一种从卷柏中提取总黄酮的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从卷柏中提取总黄酮的方法，即采用表面活性剂辅助微波提取卷柏中的总黄酮。即将卷柏全株干燥并粉碎，用含有适当浓度表面活性剂的稀乙醇水溶液浸没，多次微波照射提取，提取后快速上大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱干燥得到卷柏总黄酮。本发明的优点是微波提取技术和表面活性剂结合起来运用到卷柏总黄酮的提取中，减少了溶剂使用量，提高了提取效率，对设备要求不高，流程简单适合工业化生产。
【专利说明】一种从卷柏中提取总黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从卷柏中提取总黄酮的方法，更具体涉及一种利用表面活性剂辅助微波提取卷柏中总黄酮的方法，属于医药化工领域范畴。
【背景技术】
[0002]卷柏(Herba Selaginellae),为石松植物门_石松纲-卷柏目-卷柏科植物，又名九死还魂草，过去划为蕨类植物门。其干燥全草，具有活血通经之功效，为2010年版《中国药典(一部)》所收载。近年来，国内外学者对卷柏属植物的化学成分进行了大量的研究，报道发现的活性成分主要是黄酮类化合物和有机酸类，还发现了色酮。其中黄酮类物质药理作用显著，全草含苏铁双黄酮(sotetsuf Iavone),穗花杉双黄酮(amentof Iavone),扁柏双黄酮(hinokifIavone)，异柳杉双黄酮(isocryptomerin)，柳杉双黄酮(cryptomerin)B,芹菜素(apigenin)。其中穗花杉双黄酮的含量远远高于其他中草药。穗花杉双黄酮是一种磷酸酯酶C的抑制剂，在一些肿瘤中，磷酸肌醇的转换增强，磷酸酯酶C是磷酸肌醇转换的限速酶。穗花杉双黄酮通过抑制过分表达的磷酸酯酶C，从而抑制磷酸肌醇的转换。其他几种卷柏来源的双黄酮对多种人癌细胞也有显著的细胞毒性。这些说明卷柏属药用植物总黄酮是潜在的抗癌药物，此外卷柏中的黄酮类物质是具有很强的抗氧化性，可有效清除体内自由基，抑制油脂性过氧化物的合成，阻止细胞的退化，衰老，改变血液循环，降低胆固醇，提高人体免疫力。综上所述，卷柏中的总黄酮类物质极具开发成药物的潜在价值。
[0003]公开的文献和专利报道的方法普遍采用常规溶剂浸润后回流提取。由于卷柏组织溶胀破壁效果差，需多次回流提取，导致溶剂消耗量大、提取耗时长，杂质多，工业化生产成本高。我们采用的微波协同表面活性剂提取技术，原理是微波能从细胞内部迅速升温，使细胞迅速溶胀，促进黄酮类物质溶出并向外扩散，同时添加表面活性剂，可以降低细胞膜和溶剂间的表面张力，能增强溶剂对卷柏细胞组织的润湿性和渗透性，对总黄酮也具助溶作用，可以减少提取溶剂的用量，提高提取效率。目前尚未有公开卷柏总黄酮类物质的表面活性剂辅助微波提取方法的相关报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是为了提供一种从卷柏中提取总黄酮的方法，该方法可以节约提取溶剂，降低提取能耗，提高提取效率，生产出成本更低，质量更优的卷柏总黄酮。
[0005]为实现以上目的，本发明运用表面活性剂辅助微波的方法，制备卷柏总黄酮，包括以下步骤下:
[0006](I)将卷柏全株晾晒干燥后，粉碎过40?60目筛；
[0007](2)将所述的卷柏粉末加入一定浓度的乙醇水溶液中，卷柏粉末和乙醇水溶液的重量比为1: 20?1: 40 (kg/L)，再添加混合物重量0.3?0.8%的表面活性剂；
[0008](3)在微波功率为400?600w/L的条件下，作用2?5min，控制温度在65?80°C搅拌提取，搅拌强度为60?100rpm/min,重复作用10?20次；
[0009](4)将所述的提取液过滤后，加入0.3?1.0% (V/V)的无机酸，调ρΗ3.0?4.0为宜，流过大孔吸附树脂进行吸附，流速为2?3BV/h ；
[0010](5)用95% (V/V)乙醇洗脱，减压浓缩去除乙醇，碱溶酸沉，过滤后用95%乙醇结晶，干燥得到卷柏总黄酮。
[0011]本发明步骤⑵中乙醇水溶液的质量百分比浓度为20?35%，优浓度为30%。
[0012]本发明步骤(2)中表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)或者十二烷基苯磺酸钠(LAS)或者十六烷基三甲基氯化铵(1631)，表面活性剂可以降低固液相的界面张力，缩短浸润时间，提闻提取效率。
[0013]本发明步骤(4)中的过滤方法包括离心机甩滤、陶瓷膜过滤，优选陶瓷膜过滤，该方法滤液澄清度高，减少下一步大孔吸附的负担。
[0014]本发明步骤(4)中的大孔吸附树脂选用对卷柏总黄酮的吸附率和解析率较高的ADS-17，AB-8或DM130 ;达到85%以上，更优选的树脂吸附率和解析率分别达到92.1%和94.5%。
[0015]本发明步骤(4)中的过柱后流出液，加入步骤(4)中等摩尔量的浓度在0.3?1.0% (V/V)无机碱后，可以直接用来投入到下一批卷柏的提取工序中，省去回收溶剂的工序。
[0016]本发明利用表面活性剂辅助微波提取卷柏中总黄酮具有如下优点:(I)提取时间短，速度快，能耗低；(2)利用表面活性剂增容作用，辅助微波提取，溶剂消耗少，溶剂浓度低；(3)低乙醇浓度的提取液无需浓缩去除溶剂，调pH后直接可过柱吸附总黄酮，过柱液可以套用，重新用来提取卷柏，减少回收溶剂的能耗和溶剂损失，同时减少过柱废液的排放量。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明进一步描述，但本发明要求保护保护的范围绝不局限于下列实施方式。
[0018]实施例一:
[0019]取将卷柏全株晾晒干燥后，粉碎过50目筛，称取100g，加入3L的25% (V/V)乙醇水溶液，再添加15g十二烧基硫酸钠,60rpm/min搅拌下,调节微波功率400w/L,照射4min,冷却控制温度在65?80°C，再重复照射15次。将提取液用陶瓷膜过滤，加入0.5% (V/V)盐酸溶液调节PH3.0，流过大孔吸附树脂AB-8进行吸附，流速为3BV/h ;用95% (V/V)乙醇洗脱，减压浓缩去除乙醇后用95%乙醇结晶，过滤干燥得到卷柏总黄酮；大孔吸附树脂流出液用0.5% NaOH调节pH至6.0，作为下一批次卷柏的提取溶剂。
[0020]实施例二:
[0021]取将卷柏全株晾晒干燥后，粉碎过40目筛，称取100g，加入2.5L的30% (V/V)乙醇水溶液，再添加20g十六烧基三甲基氯化铵,60rpm/min搅拌下,调节微波功率500w/L,照射2min，冷却控制温度在65?80°C，再重复照射10次。将提取液用陶瓷膜过滤，加入0.5%(V/V)盐酸溶液调节pH3.0，流过大孔吸附树脂DM130进行吸附，流速为3BV/h ;用95% (V/V)乙醇洗脱，减压浓缩去除乙醇后用95%乙醇结晶，过滤干燥得到卷柏总黄酮；大孔吸附树脂流出液用0.5% NaOH调节pH至6.0,作为下一批次卷柏的提取溶剂。
[0022]实施例三:
[0023]取将卷柏全株晾晒干燥后，粉碎过60目筛，称取100g，加入3.5L的30% (V/V)乙醇水溶液，再添加25g十二烧基苯磺酸钠,70rpm/min搅拌下,调节微波功率500w/L,照射2min，冷却控制温度在65?80°C，再重复照射12次。将提取液用陶瓷膜过滤，加入0.6%(V/V)盐酸溶液调节pH3.0，流过大孔吸附树脂DM130进行吸附，流速为3BV/h ;用95% (V/V)乙醇洗脱，减压浓缩去除乙醇后用95%乙醇结晶，过滤干燥得到卷柏总黄酮；大孔吸附树脂流出液用0.5% NaOH调节pH至6.0,作为下一批次卷柏的提取溶剂。
【权利要求】
1.一种从卷柏中提取总黄酮的方法，其特征在于利用表面活性剂辅助微波提取卷柏中总黄酮。
2.根据权利要求1中所述的利用表面活性剂辅助微波提取卷柏中总黄酮的方法，其特征包括如下步骤: (1)将卷柏全株晾晒干燥后，粉碎过40?60目筛； (2)将所述的卷柏粉末加入一定浓度的乙醇水溶液中，卷柏粉末和乙醇水溶液的重量比为1: 20?1: 40 (kg/L)，再添加混合物重量0.3?0.8%的表面活性剂； (3)在微波功率为400?600w/L的条件下，作用2?5min，控制温度在65?80°C搅拌提取，搅拌强度为60?100rpm/min,重复作用10?20次； (4)将所述的提取液过滤后，加入0.3?1.0% (v/v)的无机酸，调pH3.0?4.0为宜，流过大孔吸附树脂进行吸附，流速为2?3BV/h ； (5)用乙醇洗脱，减压浓缩去除乙醇，碱溶酸沉，过滤后用95%乙醇结晶，过滤干燥得到卷柏总黄酮。
【文档编号】A61K36/11GK104248648SQ201310274414
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2013年6月28日 优先权日:2013年6月28日
【发明者】魏元刚, 杨永安, 易铭, 章海燕, 唐希灿 申请人:江苏天晟药业有限公司