心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用。研究结果表明，心脑欣胶囊能增加小鼠常压密闭缺氧存活时间，并增加断头张口喘气时间，提示心脑欣胶囊对缺氧环境小鼠具有一定的保护作用。此外，心脑欣胶囊能够明显降低双侧颈总动脉结扎所致脑缺血小鼠的脑含水量、脑指数和脑毛细血管通透性等，提示心脑欣胶囊对实验性脑缺血有一定保护作用。
【专利说明】心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，具体涉及心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用。
【背景技术】
[0002]缺血性脑血管疾病是一种严重危害人类健康的常见病、多发病，其死亡率高。目前治疗缺血性脑血管病除合理膳食、适当锻炼、戒烟戒酒、养成良好的生活习惯之外，一般都要采用临床治疗，但是在治疗应用中存在出血和再灌注损伤等危害，因此探讨缺血性脑损伤的发病机制，开发保护缺血性脑损伤的药物具有重要的理论意义和临床价值。
[0003]心脑欣胶囊为三普药业股份有限公司产品，国药准字Z20025866，主治益气养阴、活血化瘀。但在学习记忆障碍的作用还未见报道。
【发明内容】
[0004]发明目的:本发明的目的在于提供心脑欣胶囊的新应用。
[0005]技术方案:本发明公开了心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用。
[0006]上述心脑欣胶囊由重量份数为3~6份的红景天，5~15份的枸杞，3~9份的沙棘组成。
[0007]有益效果:研究结果表明，心脑欣胶囊能增加小鼠常压密闭缺氧存活时间，并增加断头张口喘气时间，提示心脑欣胶囊对缺氧环境小鼠具有一定的保护作用。此外，心脑欣胶囊能够明显降低双侧颈总动脉结扎所致脑缺血小鼠的脑含水量、脑指数和脑毛细血管通透性等，提示心脑欣胶囊对实验性脑缺血有一定保护作用。
【具体实施方式】
[0008]实施例1:
[0009]心脑欣胶囊对实验性脑缺血小鼠的保护作用
[0010]I实验材料
[0011]1.1 药物
[0012]心脑欣胶囊，内容物为棕褐色粉末，0.5g/粒，批号:120803三普药业股份有限公司；实验时，去除胶囊外壳，研磨内容物，用双蒸水配置成所需浓度。尼莫地平，规格:30mg，批号:BJ09103，拜耳医药保健有限公司；实验时，研磨为粉末，用双蒸水配置成所需浓度。伊文思蓝，批号:W20111101，国药集团化学试剂有限公司。甲酰胺，批号:11032310336，南京化学试剂有限公司。考马斯亮兰、超氧化物歧化酶(S0D)、丙二醛(MDA)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(N0S)、谷氨酸(Glu)试剂盒均购自南京建成生物有限公司。
[0013]1.2 仪器
[0014]电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；恒温干燥箱(Ecocell，德国)；酶标仪(Thermo，美国)；高速离心机(Sigma，1-15K)，数显恒温水浴锅(HH-4，常州国华电器有限公司)，XW-80A旋涡混合器(上海沪西分析仪器厂);微量移液器；手动匀浆器；SMG-2通道式水迷宫(中国医学科学院药物研究所)；STT-2跳台仪(中国医学科学院药物研究所)。
[0015]1.3实验动物
[0016]清洁级ICR小鼠，18~22g，雄性，由扬州大学比较医学中心提供，实验动物生产许可证号:SCXK (苏)2012-0004。动物分笼饲养，保持12h昼夜节律，室温22± I°C，自由饮水摄食。
[0017]2实验方法
[0018]2.1小鼠常压密闭缺氧存活时间的测定
[0019]清洁级ICR小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组(灌胃等体积生理盐水)，尼莫地平组(40mg/kg/d),心脑欣胶囊低、中、高剂量组(170mg/kg/d、340mg/kg/d、680mg/kg/d)。空白对照组及各给药组ig，2次/d，连续3d，于末次给药后lh，立即将各组小鼠分别放入容积为125ml的密闭广口瓶中，瓶内放有IOg钠石灰，观察并记录小鼠存活时间。
[0020]2.2小鼠断头后张口喘气时间的测定
[0021]分组与给药同2.1。于末次灌胃后lh，用大剪刀在小鼠耳下部快速断头，记录从断头到最后一次张口喘气的时间，即为张口喘气时间。
[0022]2.3急性不完全性脑缺血模型小鼠脑指数、脑含水量的测定
[0023]清洁级ICR小鼠90只，随机分为6组。即假手术组、模型组、尼莫地平组、心脑欣胶囊低、中、高剂量组。给药剂量与方式同2.1，连续给药3d，末次给药Ih后，将小鼠用10%水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉后，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧颈总动脉(CCA)。引入双线并分别结扎，形成急性实验性不完全性脑缺血模型；假手术组只分离双侧颈总动脉但不结扎。3h后，快速断头，开颅取脑，去除小脑及延髓。称重(湿脑重)，计算脑指数(脑指数=湿脑重X 100/体重)。然后在110°C烤箱中烤至恒重，分析天平称重(干脑重)，计算脑含水量，脑含水量％=(湿脑重-干脑重)/湿脑重X 100%。
[0024]2.4急性不完全性脑缺血模型小鼠脑毛细血管通透性的测定
[0025]小鼠分组，给药及造模同2.3。模型组及各给药组在结扎双侧CCA前5min尾静脉注射0.5%伊文思兰50mg/kg，随即结扎双侧CCA ;假手术组尾静脉注射伊文思兰50mg/kg，分离出双侧CCA，但不结扎。结扎45min后，断头取脑，称重大脑湿重(去小脑、延髓)，将脑组织浸泡于4ml甲酰胺中，于45°C恒温箱中温育72h，取温育液，用酶标仪在620nm处测定吸收度，根据标准曲线(y=41.214x-0.0035，R2=0.9988)计算出脑内伊文思蓝的含量，计算出脑内伊文思蓝的含量(ug/g脑湿重)。
[0026]2.5小鼠双侧颈总动脉缺血再灌注实验
[0027]2.5.1分组、造模及给药
[0028]清洁级ICR小鼠90只，随机分为6组。即假手术组、模型组、尼莫地平组、心脑欣胶囊低、中、高剂量组 。将小鼠用10%水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉后，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧CCA。模型组、阳性药组及心脑欣胶囊给药组用无创动脉夹夹闭双侧CCAlOmin。松开动脉夹灌注IOmin后，再夹闭lOmin，再通后缝合伤口。放回笼中保温饲养。假手术组的麻醉及手术过程与模型组相同，但不阻断CCA，观察时间与模型组相同。在全部造模过程中保持动物肛温在37°C左右。术后3d小鼠开始灌胃给药:空白对照组灌胃等体积生理盐水，尼莫地平组为30mg/kg/d，心脑欣胶囊低、中、高剂量组灌胃剂量分别为170mg/kg/d、340mg/kg/d、680mg/kg/d,每天灌胃I次,连续给药30d。
[0029]2.5.2 跳台实验(Step-downavoidancetest)
[0030]被动回避反应箱，底板设有铜栅，可通交流电，电压为36V。铜栅的一角放置一个橡胶平台作为安全区，小鼠可停留在平台上回避电击。末次给药Ih后开始进行学习训练。训练前先将小鼠放入箱中自由活动3min，熟悉环境，然后接通铜栅电源，持续5min，记录第一次跳下平台的潜伏期和5min内的错误次数(动物跳下平台的次数)，以此作为学习成绩。24h后测验，记录动物第一次跳下平台的潜伏期和5min内的错误次数，以此作为记忆成绩。
[0031]2.5.3 通道式水迷宫实验(watermazetest)
[0032]通道式水迷宫由黑色有机玻璃板制成，水深22cm，水温控制在25 V左右，分为终点区，A区，B区，C区，D区。并设有4个盲端，终点设有台阶，动物通过台阶可上岸躲避溺水危险。检测前先对小鼠进行训练，训练时先将动物放在终点台阶附近，让其自行爬梯2次，以熟悉逃生途径。整个训练分4阶段进行，第一阶段:将挡板挡在A处，让动物学习从该处游回终点；第二阶段:挡板挡在B处，以此为出发点进行训练；第三阶段:将挡板挡在C处，让动物学习从该处游回终点；第四阶段:从起点开始训练。每一阶段训练2次，训练过程中可用指示棒适当引导，每阶段训练结束后休息2h再进行下一阶段的训练。全部训练结束后，让小鼠休息2h，然后进行检测。先将小鼠放于终点的爬梯附近，使其自行爬上2次，以进一步熟悉环境，然后放于起点处，记录3min内动物由起点游至终点区台阶处全程所需时间(latency)以及进入盲端次数(errortimes),作为学习成绩。3min内不能游出者,计3min。24h后重复测试,作为记忆成绩。2.5.4小鼠血楽:中内皮素-1 (ET-1),血栓素B2 (TXB2)和6-酮-前列腺素(6-keto-PGFl α )含量测定
[0033]行为学实验结束后，小鼠禁食IOh后给药,给药Ih后摘眼球取血,3.8%枸橼酸三钠溶液抗凝。3000r/min离心lOmin，取上层液，于4°C保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)按试剂盒说明书操作程序测定各`指标。
[0034]2.5.5脑组织匀浆的制备
[0035]小鼠摘眼球取血后，立即将其脱颈椎处死，于冰浴上取出大脑组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液,滤纸拭干,称重。按重量体积比加生理盐水制成10%的组织匀浆，2500r/min,离心15min,取上清液备用。
[0036]2.5.6小鼠脑内蛋白含量的测定
[0037]测定原理:蛋白质分子具有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮兰显色剂加入蛋白标准液或样品中时，考马斯亮兰染料上的阴离子与蛋白-NH3+结合，使溶液变为蓝色，通过测定吸光度可以计算出蛋白含量。
[0038]操作步骤:按试剂盒说明书操作程序进行。
[0039]2.5.7超氧化物歧化酶(SOD)测定
[0040]测定原理:通过黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。
[0041]操作步骤:参见SOD试剂盒说明书。
[0042]2.5.8 丙二醛(MDA)测定[0043]测定原理:过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。
[0044]操作步骤:按试剂盒说明书操作程序进行。
[0045]2.5.9谷氨酸(Glu)含量测定
[0046]测定原理:
【权利要求】
1.心脑欣胶囊在制备治疗脑缺血药物中的应用。
2.权利要求1所述的心脑欣胶囊，其特征在于，由以下重量份数组分组成:红景天3~6份，枸杞5~15份， 沙棘3~9份。
【文档编号】A61K9/48GK103520363SQ201310398194
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月4日 优先权日:2013年9月4日
【发明者】马俊仓, 邹存生, 李成秀, 张国清, 夏彬 申请人:三普药业有限公司