红细胞结合性治疗剂的制作方法
【专利摘要】本申请描述了特异性结合红细胞的肽。这些肽作为具有特异性结合红细胞的序列的肽配体，或者是特异性结合红细胞的抗体或其片段提供。所述肽可以作为与治疗剂、耐受化抗原、或靶向肽的分子融合物制备。可以通过使用所述的融合物和在需要被耐受的物质上选择抗原来创建免疫耐受性。
【专利说明】红细胞结合性治疗剂
[0001] 对相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年2月15提交的美国系列申请No. 13/397,202的优先权，在此 通过提及并入本文。
【技术领域】
【技术领域】 [0003] 涉及结合红细胞的配体或抗体的医用组合物和用途。具体的用途包括免 疫耐受化（immunotolerization)、药物递送、和癌症疗法。
[0004] 发明背景
[0005]移植组织排斥和自身免疫疾病是病理状态（pathologicalconditions)，其涉及 外源生物分子由于其抗原性造成的免疫排斥。许多药物和临床操作都涉及对免疫排斥的抑 制或治疗。疫苗借助这一过程，通过激发针对病源性生物分子上的抗原的免疫应答，增强免 疫系统对于载有所述抗原的蛋白质或其他生物分子的应答。
[0006] 发明概述
[0007] 耐受性发生是创建（creat)对某种物质的免疫耐受的过程。经治疗以耐受某种物质 的人或非人患者，会对所述物质产生减弱的适应免疫应答（adaptiveimmuneresponse)。适 应免疫应答中的减弱，可通过分析与所述物质反应的循环抗体的量，或者通过分析T-细胞与 所述物质和耐受试剂（tolerizingagent)的反应来测定。本申请提供耐受化（tolerization) 组合物和方法。许多实施方案中涉及施用融合物分子，所述的融合物分子具有与红细胞结合 部分（bindingmoiety)相结合的耐受抗原（tolerizingantigen)。所述融合物分子结合红 细胞，并以建立耐受性的方式起始耐受抗原向免疫系统呈递的过程。
[0008] 已发现了特异性地结合于红细胞（erythrocytes)(也称作红血球（redblood cells))的肽。这些肽配体是红细胞-结合部分，其即使在血液中的其他因子存在的情况下 也与红细胞特异性地结合。这些配体可以多种方式被使用。
[0009] 本发明的一种实施方案是包含分子融合物的药学上可接受的组合物，所述分 子融合物包含致耐受性抗原和特异性地结合患者中的红细胞的红细胞-结合部分， 其中所述的红细胞-结合部分特异性地结合选自下述的生物分子：Band3(⑶233)， 水通道蛋白-1，Glut-1,Kidd抗原，RhAg/Rh50(CD241),Rh(CD240)，Rh30CE(CD240 CE)，Rh30D(CD240D)，Kx,血型糖蛋白B(CD235b),血型糖蛋白C(CD235c),血型糖 蛋白D(CD235d)，Kell(CD238)，Duffy/DARCi(CD234)，CRl(CD35)，DAF(CD55),红 细胞糖苷脂，CD44,ICAM-4 (CD242),Lu/B-CAM(CD239),XG1/XG2(CD99),EMMPRIN/ neurothelin(CD147),JMH,糖基转移酶，Cartwright,Dombrock,C4A/CAB,Scianna,MER2,s tomatin，BA-l(CD24)，GPIV(CD36)，CD108，CD139,和H抗原（CD173)。
[0010] 本发明的一种实施方案是药学上可接受的组合物，其包含与某种靶物，例如包含 致耐受性抗原的蛋白质，特异性结合的结构域相连的、红细胞-结合部分。这些结构域的一 方或两者可能是肽配体、或抗体、或抗体片段。
[0011] 另一种实施方案是药学上可接受的组合物，其用于抗体清除（depletion)或从患 者的循环中去除（removing)抗体。这种组合物具有与抗原，例如天然自身抗原或治疗性蛋 白抗原，相连的红细胞-结合部分。
[0012] 附图简述
[0013] 图1显示了ERY1和卵清蛋白（OVA)的分子融合物的实验方案和结果，其中ERYl-OVA融合物以高亲和力结合小鼠红细胞的赤道外周；小图（a) :ERY1肽与卵清蛋白 (OVA)缀合的示意图，导致结合红细胞表面血型糖蛋白-A;小图（b):每种OVA缀合物与中 间体的结合，通过流式细胞术表征；黑色实心直方图，ERYl-OVA;空心直方图，SMCC-OVA;虚 线直方图，MIS-0VA;ERY1=红细胞结合性肽WMVLPWLPGTLD(SEQIDN0:1)，MIS=错配肽 PLLTVGMDLWPW(SEQIDN0:2)，SMCC=琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧 酸盐，其用于缀合ERYl与0VA;小图（c) =ERYl-OVA对红细胞的平衡结合，其展示通过流式 细胞术测定的ERYl-OVA的低解离常数（R2 = 0. 97,单一位点结合）。
[0014] 图2是结果的拼合，其显示了红细胞结合诱导对抗原攻击的耐受：小图（a)OTI CD8+T细胞过继转移耐受模型，其展示用于实验及攻击和幼稚的对照组（η= 5)的实验 方案；小图（b)OTI⑶8+Τ细胞群体（⑶3ε+⑶8α+⑶45. 2+)的流式细胞术检测；小图（c) CD45.Γ小鼠中抗原攻击后第4天时引流淋巴结（腹股沟和腿弯部）中OTICD8+T细胞群 体的定量（*扑〈〇.〇1);小图（(1)表达正^^的01'10)8+1'细胞的流式细胞术检测 ；小图（6) 用SIINFEKL肽（SEQIDΝ0:3)抗原攻击和再刺激后第4天时引流淋巴结中表达IFNy的 OTICD8+T细胞（#Ρ〈0·01);小图（f)根据ELISA测定，在用SIINFEKL肽（SEQIDΝ0:3)再 刺激后第4天时在淋巴结细胞培养基中的IFNγ浓度（#Ρ〈0. 01);小图（g)根据ELISA测 定，在用OVA再刺激后第4天时在淋巴结细胞培养基中的IL-10浓度（*P〈0. 05)。数据代表 均值土最小值至最大值；小图（h)在第19天时的OVA特异性血清IgG效价，（*P〈0. 05)，数 据代表均值土SE;小图（i)表达组合OTI与OVA的EL4胸腺瘤（E.G7-0VA)肿瘤耐受模型， 其展示用于实验组及对照组（η分别=4, 3)的实验方案；小图（j)过继转移后第5天时在 血液中循环的非增殖（第〇代）〇TICD8+T细胞的定量；数据代表中值土最小值至最大值 (**Ρ〈0.01);小图（k)OTI过继转移后9天皮下注射的E.G7-0VA肿瘤的生长概况，数据代表 均值土SE(*P〈0. 05)。
[0015] 图3是显示红细胞结合如何减弱C57BL/6小鼠中的抗原特异性体液应答的柱形 图。C57BL/6小鼠中相隔6天两次施用1μgOVA或1μgERY1-0VA后19天时在血清中的 OVA特异性IgG检测（*P< 0· 05)。
[0016] 图4呈现了实验结果，其中8臂PEG-ERYl在体外及在体内结合红细胞；小图（a)8 臂PEG-ERYl(黑色实心直方图）在体外温育后结合小鼠红细胞，而8臂PEG-MIS(灰色实心 直方图）或8臂PEG-吡啶基二硫化物则不然；小图（b)8臂PEG-ERYl(黑色实心直方图） 在静脉内注射后结合循环的红细胞，而8臂PEG-MIS(灰色实心直方图）则不然。
[0017] 图5呈现了实验结果，其描绘了通过流式细胞术测定的8臂PEG-ERYK实心环） 和8臂PEG-MIS(空心框）的红细胞细胞表面半衰期。
[0018] 图6是以柱状图的形式呈现的、肽配体结合人红细胞的实验结果。
[0019] 图7是以流式细胞术直方图的形式呈现的实验结果。小鼠红细胞与TER119-SIINFEKL(以灰色实心直方图）或白蛋白（空心直方图）一起温育。荧光信号来自 用于检测scFv的抗-6xHis-PE抗体。
[0020] 图8所呈现的是在静脉内施用盐水，OVA,ERY1-0VA，或TER119-SIINFEKL之后，脾 中OT-ICD8T细胞增殖的实验结果图。**P〈0. 01，*#P〈0. 001
[0021] 图9是呈现过继转移并静脉内施用盐水，OVA,ERY1-0VA，或TERl19-SIINFEKL之后， OTICD8T细胞表型特征的实验结果图。左图：在流式细胞术中以膜联蛋白-V结合标记的凋 亡OTI细胞诱导；右图：在流式细胞术中以PD-I表达标记的耗尽的（exhausted)OTI细胞。
[0022] 图10是流式细胞术分析的实验结果图，其显示由经过多种注射配方耐受化的小 鼠攻击位点引流的淋巴结中，炎症性（IFNY+)0TIT细胞的特征。
[0023] 图11是显示通过ELISA确定的、接受了 2或6个剂量的ERYl-天冬酰胺酶 (ASNase)或野生型天冬酰胺酶的小鼠，在施用21天后，其中天冬酰胺酶-特异性血清IgG 滴定度实验结果图。
[0024] 图12是显示与脾DC以及多种介质添加物共培养的、来自转基因N0DBDC2. 5小鼠 的CD4T细胞增殖实验结果图。
[0025] 图13是通过流式细胞术确定的实验结果图、其显示过继转移和静脉内施用 TER119-ChrA，游离1040-p31肽，或盐水后，非增殖的N0DBDC2. 5CD4T细胞的定量。
[0026] 发明详述
[0027] 本申请针提供用于耐受性发生的分子设计。使有待被耐受的蛋白质或其他分子 抗原与红细胞结合部分形成缀合物（conjugate)。所述的部分（moiety)可包含肽配体，抗 体，适体，抗体片段。所述的缀合物，也称作分子融合物，可以是融合物蛋白，或者可能包含 接头，例如聚合物或聚合物微团或聚合物纳米颗粒，的缀合物。
[0028] 本文中描述了特异性结合红细胞的肽。这些肽以具有特异性结合红细胞的序列的 肽配体的形式，或者以特异性结合红细胞的抗体或其片段的形式提供。所述肽可以制备为 与治疗剂、致耐受化抗原、或靶向肽的分子融合物。有利地，所述治疗剂当作为所述融合物 的一部分时，可以具有延长的体内循环半衰期。通过使用所述融合物并选择有待被耐受的 物质上的抗原，可以产生免疫耐受。在本申请中，术语抗原指实际大小的抗原，其抗原性片 段，或致耐受性抗原的模拟物。与靶向性肽形成的融合物将融合物引导至靶物，例如肿瘤， 在那里红细胞结合性配体通过将红细胞募集至靶物来减少或完全消除对肿瘤的血流。
[0029] 特异性结合红细胞的肽序列
[0030]PCT/US2011/047078的 申请人:发现并报道了特异性结合红细胞的肽，包 括称作ERYl的肽，其特异性地结合红细胞。已报道了六种特异性结合人红细胞的 肽（ERY19,ERY59,ERY64,ERY123,ERY141 和ERY162)。实施例 9 详细描述了 肽配体 (ERY64，ERY123,和ERY141)如何与荧光蛋白报道分子形成融合蛋白，并保持它们的特异 性结合特性。本发明的一个实施方案是包含ERY1、或人红细胞结合性肽之一的氨基酸序 列、或其保守取代的基本上纯的多肽，或其编码核酸。此类多肽特异性结合红细胞，并且 是红细胞的配体。配体是指对靶分子具有特异性结合的化学模块的术语。靶（物）是指 使用者意图与配体结合的预定的分子、组织、或位置。如此，对组织的靶向递送，是指将分 子或其它材料（诸如细胞）递送到意图的靶组织。因而，实施方案包括这样的分子或组 合物，其包含本文中所公开的用于结合红细胞的至少一种配体。多肽对红细胞的结合活 性只需遵循如本文中描述的实验规程即可测定。使用此类方法，可以测定给定生理学条 件下多肽变体相对于ERYl或人红细胞结合性肽的结合强度，例如利用保守取代、添加或 去除侧翼基团，或者用于调节在水溶液中序列溶解度的变化或添加而生成的序列。肽配 体可特异性地针对下述靶物或靶物的组中一种或以上生成：红细胞表面分子（蛋白质，糖 蛋白），Band3(⑶233)，血型糖蛋白，更具体而言，血型糖蛋白A(⑶235a)，血型糖蛋白 B(CD235b),血型糖蛋白C(CD235c)&血型糖蛋白D(CD235d),水通道蛋白-l，Glut-l，Kidd 抗原，RhAg/Rh50(CD241)，Rh(CD240)，Rh30CE(CD240CE)，Rh30D(CD240D)，Kx,Kell(CD238 )，Duffy/DARC(CD234)，CRl(CD35)，DAF(CD55)，红细胞糖苷脂，CD44,ICAM-4 (CD242)，Lu/ B-CAM(CD239)，XGl/XG2(CD99)，EMMPRIN/neurothelin(CD147)，JMH,糖基转移 酶，Cartwright,Dombrock,C4A/CAB,Scianna,MER2,stomatin,BA-1 (CD24)，GPIV(CD36)，C D108,⑶139,和H抗原（⑶173)。红细胞细胞-表面蛋白，无论是纯化的制备物或是其混 合物，均可用于筛选肽配体。红细胞细胞-表面蛋白可以以全长的形式、或者作为与增强蛋 白质表达或稳定性的标签相融合的部分结构域的形式重组表达。所述的重组蛋白靶物可被 固定到平板或珠上，用作文库筛选过程中的亲和靶。红细胞细胞-表面蛋白也可以从全血 的细胞制备物中分离，其中，膜蛋白的纯化的或是复合混合物可被固定于固体基质（珠，平 板，或其他），并用作筛选过程中的亲和靶。整个筛选过程可在高浓度的血清白蛋白（例如 50mg/mL)存在下，于37C下进行，以减少非特异性结合事件，并以选择血清中具有良好的 结合特性的肽。最优选地，肽配体选自Band3(⑶233)，血型糖蛋白B(⑶235b)，血型糖蛋 白C(CD235c)和血型糖蛋白D(CD235d)。
[0031] 观察到肽配体结合于红细胞的细胞表面并不改变细胞形态，也无胞质易位。所 述配体分布于细胞表面并不成簇。血型糖蛋白-A(GYPA)被证明是作为ERY-I的靶的特 异性蛋白。ERY-I仅与小鼠和大鼠种具有反应性。特异性结合人红细胞的肽配体被确 定为特异于人红细胞，而非其他种。已报道了指向小鼠红细胞表面的、展示高亲和力的 肽，WMVLPWLPGTLD(SEQIDN0:1本申请中称作ERYl)的噬菌体克隆。在表1-2中显示了通 过其他实验鉴定的人红细胞结合配体。六种序列与人红细胞特异性结合。第七个序列，名 为ERY50,结合人红细胞也结合上皮/内皮细胞。
[0032] 表1:结合人红细胞的肽配体
【权利要求】
1. 药学上可接受的组合物，其包含： 分子融合物，所述的分子融合物包含致耐受性抗原和与患者中的红细胞特异性结合的 红细胞-结合部分（moiety) 其中，所述的红细胞-结合部分与选自下述的生物分子特异性结合：Band 3(CD233)，水通道蛋白-1，Glut-1, Kidd 抗原，RhAg/Rh50(CD241)，Rh(CD240)，Rh30 CE(CD240CE)，Rh30D(CD240D)，Kx,血型糖蛋白 B(CD235b),血型糖蛋白 C(CD235c), 血型糖蛋白 D(CD235d), Kell (CD238), Duffy/DARCi(CD234),CRl(CD35),DAF(CD55) ，红细胞糖苷脂，CD44,ICAM-4(CD242)，Lu/B-CAM(CD239)，XGl/XG2(CD99)，EMMPRIN/ neur。thelin (CD147)，JMH,糖基转移酶，Cartwright, Dombrock, C4A/CAB, Scianna, MER2, s tomatin，BA-l(CD24)，GPIV(CD36)，CD108，CD139,和 H 抗原（CD173)。
2. 权利要求1的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分共价结合于所述抗原。
3. 权利要求1或2的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分选自：肽配体，抗体，抗 体片段，和单链抗原结合结构域（ScFv)。
4. 权利要求1-3中任一项的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分包含来自产 生抗红细胞抗体的杂交瘤的、抗体，抗体片段或ScFv，所述的杂交瘤选自：BRIC 4，BRIC 5, BRIC 6, BRIC 10, BRIC 14, BRIC 18, BRIC 39, BRIC 66, BRIC 68, BRIC 69, BRIC 87, BRIC 108, BRIC 110, BRIC 111, BRIC 125, BRIC 126, BRIC 128, BRIC 145, BRIC 155, BRIC 157, BRIC 163, BRIC 170, BRIC 198, BRIC 203, BRIC 216, BRIC 220, BRIC 221, BRIC 222,BRIC 229, BRIC 230, BRIC 231, BRIC 235,BRIC 256,BRAC 17, BRAC 18,BGRL 1, BGRL 2,BGRL 11,BGRL 100, BRAD 3, BIRMA D6, BIRMA DIO, BIRMA K3, BIRMA K3, BIRMA 84B ；6A7 ； COE ;和 KZ1。
5. 权利要求1-4中任一项的组合物，其中，所述的致耐受性抗原包含蛋白质的模拟表 位。
6. 权利要求1-5中任一项的组合物，其中，所述的致耐受性抗原选自：蛋白质，蛋白质 的部分，人蛋白质或其部分，非人蛋白质或其部分，聚糖，含非人糖基化的蛋白质的聚糖，人 自身免疫抗原，用于人的治疗性蛋白或其部分，以及人食物的一部分。
7. 权利要求1-5中任一项的组合物，其中，所述的致耐受性抗原选自：由于遗传疾病缺 损的蛋白质，具有非人糖基化的蛋白质，非人蛋白质，非天然存在于人中的合成蛋白质，人 食物抗原，人移植抗原，和人自身免疫抗原。
8. 权利要求1-5中任一项的组合物，其中，所述的致耐受性抗原包含选自下述的 抗原：因子VIII，因子IX，腺苷脱氨酶，L-天冬酰胺酶，拉布立酶（rasburicase), 抗胸腺细胞球蛋白，L-精氨酸酶，L-甲硫氨酸酶，前胰岛素原，胰岛素原，胰岛 素，GAD65, GAD67, ΙΑ-2, ΙΑ-2 β，甲状腺球蛋白，甲状腺过氧化物酶，促甲状腺素受体，髓 壳碱性蛋白，髓壳少突胶质糖蛋白，蛋白脂质蛋白，胶原II，胶原IV，乙酰胆碱受体，基 质金属蛋白1和3,分子伴侣热激蛋白47,肌原纤蛋白-1，TOGF受体a，TOGF受体β，核内 蛋白SS-A，伴花生球蛋白（Ara h 1)，变应原II(Ara h 2)，花生凝集素 （Ara h 6)，α-乳 清蛋白（ALA),乳运铁蛋白，谷蛋白（glutein),低分子量谷蛋白，α-麦醇溶蛋白，γ-麦 醇溶蛋白，大麦醇溶蛋白，裸麦醇溶蛋白，和燕麦蛋白。
9. 权利要求8的组合物，其中，所述的抗原是模拟表位。
10. 权利要求1-9中任一项的组合物用于治疗选自下述的病理状态（pathologic condition):移植排斥，自身免疫疾病，食物过敏，和抗治疗剂免疫反应。
11. 分子融合物，其包含致耐受性抗原和红细胞-结合部分，所述红细胞-结合部 分选自：Band 3(⑶233)，血型糖蛋白B(⑶235b)，血型糖蛋白C(⑶235c)和血型糖蛋白 D(CD235d)。
12. 权利要求11的分子融合物用于产生免疫耐受性。
13. 分子融合物，其包含选自下述的致耐受性抗原：蛋白质，蛋白质的部分，人蛋白质 或其部分，非人蛋白质或其部分，聚糖，含非人糖基化的蛋白质的聚糖，人自身免疫抗原， 用于人的治疗性蛋白或其部分，以及人食物的一部分，由于遗传疾病缺损的蛋白质，具有非 人糖基化的蛋白质，非人蛋白质，非天然存在于人中的合成蛋白质，人食物抗原，人移植抗 原，和人自身免疫抗原；以及选自下述的红细胞-结合部分：Band 3 (CD233)，血型糖蛋白 B(CD235b),血型糖蛋白C(CD235c),血型糖蛋白D(CD235d)。
14. 产生免疫耐受性的方法，所述方法包括施用包含下述分子融合物的组合物，所述 的分子融合物包含致耐受性抗原和与患者中的红细胞特异性结合的红细胞-结合部分 (moiety)，其中，所述的分子融合物以用于产生针对某种物质的免疫耐受性的有效量施用， 所述物质包含上述的致耐受性抗原。
15. 药学上可接受的组合物用于针对包含下述融合物分子的物质的免疫应答的免疫逆 转（immunoreversal)，所述的融合物分子包含红细胞-结合部分和所述物质的抗原。
16. 权利要求15的组合物，其中，所述的致耐受性抗原选自：蛋白质，蛋白质的部分，人 蛋白质或其部分，非人蛋白质或其部分，聚糖，含非人糖基化的蛋白质的聚糖，人自身免疫 抗原，用于人的治疗性蛋白或其部分，以及人食物的一部分。
17. 权利要求15的组合物，其中，所述的致耐受性抗原选自：由于遗传疾病缺损的蛋白 质，具有非人糖基化的蛋白质，非人蛋白质，非天然存在于人中的合成蛋白质，人食物抗原， 人移植抗原，和人自身免疫抗原。
18. 权利要求15-17任一项的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分特异性结合选自 下述的生物分子：Band 3(CD233)，水通道蛋白-l，Glut-l，Kidd 抗原，RhAg/Rh50(CD241)， Rh (CD240)，Rh30CE (CD240CE)，Rh30D (CD240D)，Kx,血型糖蛋白 A,血型糖蛋白 B (CD235b)， 血型糖蛋白 C(CD235c),血型糖蛋白 D(CD235d), Kell (CD238), Duffy/DARCi(CD234), CR1 (CD35), DAF (CD55),红细胞糖苷脂，CD44, ICAM-4 (CD242), Lu/B-CAM (CD239), XG1/ XG2 (CD99), EMMPRIN/neurothelin (CD147), JMH,糖基转移酶，Cartwright, Dombrock, C4A/ CAB, Scianna, MER2, stomatin, BA-1 (CD24), GPIV (CD36), CD108, CD139,和 H 抗原（CD173)。
19. 权利要求15-17任一项的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分选自：肽配体，抗 体，抗体片段，和单链抗原结合结构域（ScFv)。
20. 权利要求15-17任一项的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分包含来自产生 抗红细胞的抗体的杂交瘤的、抗体，抗体片段或ScFv，所述的杂交瘤选自：BRIC 4，BRIC 5,BRIC 6,BRIC 10,BRIC 14,BRIC 18,BRIC39, BRIC 66, BRIC 68,BRIC 69,BRIC 87,BRIC 108, BRIC 110, BRIC 111, BRIC 125, BRIC 126, BRIC 128, BRIC 145, BRIC 155, BRIC 157, BRIC 163, BRIC 170, BRIC 198, BRIC 203, BRIC 216, BRIC 220, BRIC 221, BRIC 222, BRIC 229,BRIC 230, BRIC 231,BRIC 235, BRIC 256,BRAC 17,BRAC 18,BGRL 1, BGRL 2, BGRL 11,BGRL 100, BRAD 3, BIRMA D6, BIRMA DIO, BIRMA K3, BIRMA K3, BIRMA 84B ；6A7 ； COE ;和 KZ1。
21. 权利要求15-20任一项的组合物，其中，所述的致耐受性抗原包含蛋白质的模拟表 位。
22. 融合物分子，其包含红细胞-结合部分和天冬酰胺酶的抗原。
23. 权利要求22的融合物分子，其中，所述的红细胞-结合部分包含与人红细胞结合 的 scFv 或选自下述的肽结合配体：SEQ ID N0:11，SEQ ID N0:12，SEQ ID N0:13，SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17,及其组成型取代，其中，所述的序列特 异性结合红细胞。
24. 包含权利要求22或23的融合物分子的组合物用于诱导对天冬酰胺酶的耐受性。
25. 融合物分子，其包含红细胞-结合部分和嗜铬粒蛋白-A的抗原。
26. 权利要求25的融合物分子，其中，所述的红细胞-结合部分包含与人红细胞结合 的 scFv 或选自下述的肽结合配体：SEQ ID N0:11，SEQ ID N0:12，SEQ ID N0:13，SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17,及其组成型取代，其中，所述的序列特 异性结合红细胞。
27. 包含权利要求25或26的融合物分子的组合物A用于诱导对嗜铬粒蛋白-A的耐受 性。
28. 药学上可接受的组合物，其包含： 红细胞-结合部分，所述红细胞-结合部分与特异性地结合某靶物的结构域相连。
29. 权利要求28的组合物，其中，所述的靶物包含蛋白质，所述蛋白质还包含致耐受性 抗原。
30. 权利要求28或29的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分包含肽配体。
31. 权利要求28或29的组合物，其中，所述的红细胞-结合部分选自：抗体，抗体片段， 和单链抗原结合结构域（ScFv)。
32. 权利要求28-31任一项的组合物，其中，所述的结构域选自：抗体，抗体片段，和单 链抗原结合结构域（ScFv)。
33. 权利要求28-32任一项的组合物，其中，所述的组合物包含选自分子融合物，串连 scFv,双抗体和串连scFv-IgG分子的成员，红细胞-结合部分和所述结构域是上述成员的 一部分。
34. 药学上可接受的组合物，其包含：与抗原相连的红细胞-结合部分。
35. 权利要求34的组合物，其中，所述的抗原是天然自身抗原。
36. 权利要求34或35的组合物，其中，所述的自身抗原选自：红斑狼疮抗原。
37. 权利要求34-36任一项的组合物，其中，所述的抗原属于治疗性蛋白质。
38. 权利要求37的组合物，其中，所述的抗原是因子VIII抗原。
39. 权利要求34-37任一项的组合物在从循环中去除非所需要的抗体中的用途。
【文档编号】A61K39/00GK104271148SQ201380019578
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2013年2月15日 优先权日:2012年2月15日
【发明者】J.A.休贝尔, S.康托斯, K.Y.戴恩 申请人:洛桑聚合联合学院