一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药学领域，具体涉及一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂及其制备方法和应用，可以有效解决现有造影剂技术靶向性差、半衰期短、弛豫效能低和毒副作用大的问题。本发明的技术方案是，由天然多糖分子透明质酸通过亚烷基二胺为连接臂和羧基化短单壁碳纳米管共价相连，然后将三氯化钆通过物理吸附于修饰后的碳纳米管上，与水形成纳米混悬液，即成以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。这种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂物理及化学稳定性良好，生物相容性好，有效用于肿瘤诊断中的磁共振造影剂，是肿瘤造影剂上的创新。
【专利说明】一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物领域，特别是一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备方法。
【背景技术】
[0002]恶性肿瘤是一类严重危害人类健康的多发疾病，据世界卫生组织统计，目前其已经超过心血管疾病成为人类致死的首要病因。近年来虽然治疗手段有所进步，生存率有所提高，但死亡率仍然居高不下，因此需要更为有效安全的手段以实现肿瘤的早期诊断以及治疗。自1973年Lauterbur首次实现磁共振成像技术以来,其较强的软组织分辨能力、能任一方位成像等优点而迅速发展为协助临床诊断必不可少的参考依据。然而到目前为止，临床上常用的磁共振造影剂多缺乏靶向性、半衰期较短、弛豫效能低且大量使用时可导致毒副作用等缺点，因此发明一种靶向性、半衰期长、弛豫效能高且毒性低的磁共振造影剂迫在眉睫。
[0003]碳纳米管自1991年发现以来，以其独特的结构以及优异的热电学性质引起广泛关注，近年来，其应用在生物医学特别是药物载体上的研究更是逐渐成为热点。根据组成碳纳米管层数的不同，可以分为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管，单壁碳纳米管直径为I-2nm，长度为50nm-1cm，其化学结构特点是所有的原子都暴露在表面而具有较大的比表面积。单壁碳纳米管可以在侧壁不同部位通过不同的方式结合不同的效应分子，其中空结构可以装载一定大小的分子，形成一个“容器”状的载体，来完成药物分子或者效应分子的转运，这样的结构特点使得在一个单壁碳纳米管上实现多位点结合，可以结合不同的靶向配体和效应分子而起到所期望的作用，从而为其在生物医学中的应用提供更多机遇和挑战。而短单壁碳纳米管不仅具有以上单壁碳纳米管的优势，其长度仅为I-3μπι，更利于细胞吸收，提高生物相容性以及最终实现在生物体内的消除。
[0004]顺磁性造影剂以钆的螯合物为主，由于具有未成对电子使Gd3+具有顺磁性，从而缩短周围水中质子的纵向弛豫时间。Hashimoto等报道了一种把Gd3+选择性地沉积在超短单壁碳纳米管上，其弛豫度为商用造影剂的40-90倍，其成像性能极大提高。
[0005]然而，尽管短单壁碳纳米管具有以上种种优势，但其本身生物相容性较差，且不具有肿瘤靶向性，因此将其作为药物载体仍需要进一步处理修饰。目前，针对短单壁碳纳米管水溶性差的问题，主要采用表面羧基化或者氨基化处理；而针对其靶向性缺陷仍需通过进一步引入叶酸等靶基团。但是，此类合成步骤较为繁琐，且不能借助单一分子同时满足其稳定性、相容性及靶向性要求，导致载体结构复杂。
[0006]针对以上问题，本发明选用一种天然多糖一透明质酸为靶向基团来作为解决生物相性差、肿瘤靶向性差的方法。透明质酸是一种生物相容性好、可生物降解的天然线性多糖，近年来发现肿瘤细胞表面存在HA特异性受体。因此利用HA及其衍生物的可降解性及细胞表面HA受体专一性等特性，将HA及其衍生物制成药物载体可达到药物缓释和靶向运输的目的。该载体合成工艺简单方便，并将单壁碳纳米管独特的药物负载特性及透明质酸良好的生物相容性、缓释性和靶向性整合为一体，克服了目前临床常用造影剂载体靶向性差、半衰期短等问题，具有极大的临床应用前景。
【发明内容】
[0007]针对上述情况，克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆造影剂的制备方法，可有效解决传统磁共振造影剂靶向性差、半衰期短、弛豫效能低、毒副作用大等问题。
[0008]本发明解决的技术方案是，由以下步骤实现:
[0009](I)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将78-102mg短单壁碳纳米管投入40-50mL混酸中，在功率为180-200W超声条件下反应3-4h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物；所述混酸为硫酸与硝酸以体积比3: I所组成的混合酸；
[0010](2)胺化透明质酸 的合成:将93-107mg透明质酸、252-266mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和148-162mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解在8-12ml有机溶剂中，室温搅拌30min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.4-
0.6ml的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应6-48h,反应结束后,加入50ml丙酮,真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸；所述有机溶剂为甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜的一种；所述的乙二胺甲酰胺溶液是由体积比的乙二胺3.6%和甲酰胺96.4%混匀组成；
[0011](3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取26-34mg羧基化短单壁碳纳米管溶于28-32mL反应溶剂中，室温搅拌反应12h后，冰浴超声30min得到反应液；取100-118mg EDC和60-72mg NHS分别溶于3-4ml反应溶剂后加入反应液中，室温搅拌反应14-16min，在反应期间内，将56-64mg胺化透明质酸溶于7-9mL反应溶剂中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应12-48h，反应结束后，加入3-4倍反应液量的预冷丙酮，离心分离取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管；所述反应溶剂为甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺的一种或两种的混合物；
[0012](4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取26-34mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管,加入7-8mL水,冰浴超声30min-Ih使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有194-226mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min，离心分离取沉淀，在沉淀中加入含有表面活性剂的水溶液，超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂；所述表面活性剂为大豆卵磷脂，或大豆卵磷脂与泊洛沙姆的混合物；所述的表面活性剂的水溶液是由每IOmg的表面活性剂加入Iml的水组成。
[0013]所述以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂，可以用于静脉注射、肌肉注射、腹腔注射给药，优选注射剂、注射粉针。
[0014]本发明合成工艺简单方便，具有良好的生物相容性、高靶向性、高弛豫率、低毒性等优点，是肿瘤诊断用磁共振造影剂上的创新。【具体实施方式】
[0015]以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作进一步详细说明。
[0016]实施例1
[0017]本发明制备方法在具体实施中，可由以下步骤实现:
[0018](I)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将SOmg短单壁碳纳米管投入40mL混酸中，在功率为180W超声条件下反应3h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物；
[0019](2)胺化透明质酸的合成:将95mg透明质酸、254mg 1-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和150mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解在8mL甲酰胺中，室温搅拌30min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.4mL的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应6h,反应结束后,加入50ml丙酮,真空抽滤得沉淀物,沉淀物加超纯水复溶,透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸；
[0020](3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取28mg羧基化短单壁碳纳米管溶于28mL甲酰胺中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取102mgEDC和62mg NHS分别溶于3mL甲酰胺后加入反应液中，室温搅拌反应14min，在反应期间内，将58mg胺化透明质酸溶于7mL甲酰胺中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应12h，反应结束后，加入3倍反应液量的预冷丙酮，4°C低温离心机离心IOmin后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管；
[0021](4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取28mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管,加入7mL水,冰浴探头超声30min使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有196mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min后，4°C低温离心机离心取沉淀，在沉淀中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
[0022]实施例2
[0023]本发明制备方法在具体实施中，可由以下步骤实现:
[0024](I)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将90mg短单壁碳纳米管投入45mL混酸中，在功率为190W超声条件下反应3.5h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物；
[0025](2)胺化透明质酸的合成:将IOOmg透明质酸、259mg EDC和155mg NHS,溶解在IOmLN, N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌30min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入
0.5mL的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应24h，反应结束后，加入50ml丙酮，真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸；
[0026](3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取30mg羧基化短单壁碳纳米管溶于30mL N，N- 二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取109mg EDC和66mg NHS分别溶于3.5mL N，N- 二甲基甲酰胺后加入反应液中，室温搅拌反应15min，在反应期间内，将60mg胺化透明质酸溶于8mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应24h，反应结束后，加入3.5倍反应液量的预冷丙酮，4°C低温离心机离心IOmin后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管；
[0027](4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取30mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管,加入7.5mL水,冰浴探头超声45min使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有210mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min,4°C低温离心机离心取沉淀,在沉淀中加入由IOmg重量比1:1的大豆卵磷脂与泊洛沙姆的混合物和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
[0028]实施例3
[0029]本发明制备方法在具体实施中，可由以下步骤实现:
[0030](I)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将IOOmg短单壁碳纳米管投入50mL混酸中，在功率为200W超声条件下反应4h后，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，即得短单壁碳纳米管羧基化产物；
[0031](2)胺化透明质酸的合成:将105mg透明质酸、264mg EDC和160mg NHS,溶解在12ml 二甲基亚砜中，室温搅拌30min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.6ml的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应48h，反应结束后，加入50ml丙酮，真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸；
[0032](3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取32mg羧基化短单壁碳纳米管溶于32mL甲酰胺与N，N- 二甲基甲酰胺的混合物中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取116mg EDC和70mg NHS分别溶于4ml甲酰胺与N，N- 二甲基甲酰胺的混合物后加入反应液中，室温搅拌反应16min，在反应期间内，将62mg胺化透明质酸溶于9mL甲酰胺与N，N- 二甲基甲酰胺的混合物中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应48h,反应结束后,加入4倍反应液量的预冷丙酮，4°C低温离心机离心IOmin后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管；
[0033](4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取32mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管，加入SmL水，冰浴探头超声Ih使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有224mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min，4°C低温离心机离心取沉淀，在沉淀中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，即成以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
[0034]相关试验资料如下:
[0035]一.透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的扫谱分析
[0036]对本发明透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管进行紫外分光光度法扫谱分析可知:透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管既保留了羧基化短单壁碳纳米管在264nm的特征吸收峰，又保留了透明质酸的末端吸收，初步断定羧基化短单壁碳纳米管和透明质酸偶联成功；对本发明透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管进行傅里叶红外图谱分析可知:当透明质酸与羧基化短单壁碳纳米管通过乙二胺共价偶联后，1653CHT1处出现了酰胺键的伸缩振动峰，进一步证明了透明质酸有效地连接到羧基化短单壁碳纳米管上。
[0037]二.以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的表征
[0038]1.实验物:称取2mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管，探头超声使其溶解于2mL水中，冰浴条件下探头超声30min，14mg三氯化钆用水溶解，然后二者混合，室温搅拌30min后，离心(IOOOOrmp)取沉淀用含有表面活性剂的水溶液在探头超声条件下使其分散，重蒸水透析ld，离心(4000rpm) 15min，冷冻干燥；所述表面活性剂为大豆卵磷脂或大豆卵磷脂和泊洛沙姆的混合物。
[0039]2.以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂中钆元素含量的测定
[0040]采用ICP-OES分析法测定钆元素的含量。以公式(I)计算样品的载药量。载药量达到22.8%。
[0041]
【权利要求】
1.一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂，其特征在于，由透明质酸通过亚烷基二胺为连接臂和羧基化短单壁碳纳米管共价相连，然后将三氯化钆通过物理吸附于以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管上，与水形成纳米混悬液，即成以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂；所述短单壁碳纳米管为长度1-3 Ii m、直径1-2nm的单壁碳纳米管；所述透明质酸分子量为不高于400kd ;所述连接臂为碳原子数2-12的亚烷基二胺。
2.根据权利要求1所述的以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备制方法，其特征在于，由以下步骤实现: (1)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将78-102mg短单壁碳纳米管投入40-50mL混酸中，在功率为18(T200W超声条件下反应3-4h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物；所述混酸为硫酸与硝酸以体积比3: I所组成的混合酸； (2)胺化透明质酸的合成:将93-107mg透明质酸、252-266mg1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和148-162mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解在8-12ml有机溶剂中，室温搅拌30 min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.4-.0.6ml的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应6-48h,反应结束后,加入50ml丙酮,真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸；所述有机溶剂为甲酰胺、N，N- 二甲基甲酰胺、二甲基亚砜的一种；所述的乙二胺甲酰胺溶液是由体积比的乙二胺3.6%和甲酰胺96.4%混匀组成； (3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取26-34mg羧基化短单壁碳纳米管溶于28-32mL反应溶剂中，室温搅拌反应12h后，冰浴超声30min得到反应液；取100-118mg EDC和60-72mg NHS分别溶于3-4ml反应溶剂后加入反应液中，室温搅拌反应14-16min，在反应期间内，将56-64mg胺化透明质酸溶于7-9mL反应溶剂中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应12-48h，反应结束后，加入3-4倍反应液量的预冷丙酮，离心分离取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48 h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管；所述反应溶剂为甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺的一种或两种的混合物； (4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取26-34mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管,加入7-8mL水,冰浴超声30min-Ih使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有194-226mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min，离心分离取沉淀，在沉淀中加入含有表面活性剂的水溶液，超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂；所述表面活性剂为大豆卵磷脂，或大豆卵磷脂与泊洛沙姆的混合物；所述的表面活性剂的水溶液是由每IOmg的表面活性剂加入Iml的水组成。
3.根据权利要求2所述的以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (I)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将80mg短单壁碳纳米管投入40mL混酸中，在功率为180 W超声条件下反应3h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物；(2)胺化透明质酸的合成:将95mg透明质酸、254mg1_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和150mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解在8mL甲酰胺中，室温搅拌30min,得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.4mL的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应6h,反应结束后,加入50ml丙酮,真空抽滤得沉淀物,沉淀物加超纯水复溶,透析48h,冷冻干燥，得胺化透明质酸； (3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取28mg羧基化短单壁碳纳米管溶于28mL甲酰胺中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取102 mg EDC和62mg NHS分别溶于3mL甲酰胺后加入反应液中，室温搅拌反应14min，在反应期间内，将58mg胺化透明质酸溶于7mL甲酰胺中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应12h，反应结束后，加入3倍反应液量的预冷丙酮，4°C低温离心机离心10 min后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析48 h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管； (4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取28mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管，加入7mL水，冰浴探头超声30min使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有196mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min后，.4°C低温离心机离心取沉淀，在沉淀中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
4.根据权利要求2所述的以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将90mg短单壁碳纳米管投入45mL混酸中，在功率为190W超声条件下反应3.5h，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，得短单壁碳纳米管羧基化产物； (2)胺化透明质酸的合成:将IOOmg透明质酸、259mgEDC和155mg NHS，溶解在IOmLN, N- 二甲基甲酰胺中，室温搅拌30 min,得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入.0.5mL的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应24h，反应结束后，加入50ml丙酮，真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸； (3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取30mg羧基化短单壁碳纳米管溶于30mL N, N- 二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取109 mg EDC和66mg NHS分别溶于3.5mL N，N-二甲基甲酰胺后加入反应液中，室温搅拌反应15min，在反应期间内，将60mg胺化透明质酸溶于8mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应24h，反应结束后，加入3.5倍反应液量的预冷丙酮，.4°C低温离心机离心IOmin后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复溶，透析.48 h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管； (4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取30mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管，加入7.5mL水，冰浴探头超声45 min使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有210mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min，.4°C低温离心机离心取沉淀，在沉淀中加入由IOmg重量比1:1的大豆卵磷脂与泊洛沙姆的混合物和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，得以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
5.根据权利要求2所述的以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)羧基化短单壁碳纳米管的合成:将IOOmg短单壁碳纳米管投入50mL混酸中，在功率为200W超声条件下反应4h后，真空抽滤得到固体产物，用超纯水反复洗涤产物至中性，即得短单壁碳纳米管羧基化产物； (2)胺化透明质酸的合成:将105mg透明质酸、264mgEDC和160mg NHS，溶解在12ml二甲基亚砜中，室温搅拌30 min，得反应液，在冰浴条件下Ih内，将反应液滴入0.6ml的乙二胺甲酰胺溶液中，升至室温反应48 h，反应结束后，加入50ml丙酮，真空抽滤得沉淀物，沉淀物加超纯水复溶，透析48h，冷冻干燥，得胺化透明质酸； (3)透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管的合成:称取32mg羧基化短单壁碳纳米管溶于32mL甲酰胺与N，N- 二甲基甲酰胺的混合物中，室温搅拌反应12h后，冰浴探头超声30min得到反应液；取116 mg EDC和70mg NHS分别溶于4ml甲酰胺与N，N- 二甲基甲酰胺的混合物后加入反应液中，室温搅拌反应16min，在反应期间内，将62mg胺化透明质酸溶于9mL甲酰胺与N，N-二甲基甲酰胺的混合物中，然后滴加至反应液中，室温条件下，搅拌反应48h，反应结束后，加入4倍反应液量的预冷丙酮，4°C低温离心机离心IOmin后取沉淀物，用丙酮洗涤后再次离心取沉淀，超纯水复 溶，透析48 h，冷冻干燥，得透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管； (4)以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂的制备:称取32mg透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管，加入SmL水，冰浴探头超声Ih使其溶解，室温条件下，边搅拌边缓慢滴入含有224mg三氯化钆的水溶液，滴加完毕后，搅拌反应30min，4°C低温离心机离心取沉淀，在沉淀中加入由IOmg大豆卵磷脂和Iml水形成的水溶液，探头超声使沉淀分散，采用透析法除去游离三氯化钆，冻干，即成以透明质酸修饰的羧基化单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂。
6.权利要求1所述的一种以透明质酸修饰的羧基化短单壁碳纳米管为载体的钆类造影剂在肿瘤诊断中磁共振造影剂的应用。
【文档编号】A61K49/18GK103446596SQ201310397793
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月4日 优先权日:2013年9月4日
【发明者】侯琳, 张振中, 王丽丽, 王亚婷, 张慧娟, 张红岭 申请人:郑州大学