一种新型白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统及其应用的制作方法
【专利摘要】一种新型白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统及其应用，本发明涉及一种可通过玻璃体腔注射给药治疗眼病的含白蒺藜皂苷的药物领域。针对现有GSTT治疗眼病的给药方式存在的治疗效果不理想、副作用大的问题，本发明的目的在于提供一种白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统，其特征在于：包含白蒺藜皂苷和超声造影剂。本发明还提供了白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统在制备治疗青光眼性视神经损害的药物中的应用，所述药物用于在超声辐照下经玻璃体腔注射给药。本发明提供的这种新的给药方式具有治疗效果好、安全可靠的优点，可用于延缓或阻止青光眼性视神经损害的发生发展。
【专利说明】一种新型白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统及其应用【技术领域】
[0001]本发明涉及一种可通过玻璃体腔注射给药治疗眼病的含白蒺藜皂苷的药物领域。【背景技术】
[0002]白蒺藜为蒺藜科植物蒺藜的果实，其主要成份是留体皂苷，包括螺留醇和呋甾醇，另外还含有黄酮类、生物碱等多种化学成份。白蔡藜阜苷(Gross Saponins from TribulusTerrestris L, GSTT)是白蒺藜的皂苷类提取物，临床上多用于治疗高血压、冠心病、心绞痛、脑梗塞、糖尿病、不孕证、阳痿、眼疾等疾病。
[0003]对于眼疾的治疗，GSTT目前的给药方式分为口服、静脉注射和肌肉注射，均通过全身循环后才能到达眼部组织，这就导致GSTT在眼部的治疗效果不理想，同时经全身代谢后还会对其他组织器官产生副作用。究其原因可能是由于血眼屏障和眼部解剖的特殊性使药物在视网膜、视神经的局部有效浓度较低，导致疗效不佳，使得其在临床上的应用受到了很大的限制，因此寻求一种让GSTT更为有效、更安全地局部应用于视网膜和视神经的新型给药方式，成为了眼疾临床治疗的迫切需求。
[0004]由于血-眼屏障的存在使得眼球处于一个相对免疫赦免的状态，眼内注射外源抗体能最小程度引发潜在的免疫反应和炎症反应，因此眼球是局部治疗的一个理想器官。而玻璃体腔注射技术具有眼内直接给药的优势，可避免经全身代谢后对其它器官产生的副作用。但是，GSTT是复合成分，而不是单体成分，虽然GSTT的纯度可达90%以上，但眼玻璃体腔注射一定量的GSTT后对视网膜和视神经是否会产生毒性损害，目前仍无相关研究证据，国内外也尚未见到有关玻璃体腔注射GSTT治疗眼疾的任何报道。
【发明内容】
[0005]针对【背景技术】中提到的现有GSTT治疗眼病的给药方式存在的治疗效果不理想、副作用大的问题，本发明的目的在于提供一种白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统，以打破现有的给药方式，而采用玻璃体腔注射GSTT的方式治疗眼病，这种新的给药方式具有治疗效果好、安全可靠的优点。
[0006]为实现上述目的，本发明提供了这样一种新型白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统，其特征在于:包含白蒺藜皂苷和超声造影剂。
[0007]进一步地，所述超声造影剂为六氟化硫微泡。
[0008]本发明还提供了白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统在制备治疗青光眼性视神经损害的药物中的应用，所述药物用于在超声辐照下经玻璃体腔注射给药。
[0009]进一步地，所述药物用于在超声声强为0.5ff/cm2,辐照时间为30s-60s下经玻璃体腔注射给药。
[0010]进一步地，所述药物的注射剂量为l-5mg/kg的白蒺藜皂苷。
[0011]更进一步地，所述药物的注射剂量为5mg/kg的白蒺藜皂苷。
[0012]进一步地，所述药物为白蒺藜皂苷与超声造影剂的稳定混悬剂。[0013]更进一步地，所述混悬剂中白蒺藜皂苷与超声造影剂1:1混合。
[0014]有益效果:
[0015]与现有技术相比，本发明提供了一种新型超声微泡介导的GSTT眼科局部给药系统，通过玻璃体腔注射给药，让药物到达眼部的途径变得更单纯，不用经过全身代谢，避免药物经血液循环时所面临的分解及机体内环境对药物的干扰和破坏过程，从而最大限度地保证到达靶器官的药物浓度，发挥最大的治疗作用，提高视网膜局部的药物浓度的同时，也减少了全身毒副作用，减少了给药次数，延缓或阻止青光眼性视神经损害的发生发展，给青光眼患者带来更有效的治疗，减少其致盲率，为患者复明带来新的希望，大大拓宽了青光眼视神经保护治疗的视野，提供了一种新思路。
【专利附图】
【附图说明】 [0016]图1是不同造模周期眼压变化曲线图。
【具体实施方式】
[0017]下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释，本发明并不局限于以下实施例。
[0018]白蒺藜皂苷玻璃体腔注射用药物:
[0019]六氟化硫微泡与白蒺藜皂苷1:1溶于生理盐水中得到的稳定混悬液
[0020]上述药物经玻璃体腔注射给药的方法:
[0021]爱尔卡因滴眼液表面麻醉，复方托吡卡胺滴眼液滴眼散瞳，在手术显微镜下，于上方角巩膜缘处透明角膜区隧道穿刺抽出适量房水，于上方角巩膜缘3_垂直巩膜进针，刺入玻璃体腔，经散大的瞳孔明确针尖在玻璃体腔后，缓慢注入上述药物，注射剂量为l_5mg/kg的白蒺藜皂苷，棉签按压进针处，抽出针头，给予泰利必妥滴眼液点眼预防感染。闭合眼睑后涂耦合剂，置超声探头于眼睑表面进行超声辐照，超声声强为0.5W/cm2，辐照时间为30s-60so
[0022]本发明提供的白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统治疗青光眼性视神经损害的药效学实验:
[0023]本研究首先构建了兔眼高眼压视神经损害模型，然后将超声爆破微泡与白蒺藜皂苷联合，观察超声爆破微泡介导白蒺藜皂苷对高眼压兔视神经损害的治疗作用，并分析该给药系统的安全性、可行性和有效性，为临床治疗青光眼提供了一种新思路。
[0024]实验材料
[0025]一、主要试剂
[0026]白蒺藜皂苷粉末(纯度≥95%)中国食品药品检定研究院
[0027]六氟化硫微泡意大利Bracco公司
[0028]卡波姆-940北京国人逸康科技有限公司
[0029]10%甲醛组织固定液深圳市眼科医院病理科
[0030]2.5%戊二醛组织固定液中山大学电镜室
[0031]甲苯胺蓝上海楷洋生物技术有限公司
[0032]山羊抗鼠IgG抗体-HRP多聚体北京中杉金桥生物技术有限公司[0033]Bax鼠单抗广州深达生物制品技术有限公司
[0034]Bcl-2鼠单抗广州深达生物制品技术有限公司
[0035]Abeam TUNEL试剂盒广东新晋生物科技公司
[0036]免疫组化试剂盒广东新晋生物科技公司
[0037]RNAiso? Pl μ s提取试剂盒美国TaKara公司
[0038]ReverTra Ace- α -反转录试剂盒Τ0Υ0Β0 公司
[0039]SYBR Premix Ex TaqTM GC (2 X)美国 Takara 公司
[0040]NO试剂盒北京北瑞达医药科技有限公司
[0041]SOD试剂盒南京建成生物工程研究所
[0042]MDA试剂盒上海瑞齐生物科技有限公司
[0043]二氯甲烷济南欣雨化工有限公司
[0044]甲醇北京威特化工有限公司
[0045]乙腈北京威特化工有限公司
[0046]无水乙醇深圳市欧泰华化工有限公司
[0047]三氟乙酸深圳市欧泰华化工有限公司
[0048]二、主要设备和仪器
[0049]Cirrus频域OCT卡尔蔡司公司
[0050]ROLAND视觉电生理仪德国罗兰
[0051]裂隙灯彩色前节照相系统高视远望科技有限公司
[0052]手持式直接眼底镜苏州医疗器械设备厂
[0053]免散瞳眼底彩色照相系统日本TOPCON公司
[0054]Tono-pen笔试眼压计美国Reichert公司
[0055]4°C电冰箱青岛海尔股份有限公司
[0056]电子分析天平德国Sartorius公司
[0057]-80°C超低温冰箱:三洋低温冰箱
[0058]超声粉碎仪美国Sonics & Materials公司
[0059]低温高速离心机Eppendorf公司
[0060]超声基因转染治疗仪重庆医科大学超声影像研究所
[0061]工作超净台苏州净化设备有限公司
[0062]分光光度计深圳鼎鑫宜实验设备有限公司
[0063]微量移液器深圳泰赛克生物科技有限公司
[0064]全自动荧光PCR仪美国ABI公司
[0065]数显恒温水浴锅北京医疗设备有限责任公司
[0066]无菌针灸针苏州医疗用品有限公司
[0067]高效液相色谱分析仪HPLC 日本岛津公司
[0068]Hypersil ODS柱广州艾欣科学仪器有限公司
[0069]Diamonsil C18北京迪马科技有限公司
[0070]石蜡组织切片机德国LEICA公司
[0071]冰冻组织切片机德国LEICA公司[0072]荧光显微镜OLYMPUS公司
[0073]电热恒温干燥箱上海精宏实验设备有限公司
[0074]三、实验动物
[0075]健康新西兰白兔体重1.5kg，雌雄不限，由广东省医学动物实验中心提供，用裂隙灯、直接眼底镜检查眼前节及眼底无明显异常Jono-pen笔试眼压计测量眼压< 21mmHg的动物方可采用。
[0076]实验方法与步骤
[0077]—、实验动物分组
[0078]健康新西兰大白兔25只，随机分为5组，每组5只(10眼)。分组如下:[0079]1、空白对照组
[0080]2、高眼压模型组
[0081]3、高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT组
[0082]4、高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT+超声组
[0083]5、高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT+超声+微泡组
[0084]二、兔慢性高眼压模型的制备
[0085]耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(lml/kg)麻醉动物，爱尔卡因滴眼液眼部表面麻醉后，开睑器开睑，用Iml注射器在9点位沿角巩膜缘内Imm抽出前房房水0.2ml后，然后在对侧的角巩膜缘内Imm前房注入0.3%复方卡波姆溶液0.2ml。术毕泰利必妥眼水滴眼。如在实验周期中发现眼压< 22mmHg，7天后按上述方法重复注药I次。高眼压兔视神经损害模型以眼压> 22mmHg，并能维持4周为标准。采用Tono-pen笔式眼压计测量每日相同时间点眼压并记录。
[0086]三、溶液的配制
[0087]( I)复方卡波姆溶液的配制
[0088]称取3.0g卡波姆-940和0.25g地塞米松，溶于1000ml的生理盐水中，PH为4。
[0089](2) GSTT溶液的配制
[0090]称取7.5gGSTT粉末溶于100ml的生理盐水中((7.5mg/0.1ml )，给予兔玻璃体腔注射5mg/kg的GSTT溶液。
[0091](3)微泡混悬液的制备
[0092]用0.9%生理盐水5ml缓慢注入六氟化硫微泡冻干粉瓶内静置备用，使用前用力振摇以产生微泡，微泡浓度为2 X 108/ml，微泡平均直径2.5 μ m，90%的微泡直径< 8 μ m，渗透压为2900sm/kg，与人体血浆等渗，配制的微泡溶液在6h内用完。
[0093]四、各组的处理
[0094](I)空白对照组
[0095]玻璃体腔内注射PBS液0.1ml:爱尔卡因滴眼液表面麻醉，复方托吡卡胺滴眼液滴眼充分散瞳，开睑器开睑，3%碘伏冲洗结膜囊，无菌条件下用Iml注射器于上方角巩膜缘处透明角膜区隧道穿刺抽出适量房水，然后于上方角巩膜缘后3_垂直巩膜进针，刺入玻璃体腔，经散大的瞳孔明确针尖在玻璃体腔后，缓慢注入0.1ml PBS液，棉签按压进针处，抽出针头，观察眼压及眼部血管充盈情况，给予氧氟沙星滴眼液点眼，迪可罗眼膏涂眼预防感染。上述操作每周I次，持续3周。[0096](2)高眼压模型组
[0097]不做处理。
[0098]( 3 )高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT组
[0099]爱尔卡因滴眼液表面麻醉，复方托吡卡胺滴眼液滴眼充分散瞳，开睑器开睑，3%碘伏冲洗结膜囊，无菌条件下用Iml注射器于上方角巩膜缘处透明角膜区隧道穿刺抽出适量房水，然后于上方角巩膜缘后3_垂直巩膜进针，刺入玻璃体腔，经散大的瞳孔明确针尖在玻璃体腔后，缓慢注入0.1mlGSTT溶液，棉签按压进针处，抽出针头，观察眼压及眼部血管充盈情况，给予氧氟沙星滴眼液点眼，迪可罗眼膏涂眼预防感染。上述操作每周I次，持续3周。
[0100](4)高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT+超声组
[0101]玻璃体腔注射GSTT方法同上，注射完毕后闭合兔眼后涂耦合剂，置超声探头于眼球上方立即用频率1MHZ，声强为0.5ff/cm2照射眼球60s，上述操作每周I次，持续3周。
[0102](5)高眼压模型+玻璃体腔注射GSTT+超声+微泡组
[0103]兔散瞳、麻醉方式同前，用Iml注射器距角巩膜缘3mm处刺入玻璃体腔吸出相应量的玻璃体液后，注入0.1ml GSTT溶液，具体操作方法同上；再从相同部位注入0.1ml微泡混悬液，闭合兔眼后涂耦合剂，给予上述参数的超声辐照，每周I次，持续3周。
[0104]实验结果
[0105]一、眼压测量
[0106]如表1所示，造模前模型组眼压为15.0±2.0mmHg，对照组眼压为13.6±1.5mmHg,两者相比眼压差异无统计学意义(P=0.137);经独立样本t检验，模型组眼压在造模后I周、
2周、4 周的眼压值(33.4±2.8,34.1±2.5 和 34.8±2.2mmHg)，与对照组眼压(13.6±1.8、13.4± 1.7、13.3± 1.4mmHg)相比差异具有显著统计学意义(P=0.000)。从图1可见，该模型所致眼压升高可维持在30mmHg以上达4周。
[0107]表1对照眼与模型眼不同造模时间眼压比较(无mmHg)
【权利要求】
1.一种新型白蒺藜皂苷玻璃体腔注射给药系统，其特征在于:包含白蒺藜皂苷和超声造影剂。
2.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于:所述超声造影剂为六氟化硫微泡。
3.权利要求1或2所述的给药系统在制备治疗青光眼性视神经损害的药物中的应用，所述药物用于在超声辐照下经玻璃体腔注射给药。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于:所述药物用于在超声声强为0.5W/cm2，辐照时间为30s-60s下经玻璃体腔注射给药。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于:所述药物的注射剂量为l_5mg/kg的白蒺藜皂苷。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于:所述药物的注射剂量为5mg/kg的白蒺藜皂苷。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于:所述药物为白蒺藜皂苷与超声造影剂的稳定混悬剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于:所述混悬剂中白蒺藜皂苷与超声造影剂I: I混合。`
【文档编号】A61K9/10GK103705551SQ201310634877
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】黄丽娜, 申晓丽, 曾平, 廖明怡, 李诺 申请人:黄丽娜