抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途

抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途【专利摘要】本发明涉及治疗抗酪氨酸激酶抑制剂疗法的EGFR介导的疾病，特别是癌症。提供了用于在具有次级EGFR突变，特别地酪氨酸激酶结构域突变的抗标准疗法的个体中治疗癌症和减少肿瘤生长的方法。本发明提供了使用抗EGFR抗体治疗抗酪氨酸激酶抑制剂的癌症的方法。描述了使用抗体抗EGFR?mAb806治疗抗酪氨酸激酶抑制剂的复发性肺癌包括非小细胞肺癌的方法。【专利说明】抗EGFR抗体在治疗EGFR突变体介导的疾病中的用途[0001]本申请是申请日为2008年I月24日、申请号为200880006008.1、发明名称为“抗EGFR抗体在治疗EGFR突变体介导的疾病中的用途”的发明专利申请的分案申请。发明领域[0002]本发明涉及治疗抗酪氨酸激酶抑制剂疗法的EGFR介导的疾病，特别是癌症。提供了用于在具有次级EGFR突变，特别地酪氨酸激酶结构域突变的抗标准疗法的个体中治疗癌症和降低肿瘤生长的方法。[0003]发明背景[0004]靶向癌症疗法被设计用来破坏致癌作用和肿瘤生长所需的特定分子的功能，从而杀死或阻止癌细胞的生长(JiH等人(2006)CellCycle5(18):2072-2076Epub2006Sep15)。与常规细胞毒性化学疗法相反，此类靶向癌症疗法更有效并且对正常细胞的伤害更小。靶向癌症疗法领域的主要努力一直以来是开发靶向表皮生长因子受体(EGFR)的试剂。EGFR是密切相关的受体(包括的EGFR(ErbB-1)、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4))的ErbB家族的成员。EGFR的激活导致受体酪氨酸激酶的激活和一系列下游信号传导事件(所述述信号传导事件介导细胞增殖、运动、粘着、侵入和对化学疗法的抗性以及对细胞凋亡的抑制(2-4))，对于癌细胞的持续增殖和存活至关重要的过程。[0005]迄今为止，两个主要类型的抗EGFR试剂已进入临床环境:抗EGFR抗体和小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(5,6)。抗EGFR抗体例如西妥昔单抗(cetuximab)经设计以结合EGFR的细胞外结构域并且阻断EGFR下游信号传导的激活(7)。西妥昔单抗(也称为抗体225，美国专利4，943，533)是针对A431细胞产生的，所述细胞表达高水平的野生型EGFR0相反地，小分子TKI例如吉非替尼(化合物ZD1839，易瑞沙)或厄洛替尼(化合物0S1-774,它赛瓦)与ATP竞争对EGFR酪氨酸激酶的细胞外催化结构域的结合，从而阻止EGFR的自磷酸化作用和下游信号转导(4)。[0006]这两种抗EGFR药物类型都已在患有多种不同类型癌症的患者的亚群中显示一些临床功效。在患有具有EGFR激酶结构域突变的肺癌的患者中使用吉非替尼或厄洛替尼进行的治疗通常产生显著的临床反应(5，8)。然而，吉非替尼或厄洛替尼在具有野生型EGFR的肺腺癌或其他组织学亚型例如鳞状细胞癌中的功效是有限的(9，10)。此外，在临床前和临床试验中已显示吉非替尼或厄洛替尼在抑制EGFRvIII突变体(11)(其中存在外显子II至VII的符合读框的缺失(也称为EGFRde2-7)的不同的激活性EGFR突变)的功能中很大程度上是无效的。EGFRvIII通常见于成胶质细胞瘤(Glioblastoma),并且最近发现存在于人肺鳞状细胞癌的亚群(12)和大部分头颈癌(13)中。[0007]显示西妥昔单抗在非小细胞肺癌(NSCLC)患者和患有头颈癌的患者以及结肠直肠癌患者的小亚群中是有效的。然而，对西妥昔单抗的反应似乎与EGFR的表达水平无关。因此，不清楚这些患者对西妥昔单抗治疗有反应然而其肿瘤具有高EGFR表达的其他癌症患者对西妥昔单抗治疗不显疗效的原因(14)。[0008]由于EGFRVlII突变受体的表达限定于肿瘤细胞，因此其代表了抗体疗法的高度特异性靶。因此，已产生了对于de2-7EGFR的独特的肽是特异性的多克隆和单克隆抗体。使用独特的de2-7肽免疫后分离的一系列小鼠mAb都显示对于截短的受体和裸小鼠中生长的被靶向的de2-7EGFR阳性异种移植物的选择性和特异性(WikstrandCJ等人(1995)CancerRes55:3140-3148;Okamoto,S等人(1996)BrJCancer73:1366-1372;HillsD等人(1995)IntJCancer63:537-543;ReistCJ等人(1997)CancerRes57:1510-1515;ReistCJ等人(1995)CancerRes55:4375-4382;美国专利5，401，828)。抗EGFRvIII抗体的实例包括ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A.4和Y10。[0009]MAb806是新型鼠抗体，最初使用表达EGFRviii突变体的完整细胞作为免疫原产生该抗体以识别独特的截短的突变体EGFRvIII(15-17)。重要地，被mAb806识别的表位在无活性的野生型(wt)EGFR中是不可接近的，但在过表达EGFR和表达EGFRvIII的细胞中暴露于wtEGFR的过渡形式中(18)。表位研究受到免疫组织化学研究支持，后者证明806抗体结合存在于神经胶质瘤以及广泛的上皮癌中的表位但不结合正常人组织(16，19)。这些和其他临床前数据表明mAb806可能具有与西妥昔单抗和其他抗EGFR抗体不同的临床活性谱和副作用特征谱。在异种移植模型中，mAb806已展示出有效的不靶向正常组织的抗肿瘤活性。因此，mAb806的独特的靶向能力代表了癌症特异性分子靶向疗法的新范例。[0010]当过表达时或被突变激活时，酪氨酸激酶(包括EGFR)促成了癌症的发生并且这些突变的酪氨酸激酶(TK)通常为选择性和特异性癌症疗法提供了靶或敏感性。EGFR基因的酶氨酸激酶结构域中的体细胞突变与肺癌对包括吉非替尼和厄洛替尼的某些酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性有关。外显子19中的符合读框的EGFR缺失(delL747-S752)和密码子858(外显子21)中的常见点突变(L858R)已在非小细胞肺癌和腺癌中得到鉴定，并且与对TKI吉非替尼和厄洛替尼的敏感性相关(LynchTJ等人(2004)NEnglJMed350:2129-2139;PaezJG等人(2004)Science304:1497-1500;PaoW等人(2004)PNAS101(36):13306-13311)。最近的研究已显示10-30%的NSCLC患者具有EGFR激酶结构域突变，而5%的肺鳞状细胞癌(SCC)患者具有细胞外结构域EGFRvIII突变(12，20)。测定癌症对EGFR靶向治疗的反应性的方法基于对EGFR中，特别是激酶结构域中的突变的估量，患者中预测的抑制剂敏感性描述于Bell等人(W02005/094357和US20060147959)。[0011]由继发抗药性(secondaryresistance)或补偿性突变(compensatorymutations)介导的、所获得的对化学疗法或靶向癌症疗法的抗性是正在面临的挑战。尽管使用TKI进行持续的治疗，但对TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)敏感的肿瘤最终不断地发展。已在复发性和抗性患者的肿瘤活检组织中鉴定了EGFR的位点790上的次级突变(T790M)(KobayashiS等人(2005)NEnglJMed352(8):786-792)。预测该突变导致抑制剂在ATP-激酶-结合口袋中的结合的空间位阻。[0012]考虑到在EGFR介导的疾病中获得的对TKI的抗性的存在和盛行以及显著的癌症复发率，存在对更广的有效的治疗方案的临床需要，所述治疗方案使用EGFR靶向试剂，所述试剂有效地针对，靶向或避免在EGFR突变体和EGFR介导的疾病中获得的抗性。[0013]本文中参考资料的引用不应当解释为这是对于本发明的现有技术的承认。[0014]发明概述[0015]现已在许多EGFR介导的癌症(包括肺癌)中鉴定了激活表皮生长因子受体(EGFR)的突变。已在人非小细胞肺癌(NSCLC)中鉴定了EGFR突变，5%的人肺鳞状细胞癌具有EGFRvI11突变以及10-30%的肺腺癌具有EGFR激酶结构域突变。EGFR靶向性单克隆抗体mAb806识别野生型(Wt)EGFR以及截短的EGFRvIII突变体的构象表位。为了进一步表征mAb806对EGFR介导的癌症疗法的应用，将mAb806用于治疗经基因工程改造的、患有肺肿瘤的小鼠，所述肺肿瘤由EGFRvIII或EGFR激酶结构域的突变驱动。本发明验证了抗EGFRVlII抗体，特别是mAb806在阻断EGFRvIII信号传导和诱导肿瘤细胞凋亡，从而在EGFRvIII驱动的鼠类肺癌中导致显著的肿瘤衰退中是非常有效的。针对表达高水平的野生型EGFR的细胞产生的不同的EGFR-靶向性抗体一西妥昔单抗未能在这些遗传上确定的肺肿瘤中显示活性。此外，使用mAb806进行的对由公认的和临床相关的EGFR激酶结构域突变(L858R)驱动的鼠肺肿瘤的治疗诱导了显著的肿瘤衰退。已显示该激酶结构域突变对TKI疗法，特别是吉非替尼或厄洛替尼是敏感的。[0016]获得的对TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)的抗性是正在面临的挑战，并且尽管进行持续的疗法，但对TKI敏感的肿瘤最终继续发展。该获得的抗性可由继发抗药性或补偿性突变，特别包括在EGFR的位点790上的次级突变(T790M)介导。研究者现在证明抗EGFR抗体，特别是mAb806有效地抗T790M突变，从而在EGFRT790M/L858R驱动的鼠肺癌中导致显著的肿瘤衰退。总的说来，这些数据证明抗EGFR抗体，特别是mAb806在具有EGFR激酶结构域突变的患者(包括癌症患者，特别是肺癌患者)的治疗中提供了有效的备选或辅助。[0017]本发明提供了在哺乳动物中治疗酪氨酸激酶抑制剂抗性EGFR介导的疾病的方法，其中所述抗性EGFR介导的疾病是EGFR中次级突变从而产生突变的EGFR的结果并且其中所述突变与EGFRVlII突变不同，该方法包括对所述哺乳动物施用有效量的能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体。在特定的方面，次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。在另外的方面，酪氨酸激酶结构域突变是T790M。[0018]在所述方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。[0019]另外的抗EGFR抗体，包括靶向EGFRvIII突变体的那些抗体，可用于本发明的治疗方法。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。[0020]在所述方法中进行治疗的EGFR介导的疾病包括癌症。EGFR介导的癌症包括成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，EGFR介导的癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。[0021]本发明提供了用于在癌症患者中降低EGFR介导的肿瘤生长的方法，其中所述癌症患者之前已用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂进行了治疗并且已发生了复发性疾病和肿瘤生长，该方法包括对所述患者施用有效量的抗EGFR抗体以使复发性疾病和肿瘤生长被抑制和降低。[0022]在用于降低肿瘤生长的本方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。[0023]可使用另外的抗EGFR抗体，包括靶向EGFRvIII突变体的那些抗体。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。[0024]在特定的临床方面，癌症患者中的复发性疾病和肿瘤生长是次级EGFR突变的结果，所述次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。特定的次级EGFR突变是酶氨酸激酶结构域突变T790M。[0025]本发明还提供了在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的方法，该方法包括对所述哺乳动物施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体，其中在使用酪氨酸激酶抑制剂作为二线疗法的治疗后施用所述抗EGFR抗体来抑制抗酪氨酸激酶抑制剂的潜在的次级突变的EGFR。[0026]EGFR介导的癌症可选成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。[0027]在本方法的一个方面，酶氨酸激酶抑制剂是可逆酪氨酸激酶抑制剂。可逆酪氨酸激酶抑制剂可以是苯胺喹唑啉化合物(aniliniquinazoline)和选自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。[0028]在本方法的另外方面，酪氨酸激酶抑制剂是不可逆酪氨酸激酶抑制剂。示例性不可逆酪氨酸激酶抑制剂在本领域内是已知的并且包括但不限于EKB-569、EK1-569、HK1-272、HK1-357和BIBW2992。[0029]根据参考下列举例说明的附图的下列描述，其他目的和有利方面对于本领域技术人员将变得显而易见。[0030]附图概述[0031]图1描绘由EGFRvIII表达驱动的鼠肺癌肿瘤对mAb806和ch806抗体治疗敏感但抗西妥昔单抗治疗。通过每日一次1.P.注射0.5mg/剂的mAb806或ch806或Img/剂的西妥昔单抗治疗Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA，Ink4A/Arf-/_小鼠。在第一周的治疗后，以相同的剂量每两天给予抗体。在指定的时间点上进行系列MRI，显示各治疗组中代表性小鼠的相应切片。表示为平均值土标准差(SD)的条状图(Bardiagram)示例说明通过MRI测量的肿瘤衰退，并且使用学生氏精确t检验(Student’sexactttest)进行统计分析。在整个实验过程中使所有小鼠持续饮食多西环素。H:标示心脏的区域。[0032]图2A和2B描绘了使用mAb806治疗的EGFRvIII驱动的小鼠中的肺腺癌的组织病理学特征。(A)通过EGFRvIII表达进行超过8周驱动的肺腺癌(上方的图框)。在用mAb806治疗I周后，肿瘤开始变小并且具有增加的纤维化(中间的图框)。当在第5周结束mAb806治疗时肺样品总体上正常(下方的图框)。箭头显示纤维化结节(fibroticnodule)，其由成纤维细胞和巨噬细胞组成。在该特定的纤维化区域中未发现肿瘤细胞。左图框:100X，在图框:800X。⑶可在对照小鼠和用mAb806治疗I周的小鼠(分别为左上和左下图框)中观察到总EGFR的免疫组织学染色的相似模式和强度；当与未治疗的肿瘤(右上图框)相比时，在I周的治疗后，肿瘤细胞的Phospho-EGFR染色的强度减小(右下图框)。代表性照片在200X放大率下拍摄。(C)TUNEL染色显示当与未治疗的肿瘤(左上图框)相比时，在用mAb806治疗I周后在EGFRvIII驱动的肺肿瘤(左下图框)中凋亡的细胞核(红色箭头)增加。代表性照片在200X放大率下拍摄。表示为平均值土SD的条状图示例说明从至少200倍的高倍视野(HPF)中测定在I周的mAb806治疗前和治疗后肺肿瘤中的细胞凋亡指数。使用学生氏精确t检验(右图框)进行统计分析。[0033]图3显示来自mAb806治疗的Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/_小鼠的整个肺裂解物的Western印迹分析。分析来自在mAb806治疗的不同时间点上从小鼠采集的肿瘤的完整肺裂解物。EGFR磷酸化的抑制可在治疗的I周后就观察到，然而总EGFR水平只在治疗的5周后才减少。在mAb806施用的整个过程中，Erkl，2磷酸化被抗体抑制，但AKT磷酸化在两个治疗时间点上都保持在与未治疗的对照相当的水平上，β肌动蛋白用作上样对照。[0034]图4Α和4Β。EGFR激酶结构域突变L858R驱动的小鼠肺腺癌对ch806治疗有反应。(A)通过每日一次1.P注射0.5mg/剂的ch806来治疗Tet-op-EGFRL858R-1RES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠，进行4周。在治疗的2和4周后，MRI显示肿瘤体积减少。表示为平均值土SD的条状图示例说明通过MRI测量到的肿瘤衰退，使用学生氏精确t检验进行统计分析(右图框)。H:标示心脏的区域。(B)组织病理学分析显示，当与未治疗对照(左边的两个图框)相比较时，Tet-op-EGFRL858R-1RES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠(右边的两个图框)中肿瘤皱缩并且具有显著的巨噬细胞浸润。箭头显示残留肿瘤的病灶。来自100X和800X放大率的照片如图中的脚标所标示所示。[0035]图5A和5B描绘了使用mAb806对比西妥昔单抗，对EGFRT790M-L858R肺肿瘤治疗的结果。将持续多西环素饮食超过8周的小鼠进行MRI以记录肿瘤负荷。每日一次通过1.P.注射0.5mg剂量，将mAb806递送至具有肺肿瘤的小鼠，进行4周。每日一次通过1.P.注射Img/剂对小鼠施用西妥昔单抗,进行4周。使用同窝出生小鼠(Littermate)作为所有治疗研究的对照(未治疗)。(A)在第0、2和4或5周用MRI对小鼠进行成像来测定肿瘤体积的减小。(B)在治疗和MRI成像完成后，杀死小鼠以进行进一步的组织学和生物化学研究。[0036]发明详述[0037]根据本发明，可使用在本领域技术人员的能力之内的常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术。此类技术在文献中进行了详尽的说明。参见，例如，SambiOOk等人，"MolecularCloning:ALaboratoryManual"(1989),CurrentProtocolsinMolecularBiology"第1-1II卷[AusubeI,R.M.,ed.(1994)]CellBiology:ALaboratoryHandbook^第1-1II卷[J.E.Celis,ed.(1994))];〃CurrentProtocolsinImmunology"第1-1II卷[CoIigan,J.E.,ed.(1994)]!^OligonucleotideSynthesis"(M.J.Gaited.1984);"NucleicAcidHybridization"[B.D.Hames&S.J.Higginseds.(1985)];"TranscriptionAndTranslation"[B.D.Hames&SJ.Higgins,eds.(1984)];〃AnimalCellCulture^[R.1.Freshney,ed.(1986)];"ImmobilizedCellsAndEnzymes"[IRLPress,(1986)];B.Perbal，〃APracticalGuideToMolecularCloning"(1984)。[0038]因此，如果在本文中出现，下列术语将具有下面所示的定义。[0039]术语“抗体”描述了无论是天然还是部分或完全合成产生的免疫球蛋白。抗体包括结合特定表位的任何免疫球蛋白，包括抗体和其片段。该术语包括多克隆、单克隆、重组、人源化以及嵌合抗体。该术语还涵盖具有是抗体结合结构域的或与其同源的结合结构域的任何多肽或蛋白质。该术语也包括⑶R移植抗体。[0040]由于抗体可通过许多方法进行修饰，因此，术语“抗体”应当解释为涵盖具有拥有需特异性的结合结构域的任何特定的结合成员或物质。因此，该术语涵盖抗体的抗体片段、衍生物、功能等同物和同源物，其中包括包含免疫球蛋白结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是完全或部分合成的多肽。因此包括包含融合至另一个多肽的免疫球蛋白结合结构域或等同物的免疫嵌合分子。嵌合抗体的克隆和表达描述于EP-A-0120694和EP-A-0125023以及美国专利4，816，397和4，816，567中。[0041]已显示，完整抗体的片段可行使结合抗原的功能。结合片段的实例是(i)由VL、VH、CL和CHl结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CHl结构域组成的Fd片段；(iii)由单个抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)由VH结构域组成的dAb片段(Ward,E.S.等A.,Nature341,544-546(1989));(v)分离的CDR区域;(vi)F(ab’)2片段，包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽连接体连接，所述肽连接体允许两个结构域结合形成抗原结合部位(Bird等人，Science,242，423-426，1988;Huston等人，PNASUSA,85，5879-5883，1988);(viii)多价抗体片段(scFv二聚体、三聚体和/或四聚体(Power和Hudson,JImmunol.Methods242:193-2049(2000))；(ix)双特异性单链Fv二聚体(PCT/US92/09965)和(x)“双特异抗体(Diabody)”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(W094/13804;P.Ho11iger等人Proc.Nat1.Acad.Sc1.USA906444-6448,(1993))。[0042]“抗体结合部位”是由轻链或重链以及轻链可变区和高变区组成的抗体分子的结构部分，其特异性结合抗原。[0043]以其不同语法形式在本文中使用的短语“抗体分子”包括完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。[0044]示例性抗体分子是完整的免疫球蛋白分子、大体上完整的免疫球蛋白分子和包含互补位(paratope)的免疫球蛋白分子的那些部分,其中包括本领域内称为Fab、Fab’、F(ab’)2和F(v)的那些部分，所述部分优选用于本文中描述的治疗方法。[0045]抗体还可以是双特异性的，其中抗体的一个结合结构域是本发明的特定结合成员，并且另一个结合结构域具有不同的特异性，例如招募效应子功能等。本发明的双特异性抗体包括其中抗体的一个结合结构域是本发明的特定结合成员(以括其片段)，并且另一个结合结构域是不同的抗体或其片段，包括不同的抗EGFR抗体例如抗体528(美国专利4，943，533)、嵌合的和人源化的225抗体(美国专利4，943，533和W0/9640210)、抗de2-7抗体例如DH8.3(Hills,D.等人(1995)Int.J.Cancer63(4):537-543)、抗体L8A4和Y10(Reist，CJ等人(1995)CancerRes.55(19):4375-4382;FoulonCF等人.(2000)CancerRes.60(16):4453-4460),ICR62(ModjtahediH等人(1993)CellBiophys.Jan-Jun;22(1-3):129-46;Modjtahedi等人(2002)P.A.A.C.R.55(14):3140-3148或Wikstrand等人的抗体(ffikstrandC.等人(1995)CancerRes.55(14):3140-3148)的片段。另一个结合结构域可以是识别或靶向特定细胞类型的抗体，如在神经或胶质细胞特异性抗体中的。在本发明的双特异性的抗体中，本发明的抗体的一个结合结构域可以与其他结合结构域或分子组合，所述其他结合结构域或分子识别特定细胞受体和/或以特定的方式例如作为免疫调节剂(例如，白细胞介素)、生长调节剂或细胞因子(例如肿瘤坏死因子(TNF)，特别地，2002年2月13日提交的U.S.S.N.60/355，838(以其全文通过引用合并入本文)中记载的TNF双特异性形式(modality))或毒素(例如，蓖麻毒素)或抗有丝分裂或细胞凋亡试剂或因子来调控细胞。[0046]抗体分子的Fab和F(ab’)2部分可通过熟知的方法通过木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别对大体上完整的抗体分子进行蛋白水解反应来制备。参见例如，属于Theofilopolous等人的美国专利4，342，566。Fab’抗体分子部分也是熟知的并且从F(ab’)2部分产生，然后用巯基乙醇还原连接两个重链部分的二硫键，然后用试剂例如碘乙酰胺来烷基化所得的蛋白质硫醇来产生。包含完整的抗体分子的抗体在本文中是优选的。[0047]以其不同语法形式显示的短语“单克隆抗体”是指只具有一种能够与特定抗原发生免疫反应的抗体结合部位的抗体。因此单克隆抗体通常展示对于与其发生免疫反应的任何抗原的单一结合亲和力。单克隆抗体还可以包含具有多个抗体结合部位的抗体分子，每一个抗体结合部位对于不同的抗原是免疫特异性的；例如，双特异性(嵌合)的单克隆抗体。[0048]术语“抗原结合结构域”描述了包含特异性结合抗原的部分或全部和与抗原的部分或全部互补的区域的抗体的部分。当抗原很大时，抗体可以只结合抗原的特定部分，该部分称为表位。抗原结合结构域可由一个或多个抗体可变结构域提供。优选，抗原结合结构域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。[0049]术语“mAb806”、“806抗体”、“单克隆抗体806”、“ch806”、“人源化806”和未特别列出的任何变体可在本文中互换使用，并且如在整个本申请和权利要求中所使用。因此，同样地包括抗体，其中包括重组的、嵌合的、经遗传修饰的或备选的抗体。这些修饰可以是有意的，例如通过定点诱变获得的修饰，或者可以是偶然的，例如通过在作为抗体或其片段的产生者的宿主中的突变获得的修饰。同样，术语“mAb806”、“806抗体”、“单克隆抗体806”、“ch806”、“人源化806”意欲将本文中明确引用的和本领域技术人员已知的、公共公开的蛋白质和免疫球蛋白以及所有大体上同源的类似物和等位基因变异包括在它们的范围内。mAb806抗体，包括其产生、特定的活性、氨基酸和核酸序列、抗原结合结构域、可变区序列得到了公开并且对于本领域技术人员来说是已知的，包括W002/092771;LUWOrRB等人(2001)CancerRes61:5355-5361;MishimaK等人(2001)CancerRes61:5349-5354;JohnsTG等人(2002)IntJCancer98:398-408;JungbluthAA等人(2003)ProcNatlAcadScilOO(2):639-644(其各自以其全文通过引用合并入本文)中所提供的。[0050]本文中描述的氨基酸残基优选以“L”同分异构形式存在。然而，可用以“D”同分异构形式存在的的残基置换任何L氨基酸残基，只要多肽保持期望的免疫球蛋白-结合的功能特性。NH2是指存在于多肽的氨基末端的游离氨基。COOH是指存在于多肽的羧基末端的游离羧基。与标准的多肽命名法，J.Biol.Chem.，243:3552-59(1969)一致，氨基酸残基的缩写不于下列对应表(tableofCorrespondence)中:[0051]对应表【权利要求】1.有效量的、能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体在制备用于在哺乳动物中治疗酪氨酸激酶抑制剂抗性EGFR介导的疾病的药物中的用途，其中所述抗性EGFR介导的疾病是EGFR中次级突变从而产生突变的EGFR的结果，并且其中所述突变是T790M，所述抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。2.权利要求1的用途,其中mAb806是重组抗体或人源化抗体。3.权利要求1的用途,其中EGFR介导的疾病是癌症并且选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖_泌尿癌和膀胱癌。4.权利要求3的用途，其中癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。5.有效量的、能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体在制备用于在癌症患者中降低EGFR介导的肿瘤生长，特别是复发性疾病的药物中的用途，其中所述癌症患者之前已用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂进行治疗并且已发生了复发性疾病，其中癌症患者已经发生了为T790M的次级EGFR突变，并且其中所述抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。6.权利要求5的用途，其中mAb806是重组抗体或人源化抗体。7.权利要求5的用途，其中抗EGFR抗体选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。8.能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体在制备用于在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的药物中的用途，其中在使用酪氨酸激酶抑制剂作为二线疗法的治疗后施用所述抗EGFR抗体药物来抑制抗酪氨酸激酶抑制剂的潜在的次级突变的EGFR，其中所述突变的EGFR是T790M，并且所述抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。9.权利要求8的用途，其中EGFR介导的癌症选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。10.权利要求9的用途，其中癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。11.权利要求8的用途，其中酪氨酸激酶抑制剂是可逆酪氨酸激酶抑制剂。12.权利要求11的用途，其中可逆酪氨酸激酶抑制剂是苯胺喹唑啉化合物和选自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。13.权利要求8的用途，其中酪氨酸激酶抑制剂是不可逆酪氨酸激酶抑制剂。14.权利要求13的用途，其中不可逆酪氨酸激酶抑制剂选自EKB-569、EK1-569、HK1-272、HK1-357和BIBW2992。15.权利要求1的用途，其中用可检测的或功能性的标记物标记所述抗体。16.权利要求15的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是放射性标记物。17.权利要求15的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是细胞毒性药物。18.权利要求5的用途，其中用可检测的或功能性的标记物标记所述抗体。19.权利要求18的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是放射性标记物。20.权利要求18的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是细胞毒性药物。21.权利要求8的用途，其中用可检测的或功能性的标记物标记所述抗体。22.权利要求21的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是放射性标记物。23.权利要求21的用途，其中所述可检测的或功能性的标记物是细胞毒性药物。【文档编号】A61P35/00GK104013956SQ201310593708【公开日】2014年9月3日申请日期:2008年1月24日优先权日:2007年1月25日【发明者】K-K·王申请人:达娜-法勃肿瘤研究所公司