“AUG起始密码子”。少数基因具有含有RNA序列5’-GUG、5’-UUG或5’-CUG的翻译起始密码子，并且5’_AUA、5’-ACG和5’-CUG已显示出在体内起作用。因此，术语“翻译起始密码子”和“起始密码子”可包括许多密码子序列，即使在每种情况下起始氨基酸通常是蛋氨酸(真核生物中)或甲酰甲硫氨酸(原核生物中)。在本领域中还已知真核生物基因和原核生物基因可具有两种或更多可选的起始密码子，在特定的细胞类型或组织中、或在一组特定条件下，起始密码子的任何一种可优选用于翻译起始。术语“寡核苷酸”包括核苷酸或核苷单体的寡聚物或聚合物，其包括天然存在的碱基、糖以及糖内(主链)结合。术语“寡核苷酸”还包括包含非天然存在的单体、或其部分的寡聚物或聚合物，其功能类似。这样修饰或取代的寡核苷酸通常比天然形式更优选，这是由于诸如提高的细胞摄取、在有核酸酶存在的情况下增高的稳定性、或提高的靶亲合力的性能。已表明许多核苷酸和核苷修饰使得它们加入其中的寡核苷酸比天然寡脱氧核苷酸(ODN)更耐核酸酶消化作用。核酸酶抗性是通过用细胞提取物或分离的核酸酶溶液孵育寡核苷酸并且通常通过凝胶电泳测量经过一段时间残留的完整寡核苷酸的水平来常规地加以测量。为提高其核酸酶抗性而已修饰的寡核苷酸在比未修饰的寡核苷酸可在更长时间内完整存活。还表明许多修饰可增大寡核苷酸与其靶标的结合(亲合力)。寡核苷酸对其靶标的亲合力是通过测量寡核苷酸/靶标对的Tm(解链温度)来常规地加以确定，其中Tm是寡核苷酸和靶标分离的温度。分离是用分光光度法进行检测。Tm越大，寡核苷酸对靶标的亲合力就越大。在一些情形中，提高靶标结合亲合力的寡核苷酸修饰还能够提高核酸酶抗性。“多核苷酸”意思是多个核苷酸。因此，术语“核苷酸序列”或“核酸”或“多核苷酸”或“寡核苷酸”或“寡脱氧核苷酸”都指的是核苷酸的杂聚物或这些核苷酸的序列。这些短语还指可以是单链或双链并且可代表有义或反义链的基因组的或合成起源的DNA或RNA，指肽核酸(PNA)或指任何DNA类似物或RNA类似物。编码连接蛋白、连接蛋白片断、或连接蛋白变异体的多核苷酸包括这样的多核苷酸，其编码:天然发现的连接蛋白的成熟型；天然发现的连接蛋白及附加编码序列(例如，前导序列或信号序列或原蛋白(proprotein)序列)的成熟型；任一种前述和非编码序列(例如，用于天然发现的多肽的成熟型的编码序列的内含子或非编码序列5’和/或3’)；天然发现的连接蛋白的成熟型的片断；以及天然发现的连接蛋白的成熟型的变异体。因此，“编码连接蛋白的多核苷酸”及同类物包括只包含用于希望的连接蛋白、片断、或变异体的编码序列的多核苷酸，以及包含附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。术语“模拟肽(peptidomimetic)”或“模拟物”指的是合成化合物，其可具有大致与本文提供的反义多肽相同的结构和功能特性以及至少部分且在一定程度上模拟连接蛋白特异性的抑制活性。肽类似物通常在制药工业中用作非肽药，这些非肽药具有类似于模板肽药的性质。这些类型的非肽化合物称作“肽模拟物”或“模拟肽”(Fauchere，J.Adv.DrugRes.15:29(1986);VeberandFreidinger;TINS;392(1985);andEvansetal.,J.Med.Chem.30:1229(1987);BeeleyN.,TrendsBiotechnol.1994Jun;12(6):213-6.;Kieber-EmmonsT,etal.;CurrOpinBiotechnol.1997Aug;8(4):435-41)。与治疗有用的妝的结构类似的肽模拟物可用来产生等效或提高的治疗或预防作用。通常，模拟肽结构上类似于范例多肽(paradigmpolypeptide)(即，具有生物学或药理学活性的多肽),如反义多核苷酸，但具有一个或多个肽键，所述肽键可选地由选自由(例如)-CH2NH-,-CH2S-,-CH2-CH2-,-CH=CH-(顺式和反式)、-C0CH2-、-CH(OH)CH2-,以及-CH2SO-组成的组的键代替。该模拟物可以是全部由合成的、非天然的氨基酸的类似物组成，或者是部分天然肽氨基酸和部分氨基酸的非天然类似物的嵌合分子。该模拟物还可包括任何量的天然氨基酸的保守性置换，只要这样的置换还不会实质上改变该模拟物的结构和/或活性。例如，模拟组合物是在本发明的范围内，如果其能够下调连接蛋白的生物活性，如，间隙连接介导的细胞间通讯。术语“组合物”用来包括包含一种或多种成分的产物。术语连接蛋白活性的“调节子”和“调节”(如本文以其各种形式使用的)用来包括对连接蛋白的表达或活性的整体或部分抑制。这样的调节子包括连接蛋白功能或表达的小分子激动剂和拮抗剂、反义分子、核酶、三股螺旋分子(triplexmolecule)、以及RNAi多核苷酸、基因治疗方法、以及其它。短语“同一'丨生百分数(percentidentity)(%)”指的是在两个或更多序列的对比中发现的序列类似性的百分数。同一性百分数可利用任何合适的软件用电子仪器来确定。同样，在两个序列(或它们其中的一个或两个的一个或多个部分)之间的“类似性”是通过将一个序列的序列与第二个序列进行对比来确定。通过“药学上可接受的(药用)”的意思是，例如，与配方的其它成分相容并且适合给予其接受体的载体、稀释剂或赋形剂。通常，术语“蛋白质”指的是通过肽键连接的两个或多个单独的氨基酸(无论是否天然存在)的任何聚合物，当结合到一个氨基酸(或氨基酸残基)的α-碳的羧酸基团的羧基碳原子共价结合到氨基基团(其结合于相邻氨基酸的α-碳)的氨基氮原子时发生。这些肽键键合、以及包括它们的原子(即，α-碳原子、羧基碳原子(以及它们的取代基氧原子)、以及氨基氮原子(以及它们的取代基氢原子))形成蛋白质的“多肽主链”。另外，如在本文中所使用的，术语“蛋白质”应理解为包括术语“多肽”和“肽”(有时其可在本文中互换使用)。同样地，蛋白质片断、类似物、衍生物、以及变异体本文中可称为“蛋白质”，并且除非另有说明，应视为“蛋白质”。术语蛋白质的“片断”指的是包括比蛋白质的所有氨基酸残基更少的多肽。如同将要理解的，蛋白质的“片断”可以是在氨基末端、羧基末端、和/或在其内部(如通过天然剪接)截短的蛋白质形式，并且还可以是变异体和/或衍生物。蛋白质的“域”也是片断，并且包括要求赋予相应于天然存在的蛋白质的生物化学活性的蛋白质的氨基酸残基。截短的分子，其是直链生物聚合物如核酸分子或多肽，可具有一个或多个从分子的其中一个末端的缺失和/或一个或多个从分子的非端区的缺失，其中这样的缺失可以是约1-1500个邻近核苷酸或氨基酸残基的缺失，优选约1-500个邻近核苷酸或氨基酸残基的缺失，并且更优选约1-300个邻近核苷酸或氨基酸残基的缺失，包括约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31-40、41-50、51-74,75-100,101-150,151-200,201-250或251-299个邻近核苷酸或氨基酸残基的缺失。术语“严格条件”指的是允许多核苷酸之间杂交的条件。严格条件可通过盐浓度、有机溶剂(例如甲酰胺)的浓度、温度、以及其它本领域已知的条件来定义。严格性可通过减少盐的浓度、增大有机溶剂(例如甲酰胺)的浓度、或者升高杂交温度来提高。例如，严格的盐浓度通常低于约750mMNaCl和75mM柠檬酸三钠，优选低于约500mMNaCl和50mM柠檬酸三钠，并且最优选低于约250mMNaCl和25mM柠檬酸三钠。低严格性杂交可在没有有机溶齐IJ(例如甲酰胺)存在的情况下实现，而高严格性杂交可在有机溶剂(例如，至少约35%甲酰胺，最优选至少约50%甲酰胺)存在的情况下实现。严格的温度条件通常包括至少约30°C的温度，更优选至少约37°C的温度，并且最优选至少约42°C的温度。变动其它参数，例如，杂交时间、去污剂(例如，十二烷基硫酸钠(SDS))的浓度、以及包含或不包含载体DNA，对本领域技术人员来说是熟知的。严格性的各种水平是通过组合这些所需的各种条件来完成，并且在本领域技术人员已知的范围内。严格的杂交条件还可通过在低于靶标序列和对于该靶标具有精确或接近精确互补性的探针的解链温度(Tm)约5°C到约20°C或25°C范围内的条件来限定。如在本文中所使用的，解链温度是双链核酸分子群半解离成单链的温度。用于计算核酸的Tm的方法在本领域中是熟知的(参见,例如,BergerandKimmel,1987,MethodsInEnzymology,Vol.152:GuideToMolecularCloningTechniques,SanDiego:AcademicPress,Inc.andSambrooketal.,(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEd.,Vols.1-3,ColdSpringHarborLaboratory)。如由标准参考文献表明的，当核酸在IMNaCl的水溶液中时，Tm值的简单估计可通过等式来计算:Tm=81.5+0.41(%G+C)(参见，例如，AndersonandYoung,“QuantitativeFilterHybrization，，inNucleicAcidHybridization(1985))。杂交物的解链温度(并且由此的严格杂交的条件)受各种因素的影响，诸如探针的长度和性质(DNA、RNA、碱基组成)以及靶标的性质(DNA、RNA、碱基组成、存在于溶液中或固定的等)、以及盐和其它组分的浓度(例如，存在或缺少甲酰胺、硫酸葡聚糖、聚乙二醇)。这些因素的影响在本领域中是熟知的并且在标准参考文献中进行了讨论，参见例如，Sambrook,见前，以及Ausubel,见前。通常，严格的杂交条件是:盐浓度低于约1.0M钠离子，通常在ρΗ7.0到8.3时约0.01到1.0M钠离子，以及对于短探针(例如，10到50个核苷酸)温度至少约30°C而对于长探针(例如，大于50个核苷酸)温度至少约60°C。正如所指出的那样，严格条件还可用诸如甲酰胺的去稳定剂的加入来实现，在该情形中可使用较低温度。在本发明中，多核苷酸可以是这样的多核苷酸，其在中等至较高的严格性的条件下如0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠、并在约50到约60°C摄氏度下杂交到连接蛋白mRNA。术语“有效治疗量”意思是所讨论的(subject)化合物的量，其将引起所希望的反应，例如，组织、系统、动物或人类的生物或药物反应，而这是，例如，由研究人员、兽医、医生、或其它临床医生所寻找的。“治疗”指的是治疗处理和预防或保护措施。那些需要治疗的患者包括那些已患有病症的患者以及那些需要防止病症的患者。术语“载体”是指核酸分子扩增、复制、和/或表达载体，其形式为质粒、噬菌体、病毒、或其它系统(天然存在的或合成的)，用于将核酸传递到细胞，其中质粒、噬菌体、或病毒可以借助细菌、酵母菌、无脊椎动物、和/或哺乳动物宿主细胞起作用。载体可保持独立于宿主细胞基因组DNA的状态或可整体或部分地和基因组DNA结合起来。载体通常(但不需要)含有所有必要组分，以便在任何其相容的宿主细胞中起作用。“表达载体”是在适当条件下能够引导外源多核苷酸(例如编码连接域融合蛋白(bindingdomainfusionprotein)的多核苷酸)表达的载体。如在本文中所描述的，术语“同源和同源物”包括可以是连接蛋白多核苷酸中的序列的同源体的多核苷酸(例如，mRNA)ο这样的多核苷酸通常与相关序列具有至少约70%的同源性，优选至少约80%、90%、95%、97%或99%的同源性，例如，超过(同源序列的)至少约15、20、30、40、50、100个更多相邻的核苷酸的区。同源性可基于本领域的任何方法加以计算。例如，UWGCG包提供了可用来计算同源性(例如，根据默认设置使用)的BESTFIT程序(Devereuxetal.(1984)NucleicAcidsResearchl2,p387_395)。PILEUP和BLAST算法可用来计算同源性或校正(lineup)序列(通常基于其默认设置)，例如在AltschulS.F.(1993);JMolEvol36:290-300;Altschul,S.F.etal.;(1990);JMolBiol215:403-10中所描述的。用于进行BLAST分析的软件通过国家生物技术信息中心可公开获得(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/L)。该算法涉及首先通过在查询序列中确定短字长(wordoflength)W来确定高得分序列对，当在数据库序列中对准(alignwith)相同长度的字时,其匹配或满足某一正值阈值得分(score)T。T称为邻域字得分阈值(neighborhoodwordscorethreshold)(Altschuletal.,见前)。这些初始邻域字命中(wordhit)作为用来启动搜索以找到含有它们的HSPs的种子(seed)。字命中沿着每个序列向两个方向延伸直到可增加累积对准得分(alignmentscore)。字命中在每个方向的延伸会停止，当:累积对准得分从其最大获得值下降量X;累积得分趋于零或以下，这是由于一个或多个负得分残基排列的累积；或其中一个序列到达端点时。BLAST算法参数W、T以及X确定对准的灵敏度和速度。BLAST程序使用字长(W)为11、BL0SUM62得分矩阵(参见HenikoffandHenikoff(1992)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:10915-10919)对准(B)为50、期望值(E)为10、M=5、N=4、以及两种链的对比)作为默认。BLAST算法对两个序列之间的相似性进行统计分析；参见例如，KarIinandAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:5873-5787。BLAST算法提供的一种相似性测量是最小求和概率(P(N))，其提供概率读数，两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配通过该概率读数偶尔发生。例如，如果与第一个序列相比最小求和概率小于约1，优选小于约0.1，更优选小于约0.01，并且最优选小于约0.001，那么就认为序列与另一个序列相似。同源序列通常与相关序列相差至少(或不多于)约1、2、5、10、15、20或更多突变(其可以是替换、缺失或插入)。这些突变可通过任何上述与计算同源性有关的区来测量。同源序列通常以显著高于背景的水平选择性地杂交到初始序列。选择性的杂交通常利用中等到高度严格性条件(例如，约50°C到约60°C，0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠)来实现。但是，这样的杂交可在本领域已知的任何合适条件下进行(参见Sambrooketal.(1989),MolecularCloning:ALaboratoryManual)。例如，如果需要高严格性，那么合适条件就包括在60°C下的0.2xSSC0如果需要较低严格性，那么合适条件就包括60°C下的2xSSC0“细胞”意思是任何适用于所希望的应用的活细胞。细胞包括真核细胞和原核细胞。术语“基因产物”指的是从基因转录的RNA分子、或由基因编码的或从RNA翻译的多肽。术语“重组”是指:体外合成或以其它方式生成的多核苷酸(例如，“重组多核苷酸”)；利用重组多核苷酸来在细胞中或其它生物系统中生产基因产物的方法；或由重组多核苷酸编码的多肽(“重组蛋白”)。因此，“重组的”多核苷酸通过其生产的方法或者其结构来定义。关于其生产方法，该过程指的是使用重组核酸技术，例如，涉及人为介入到核苷酸序列中，通常为选择或生成。可替换地，其可以是通过生成序列而形成的多核苷酸，该序列包括两个或多个不是相互天然邻接的片断的融合。因此，例如，包括通过用任何非天然存在的载体转化细胞而形成的产物，也包括包含利用任何合成寡核苷酸过程衍生的序列的多核苷酸。同样地，“重组的”多肽是从重组多核苷酸表达的一种。“重组宿主细胞”是包含载体(例如，克隆载体或表达载体)的细胞、或通过重组技术用其它方法已加以操作以表达感兴趣的蛋白的细胞。本发明包括利用化合物和组合物对用于伤口愈合(例如，手术相关的伤口愈合和/或组织重建应用)的间隙连接相关的蛋白表达进行部位特异性调节的方法。本发明可用于，例如，连同激光手术矫正视觉缺陷、体外角膜工程(engineering)、以及在希望进行角膜重建处直接眼处理，包括那些独立进行的眼处理或可选地，连同对眼进行的操作(例如，手术)的眼处理。直接细胞间通讯的反义调节优选通过直接地或间接地减少组织中细胞之间的偶连的分子加以介导。这样的分子包括诸如反义脱氧核苷酸的多核苷酸、吗啉代核苷酸、RNAi以及靶向特定连接蛋白同种型(isoform)的脱氧核酶，其导致减少的蛋白质同种型的翻译并且干扰细胞间隙连接的功能。这些反义化合物的施加导致间隙连接介导的细胞间通讯在连接蛋白表达被下调的部位减少。连接蛋白在间隙连接介导的细胞间信号传递中起重要作用。连接蛋白的过度表达与术后瘢痕形成和外伤后引起的组织重建(remodeling)有关。根据本发明的一些实施例，连接蛋白代表有用的靶，该靶用于与角膜外伤和术后组织重建有关的不良作用的处理；以及用于这样的疾病和病症，其中直接的细胞间通讯中局部破坏是希望的。尤其是，连接蛋白表达的调节可用于间隙连接相关的蛋白质表达(其用于组织重建/组织工程应用)的部位特异性调节。本文提供的反义化合物可与眼科操作或手术(如，例如，白内障手术、眼内晶状体手术、角膜移植手术和一些类型的青光眼手术、以及其它在本文中描述的操作)结合，用于连接蛋白的调节。在一些实施例中，连接蛋白的调节可用于影响后段(包括视网膜和晶状体)的眼科病症。在本发明的另一方面，连接蛋白的调节可用于影响前段(包括角膜、结膜以及巩膜)的眼科病症。在本发明的范围内，后段病症包括黄斑裂孔和变性、视网膜撕裂、糖尿病视网膜病变、玻璃体视网膜病变以及其它病症。还是在本发明的范围内，晶状体的病症可以包括白内障。在又一个方面，可以设想，角膜的病症是屈光病症，如放射状角膜切开术的后遗症、干眼症、病毒性结膜炎、溃疡性结膜炎和伤口愈合中的瘢痕形成，如，角膜上皮伤口，以及舍格伦综合症的后果。本发明披露了反义化合物，尤其是寡核苷酸，用于调节编码连接蛋白的核酸分子的功能，最后调节产生的连接蛋白的量。这是通过提供特异性地与编码连接蛋白的核酸(优选mRNA)杂交的寡核苷酸来完成。这种在诸如寡核苷酸的反义化合物和其互补核酸靶标(寡核苷酸与其杂交)之间的关系通常称为“反义”。如在本文中所描述的，寡核苷酸“靶向”选择的核酸靶标通常是多步过程。该过程通常从确定其功能需要调节的核酸序列开始。例如，这可以是其表达与具体疾病状态有关的细胞基因(或由该基因形成的mRNA)。在本发明中，靶标是编码连接蛋白的核酸；换句话说，编码连接蛋白的基因、或从连接蛋白基因表达的mRNA。编码连接蛋白的mRNA是当前优选的靶标。靶向过程还包括核酸序列内用于发生反义相互作用的部位或多个部位的确定，以便形成基因表达的调节。在本发明的范围内，信使RNA不仅包括利用三个字母遗传密码编码蛋白质的信息，而且包括有关的核糖核苷酸，其形成技术人员已知的区，如5’-非翻译区、3’-非翻译区、5’-帽区，以及内含子/外显子连接核糖核苷酸。因此，寡核苷酸可根据本发明来制成，其整个或部分地靶向这些相关核糖核苷酸以及靶向信息核糖核苷酸。寡核苷酸因此可特异性地与转录起始部位区、翻译起始密码子区、5’帽区、内含子/外显子连接、编码序列、翻译终止密码子区或在5’-或3’-非翻译区中的序列杂交。由于翻译起始密码子通常是5’-AUG(在转录的mRNA分子中；在相对应的DNA分子中的5’-ATG)，翻译起始密码子也称为“AUG密码子”、“起始密码子”或“AUG起始密码子”。少量基因具有含有RNA序列5’-GUG、5’-UUG或5’-CUG的翻译起始密码子，而5’-AUA、5’-ACG以及5’-CUG已表明在体内起作用。因此，术语“翻译起始密码子”和“起始密码子”可包括许多密码子序列，即使在每种情况下起始氨基酸通常是蛋氨酸(真核生物中)或甲酰甲硫氨酸(原核生物中)。本领域中还已知真核生物基因和原核生物基因可具有两个或多个可替换的起始密码子，其中任何一个可优选用于特定的细胞类型或组织中、或在特定的一组条件下的翻译起始。在本发明的范围内，“起始密码子”和“翻译起始密码子”指的是密码子或多个密码子，这些密码子在体内用来引发转录自编码连接蛋白的基因的mRNA分子的翻译，而与这样的密码子的序列无关。本领域中还已知，基因的翻译终止密码子(或“终止密码子”)可具有三个序列(即，5’-UAA、5，-UAG以及5’-UGA，其相对应的DNA序列分别是5’-TAA、5’-TAG以及5’-TGA)中的一个。术语“起始密码子区”、“AUG区”以及“翻译起始密码子区”指的是这样的mRNA或基因的一部分，其在自翻译起始密码子的每个方向(即，5’或3’)包括约25个到约50个相邻核苷酸。该区是优选的靶标区。同样地，术语“终止密码子区”和“翻译终止密码子区”指的是这样的mRNA或基因的一部分，其在自翻译终止密码子的每个方向(即，5’或3’)包括约25个到约50个相邻核苷酸。该区是优选的靶标区。本领域已知的开放阅读框(ORF)或“编码区”指的是在翻译起始密码子和翻译终止密码子之间的区，其也是可以有效靶向的区。其它优选的靶标区包括本领域已知的5’非翻译区(5’UTR)，其指的是在5’方向上从翻译起始密码子开始的mRNA的部分，因此包括在mRNA的5’帽部位和翻译起始密码子之间的核苷酸或在基因上相对应的核苷酸，以及本领域已知的3’非翻译区(3’UTR)，其指的是在3’方向上从翻译终止密码子开始的mRNA的部分，因此包括在mRNA的翻译终止密码子和3’末端之间的核苷酸或在基因上相对应的核苷酸。mRNA的5’帽包括通过5’-5’三磷酸键(triphosphatelinkage)连接到mRNA的5’-多数(most)残基的N7-甲基化的鸟嘌呤核苷残基。认为mRNA的5’帽区包括5’帽结构本身以及接近该帽的最初50个核苷酸。5’帽区也可以是优选的靶标区。尽管一些真核细胞的mRNA转录物被直接翻译，但是许多含有一个或多个区(称为“内含子”)，其从mRNA前体转录物被切除而产生一个或多个成熟mRNA。残留的(并因此被翻译)区称为“外显子”，并且被剪接在一起而形成连续的mRNA序列。mRNA剪接部位(B卩，外显子之间或内含子一外显子的连接部)也可以是优选的靶标区，并且在下述情况下是特别有用的:在疾病中涉及异常剪接、或在疾病中涉及特定mRNA剪接产物的过度产生。起因于重排或缺失的异常融合连接也是优选的靶标。在可选的剪接的mRNA中靶向特定外显子也可以是优选的。还发现内含子也可以是有效的，并因此是优选的反义化合物靶向的靶标区，例如,靶向DNA或mRNA前体。在本发明的范围内，反义多核苷酸可例如杂交到全部或部分的连接蛋白mRNA。通常，反义多核苷酸杂交到连接蛋白mRNA的核糖体结合区或编码区。多核苷酸可以互补于连接蛋白mRNA的全部或一个(或几个)区。例如，多核苷酸可以是连接蛋白mRNA的全部或部分的精确互补结构(complement)。反义多核苷酸可抑制连接蛋白的转录和/或翻译。优选地，该多核苷酸是连接蛋白基因的转录和/或翻译的特异性抑制剂，并且不会抑制其它基因的转录和/或翻译。该产物可结合到连接蛋白基因或mRNA或者(i)5’到编码序列，和/或(ii)到编码序列，和/或(iii)3’到编码序列。通常，反义多核苷酸会引起细胞中连接蛋白mRNA和/或蛋白的表达减少。反义多核苷酸对于连接蛋白mRNA通常是反义。这样的多核苷酸可以能够杂交到连接蛋白mRNA并且可通过干扰连接蛋白mRNA代谢(包括转录、mRNA加工、mRNA从细胞核的转运、翻译或mRNA降解)的一个或多个方面来抑制连接蛋白的表达。反义多核苷酸通常杂交到连接蛋白mRNA，以形成一种双链体，其可引起mRNA的翻译的直接抑制和/或去稳定化。这样的双链体可容易受到核酸酶降解的影响。反义寡核苷酸与mRNA的杂交会干扰mRNA的一个或多个正常功能。要干扰的mRNA功能包括所有生命必需的功能，如，例如，mRNA移位到蛋白质翻译的部位、从RNA翻译蛋白质、RNA的剪接以产生一个或多个mRNA种类，以及可由RNA参加的催化活性。也可通过反义寡核苷酸杂交到RNA来干扰特定蛋白与RNA的结合。对mRNA功能进行干扰的总体作用是调节连接蛋白的表达。在本发明的范围内，“调节”包括抑制或者刺激；即，或者降低或者增加表达。这种调节可用本领域的常规方式加以测量，例如，通过mRNA表达的RNA印迹(Northernblot)实验、或反转录酶PCR(如在本申请的实施例中讲述的)、或通过蛋白质表达的蛋白质印迹实验或ELISA、或通过蛋白质表达的免疫沉淀实验。对细胞增殖或肿瘤细胞生长的影响也可以加以测量，如在本申请的实施例中讲述的。目前抑制是优选的。一旦确定了靶位或多个靶位，则选择与靶标足够互补的寡核苷酸，S卩，足够良好地杂交并且具有足够的特异性，以获得所希望的调节。反义核酸(DNA、RNA、修饰的、类似物等)可利用任何适合用来产生核酸的方法来制成。靶向其它连接蛋白的寡脱氧核苷酸可根据它们的核苷酸序列并通过任何本领域公认的方法(如，例如，计算机程序MacVector和OligoTech(来自Oligosetc.Eugene,Oregon,USA))加以选择。用于这样的合成的装置可通过几个包括MacVector和OligoTech(来自Oligosetc.Eugene,Oregon,USA)的卖主获得。对于涉及反义多核苷酸的一般方法，参见AntisenseRNAandDNA,D.A.Melton,Ed.,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1998)。还参见Dagleetal.,NucleicAcidsResearch,19:1805(1991)。对于反义治疗，参见，例如，Uhlmannetal.，Chem.Reviews,90:543-584(1990)。通常，至少部分核苷酸序列对于连接蛋白是已知的，其中抑制表达是所希望的。优选地，反义化合物被靶向一个或多个特定连接蛋白同种型。可能由反义化合物靶向的连接蛋白的特定同种型包括但不限于43、37、31.1、26、以及在本文描述的其它连接蛋白的同种型。优选(但不必需)靶向的连接蛋白是人类的。连接蛋白可(例如)具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列。在一些实施例中，反义化合物靶向编码连接蛋白的核酸分子的至少8个核酸碱基，其中该核酸分子具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列。在一些其它实施例中，将第二反义化合物给予患者的眼，其中第二反义化合物靶向编码连接蛋白的核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中该核酸分子具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列，其中所述第二反义化合物靶向不同于第一反义化合物靶向的连接蛋白。连接蛋白靶标依赖于要设计或重建的组织类型而变化，并且本发明使用的反义多核苷酸的精确序列依赖于靶标连接蛋白。由寡核苷酸靶向的连接蛋白或多种连接蛋白依赖于要进行下调的部位。这反映了就连接蛋白亚单位组成而论在整个身体(body)的不同部位间隙连接具有不均匀的组成。但是依据在组织中的分布，一些连接蛋白比其它连接蛋白更加普遍存在。如本文所描述的，诸如连接蛋白-43的角膜相关连接蛋白在一些实施例中是优选的。因此，在本发明的范围内，寡核苷酸单独或者组合地靶向适合于角膜设计或重建应用的连接蛋白43、26、37、30和/或31.1(例如，参见SEQ.1D.N0S:1-11)。在本发明的一个方面，该寡脱氧核苷酸可以是未修饰的磷酸二酯寡聚物。在本发明的另一方面，该多核苷酸可以是单链或双链。还设想靶向分开的连接蛋白的寡核苷酸可组合使用(例如，可以靶向一种、两种、三种、四种或更多不同的连接蛋白)。例如，可以组合使用靶向连接蛋白43、以及一种或多种连接蛋白家族的其它成员(如连接蛋白26、30、31.1、37以及43)的0DN。还设想单个反义多核苷酸对于特定连接蛋白可以是特异的，或可靶向1、2、3或更多不同的连接蛋白。特异多核苷酸通常将靶向连接蛋白基因或mRNA中的序列，其在连接蛋白之间不是保守的，而非特异多核苷酸将靶向保守序列。因此，在一些实施例中，反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中该核酸分子编码人类连接蛋白26、连接蛋白30、连接蛋白31.1、人类连接蛋白37、连接蛋白43，其中，所述反义化合物在与患者眼有关的细胞中抑制人类连接蛋白的表达。在一些实施例中，编码连接蛋白的核酸分子具有选自SEQIDN0:12-31的核酸碱基序列。在一些实施例中，该组合物靶向两种或多种人类连接蛋白并且抑制两种或多种人类连接蛋白的表达。在另外的一些实施例中，反义化合物是反义寡核苷酸。针对连接蛋白43选择的典型的反义寡核苷酸包括GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO:1);GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO:2);以及GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT(SEQIDNO:3)。针对连接蛋白26的反义寡核苷酸的实例具有序列TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA(SEQIDNO:4)针对连接蛋白37选择的典型的反义寡核苷酸包括5’CATCTCCTTGGTGCTCAACC3’(SEQIDNO:5)和5’CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3’(SEQIDNO:6)针对连接蛋白30选择的典型的反义寡核苷酸包括5’CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3’(SEQIDNO:7)和5’TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3’(SEQIDN0:8)。针对连接蛋白31.1选择的典型的反义寡核苷酸包括5’CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC3’(SEQIDNO:9);5’AGAGGCGCACGTGAGACAC3’(SEQIDNO:10);以及5’TGAAGACAATGAAGATGTT3’(SEQIDNO:11)。在另外的实施例中，选自以下序列的寡脱氧核苷酸特别适合于下调连接蛋白43表达:5’GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC3’(SEQIDNO:1)5’GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC3’(SEQIDNO:2);以及5，GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT3’(SEQIDNO:3)在又一个实施例中，选自以下序列组的寡脱氧核苷酸特别适合于连接蛋白26、37、30、以及31.1:5，TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA3，(连接蛋白26)(SEQIDNO:4)5，CATCTCCTTGGTGCTCAACC3，(连接蛋白37)(SEQIDNO:5)5，CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3，(连接蛋白37)(SEQIDNO:6)5，CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3’(连接蛋白30)(SEQIDNO:7)5’TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3’(连接蛋白30)(SEQIDNO:8)5，CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC3，(连接蛋白31.1)(SEQIDN0:9)5，AGAGGCGCACGTGAGACAC3，(连接蛋白31.1)(SEQIDNO:10)5，TGAAGACAATGAAGATGTT3，(连接蛋白31.1)(SEQIDNO:11)本文提供的反义化合物通常包括约8到约40个核酸碱基(即，约8到约40个连接的核苷)，并且更典型地，包括约12到约40个核酸碱基，并且甚至更典型地，包括约30个核酸碱基。包含多核苷酸的反义化合物可以是至少约40，例如至少约60或至少约80个核苷酸的长度并且高达100、200、300、400、500、1000、2000或3000或更多个核苷酸的长度。适合的反义化合物包括，例如,30mer0DN。在一些实施例中，反义化合物靶向编码连接蛋白的核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列。在其它实施例中，反义化合物靶向编码连接蛋白的核酸分子的至少约10、至少约12、至少约14、至少约16、至少约18、至少约20、至少约25、至少约30、以及至少约35个核酸碱基，其中核酸分子具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列。反义化合物(包括靶向编码人类连接蛋白的核酸分子的至少在约8个和35个核酸碱基之间的寡核苷酸)的大小可以是8个核酸碱基的长度或更长，在8个到100个核酸碱基之间、在8个到50个核酸碱基之间、在8个到40个核酸碱基之间、在10个到50个核酸碱基之间、在12个到50个核酸碱基之间、在14个到50个核酸碱基之间、在16个到50个核酸碱基之间、在18个到50个核酸碱基之间、在20个到50个核酸碱基之间、在25个到50个核酸碱基之间、在15个到35个核酸碱基之间等的长度。本发明的其它反义化合物可以是更短或更长的大小，例如，具有大于100个核酸碱基的长度。反义化合物包括反义寡核苷酸(0DN)、反义多核苷酸、脱氧核酶、吗啉代寡核苷酸、RNAi分子或其类似物、siRNA分子或其类似物、PNA分子或其类似物、DNA酶或其类似物、5’-端-变突的Ul小核RNA及其类似物。如本文所提供的，反义化合物可以包括使用寡脱氧核苷酸(0DN)。ODN通常是约20个核苷酸的长度并且通过杂交到mRNA前体和mRNA来起作用，以产生核糖核酸酶H(RNA酶H)的底物，其特异性地降解形成的RNA-DNA双链体的RNA链。如果以一种阻止RNA酶H作用的方式进行修饰，那么ODN可通过位阻来抑制mRNA的翻译、或抑制mRNA前体的剪接。ODN及其修饰已用于靶向dsDNA以通过形成三股螺旋而抑制转录。ODN可通过本领域已知的自动合成的方法来获得并且其相对更直接地获得任何序列的ODN并通过反义碱基配对来阻断基因表达。在一些方面，ODN的磷酸二酯主链可加以修饰以增加其作为用于阻断基因表达的靶标特异性试剂的效能。开发了这些主链修饰以提高ODN的稳定性并且提高它们的细胞摄取。最广泛使用的修饰是这样一种修饰，其中用硫原子代替非桥接氧，从而形成硫代磷酸酯(phosphorothioate)ODNo至少一种硫代磷酸酯ODN已由FDA批准,并且几种其它硫代磷酸酯反义ODN处于用于各种癌症和炎性疾病的临床试验的早期阶段。ODN关于阻断基因功能的作用机制依赖于ODN的主链而变化(Branch,A.D.Hepatology24,1517-1529(1996);Dias,N.andStein,C.A.Mol.CancerThor.1,347-355(2002);Stein,C.A.andCohen,J.S.,CancerRes.48,2659-2668(1998);Zon,G.Ann.N.Y.AcadSc1.，616，161-172(1990))。净负电荷的ODN(如磷酸二酯和硫代磷酸酯)弓丨起RNA酶H-介导的祀标mRNA的剪切。不补充(recruit)RNA酶H(因为其缺少电荷或与靶标RNA形成的螺旋的类型)的其它主链修饰可归类为位阻ODN0常用的这种后一组的成员包括吗啉代、U-O-甲基、2”-0_烯丙基、锁定的(locked)核酸和肽核酸(PNA)。在其它抑制靶标中，这些ODN可阻断剪接、翻译、核-细胞质传送和翻译。在另一方面，连接蛋白表达的调节涉及核酶的使用。核酶是用作酶(即使完全缺少蛋白质)的RNA分子。它们具有特别专一的断裂和/或形成共价键的催化活性，从而加速靶向反应的自发速率达许多数量级。核酶通过Watson-Crick碱基配对结合RNA并通过催化磷酸二酯主链的水解而用于降解靶标RNA。有几种不同类的核酶，其中‘锤头状’核酶研究得最为广泛。如同其名称所暗示的，当杂交到其靶标mRNA时，锤头状核酶形成独特的二级结构。核酶内的催化上重要的残基在靶标互补序列的侧面，该靶标互补序列在靶标RNA剪切部位的侧面。由核酶进行的剪切需要二价离子，如镁离子，并且也依赖于靶标RNA的结构和可接近性。通过利用定位信号将核酶协同定位到细胞内的靶标RNA可以在很大程度上增加它们的沉默效能。锤头状核酶足够短而可以被化学合成或可从载体进行转录，使得在细胞内可以连续产生核酶。RNA用作催化剂的能力首先在四膜虫嗜热细菌(Tetrahymenathermophila)的自剪接I组内含子以及RNA酶的RNA部分得到证明。在发现这两种RNA酶之后，发现RNA介导的催化作用与酵母菌、真菌以及植物线粒体(以及叶绿体)单链植物类病毒和拟病毒RNA、δ型肝炎病毒以及来自粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)线粒体的卫星RNA的自剪接II组内含子有关。核酶天然存在，但也可进行人工设计用于顺式(在同一核酸链上)或反式(非共价连接的核酸)的特异序列的表达和靶向。利用体外选择方案正开发新生物化学活性以及产生在不同于RNA的底物上起作用的新核酶基序。四膜虫嗜热细菌(T.thermophila)的I组内含子是被转化成反式反应形式的第一顺式剪切核酶(我们称其为内含子/核酶)，使其可用于基因组研究并且作为可能的治疗法。在反式剪接反应中，靶向的mRNA的缺陷型外显子可交换成正确的共价连接到内含子/核酶的外显子。这通过剪接反应发生，在剪接反应中，连接到内含子的外显子是通过碱基配对定位到靶标mRNA，以便在酯交换反应中其可共价结合到靶标转录物的5”端。这个反应已用于将野生型序列反式剪接到镰状细胞球蛋白转录物和突变型P53转录物中并替换在强直性肌营养不良等位基因中的蛋白激酶转录物的3”-UTR中的展开的三联体。在整个自然界的有机体中发现了核糖核酸酶内切酶(endoribonuclease)RNA酶P。依赖于从其分离的有机体，这种酶具有RNA和一个或多个蛋白质组分。来源于大肠杆菌和枯草杆菌酶的RNA组分在缺少蛋白质并在(trader)—定盐和离子条件下可用作部位特异性剪切剂。对于人类和细菌酶的底物要求的研究已表明，用于任何一种酶的最小限度的底物类似转移RNA分子的片断。这种结构可通过专门设计的与靶标RNA配对的反义RNA加以模拟，并在试管和细胞中用作RNA酶P-介导的、部位特异性剪切的底物。还表明，反义组分可共价结合到RNA酶PRNA,从而仅将酶引向感兴趣的靶标RNA。研究人员在反义RNA的设计中利用了这种性能，其中反义RNA与感兴趣的靶标mRNA配对以激发靶标的部位特异性剪切并在细胞培养中用于单纯疱疹病毒和巨细胞病毒的靶向抑制。大量小植物病原RNA(类病毒、卫星RNA以及拟病毒)、来自粗糙脉孢菌(N.crassa)线粒体的DNA质粒的转录物以及动物δ型肝炎病毒在缺少蛋白质的情况下经历体外自剪切反应。该反应需要中性pH和Mg2+。自剪切反应是复制的体内滚环(rollingcircle)机制的组成部分。这些自剪切RNA可根据剪切部位附近形成的序列和二级结构细分成若干组。小核酶来源于在单链植物类病毒和拟病毒RNA中发现的基序。基于共享的二级结构和保守的一组核苷酸，术语“锤头状”已指定给这种自剪切域的一个组。锤头状核酶包括30个核苷酸。锤头状催化域的简单性使其成为在反式作用核酶的设计中的常见选择。利用Watson-Crick碱基配对，可将锤头状核酶设计成能够剪切任何靶标RNA。在剪切部位的要求相对简单，并且实际上可靶向任何UH序列基序(这里H是U、C或A)。第二种来自植物的、自剪切基序(在烟草环斑卫星RNA的负链中最初确定的)称为“发夹”或“纸夹”。发夹核酶在产生2”、Y-环状磷酸酯以及5”-羟基Tl末端的可逆反应中剪切RNA底物一这种催化性基序的设计变型(engineeredversions)也剪切并且翻转(turnover)各种反式靶标的多份复制。用于发夹的底物要求包括⑶C，其中紧接着G的上游发生剪切。发夹核酶还催化连接反应，尽管其更经常用于剪切反应。在细胞中锤头状和发夹状核酶都有大量的应用，用于下调特定的细胞和病毒靶标。Haseloff和Gerlach设计了锤头状基序(HaseloffandGerlach;Nature.1988Augl8;334(6183):585-91),该基序通过修饰具有正确靶标的碱基对的臂而可以用来剪切任何靶标。Ramemzani等证明了这种锤头状核酶基序在研究中具有潜在的治疗应用，其中，利用设计用来表达抗人类免疫缺陷病毒(HIV)gag核酶的细胞，实际上完全抑制病毒基因表达和复制(RamezaniA.etal.,FrontiersinBioscience7:a,29-36;2002)。在另一方面，连接蛋白表达的调节涉及催化性DNA(或DNA酶)的使用。通过体外演变已开发了能够部位特异性地剪切RNA靶标的小DNA(因为没有已知的天然存在的DNA酶)。已确定了具有不同剪切部位特异性的两种不同的催化性基序。最通常使用的10-20种酶通过Watson-Crick碱基配对结合到其RNA底物并部位特异性地剪切靶标RNA，如同锤头状和发夹核酶所做的那样，这产生2;3”_环状磷酸酯和5”-OH末端。靶标mRNA的剪切导致其破坏和DNA酶再循环并且剪切多个底物。催化性DNA对于合成来说相对廉价并且具有优良催化性质，使其用于取代反义DNA或核酶。已公布了在细胞培养中DNA酶的若干应用，包括VegFmRNA的抑制和血管生成的后续预防、以及慢性髓细胞源性(myelogenous)白血病的特征的bcr/abl融合转录物的表达抑制。催化性DNA可以外源传递，并且它们可以加以主链修饰以便在缺少载体的情况下优化系统传递。在本发明的另一方面，组成型连接蛋白基因的调节涉及具有吗啉代主链结构的寡核苷酸的使用。Summerton,J.E.和Weller,D.D的美国专利第5，034，506号。在本发明的另一方面，反义多核苷酸可以加以化学修饰，以便提高其对核酸酶的抗性并增大细胞进入的效能。例如，可使用含有硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸片断以及适当放置的修饰寡脱氧核糖核苷酸或寡核糖核苷酸片断的混合主链寡核苷酸(MBO)。MBO具有硫代磷酸酯连接的片断和其它修饰寡核苷酸的其它片断，如甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3’P5’-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯及其2’-O-烷基类似物和2’-O-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯，其是非离子的，并且极耐核酸酶或2’-O-烷基寡核糖核苷酸。如本领域所已知的，核苷是碱基-糖组合。核苷的碱基部分通常是杂环碱基。这样的杂环碱基的两种最常见的类型是嘌呤和嘧啶。核苷酸是进一步包括磷酸酯基团的核苷，其中磷酸酯基团共价连接到核苷的糖部分。对于那些包括戍呋喃糖(pentofuranosyl)的核苷，磷酸酯基团可连接到糖的2’、3’或5’羟基部分。在形成寡核苷酸中，磷酸酯基团将邻近核苷相互共价连接，以形成直链聚合化合物。这种直链聚合结构的各端又可进一步连接以形成环形结构，然而，开放式线性结构通常是优选的。在寡核苷酸结构中，磷酸酯基团通常称为形成寡核苷酸的核苷间主链。RNA和DNA的正常键或主链是3’到5’磷酸二酯键。在本发明中有用的反义化合物可包括含有修饰主链或非天然核苷间连接的寡核苷酸。具有修饰主链的寡核苷酸包括那些在主链中保留磷原子以及那些在主链中不具有磷原子的寡核苷酸。在本发明的范围内，在其核苷间主链中不具有磷原子的修饰寡核苷酸也可认为是寡核苷酸。在本发明中有用的具有修饰寡核苷酸主链的反义化合物可包括(例如)硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基磷酸酯(包括3’-亚烷基磷酸酯和手性磷酸酯、次磷酸酯)、氨基磷酸酯(包括3’-氨基氨基磷酸酯以及氨基烷基氨基磷酸酯、硫羰氨基磷酸酯)、硫羰烷基磷酸酯、硫羰烷基磷酸三酯、以及具有通常的3’-5’键合的硼代磷酸酯(boranophosphate)、这些硼代磷酸酯的2’-5’键合类似物、以及那些具有反向极性的反义化合物，其中，核苷单元的邻近对是键接的3’-5’到5’-3’或2’-5’到5’-2’。还包括各种盐、混合盐以及游离酸形式。在一方面，可以设想，其中不包括磷原子的修饰寡核苷酸主链具有由短链烷基或环烷基核苷间键、混合杂原子以及烷基或环烷基核苷间键、或一个或多个短链杂原子或杂环核苷间键形成的主链。这些主链包括那些具有吗啉代键(部分地由核苷的糖部分形成)的主链；娃氧烧主链；硫化物、亚砜以及砜主链；甲酰基(formacetyl)和硫甲酰基主链；亚甲基甲酰基和硫甲酰基主链；含烯烃主链；氨基磺酸酯主链；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基主链；磺酸酯和氨磺酰主链；酰胺主链；以及具有混合N、O、S和CH2组分的其它主链。在一方面，可以设想，寡核苷酸模拟物，糖和核苷间键二者，即核苷酸单元的主链用新基团替换。保持碱基单元以与合适核酸靶标化合物进行杂交。一种这样的寡聚物，已表现出具有优良杂交性质的寡核苷酸模拟物，称为肽核酸(PM)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖主链用含有酰胺的主链代替，尤其是用氨基乙基甘氨酸主链代替。保留核酸碱基并直接或间接结合到主链酰胺部分的氮杂氮原子。PNA化合物的进一步内容(teaching)可在Nielsen等(Science,1991，254，1497-1500)中找到。在一方面，可以设想具有硫代磷酸酯主链的寡核苷酸和具有杂原子主链的寡核昔、以及尤其一CH2—NH—O-CH2—、一CH2-N(CH3)—O—CH2-[称为亚甲基(甲基亚氛基)或MMI王链]、一CH2—O—N(CH3)—CH2->—CH2—N(CH3)一N(CH3)—CH2—以及一O-N(CH3)--CH2--CH2-[其中原有磷酸二酯主链表示为--O--P-O-CH2--]。在又一个方面，还可以设想具有吗啉代和酰胺主链结构的寡核苷酸。在另一方面，可以设想，修饰寡核苷酸还可包含一个和多个取代的糖部分。例如，在2’位置包括以下之一的寡核苷酸:0H;F;0-、S-、或N-烷基，O-烷基-O-烷基，O-、S-、或N-链烯基，或O-、S-、或N-炔基，其中烷基、链烯基以及炔基可以是取代的或未取代的C1到Cltl烷基或C2到Cltl链烯基和炔基。特别优选的是0[(CH2)n0]mCH3、O(CH2)nOCH3^O(CH2)2ON(CH3)2、O(CH2)nNH2,O(CH2)nCH3^O(CH2)nONH2,以及O(CH2)n0N[(CH2)nCHj2,其中η和m从I到约10。其它优选的寡核苷酸可包括在2’位置的以下一个基团=C1到Cltl低级烷基、取代的低级烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3>0CN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3>SOCH3>S02CH3、ONO2>NO2>N3、NH2、杂环掠某、杂环掠芳某、氣某掠某氣某、多掠某氣基、取代的甲硅烷基、RNA剪切基团、报道基团、嵌入剂、用于提高寡核苷酸的药物动力学性能的基团、或用于改善寡核苷酸的药理动力学性能的基团、以及其它具有类似性能的取代基。优选的修饰包括2’-甲氧乙氧基(2’-O-CH2CH2OCH3，也称为2’-0-(2-甲氧乙基)或2’-MOE)(Martinetal.Helv.Chim.Actal995,78，486-504)，即，烷氧烷氧基团。其它修饰包括2’-二甲基氨氧基乙氧基，S卩，O(CH2)2ON(CH3)2基团，也称为2’-DMA0E，以及2’-二甲基氣基乙氧乙氧基(2，-DMAEOE)，即，2’_0_CH2_0_CH2_N(CH2)2。可以进一步设想，这些修饰可包括2’-甲氧基(2’-0_CH3)、2’-氨基丙氧基(2’-OCH2CH2CH2NH2)以及2’-氟(2’-F)。类似的修饰还可在寡核苷酸的其它位置上进行，尤其是在3’终端核苷酸上或在2’-5’键合的寡核苷酸中的糖的3’位置以及5’终端核苷酸的5’位置。寡核苷酸还可具有糖模拟物，如在戊呋喃糖位置中的环丁基部分。在另一方面，可以设想，寡核苷酸还可包括核酸碱基(本领域中经常简称为“碱基”)修饰或取代。如在本文所使用的，“未修饰的”或“天然的”核酸碱基包括嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)以及尿嘧啶(U)。修饰的核酸碱基包括其它合成和天然核酸碱基，如5-甲基胞嘧啶(5-Me-C或m5c)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基以及其它烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基以及其它烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫胸腺嘧啶以及2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤代、8-氨基、8-硫羟、8-硫代烷基、8-羟基以及其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代尤其是5-溴代、5-三氟甲基以及其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮杂鸟嘌呤和7-脱氮杂腺嘌呤以及3-脱氮杂鸟嘌呤和3-脱氮杂腺嘌呤。另外的核酸碱基包括那些在美国专利第3，687，808号中披露的核酸碱基、那些在ConciseEncyclopediaOfPolymerScienceAndEngineeringl990,pages858-859,Kroschwitz,J.JohnWiley&Sons中披露的核酸碱基、那些由Englisch等披露的核酸碱基(AngewandteChemie,InternationalEditionl991,30，613-722)、以及那些由Sanghvi,Y.S.(Chapterl5,AntisenseResearchandAppIications1993,pages289_302,Crooke,S.T.andLebleu,B.,ed.,CRCPress)披露的核酸碱基。一些这些核酸碱基对于增大寡聚物的结合亲合力特别有用。这些核酸碱基包括5—取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶以及N-2、N-6和0-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶以及5-丙炔基胞嘧啶。已表明5-甲基胞嘧啶取代可增大0.6-1.2°C的核酸双链体稳定性(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.andLebleu,B.,eds.,AntisenseResearchandApplicationsl993,CRCPress,BocaRaton,pages276_278),并且是目前优选的喊基取代，甚至更尤其是当其和2’-O-甲氧乙基糖修饰结合时。在另一方面，可以设想，寡核苷酸的修饰涉及化学键合到寡核苷酸一个或多个部分或者轭合物，其提高寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄取。这样的部分包括但不限于类脂部分，如胆固醇部分(Letsingeretal.，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA1989,86，6553-6556)、胆酸(Manoharanetal.,Bioorg.Med.Chem.Lett.1994,4，1053-1059)、硫酿，例如，己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharanetal.,Ann.N.Y.Acad.Sc1.1992,660,306-309;Manoharanetal.,Bioorg.Med.Chem.Let.1993，3，2765-2770)、硫代胆固醇(Oberhauseretal.,Nucl.AcidsRes.1992,20,533-538)、脂肪族链,例如，十二烧二醇或十一烧基残基(Saison-Behmoarasetal.,EMBOJ.1991,10,1111-1118;Kabanovetal.,FEBSLett.1990,259,327-330;Svinarchuketal.，Biochimiel993,75，49-54)、磷脂，例如，双十六烷基-射碳-丙三醇或三乙基铵I，2_二-O-十六烧基-射碳-丙三醇-3-H-憐酸酯(Manoharanetal.,TetrahedronLett.1995，36，3651-3654;Sheaetal.,Nucl.AcidsRes.1990，18，3777-3783)、多胺或多聚乙二醇链(Manoharanetal.,Nucleosides&Nucleotidesl995,14，969-973)、或金刚烧乙酸(Manoharanetal.,TetrahedronLett.1995，36，3651-3654)、掠桐基部分(Mis小时aetal.,Biochim.Biophys.Actal995,1264,229-237)、或十八胺或己基氛基-竣基-氧胆固醇部分(Crookeetal.,J.Pharmacol.Exp.Ther.1996,277,923-937)。还设想使用的寡核苷酸是嵌合的寡核苷酸。在本发明的范围内，“嵌合的”寡核苷酸或“嵌合体”是包含两个或多个化学上截然不同的区的寡核苷酸，其中每一个区由至少一个核苷酸形成。这些寡核苷酸通常包含至少一个区，在该区中对寡核苷酸进行修饰，以便赋予寡核苷酸增大的对核酸酶降解的抗性、增大的细胞摄取、和/或对靶核酸增大的结合亲合力。寡核苷酸的另外一个区可用作能够剪切RNA=DNA或RNA=RNA杂交物的酶的底物。通过举实的方式，RNA酶H是一种细胞核酸内切酶，其剪切RNA=DNA双链体的RNA链。因此，RNA酶H的活化导致RNA靶的剪切，从而很大程度上提高基因表达的反义抑制的效率。RNA靶的剪切可通过凝胶电泳进行常规检测，并且，如果必要，用本领域已知的有关核酸杂交技术进行检测。这种RNA靶的RNA酶H-介导的剪切不同于利用核酶来剪切核酸。嵌合寡核苷酸的实例包括但不限于“多间隙体(gapmers)”，其中有三个不同的区，通常具有由两个区(化学上相互等同但区别于间隙(gap))侧面包围着的中心区。优选的多间隙体的实例是寡核苷酸，其中，寡核苷酸的中部(“间隙”)用作RNA酶H的底物并且优选由2’-脱氧核苷酸组成，而将侧面部分(5’和3’“翼(wing)”)被修饰以对靶RNA分子具有更大亲合力但不能支持核酸酶活性(例如，氟-或2’-O-甲氧基乙基-取代的)。嵌合寡核苷酸不限于那些在糖上具有修饰的嵌合寡核苷酸，但还可包括具有修饰主链的寡核苷或寡核苷酸，例如，具有硫代磷酸酯(P=S)和磷酸二酯(P=O)主链键的区或具有MMI和P=S主链键的区。其它嵌合体包括“多翼物(wingmers)”,在本领域也称为“半聚物(hemimers)”，即，具有两个完全不同区的寡核苷酸。在多翼物的优选实例中，寡核苷酸的5’部分用作RNA酶H的底物并且优选由2’-脱氧核苷酸组成，而将3’部分用这样的方式加以修饰，以便对靶RNA分子具有更大亲合力但不能支持核酸酶活性(例如，氟-或2’-0_甲氧基乙基-取代的)，或反之亦然。在一个实施例中，本发明的寡核苷酸包含在至少一个核苷酸的糖部分的2’-O-甲氧基乙基(2’-O-CH2CH2OCH3)修饰。已表明这种修饰可增大寡核苷酸对其靶的亲合力和寡核苷酸的核酸酶抗性。根据本发明，寡核苷酸的一个、多个、或所有核苷酸亚单位可带有2’-O-甲氧基乙基(2’-O-CH2CH2OCH3)修饰。包括多个具有2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸亚单位的寡核苷酸可以在寡核苷酸内的任何核苷酸亚单位上具有这样的修饰，并且可以是嵌合寡核苷酸。除了或除开2’(21)-0-甲氧基乙基修饰之外，还可以设想包含其它修饰的寡核苷酸，这些修饰可提高反义效能、效力或靶亲合力。本发明还提供多核苷酸(例如，DNA、RNA、PNA或类似物)，其结合到双链或双链体连接蛋白核酸(例如，在连接蛋白RNA的折叠区中或在连接蛋白基因中)，形成含有三股螺旋的核酸。三股螺旋形成导致连接蛋白表达的抑制，例如通过阻止连接蛋白基因的转录，因此降低或消除细胞中连接蛋白活性。不为任何特殊的机制所限制，相信三股螺旋配对会损害双螺旋为发生聚合酶、转录因子、或调节分子的结合而足够打开的能力。三股螺旋寡-和多核苷酸是利用三股螺旋形成的碱基配对规则(参见，例如，Chengetal.,J.Biol.Chem.263:15110(1988);FerrinandCamerin1-Otero,Science354:1494(1991);Ramdasetal.,J.Biol.Chem.264:17395(1989);Strobeletal.，Science254:1639(199I);andRigasetal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.83:9591(1986))以及连接蛋白mRNA和/或基因序列来构成。通常，形成三股螺旋的寡核苷酸包括从约10到约25个核苷酸或更长的与连接蛋白RNA或基因中的特定序列“互补”的特异序列(即，足够大以形成稳定的三股螺旋，但又充分小，其依赖于传递的模式，以体内给予，如果需要的话)。在本上下文中，“互补”意思是能够形成稳定的三股螺旋。在一个实施例中，寡核苷酸用来特异性地结合到连接蛋白基因的调节区(例如，连接蛋白5’-侧翼序列、启动子、以及增强子)或特异性地结合到转录起始部位(例如，在从转录起始部位的-10和+10之间)。为了回顾近来利用三股螺旋DNA所取得的治疗进展，参见Geeetal.,inHuberandCarr，1994，MolecularandImmunologicApprochesjFuturaPublishingCo，MtKiscoNYandRininslandetal.,1997,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA94:58540本发明还提供了可用于抑制连接蛋白活性的核酶。这些核酶结合并且特异性地剪切和钝化连接蛋白mRNA。有用的核酶可包括互补于连接蛋白mRNA的5’-和3’-末端序列并且可由技术人员基于连接蛋白mRNA序列加以设计。可以设想，本文提供的核酶包括那些具有I组内含子核酶的特性的核酶(Cech，Biotechnologyl3:323(1995))和锤头状核酶的其它核酶(Edgington,BiotechnologylO:256(1992))。核酶包括那些具有剪切部位的核酶，如GUA、GUU以及⑶C。长度在15和20个核糖核苷酸之间并且对应于包含剪切部位的靶连接蛋白基因的区的短RNA寡核苷酸可以用二级结构特性加以评价，这些二级结构特性可使寡核苷酸更合乎需要。剪切部位的适合性也可利用核糖核酸酶保护测定通过测试与互补寡核苷酸杂交的可接近性，或根据本领域已知的标准程序通过体外测试核酶活性来加以评价。进一步设想这样的反义化合物，其中反义和核酶功能可结合在单个寡核苷酸中。而且，核酶可包括一个或多个修饰的核苷酸或核苷酸之间的修饰键合，如上述结合对本文提供的反义寡核苷酸的说明所描述的。本发明还提供了通过诸如RNA干扰(RNAi)的方法对连接蛋白活性的抑制很有用的多核苷酸。这种以及其它基因抑制的技术在本领域是熟知的。这种技术的回顾在Science288:1370-1372(2000)中可找到。RNAi在转录后水平起作用并且是序列特异的。该过程包括将具有部分或全部双链特征的RNA、或能够编码这样的RNA的前体物引入细胞或引入细胞外环境。如由Fire等的美国专利第6，506,559号所描述的，RNA可包括聚合的核糖核苷酸的一链或多链。双链结构可由单个自身互补的RNA链或两个互补的RNA链形成。RNA可包括对磷酸酯-糖主链或核苷酸的修饰。RNA双链体的形成可在细胞内或细胞外启动。研究表明一种或多种核糖核酸酶特异性地结合并将双链RNA剪切成短片断。核糖核酸酶保持与这些片断相关，其本身特异性地结合到互补mRNA，即，特异性地结合到用于连接蛋白基因的转录的mRNA链。用于连接蛋白基因的mRNA也通过核糖核酸酶降解成短片断，从而避免连接蛋白基因的翻译和表达，因此抑制连接蛋白活性。另外，RNA聚合酶可用于促进短片断的许多拷贝的合成，其指数性地增大系统的效率。这种基因抑制途径的独特性质在于沉默不限于其启动的细胞。基因沉默作用可散布到有机体的其它部分以及甚至通过种系传达到好几代。在一个方面，RNAi的双链(ds)RNA依赖性基因特异后转录沉默策略包括使用短干扰RNA(SiRNA)0常规RNAi方法的使用具有一些局限，包括在响应长dsRNA分子而活化的哺乳动物细胞中的非特异抗病毒防卫机制(GilJ,EstebanM,“InductionofapoptosisbythedsRNA-dependentproteinkinase(PKR):Mechanismsofaction，，.Apoptosis2000,5:107-114)。在本领域中已作出了进展，其中证明了合成的21核苷酸RNA的双链体可介导哺乳动物细胞中的基因特异性RNAi而不引发一般的(generic)抗病毒防卫机制(ElbashirS，etal.,“Duplexesof21_nucleotideRNAsmediateRNAinterferenceinculturedmammaliancells，，.Nature2001,411:494-498;CaplenN.etal.,ProcNatlAcadSci2001,98:9742-9747)。因此，siRNA正日益看作是基因特异调节的有效工具。如在本文中所描述的，RNAi包括一组相关的基因沉默机制，这些机制共用许多普通的生化组分，其中终端效应物分子是例如但不限于小21-23-核苷酸反义RNA。一种机制利用相对较长的dsRNA触发子(trigger);其被细胞酶Dicer处理成短的,例如但不限于21-23-核苷酸dsRNA，称为siRNA。siRNA互补于靶RNA的链并入称为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的多蛋白复合物中，在这里,其用作革巴位内mRNA链的核内水解(endonucleolytic)剪切的向导。这引起整个mRNA的降解；反义siRNA然后可以再循环。在低级有机体中，RNA依赖性的RNA聚合酶也利用退火的向导siRNA作为引物，从而产生更多的dsRNA前靶标(frontthetarget),其本身用作Dicer底物,从而产生更多siRNA并放大siRNA信号。这种途径在植物中通常用作病毒防卫机制。如在本文中所描述的，siRNA可包括(例如但不限于)21-23核苷酸的两个分开的、退火的单链，其中终端两个3”-核苷酸是未成对的(3”悬突(overhang))。可替换地,siRNA可以是单茎环的形式，经常称为短发夹RNA(s小时NA)。通常，但不是总是，s小时NA的反义链也是完全互补于si/s小时NA的有义搭配链(partnerstrand)。在哺乳动物细胞中，长dsRNA(长度通常大于30个核苷酸)触发干扰素途径，从而激活蛋白质激酶R和2;5”_寡腺苷酸合成酶(oligoadenylatesynthetase)。干扰素途径的激活可引起翻译的全面下调以及全部RNA降解。但是，已报道外源引入哺乳动物细胞中的较短siRNA会绕过干扰素途径。SiRNA反义产物还可来源于内源性微小RNA(microRNA)。在人类细胞中，不管最初形式(siRNA和微小RNA)或处理途径,最终成熟的(例如但不限于)完全同源于mRNA的21-23-核苷酸反义RNA将引导mRNA剪切。通常，siRNA和靶位之间的错配的影响可以从几乎没有到完全去除活性不等，其原因只是部分了解；但是，在至少一种情形下，部分同源性导致mRNA翻译抑制。通常，设计用来模拟原型微小RNA-靶干扰的具有靶错配的siRNA可介导不同程度的翻译抑制，其依赖于特定相互作用和mRNA中靶位的数量。RNAi可通过预先形成的siRNA的外源传递或通过siRNA或s小时NA的基于启动子的表达来激活。短干扰RNA(siRNA)可以化学合成或通过基于DNA的载体系统来产生。通常，这涉及经有效处理而在细胞内形成siRNA的短发夹(sh)RNA的转录(PaddisonP,CaudyA,HannonG:StablesuppressionofgeneexpressionbyRNAiinmammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA2002，99:1443-1448;PaddisonPjCaudyA,BernsteinE，HannonG，ConklinD:ShorthairpinRNAs(s小时NAs)inducesequence-specificsilencinginmammaliancells.Genes&Dev2002,16:948-958;SuiG，etal.,ProcNatlAcadSci2002,8:5515-5520;BrummelkampT，etal.，Science2002，296:550-553)。因此，在上下文中，siRNA可用作组织特异靶向以及基因表达调节的有效策略。根据本发明使用的寡核苷酸可方便并常规地通过熟知的固相合成技术制备。用于这种合成的装置由几个本领域熟知的卖主销售。任何其它用于这种合成的方法也可釆用；寡核苷酸的现行合成在本领域是公认的。熟知利用同样的技术来制备寡核苷酸，如硫代磷酸酯和2’-烷氧基或21-烷氧基烷氧基衍生物，包括2’-O-甲氧乙基寡核苷酸(Martin，P.Helv.Chim.Actal995,78，486-504)。还熟知利用同样的技术和工业上可获得的修饰酰胺化物(amidites)和可控多孔玻璃(controlled-poreglass)(CPG)产物如生物素、突光素、口丫啶或补骨脂素-修饰的酰胺化物和/或CPG(可从GlenResearch,Sterling,Va.获得)来合成荧光标记的、生物素化(biotinylated)的或其它共轭的寡核苷酸。方法在另一方面，本发明包括通过将反义化合物给予受治疗者而治疗该受治疗者(例如，患者)的方法。通常，这些方法包括用于组织工程的方法以及用于减少与医学操作(包括但不限于，眼科操作)有关的组织损伤的方法。方法可包括，例如，将反义化合物以足够抑制眼中或与受治疗者眼有关的细胞中的人类连接蛋白表达的量给予所述受治疗者的眼。尽管优选对人类连接蛋白质的表达进行抑制，但是可以预想到其它蛋白质可以是由反义化合物(单独或者联合抑制人类连接蛋白表达的反义化合物)进行调节的靶。在一些实施例中，眼科操作是眼科手术，包括但不限于准分子激光屈光性角膜切除手术、白内障摘除术、角膜移植、矫正屈光的手术、放射状角膜切开手术、青光眼滤过手术、角膜移植手术、准分子激光屈光性角膜切除手术、角膜移植、矫正屈光的手术、眼表面瘤切除术、结膜或羊膜移植、翼状胬肉和睑裂斑切除术、眼整形手术、眼睑瘤切除术、用于先天性异常的重建眼睑手术、外翻和内翻眼睑修复、斜视手术(眼肌肉)、穿透性眼外伤。在一些实施例中，本文提供的反义化合物是通过局部给予药来给药的。本文提供的反义化合物还可(例如)全身地或通过眼内注射来给予。可以将本文提供的反义化合物在(例如)相对于伤口形成的预定时间给予受治疗者，如在眼科操作(例如手术)中发生。例如，反义化合物可以在进行眼科操作之前、眼科操作期间、或眼科操作之后给予。例如，反义化合物可在进行眼科操作之前或之后几分钟或几小时内给予受治疗者。在一些实施例中，反义化合物在进行眼科操作之后给予，并且例如反义化合物在操作的约4小时内、操作的约3小时内给予、以及更通常地在眼科操作的约2小时内、或眼科操作的约I小时内给予。可替换地，反义化合物可在眼科操作的几分钟内给予，例如在眼科操作的5、10、15、20、30、45分钟内。反义化合物还可在眼科操作的4小时后给予。在另一方面，本文提供的反义化合物可以用影响组织工程的方法给予。在这些实施例，以及本文提供的一些其它实施例中，反义化合物通常在更长时间内给予，例如在几天、几星期、几个月、或者甚至更长的时间内，并且可独立于对病人进行的特别操作(如对眼进行的操作)来给予。本文提供的反义化合物可以结合增加受治疗者角膜组织厚度的方法来给予，包括以与眼科操作无关的方法给予，以及以与眼科操作(例如，手术)结合给予反义化合物的方法给予。本文提供的反义化合物可结合一种方法来给予，该方法可例如在与受治疗者角膜有关的细胞(例如角膜细胞)中促进愈合或防止组织损伤。本文提供的反义化合物可结合减少受治疗者眼中瘢痕的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合减少受治疗者眼中混浊(hazing)的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合调节与成肌纤维细胞分化(与激光所致损伤的部位有关)有关的细胞过多的方法来给予，优选在术后24小时到48小时期间内。本文提供的反义化合物可结合调节间质重建并减少与激光所致损伤的部位有关的混浊的方法来给予，优选在术后24小时到72小时期间内。本文提供的反义化合物可结合增加受治疗者眼中上皮细胞运动的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合在将反义化合物给予受治疗者眼的12小时内导致增大上皮细胞运动的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合在将反义化合物给予受治疗者眼的24小时内导致增大上皮细胞运动的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合阻止间质细胞密度增大的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合抑制与激光所致损伤的部位有关的间质水肿的方法在术后24小时到72小时期间内给予。本文提供的反义化合物可结合减少上皮增生的方法在术后24小时到72小时期间内给予。本文提供的反义化合物可结合减少成肌纤维细胞活性长达术后I星期的方法来给予。本文提供的反义化合物可结合调节细胞分化的方法来给予，其中细胞分化会改善胞外基质。本文提供的反义化合物可结合减少细胞增殖的方法来给予。在一些实施例中，反义化合物会减少瘢痕形成。在一些实施例中，反义化合物可减少炎症。在一些实施例中，反义化合物可促进伤口愈合。在一些优选实施例中，结合手术移植操作来使用反义化合物。在一些优选实施例中，反义化合物靶向连接蛋白43并给予以调节上皮基细胞分裂和生长。在一些实施例中，反义化合物靶向连接蛋白31.1并给予以调节外层角质化。在其它实施例中，该方法促进愈合或防止与受治疗者角膜有关的细胞中的组织损伤。根据一些实施例，反义化合物用于增大受治疗者角膜组织厚度的方法中，或用于导致减少受治疗者角膜细胞中组织损伤的方法中，或用于导致减少与受治疗者角膜有关的细胞中组织损伤的方法中，或用于结合受治疗者的准分子激光屈光角膜切除手术进行的方法中，或用于调节与成肌纤维细胞分化(与激光所致损伤的部位有关)有关的细胞过多的方法中，优选在术后24小时到48小时期间内，或用于调节间质重建并减少与激光所致损伤的部位有关的混浊的方法中，优选在术后24小时到72小时期间内，或在术后24小时到72小时期间内用于抑制与激光所致损伤的部位有关的间质水肿的方法中，或用于减少上皮增生的方法中，优选在术后24小时到72小时期间内，或用于减少成肌纤维细胞活性长达术后I星期的方法中，或用于调节细胞分化(其改善胞外基质)的方法中，或用于减少细胞增殖的方法中。在一些实施例中，眼科操作是白内障摘除术。在其它实施例中，眼科操作是角膜移植。在其它实施例中，眼外科手术是矫正屈光的手术。在其它实施例中，眼科操作是放射状角膜切开手术。在其它实施例中，眼科操作是青光眼滤过手术。在还有的其它实施例中，目艮科操作是角膜移植手术。在一些实施例中，反义化合物或组合物是通过局部给药方式来给予。在一些实施例中，反义化合物或组合物是通过直接涂敷到手术伤口来给予。在一些实施例中，反义化合物或组合物是通过眼内注射来给予。在一些实施例中，反义化合物或组合物是在进行外科手术之前给予。在一些实施例中，反义化合物或组合物是在外科手术过程中给予。在一些非限制性实施例中，反义化合物或组合物是在进行眼科操作之前约15分钟内或在进行眼科操作之后长达约2小时给予。在一些其它实施例中，例如对于组织工程，可以给予本文提供的反义化合物几天或甚至几个月。在一些另外的实施例中，化合物和组合物用来促进愈合或阻止与角膜有关的细胞中的组织损伤，其中与角膜有关的细胞可以是眼中的任何细胞，其包括但不限于角膜细胞。本文提供的药剂，包括反义化合物，可增加受治疗者角膜组织的厚度。在一些实施例中，反义化合物结合另一种可用于减少组织损伤或促进愈合的化合物一起使用。例如，反义化合物可与生长因子、细胞因子、或类似因子一起给予，这些因子包括但不限于FGF、NGF、NT3、PDGF,TGF、VEGF,BDGF,EGF、KGF、整联蛋白、白细胞介素、纤溶酶、以及semaphorins。在另一方面，提供了用于减少与眼科手术有关的组织损伤的药物组合物。药物组合物被适当配制，用于局部给予受治疗者的眼，该药物组合物包括足够量的反义化合物以抑制与受治疗者眼有关的细胞中的人类连接蛋白质的表达。反义化合物优选靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白。在一些实施例中，反义化合物是包括药用载体或赋形剂的药物组合物的形式，并且药剂或反义化合物以有效促进受治疗者伤口愈合的量存在。在一些实施例中，药物组合物可以是，例如，适合局部给药的形式，包括适合局部给予受治疗者眼的形式。在一些另外的实施例中，组合物以及剂型可以是凝胶剂、乳膏剂的形式，或任何本文描述的形式。在另一方面，提供了治疗中枢神经系统的损伤的方法。方法包括结合为治疗所述中枢神经系统的损伤而给患者进行的外科手术，将反义化合物给予接近中枢神经系统的预先存在伤口的部位，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白。在方法的一些实施例中，给予反义化合物以减少起因于脊髓物理损伤的神经元损失。在方法的一些实施例中，将反义化合物给予接近由外伤引起的伤口的部位。在方法的一些实施例中，将反义化合物给予接近由手术引起的伤口的部位。在方法的一些实施例中，将反义化合物给予接近脊髓损伤的部位。在方法的一些实施例中，反义化合物指向连接蛋白43并给予以调节上皮基细胞分裂和生长。在方法的一些实施例中，反义化合物促进伤口愈合。在方法的一些实施例中，反义化合物减少炎症。在方法的一些实施例中，反义化合物减少瘢痕形成。在方法的一些实施例中，中枢神经系统损伤是脊髓损伤。在方法的一些实施例中，在脊髓物理损伤后至少约24小时将反义化合物给予患者。在方法的一些实施例中，反义化合物结合外科移植手术一起使用。在方法的一些另外实施例中，外科移植手术结合用反义化合物进行的移植前处理以促进伤口愈合。在另一方面，提供了反义化合物，这些反义化合物结合用于治疗患者预先存在的特征在于神经元损失的伤口的操作能够促进神经元的再生。在一些实施例中，药剂是长度高达40个核酸碱基的反义化合物，其靶向编码人类连接蛋白的核酸分子的至少约8个核酸碱基，并且反义化合物结合促进用于治疗患者预先存在伤口的再生神经元的操作来抑制一种或多种人类连接蛋白表达。伤口包括那些特征在于神经元损失的伤口。可被靶向的连接蛋白包括具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白。在这些实施例中，反义化合物可在所述患者的导致神经元损失的脊髓物理损伤后至少24小时给予患者。反义化合物可在脊髓物理损伤超过24小时后给予患者几星期、几个月，或在导致神经元损失的物理损伤几年后给予患者。在药物组合物和方法的一些实施例中，反义化合物靶向编码人类连接蛋白30或人类连接蛋白37的核酸分子的至少约8个核酸碱基。优选地，反义化合物抑制与患者眼有关的细胞中的人类连接蛋白30或37的表达。其它药物组合物包括一种反义化合物，其靶向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白(例如，人类的)，并且优选地反义化合物结合一种操作来抑制人类连接蛋白的表达，从而为治疗患者预先存在的伤口(特征在于神经元损失)而促进再生神经元。药物组合物在另一方面，本发明包括包含反义化合物的药物组合物。在一个实施例中，提供的药物组合物用于减少与眼科操作(例如，手术)有关的组织损伤，使得制成的药物组合物用于局部给予患者的眼，并且它包括一定量的反义化合物，其足以抑制与患者眼有关的细胞中的人类连接蛋白质的表达。在一些实施例中，反义化合物祀向核酸分子的至少约8个核酸碱基，其中核酸分子编码具有选自SEQIDNO:12-31的核酸碱基序列的连接蛋白(例如，人类的)。在一些实施例中，该药物组合物包括药用载体，该载体包括缓冲普卢兰尼克酸(pluronicacid)或凝胶,例如在磷酸缓冲盐溶液中高达约30%的普卢兰尼克酸。反义组合物可包括不同量的普卢兰尼克酸或凝胶，其量包括但不限于在磷酸缓冲盐溶液中高达约5%的普卢兰尼克酸、在磷酸缓冲盐溶液中高达约10%的普卢兰尼克酸、在磷酸缓冲盐溶液中高达约15%的普卢兰尼克酸、在磷酸缓冲盐溶液中高达约20%的普卢兰尼克酸、在磷酸缓冲盐溶液中高达约25%的普卢兰尼克酸、以及在磷酸缓冲盐溶液中高达约30%的普卢兰尼克酸。本文提供的反义化合物还可包括生物等效的化合物，包括药用盐和前药。这用来包括任何药用盐、酯、或这样酯的盐、或任何其它化合物，其给予包括人类的动物以后，能够提供(直接或间接地)生物活性代谢物或其残余物。因此，例如，披露内容还包括核酸的药用盐以及这样的核酸的前药。“药用盐”是生理上和药理上可接受的本文提供的核酸的盐:gp，保留母体化合物的所希望的生物活性并且不赋予不希望的毒性作用的盐(参见，例如，Bergeetal.,J.0fPharmaSc1.1977,66,1-19)。对于寡核苷酸，药用盐的实例包括但不限于(a)和诸如钠、钾、铵、镁、钙的阳离子，和诸如精胺和亚精胺等的多胺形成的盐；(b)和无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等形成的酸加成盐；(C)和有机酸，例如，醋酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、安息香酸、单宁酸、棕榈酸、海藻酸、多聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等形成的盐；以及(d)和基本阴离子(elementalanion)如氯、溴、以及碘形成的盐。本文提供的寡核苷酸可另外地或可选地加以制备以用“前药”形式加以递送。术语“前药”表示治疗剂，其制备成无活性形式并通过内源性酶或其它化学品和/或条件的作用在体内或细胞内转化成活性形式(即，药物)。尤其是，寡核苷酸的前药形式可以根据在1993年12月9日公布的Gosselin等的W093/24510中披露的方法制成SATE[(S_乙酰基-2-硫乙基)磷酸酯]衍生物。反义化合物可制成药物组合物，除了寡核苷酸之外，其可包括药用载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂、中性或阳离子脂质、脂质复合物、脂质体、促渗剂、载体化合物以及其它药用载体或赋形剂等。药物组合物还可包括一种或多种活性成分，如干扰素、抗微生物剂、抗炎剂、麻醉剂等。用于胃肠道外给药的剂型可包括无菌水溶液，该无菌水溶液也可包含缓冲剂、脂质体、稀释剂以及其它合适的添加剂。包括本文提供的寡核苷酸的药物组合物可包括促渗剂，以便提高寡核苷酸的消化递送(alimentarydelivery)。促渗剂可分类为属于五个大类的一类，即脂肪酸、胆汁盐、螯合剂、表面活性剂以及非表面活性剂(Leeetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl991，8，91—192;Muranishi，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl990，7，1-33)。可包括来自一个或多个这些大类的一种或多种促渗剂。用作促渗剂的各种脂肪酸及其衍生物包括，例如，油酸、月桂酸、癸酸、豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、recinleate、一油精(a.k.a.1-甘油一油酸酯(monooleoyl—rac一glycerol))、二月桂精、辛酸、花生四烯酸、1-单癸酸甘油酯、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮、酰基肉毒碱、酰基胆碱、单-甘油酯和二-甘油酯及其生理上可接受的盐(即，油酸盐(酯)、月桂酸盐(酯)、癸酸盐(酯)、豆蘧酸盐(酯)、棕榈酸盐(酯)、硬脂酸盐(酯)、亚油酸盐(酯)等)。(Leeetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl991,page92;Muranishi,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl990,7,I;El-Haririetal.,J.Pharm.Pharmacol.199244,651-654)。胆汁的生理作用包括促进脂质和脂溶性维生素的分散和吸收(Brunton，Chapterf8In:Goodman&Gilman,sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,9thEd.,Hardmanetal.McGraw-Hill,NewYork,N.Y.，1996，pages934_935)。各种天然的胆汁盐、及其合成衍生物用作促渗剂。因此，术语“胆汁盐”包括任何天然存在的胆汁成分以及任何其合成的衍生物。可使用包括一种或多种促渗剂的复合剂型。例如，胆汁盐可结合脂肪酸使用以制成复合剂型。螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)二钠、柠檬酸、水杨酸盐(例如，水杨酸钠、5-甲氧基水杨酸盐以及高香草酸盐)、胶原的N-酰基衍生物、月桂基聚氧乙烯(9)醚(laureth-9)和β二酮(烯胺)的N-氨基酰基衍生物(Leeetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems1991,page92;Muranishi,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems1990，7，1-33;Buuretal.,J.ControlRel.1990，14，43-51)。螯合剂具有也用作DNA酶抑制剂的附加优点。表面活性剂包括，例如，十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯-9-十二烷基醚和聚氧乙烯-20-十六烧基醚(Leeetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl991,page92)；以及全氣化合物的乳剂，如FC-43(Takahashietal.,J.Pharm.Phamacol.1988，40,252-257)。非表面活性剂包括，例如，不饱和环脲、1-烷基-以及1_烯基氮杂环-烧酮(alkanone)衍生物(Leeetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystemsl991,page92)；以及非甾类消炎剂，如双氯芬酸钠、卩引哚美辛(indomethacin)以及苯丁唑酮(phenylbutazone)(Yamashitaetal.,J.Pharm.Pharmacol.1987,39,621-626)。如在本文中所使用的，“载体化合物”指的是核酸、或其类似物，其是惰性的(S卩，本身不具有生物活性)，但通过体内过程被识别为核酸，其中体内过程通过(例如)降解生物活性核酸或促进其从循环中去除来降低具有生物活性的核酸的生物利用度。核酸和载体化合物(通常具有过量的后者)的共同给予可导致在肝、肾或其它外循环储液囊回收的核酸量显著减少，大概由于在载体化合物和核酸之间对于共同受体的竞争。与载体化合物相反，“药用载体”(赋形剂)是药用溶剂、悬浮剂或任何其它用于将一种或多种核酸传递到动物的药理惰性赋形剂。当结合核酸和所给药物组合物的其它组分时，药用载体可以是液体或固体并且用脑中计划的给药方式进行选择，以便提供所希望的本体(bulk)和稠度等。通常的药用载体包括但不限于粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素等)；填充剂(例如，乳糖和其它糖、微晶纤维素、果胶、明胶、硫酸钙、乙基纤维素、聚丙烯酸酯或磷酸氢钙等)；滑润剂(例如，硬脂酸镁、滑石、硅石、胶态二氧化硅、硬脂酸、金属硬脂酸盐、氢化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸钠、醋酸钠等)；崩解剂(例如，淀粉、淀粉羟乙酸钠等)；或湿润剂(例如，十二烷基硫酸钠等)。本文提供的组合物可另外包含在药物组合物中通常发现的其它附属组分，并且这些附属组分使用水平在本
技术领域：
已确定。因此，例如，组合物可包含另外相容的药物活性物质如，止痒药、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎药，或可包含另外的物质，这些物质可用于物理配制本发明的组合物的各种剂型，如染料、增香剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂、以及稳定剂。但是，当添加时，这样的物质不应过度干扰本文提供的组合物的组分的生物活性。不管寡核苷酸通过什么方法引入患者，胶态分散系统可用作传递赋形剂，以提高寡核苷酸的体内稳定性和/或将寡核苷酸靶向特定器官、组织或细胞类型。胶态分散系统包括但不限于大分子复合物、微米囊、微球体、小珠以及基于脂类的体系，其包括水包油乳齐U、胶束、混合胶束、脂质体以及不典型结构的脂质:寡核苷酸复合物。优选的胶态分散系统是多种脂质体。这些脂质体是具有含水核(aqueouscore)的微球体，该水合核由一个或多个由排列成双层构型的类脂形成的外层所围绕(参见，通常，Chonnetal.，CurrentOp.Biotech.1995,6,698-708)。反义多核苷酸可以以基本上隔离的形式存在。应理解，产物可与载体或稀释剂混合，其不影响产物的预定目的并且仍认为是充分隔离的。产物还可以是基本中纯化的形式，在该情形下，其通常包括90%，例如至少约95%、98%或99%的多核苷酸或制剂的干质量。反义多核苷酸可以局部给予(在要治疗的部位)。优选地反义多核苷酸和药用载体或稀释剂结合，以生成药物组合物。合适的载体和稀释剂包括等渗盐溶液，例如磷酸缓冲盐溶液。组合物可加以配制，以用于胃肠道外、肌内、脑内、静脉内、皮下、或经皮给药。哺乳动物细胞对核酸的摄取可通过若干已知的转染技术，例如，那些使用转染剂的技术来提高。给予的剂型可包含这样的制剂。这些制剂的实例包括阳离子制剂(例如，磷酸钙和DEAE-右旋糖酐)和脂转染剂(Iipofectants)(例如,脂转染剂TM和转染剂(transfectam)TM)。在一方面，寡核苷酸可能需要部位特异性递送。它们还需要在延长时期内递送。尽管递送时间将明显依赖于要诱导下调的部位和所希望的治疗效果，但是经常需要连续递送24小时或更长时间。在本发明的一方面，这是通过将反义化合物与药用载体或赋形剂一起包含在剂型中来实现，尤其是以用于局部给药的剂型形式。尤其，诸如乳膏剂、滴剂、以及其它本文描述的局部剂型可用来调节上皮基细胞分裂和生长(利用靶向连接蛋白43的反义化合物)以及外层角质化(利用靶向连接蛋白31.1的反义化合物)。用于局部给药的剂型可包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体制剂和散剂。传统药物载体，含水的、粉末或油基、增稠剂等可以是必要的或所希望的。涂层避孕套、手套等也是有用的。用于口服的组合物包括散剂或颗粒剂、在水或非含水介质中的混悬剂或溶液、胶囊剂、小药囊或片剂。增稠剂、增香剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可以是希望有的。用于胃肠道外给药的组合物可包括无菌水溶液，其也可包含缓冲剂、稀释剂以及其它合适的添加剂。在一些情形下，结合其它传统治疗方式用寡核苷酸来治疗患者可能是更有效的，从而增加治疗方案的效能。如在本文中所使用的，术语“治疗方案”意思是包括治疗的、减轻的以及预防的方式。治疗组合物的剂型及其后来的给药认为是在本领域技术人员的知识范围内。剂量依赖于要治疗的疾病状态的严重性和反应性，具有从几天持续到几个月、或直至达到治愈或实现疾病状态的减少的治疗期。最佳给药方案可以根据患者体内药物累积的检测结果加以计算。普通技术人员可以很容易确定最佳剂量、给药方法和重复率。最佳剂量可依赖于单个寡核苷酸的相对效力而变化，并且通常可基于在体外和在体内动物模型中发现是有效的EC50来估计。通常,剂量为从0.01mg/kg到100mg/kg体重,并且每天、每星期、每月或每年可以给予一次或多次，或甚至每2到20年一次。本领域普通技术人员可以基于测得的体液或组织中药物的滞留时间和浓度容易地估计给药的重复率。在治疗成功以后，可能希望让患者进行维持治疗以防止疾病状态的复发，其中以维持剂量给予寡核苷酸，范围为从0.0lmg/kg到100mg/kg体重,每天一次或多次到每20年一次。在需要连接蛋白调节的疾病的治疗或预防中，合适的剂量水平通常为约0.001到100mg/kg患者体重/天，其可以单剂量或多剂量进行给药。优选地，剂量水平将为约I到约40mg/kg/天。本发明的寡核苷酸可用于诊断、治疗、预防、用作研究试剂以及用于试剂盒中。由于本发明的寡核苷酸可以杂交到编码连接蛋白的核酸，所以很容易构建夹层结构、量热以及其它测定来利用这个事实。用于检测寡核苷酸和连接蛋白基因或mRNA的杂交的方法的条件可常规地实现。这样的条件可包括酶接合、放射性同位素示踪或任何其它合适的检测系统。还可以制备用于检测连接蛋白存在或缺乏的试剂盒。本发明的寡核苷酸还可用于研究目的。因此，由寡核苷酸表现出的特异性杂交可用于测定、纯化、细胞产物制备以及本领域普通技术人员已知的其它方法中。在本文描述的一些实施例中可以被靶向的示例性连接蛋白包括但不限于以下连接蛋白。人类Cx43，aI(SEQIDNO:12)LOCUSNM_0001653088bpmRNA直链PRI26-0CT-2004DEFINITION人类间隙连接蛋白质，al，43kDa(连接蛋白43)(GJAl)，mRNA。Iacaaaaaagcttttacgaggtatcagcacttttctttcattagggggaaggcgtgaggaa61agtaccaaacagcagcggagttttaaactttaaatagacaggtctgagtgcctgaacttg121ccttttcattttacttcatcctccaaggagttcaatcacttggcgtgacttcactacttt181taagcaaaagagtggtgcccaggcaacatgggtgactggagcgccttaggcaaactcctt241gacaaggttcaagcctactcaactgctggagggaaggtgtggctgtcagtacttttcatt301ttccgaatcctgctgctggggacagcggttgagtcagcctggggagatgagcagtctgcc361tttcgttgtaacactcagcaacctggttgtgaaaatgtctgctatgacaagtctttccca421atctctcatgtgcgcttcgtggtcctgcagatcatatttgtgtctgtacccacactcttg481tacctggctcatgtgttctatgtgatgcgaaaggaagagaaactgaacaagaaagaggaa541gaactcaaggttgcccaaactgatggtgtcaatgtggacatgcacttgaagcagattgag601ataaagaagttcaagtacggtattgaagagcatggtaaggtgaaaatgcgaggggggttg661ctgcgaacctacatcatcagtatcctcttcaagtctatctttgaggtggccttcttgctg721atccagtggtacatctatggattcagcttgagtgctgtttacacttgcaaaagagatccc781tgcccacatcaggtggactgtttcctctctcgccccacggagaaaaccatcttcatcatc841ttcatgctggtggtgtccttggtgtccctggccttgaatatcattgaactcttctatgtt901ttcttcaagggcgttaaggatcgggttaagggaaagagcgacccttaccatgcgaccagt961ggtgcgctgagccctgccaaagactgtgggtctcaaaaatatgcttatttcaatggctgc1021tcctcaccaaccgctcccctctcgcctatgtctcctcctgggtacaagctggttactggc1081gacagaaacaattcttcttgccgcaattacaacaagcaagcaagtgagcaaaactgggct1141aattacagtgcagaacaaaatcgaatggggcaggcgggaagcaccatctctaactcccat1201gcacagccttttgatttccccgatgataaccagaattctaaaaaactagctgctggacat1261gaattacagccactagccattgtggaccagcgaccttcaagcagagccagcagtcgtgcc1321agcagcagacctcggcctgatgacctggagatctagatacaggcttgaaagcatcaagat1381tccactcaattgtggagaagaaaaaaggtgctgtagaaagtgcaccaggtgttaattttg1441atccggtggaggtggtactcaacagccttattcatgaggcttagaaaacacaaagacatt1501agaatacctaggttcactgggggtgtatggggtagatgggtggagagggaggggataaga1561gaggtgcatgttggtatttaaagtagtggattcaaagaacttagattataaataagagtt1621ccattaggtgatacatagataagggctttttctccccgcaaacacccctaagaatggttc1681tgtgtatgtgaatgagcgggtggtaattgtggctaaatatttttgttttaccaagaaact1741gaaataattctggccaggaataaatacttcctgaacatcttaggtcttttcaacaagaaa1801aagacagaggattgtccttaagtccctgctaaaacattccattgttaaaatttgcacttt1861gaaggtaagctttctaggcctgaccctccaggtgtcaatggacttgtgctactatatttt1921tttattcttggtatcagtttaaaattcagacaaggcccacagaataagattttccatgca1981tttgcaaatacgtatattctttttccatccacttgcacaatatcattaccatcacttttt2041catcattcctcagctactactcacattcatttaatggtttctgtaaacatttttaagaca2101gttgggatgtcacttaacattttttttttttgagctaaagtcagggaatcaagccatgct2161taatatttaacaatcacttatatgtgtgtcgaagagtttgttttgtttgtcatgtattgg2221tacaagcagatacagtataaactcacaaacacagatttgaaaataatgcacatatggtgt2281tcaaatttgaacctttctcatggatttttgtggtgtgggccaatatggtgtttacattat2341ataattcctgctgtggcaagtaaagcacactttttttttctcctaaaatgtttttccctg2401tgtatcctattatggatactggttttgttaattatgattctttattttctctcctttttt2461taggatatagcagtaatgctattactgaaatgaatttcctttttctgaaatgtaatcatt2521gatgcttcgaatgatagaattttagtactgtaaacaggctttagtcattaatgtgagagac2581ttagaaaaaatgcttagagtggactattaaatgtgcctaaatgaattttgcagtaactgg2641tattcttgggttttcctacttaatacacagtaattcagaacttgtattctattatgagtt2701tagcagtcttttggagtgaccagcaactttgatgtttgcactaagattttatttggaatg2761caagagaggttgaaagaggattcagtagtacacatacaactaatttatttgaactatatg2821ttgaagacatctaccagtttctccaaatgccttttttaaaactcatcacagaagattggt2881gaaaatgctgagtatgacacttttcttcttgcatgcatgtcagctacataaacagttttg2941tacaatgaaaattactaatttgtttgacattccatgttaaactacggtcatgttcagctt3001cattgcatgtaatgtagacctagtccatcagatcatgtgttctggagagtgttctttatt3061caataaagttttaatttagtataaacat//人类Cx46，α3(SEQIDNO:13)LOCUSNM—0219541308bpmRNA直链PRI27-0CT-2004DEFINITION人类间隙连接蛋白质，a3，46kDa(连接蛋白46)(GJA3)，mRNA。Iatgggcgactggagctttctgggaagactcttagaaaatgcacaggagcactccacggtc61atcggcaaggtttggctgaccgtgctgttcatcttccgcatcttggtgctgggggccgcg121gcggaggacgtgtggggcgatgagcagtcagacttcacctgcaacacccagcagccgggc181tgcgagaacgtctgctacgacagggccttccccatctcccacatccgcttctgggcgctg241cagatcatcttcgtgtccacgcccaccctcatctacctgggccacgtgctgcacatcgtg301cgcatggaagagaagaagaaagagagggaggaggaggagcagctgaagagagagagcccc361agccccaaggagccaccgcaggacaatccctcgtcgcgggacgaccgcggcagggtgcgc421atggccggggcgctgctgcggacctacgtcttcaacatcatcttcaagacgctgttcgag481gtgggcttcatcgccggccagtactttctgtacggcttcgagctgaagccgctctaccgc541tgcgaccgctggccctgccccaacacggtggactgcttcatctccaggcccacggagaag601accatcttccatcatcttcatgctggcggtggcctgcgcgtccctgctgctcaacatgctg661gagatctaccacctgggctggaagaagctcaagcagggcgtgaccagccgcctcggcccg721gacgcctccgaggccccgctggggacagccgatcccccgcccctgccccccagctcccgg781ccgcccgccgttgccatcgggttcccaccctactatgcgcacaccgctgcgcccctggga841caggcccgcgccgtgggctaccccggggccccgccaccagccgcggacttcaaactgcta901gccctgaccgaggcgcgcggaaagggccagtccgccaagctctacaacggccaccaccac961ctgctgatgactgagcagaactgggccaaccaggcggccgagcggcagcccccggcgctc1021aaggcttacccggcagcgtccacgcctgcagcccccagccccgtcggcagcagctccccg1081ccactcgcgcacgaggctgaggcgggcgcggcgcccctgctgctggatgggagcggcagc1141agtctggaggggagcgccctggcagggacccccgaggaggaggagcaggccgtgaccacc1201gcggcccagatgcaccagccgcccttgcccctcggagacccaggtcgggccagcaaggcc1261agcagggccagcagcgggcgggccagaccggaggacttggccatctag//人类Cx37，α4(SEQIDNO:14)LOCUSNM—0020601601bpmRNA直链PRI26-0CT-2004DEFINITION人类间隙连接蛋白质，α4，37kDa(连接蛋白37)(GJA4)，mRNA。Ictccggccatcgtccccacctccacctgggccgcccgcgaggcagcggacggaggccggg61agccatgggtgactggggcttcctggagaagttgctggaccaggtccgagagcactcgac121cgtggtgggtaagatctggctgacggtgctcttcatcttccgcatcctcatcctgggcct181ggccggcgagtcagtgtggggtgacgagcagtcagatttcgagtgtaacacggcccagcc241aggctgcaccaacgtctgctatgaccaggccttccccatctcccacatccgctactgggt301gctgcagttcctcttcgtcagcacacccaccctggtctacctgggccatgtcatttacct361gtctcggcgagaagagcggctggcgcagaaggagggggagctgcgggcactgccggccaa421ggacccacaggtggagcgggcgctggccggcatagagcttcagatggccaagatctcggt权利要求1.一种用于治疗受治疗者的角膜穿透性眼外伤的药物组合物，包括连接蛋白43下调量的连接蛋白43反义化合物。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤为化学外伤。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤为机械外伤。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤导致角膜上皮损伤。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白43反义化合物被给予具有羊膜移植的受治疗者。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物选自包括反义寡核苷酸和反义多核苷酸的组。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQIDNO:1-3的核酸碱基序列。8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQIDNO:12的核酸碱基序列的连接蛋白。9.根据权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是长度在15和35个核酸碱基之间的反义寡核苷酸。10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括天然存在的核酸碱基和未修饰的核苷间键的反义寡核苷酸。11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的糖部分、和/或至少一种修饰的核酸碱基的反义寡核苷酸。12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中，所述修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过表面方式来给予。14.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过局部方式来给予。15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过眼内注射来给予。16.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物用普卢兰尼克凝胶配制。17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中，所述普卢兰尼克凝胶包括普卢兰尼克F127。18.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予一次。19.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予多于一次。20.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述受治疗者为人类。21.一种用于治疗受治疗者的眼的后段病症的药物组合物，包括连接蛋白43下调量的连接蛋白43反义化合物。22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述后段病症包括黄斑裂孔、黄斑变性、视网膜撕裂、糖尿病视网膜病变、和玻璃体视网膜病变。23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中，所述后段病症是黄斑变性。24.根据权利要求22所述的药物组合物，其中，所述后段病症是糖尿病视网膜病变。25.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物选自包括反义寡核苷酸和反义多核苷酸的组。26.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQIDNO:1-3的长度不超过40个核苷酸的核酸碱基序列。27.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQIDNO:12的核酸碱基序列的连接蛋白。28.根据权利要求21-27中任一项所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是长度在15和35个核酸碱基之间的反义寡核苷酸。29.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括天然存在的核酸碱基和未修饰的核苷间键的反义寡核苷酸。30.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的糖部分、和/或至少一种修饰的核酸碱基的反义寡核苷酸。31.根据权利要求30所述的药物组合物，其中，所述修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。32.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物适合于通过眼内注射来给予。33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予一次。34.根据权利要求32所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予多于一次。35.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述受治疗者为人类。36.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQIDNO:1的长度不超过40个核苷酸的核酸碱基序列。37.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO:1-3的序列的多核苷酸具有至少80%的同源性。38.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO:1-3的序列的多核苷酸具有至少90%的同源性。39.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO:1-3的序列的多核苷酸具有至少95%的同源性。40.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO:1-3的序列的多核苷酸具有至少97%的同源性。41.一种用于在受治疗者中促进与眼科操作有关的角膜伤口愈合的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以结合所述操作给予所述受治疗者的眼睛的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.001至0.01mg/kg体重范围内并且在与所述受治疗者的眼睛有关的角膜细胞中抑制连接蛋白的表达。42.一种用于促进与眼科操作有关的角膜伤口愈合的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以给予受治疗者的眼睛的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.001至0.01mg/kg体重范围内并且在所述受治疗者的眼中或与所述眼有关的细胞中抑制连接蛋白的表达以及在所述受治疗者眼中或与所述眼有关的细胞中调节细胞的增殖、迁移、或分化。43.一种用于在受治疗者眼中或在与受治疗者眼有关的组织中促进伤口愈合的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以给予受治疗者的眼睛的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.0Ol至0.01mg/kg体重范围内并且在所述受治疗者的眼中或与所述眼有关的细胞中抑制连接蛋白的表达以及促进上皮细胞的累积。44.一种用于在受治疗者眼中或在与受治疗者眼有关的组织中促进伤口愈合的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以给予受治疗者的眼睛的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.001至.0.01mg/kg体重范围内并且在所述受治疗者的眼中或与所述眼有关的细胞中抑制连接蛋白的表达以及抑制细胞过多。45.一种用于治疗中枢神经系统损伤的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以结合对受治疗者进行的外科手术一起给予接近所述中枢神经系统的预先存在的伤口的部位的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.001至0.01mg/kg体重范围内以治疗所述中枢神经系统的所述损伤，其中所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQIDNO:12或25的核酸碱基序列的连接蛋白。46.一种用于接触角膜细胞以治疗角膜损伤的制剂，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以给予所述角膜细胞的量存在，所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物的量在0.001至0.01mg/kg体重范围内。47.根据权利要求46所述的制剂，其中，所述反义化合物是选自包括反义寡核苷酸、反义多核苷酸、脱氧核酶、吗啉代寡核苷酸、RNAi分子、siRNA分子、PNA分子、DNA酶、以及5’-端-突变的Ul小核RNA、以及前述的类似物的组。48.根据权利要求46所述的制剂，其中，所述反义化合物包括选自SEQIDN0:l_3的核酸碱基序列。49.根据权利要求46所述的制剂，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQIDNO:12的核酸碱基序列的连接蛋白。50.根据权利要求46或47所述的制剂，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQIDNO:25的核酸碱基序列的连接蛋白。51.根据权利要求46-49中任一项所述的制剂，其中，所述反义化合物是长度在15和35个核酸碱基之间的反义寡核苷酸。52.根据权利要求51所述的制剂，其中，所述反义化合物是包括天然存在的核酸碱基和未修饰的核苷间键的反义寡核苷酸。53.根据权利要求51所述的制剂，其中，所述反义化合物是包括至少一种选自至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的糖部分、和至少一种修饰的核酸碱基的反义寡核苷酸。54.根据权利要求53所述的制剂，其中，所述至少一种修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。55.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，所述普卢兰尼克凝胶或酸包括普卢兰尼克F127。56.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达5%的普卢兰尼克酸。57.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达10%的普卢兰尼克酸。58.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达15%的普卢兰尼克酸。59.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达20%的普卢兰尼克酸。60.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达25%的普卢兰尼克酸。61.根据权利要求56-59中任一项所述的制剂，其中，普卢兰尼克凝胶或酸进一步包括在磷酸缓冲盐溶液中高达30%的普卢兰尼克酸。全文摘要本发明提供了靶向连接蛋白的反义化合物及其使用方法。本发明提供了用于调节连接蛋白活性的方法以及组合物，包括例如，用于术后、外伤，或组织工程应用。这些化合物以及方法可在治疗上，例如，用来降低与疾病和病症有关的不良作用的严重性，其中直接细胞间通讯的局部破坏是所希望的。文档编号A61K48/00GK103212088SQ20131009801公开日2013年7月24日申请日期2004年12月3日优先权日2003年12月3日发明者维尔达·劳克斯,科林·R·格林申请人:科达治疗(新西兰)有限公司