一种杨梅叶总黄酮的提取工艺及其提取条件的优化方法
【专利摘要】本发明公开了一种以抗氧化活性为指标提取杨梅叶总黄酮的方法，按照10-25mL乙醇/g杨梅叶的液料比混合，于60-90℃的温度下采用微波辅助萃取方法提取5-11min，3500r/min下离心5min，取上清得杨梅叶提取液，当提取温度为73.3℃，提取时间为7.00min，液料比为20：1mL/g时，用DPPH法和ABTS法测定提取液中Trolox的当量分别为1352.10μmol/g和1438.73μmol/g，提取物的总黄酮含量为70.94mg/g。本发明还提供了一种以抗氧化活性为指标，用响应曲面法优化杨梅叶总黄酮提取工艺的方法，设置3个变量：提取温度，提取时间和液料比，用DesignExpert软件根据Box-Behnken设计原则进行优化。该方法成本底，提取时间短，提取效率高，原料来源广泛。
【专利说明】一种杨梅叶总黄酮的提取工艺及其提取条件的优化方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于医药【技术领域】，涉及一种杨梅叶总黄酮提取的提取工艺及其提取条件优化方法，特别是涉及以抗氧化活性为指标，利用响应曲面法优化杨梅叶总黄酮提取条件的方法。
【背景技术】
[0003]自由基，人体进行生命活动时所产生的一种具有非配对电子的活性基团或分子，是正常生化过程的中间产物，在机体正常及病理过程中都存在。
[0004]生物体内的自由基主要包括超氧阴离子自由基(02_.)、羟基自由基(.0Η)和脂质过氧化自由基(R00.)等，可攻击体内的生物大分子，如核酸、蛋白质、多不饱和脂肪酸，从而对机体产生毒害。自由基氧化损伤是导致生物体衰老和某些疾病如癌症、糖尿病、心血管疾病等的重要因素。因此，抗氧化活性物质的研究和开发成为国内外学者研究的热点。
[0005]化学合成抗氧化剂如二丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)等曾一度受到青睐，但通过动物实验发现它们有一定毒性和致畸作用，使得人们对合成抗氧化剂产生了疑虑。天然抗氧化剂安全、无毒，符合人们对健康、安全的新需求。大量临床研究表明，多种天然植物包括蔬菜、水果、谷物及中草药等都含有黄酮、多酚、鞣质、皂苷及生物碱等抗氧化活性成分，在一定程度上减少了机体的氧化损伤。
[0006]杨梅叶为双子叶纲杨梅科Icicacae杨梅属Myrica L常绿灌木或小乔木，学名Myrica rubra (Lour.) Sieb.et Zucc.,英文名 China WaxmyrtIe, China Bayberry 的干燥叶片。收载于《中华本草》。主要化学成分是黄酮类和原花青素类，黄酮类物质为杨梅素、槲皮素、山奈酚以及各自连有不同的糖所组成的苷。药理及体内体外实验证实:杨梅叶具有很好的降低血糖、抑菌、抗炎镇痛、保肝护肝、抗肿瘤和抗氧化作用。
[0007]杨梅叶含有丰富的黄酮类物质，具有很强的抗氧化作用。目前现有的杨梅叶总黄酮提取方法为:用乙醇溶液浸提，结合超声辅助方法，在45倍于样重的40%的乙醇浸泡24h后，超声辅助萃取45 min,连续提取2次；超声-微波协同萃取，提取温度70°C，液料比25mL /g,乙醇浓度60%，提取时间40 min，提取次数2次；提取时间长，提取次数多。响应曲面设计方法(Response Surface Methodology, RSM):是利用合理的试验设计方法并通过实验得到一定数据，采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系，通过对回归方程的分析来寻求最优工艺参数，解决多变量问题的一种统计方法(又称回归设计)。本发明对杨梅叶的提取和抗氧化活性做了更加深入的研究，提供一种省时，高效，溶剂用量少的提取方法。
【发明内容】
[0008]本发明要解决的技术问题是提供一种以抗氧化活性为指标，运用响应曲面优化方法所获得的杨梅叶总黄酮提取工艺，本发明对提取温度、提取时间以及液料比这些影响因素进行优化，从而提高总黄酮的得率。
[0009]为了解决上述技术问题，本发明提供一种以抗氧化活性为指标的杨梅叶总黄酮提取工艺，杨梅叶与含水乙醇按照10-25 mL含水乙醇/g杨梅叶的液料比混合，于60-90°C的温度下采用微波辅助萃取方法提取5-11 min，得杨梅叶总黄酮提取液，所述的含水乙醇体积浓度为60%-80%。
[0010]本发明的具体方法为:新鲜杨梅叶烘干，粉碎，过100目筛，用10倍体积石油醚浸泡，脱脂，抽滤，阴干；精密称定微波萃取罐，按照比例加入含水乙醇和杨梅叶，混合，称定重量，于60-90°C的温度下采用微波辅助萃取方法提取5-11 min，提取后静置冷却到室温，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，3500 r/min下离心5 min,取上清得杨梅叶总黄酮提取液。
[0011]作为本发明的杨梅叶总黄酮提取工艺的优选:所述的含水乙醇体积浓度为70%-80%，所用的杨梅叶与含水乙醇比例为15-20 mL含水乙醇/g杨梅叶，温度为70_80°C，提取时间 7.00-9.00 min。
[0012]本发明还同时提供了一种以抗氧化活性为指标，用响应曲面法优化杨梅叶总黄酮提取工艺的方法，设置以下3个变量:乙醇(80%)与杨梅叶的液料比，提取温度，提取时间；利用Design Expert软件根据Box-Behnken设计原则进行优化。
[0013]通过单因素实验筛选选取提取温度、提取时间和液料比三个条件，进行Box-Behnken实验，分别以X1、X2、X3表示，每个自变量的低、中、高试验水平编码分别为_1、
O、I,见表1 ;
按照Box-Behnken设计原理进行实验方案设计，并进行实验；
利用Design Expert软件分析实验结果得到杨梅叶总黄酮抗氧化活性的二次多项模型，筛选出杨梅叶总黄酮最佳提取条件。
【权利要求】
1.杨梅叶总黄酮的提取工艺，其特征是:杨梅叶与含水乙醇按照10-25mL含水乙醇/g杨梅叶的液料比混合，于60-90°C的温度下采用微波辅助萃取方法提取5-11 min，得杨梅叶总黄酮提取液，所述的含水乙醇体积浓度为60%-80%。
2.根据权利要求1所述的杨梅叶总黄酮的提取工艺，其特征是:新鲜杨梅叶烘干，粉碎，过筛，用石油醚浸泡，脱脂，抽滤，阴干；精密称定微波萃取罐，按照液料比混合，称定重量，于60-90°C的温度下采用微波辅助萃取方法提取5-11 min，提取后静置冷却到室温，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，离心5 min，取上清得杨梅叶总黄酮提取液。
3.根据权利要求1或2所述的提取工艺，其特征是:所述的含水乙醇浓度为70%-80%。
4.根据权利要求1或2所述的提取工艺，其特征是:所述的温度为70-80°C。
5.根据权利要求1或2所述的提取工艺，其特征是:提取时间为7-9min。
6.根据权利要求1所述的杨梅叶总黄酮的提取工艺，其特征是:所述杨梅叶与含水乙醇按照15-20 mL含水乙醇/g杨梅叶的液料比混合。
7.响应曲面法在优化中药提取工艺中的应用。
8.根据权 利要求7所述的应用，其特征在于，所述的中药为杨梅叶，设置以下3个变量:杨梅叶与含水乙醇的液料比、提取温度、提取时间；利用Design Expert软件根据Box-Behnken设计原则进行优化。
【文档编号】A61P39/06GK103599147SQ201310569191
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】邸欣, 马元旦, 刘有平, 王鑫 申请人:沈阳药科大学