四叶参在制备用于催乳的制剂中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了四叶参在制备用于催乳的制剂中的应用，所述四叶参可以选用四叶参蜂蜜组合物和/或四叶参发酵物。本发明通过动物水平实验证明了四叶参蜂蜜组合物具有催乳的功效，经发酵得到的四叶参发酵物，具有生物利用度高，吸收完全等优点，可以促进四叶参催乳功效的最大发挥。四叶参蜂蜜组合物和发酵物均可以显著增加大鼠的泌乳量，提高血清催乳素的水平，促进催乳素的分泌，同时还通过毒性实验证明四叶参对动物体的生长无不良反应，所以将四叶参用于制备催乳制剂具有良好的市场应用前景。
【专利说明】四叶参在制备用于催乳的制剂中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明具体涉及四叶参在制备用于催乳的制剂中的应用。
【背景技术】
[0002]产后缺乳是指分娩后乳腺泌乳量小，不能满足喂养婴儿的需要。母乳喂养有利于婴儿的健康，但近年来，由于高龄产妇增多，加之剖宫产率的上升，以及妊娠期营养不足、精神过度紧张等诸多因素，产后缺乳的现象呈上升趋势，尤其在城市妇女中该症状较为常见。2012年卫生部发布信息显示，我国母乳喂养率仅为30%。所以，如何有效地治疗产后缺乳，是迫切需要解决的问题。 [0003]乳汁的合成及泌乳是一个复杂的生理过程，包括多种内分泌的参与和影响，其中垂体分泌的催乳素(PRL)在泌乳启动和维持中起着重要作用。在妊娠期因雌激素和孕激素的作用，血中催乳素浓度是正常时的10~20倍以上，促使乳腺进一步发育，但由于雌激素、孕激素与催乳素竞争同乳腺受体的结合，此时虽然催乳素浓度较高，但孕妇并不泌乳。胎盘娩出后，雌激素、孕激素水平迅速下降，解除了对丘脑下部及垂体的抑制作用，催乳素抑制因子(PIF)分泌减少，PRL与乳腺受体结合，开始泌乳。产后缺乳的成因主要是情绪紧张或疲劳过度影响垂体前叶催乳素的分泌，导致乳汁减少或断奶。另外，营养不足、出血过多、药物影响等因素也可导致乳汁分泌减少。
[0004]针对产后缺乳的治疗，西医目前尚缺乏有效的治疗措施，临床报道不多。据调研，泰必利、维生素E、甲氧氯普胺(灭吐灵)、奋乃静等药物有催乳的作用。但这些西药副反应明显，泰必利的不良反应为思睡、轻度头昏、乏力，偶见恶心、胸闷、兴奋、皮疹等，大剂量(400mg/d)维生素E长期(>10d)使用，可能产生胃肠不适、倦怠无力、生殖功能障碍、高血压、骨骼肌无力、静脉炎、以及免疫功能下降等不良反应。一项随机双盲安慰剂对照试验结果显示:灭吐灵IOmg tidX IOd与安慰剂对照组相比并不增加乳汁量，因此其催乳作用尚需进一步研究证实。多潘立酮可导致心律失常甚至心源性猝死，且乳汁进入婴儿体内会造成不可预料的不良影响，目前美国食品药品管理局已禁止使用多潘立酮用于催乳。以上药物由于疗效不确切，可能存在不良反应，一直未被广大患者接受，均未能广泛应用于临床。
[0005]而中医药治疗产后缺乳有着悠久的历史，临床实践中也取得了较好的疗效，也得到了现代药理实验的验证。据报道，通草、王不留行和葛根等中药具有提高缺乳模型大鼠血红蛋白量、红细胞数，提高血中PRL水平和降低多巴胺DA水平，增加乳腺细胞的数量并且其组织形态学未发现变化，增加大鼠泌乳量和仔鼠体重等作用。传统医学认为乳汁由冲任气血生化，下则为经，上则为乳。若气血亏虚，津液不足，则致乳汁减少或不足；或七情所伤，肝气郁结可致乳脉不行而缺乳。宋.陈自明《妇人大全良方.产后乳少或止方论》谓..“妇母乳汁，乃气血所化，若元气虚弱，则乳汁短少，初产乳房欣胀，此乳未通，……若累产无乳，此内亡津液”，明确提出了缺乳的病机。金.张子和《儒门事亲.卷五》云:“妇人本生无乳者不治，或因啼哭悲怒郁结，气溢闭塞，以致乳脉不行”。故产后缺乳多因“气血生化之源不足，机体虚弱或因肝郁气滞，乳汁运行受阻所致”，气血亏虚，肝郁气滞，经络闭塞为缺乳的主要病机。可见，在中医药治疗产后缺乳方面，形成了ー套比较完整的理论体系，对产后缺乳的病因、病机、治疗都有独特的见解。中医药治疗产后缺乳具有广阔的应用前景。
【发明内容】
[0006]本发明提供了四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，本发明通过寻找天然无毒、安全可靠的催乳药物来源，解决了人工合成催乳药副作用大的问题。
[0007]为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现:
[0008]本发明提供了四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用。
[0009]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參选用四叶參蜂蜜组合物和/或四叶參发酵物。
[0010]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參为崂山四叶參。
[0011]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參蜂蜜组合物的制备方法为:将四叶參切成薄片，干燥，粉碎，过筛，蒸馏水浸泡，煎煮，过滤；药渣再加蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液合并，离心分离得上清液，减压浓缩干燥成干浸膏，粉碎，过筛，得四叶參提取物，将四叶參提取物与槐花蜂蜜质量比8:1混合,得四叶參蜂蜜组合物。
[0012]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參发酵物的制备方法为:将四叶參切成薄片，干燥，粉碎，过筛，蒸馏水浸泡，煎煮，过滤；药渣再加蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液合并，离心分离得上清液，离心后上清液经减压浓缩至适量体积，灭菌；加入占四叶參质量比为10%的嗜热链球菌ST4菌粉，42°C发酵10h，发酵液减压干燥成干浸膏，粉碎，过筛，低温保存。
[0013]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參可以提高泌乳量。
[0014]对上述技术方案的进ー步改进:所述四叶參能提高血清催乳素水平。
[0015]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是:本发明通过动物水平实验证明了四叶參蜂蜜组合物具有催乳的功效，经发酵得到的四叶參发酵物，具有生物利用度高，吸收完全等优点，可以促进四叶參催乳功效的最大发挥。四叶參蜂蜜组合物和发酵物均可以显著增加大鼠的泌乳量，提高血清催乳素的水平，促进催乳素的分泌，同时还通过毒性实验证明四叶參对动物体的生长无不良反应，所以将四叶參用于制备催乳制剂具有良好的市场应用前景。
[0016]结合附图阅读本发明的【具体实施方式】后，本发明的其他特点和优点将变得更加清
Ah, O
【专利附图】
【附图说明】
[0017]图1为本发明中正常组乳腺组织光镜切片。
[0018]图2为本发明中模型组乳腺组织光镜切片。
[0019]图3为本发明中四叶參蜂蜜组合物组乳腺组织光镜切片。
[0020]图4为本发明中四叶參发酵组乳腺组织光镜切片。
[0021]图5为本发明中阳性组乳腺组织光镜切片。
[0022]图6为本发明中正常组垂体组织光镜切片。
[0023]图7为本发明中模型组垂体组织光镜切片。[0024]图8为本发明中四叶参蜂蜜组合物组垂体组织光镜切片。
[0025]图9为本发明中四叶参发酵组垂体组织光镜切片。
[0026]图10为本发明中阳性组垂体组织光镜切片。
[0027]图11为本发明中验证四叶参具有催乳作用的实验流程图。
【具体实施方式】
[0028]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明的技术方案作进一步详细的说明。 [0029]实施例1
[0030]本发明通过实验验证四叶参具有催乳作用的实验流程图如图11所示。
[0031]一、四叶参催乳作用的药效学研究
[0032]1、试验材料
[0033](I)四叶参，青岛流清河森宝生物科技开发有限公司提供，青岛大学医学院周三副教授鉴定。
[0034](2)槐花蜂蜜:500克/瓶，蒙阴深山蜜坊蜂业有限公司生产，产品标准号:符合蜂蜜国标GB18796要求。
[0035](3)嗜热链球菌ST4菌粉:200克/袋，内蒙古普泽生物制品有限责任公司生产，活菌数 I X 101ICFU/ 克，执行标准 Q/PZSW 0014S-2010。
[0036](4)乳泉颗粒:15克/袋，四川志远广和有限公司生产，生产批号:060101，批准文号:国家准字Z51020010。
[0037](5)甲磺酸溴隐亭片:2.5mg/片，匈牙利吉瑞大药厂生产，进口药品注册证号:H20110116，进口药品注册标准JX20100204，生产批号:T29400A。临用前用生理盐水配制成0.05mg/ml的药液。
[0038](6)大鼠(Rat)催乳素(PRL) ELISA试剂盒，试剂盒货号:CK_E30594R。
[0039](7)生理盐水:500ml，4.5g，山东齐都药业有限公司生产，国家准字号:H37020766，产品批号:8B13010402。
[0040](8) SD大鼠，雌雄兼有(雌:雄=3:1)，72只，雌鼠体重250g左右，雄鼠体重350-400g,由青岛市药检所实验动物中心提供，清洁级动物，合格证号:0014107。
[0041]2、试验方法
[0042](I)分组方法:选用成年健康清洁级SD大鼠72只，雌雄比例3:1合笼饲养，雌鼠未经孕产，18d后，取出雄鼠，同时将雌鼠每笼一只饲养。取产仔时间前后相差不超过24h的40只母鼠作为实验对象，使每只母鼠带仔鼠8只，多余的弃掉。
[0043]将筛选出的40只母鼠按体重随机分为5组:正常组、模型组、四叶参蜂蜜组合物组、四叶参发酵组及阳性对照药物乳泉颗粒组。
[0044](2)造模方法:各组于产后第2d起溴隐亭灌胃造模(正常组除外)，连续7d。
[0045](3)给药方法:于产后第2天起，正常组以每天每只10ml/kg的蒸馏水灌胃，每天I次；四叶参蜂蜜组合物组于产后第2d起给予四叶参蜂蜜组合物15g.kg—1 (相当于含生药量)ig ;四叶参发酵组于产后第2d起给予四叶参发酵物15g.k^1 (相当于含生药量)ig ;阳性对照组乳泉颗粒灌胃，连续7d。各组动物均予正常饮食。
[0046](4)四叶参蜂蜜组合物制备方法:取四叶参切成薄片，干燥，粉碎，过筛，6倍蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，药渣再加6倍蒸馏水，同法浸泡、煎煮、过滤,将两次滤液合并，3000rpm离心15分钟，分离上清液，减压浓缩干燥成干浸膏，粉碎，过筛，得四叶参提取物。将四叶参提取物与槐花蜂蜜质量比8:1混合，得四叶参蜂蜜组合物。
[0047] 四叶参发酵物制备方法:取四叶参切成薄片，干燥，粉碎，过筛，6倍蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，药渣再加6倍蒸馏水，同法浸泡、煎煮、过滤,将两次滤液合并,3000rpm离心15分钟，离心后上清液经减压浓缩至适量体积。120°C，20min灭菌。加入嗜热链球菌ST4菌粉10%(每100克四叶参干品加入IOg菌粉)，42°C发酵10h。发酵液减压干燥成干浸膏，粉碎，过筛，低温保存。
[0048]甲磺酸溴隐亭片临用前用生理盐水配制成0.05mg/ml的药液,齐Li量为0.5mg/kg,按每天每只10ml/kg灌胃造模(正常组除外)，连续7d。
[0049](5)计算泌乳量及仔鼠体重:每日晨9时用精密电子天平称每窝仔鼠体重，然后将仔鼠与母鼠分离，以每窝仔鼠总重量(g)/每窝仔鼠个数为平均体重，观察平均每只仔鼠每日体重的变化；仔鼠与母鼠分离4h后，再次称量全窝仔鼠体重作为喂乳前体重值，随即将仔鼠送回母鼠身边哺乳喂养；3h后第三次称量全窝仔鼠体重作为喂乳后体重值。并每日称量母鼠的体重，连续观察7d。
[0050]计算每日母鼠3h平均泌乳量[(喂乳后体重值-喂乳前体重值)/仔鼠个数]，仔鼠体重增长率[(当日离乳体重值-第I日离乳体重值)/第I日离乳体重值]。所得数据进打t检验。
[0051](6)催乳素(PRL)的测定:于给药后第8d，将5组大鼠腹主动脉取血2ml。室温静置2h、3500r/min离心15min,分离血清。用酶免法测定催乳素。
[0052](7)观察乳腺及垂体的病理组织学变化--第8d，将5组母鼠处死，脑垂体称重，剥离乳腺，取乳腺及垂体，用10%甲醛分别固定，IOd后石蜡包埋切片，HE染色，于光学显微镜下进行乳腺及垂体的组织形态学检查。
[0053]根据以上数据，通过计算母鼠泌乳量、母鼠体重变化、检测血清催乳素(PRL)水平，观察乳腺及垂体的病理组织学变化等指标，研究四叶参的催乳作用。
[0054]3、实验结果
[0055]采用SPSS13.0统计软件进行数据处理，各组数据均采用均数土标准差(x土 s)表示，组间差异性比较，采用t检验。
[0056]( I)四叶参对大鼠泌乳量的影响
[0057]表1.四叶参对产后缺乳模型大鼠的泌乳量的影响
【权利要求】
1.四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參选用四叶參蜂蜜组合物和/或四叶參发酵物。
3.根据权利要求1或2所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參为崂山四叶參。
4.根据权利要求2所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參蜂蜜组合物的制备方法为:将四叶參切成薄片，干燥，粉碎，过筛，蒸馏水浸泡，煎煮，过滤；药渣再加蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液合并，离心分离得上清液，减压浓缩干燥成干浸膏，粉碎，过筛，得四叶參提取物，将四叶參提取物与槐花蜂蜜按质量比8:1混合，得四叶參蜂蜜组合物。
5.根据权利要求2所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參发酵物的制备方法为:将四叶參切成薄片，干燥，粉碎，过筛，蒸馏水浸泡，煎煮，过滤；药渣再加蒸馏水浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液合并，离心分离得上清液，离心后上清液经减压浓缩至适量体积，灭菌；加入占四叶參质量比为10%的嗜热链球菌ST4菌粉，42°C发酵10h，发酵液减压干燥成干浸膏，粉碎，过筛，低温保存。
6.根据权利要求1所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參可以提高泌乳量。
7.根据权利要求1所述的四叶參在制备用于催乳的制剂中的应用，其特征在于:所述四叶參能提高血清催乳素水平。
【文档编号】A61K35/64GK103585248SQ201310624182
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月28日 优先权日:2013年11月28日
【发明者】彭晓娉, 钱学艳, 周三, 高华, 刘明 申请人:青岛大学