多价脑膜炎球菌缀合物及制备缀合物的方法

多价脑膜炎球菌缀合物及制备缀合物的方法
【专利摘要】本文公开了可引起针对来自组A、C、W-135和Y的脑膜炎球菌多糖(PS)和组B因子H结合蛋白(fHbp)的免疫应答的脑膜炎球菌免疫原性缀合物。所述公开的缀合物还表现出针对脑膜炎球菌A、C、W-135、Y、B和X血清组的杀菌活性。还公开了改进的制备缀合物——例如免疫原性缀合物——的方法，包括在约4℃下用氰基化试剂活化多糖。
【专利说明】多价脑膜炎球菌缀合物及制备缀合物的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本发明要求2012年5月24日提交的美国临时申请No. 61/651,382的优先权，所 述申请以引用的方式全文纳入本文。

【技术领域】
[0003] 本公开内容涉及缀合物，具体为免疫原性脑膜炎球菌缀合物，以及制备所述缀合 物的方法。

【背景技术】
[0004] 在13个分离的脑膜炎球菌血清组中，A、B、C、W-135和Y是最普遍的。现有三种 FDA批准的基于荚膜多糖（PS)的疫苗--.Menomune?四价PS疫苗（Sanofi Pasteur)、 .Menactra㊣（Sanofi Pasteur)和Menveo? (Novartis)四价缀合疫苗，用于针对由组 A、C、W-135和Y脑膜炎奈瑟氏球菌引起的脑膜炎球菌疾病进行保护。组B荚膜PS-一具 有a 2 - 8糖苷键的多聚唾液酸--与某些人组织中表达的PS结构相似（Finne et al.， Lancet 2:355-357,1983)，从而使其成为较差的免疫原。另外，如果用作疫苗，存在其诱导 自身免疫应答的可能性。因此，需要开发其他脑膜炎球菌疫苗，特别是针对组B和组X脑膜 炎球菌血清组。


【发明内容】

[0005] 本文公开了免疫原性缀合物，所述免疫原性缀合物包括至少一种缀合至奈瑟氏球 菌表面蛋白（例如组B因子H结合蛋白（fHbp)或奈瑟氏球菌表面蛋白A (NspA))的多糖或 蛋白质。在一些实例中，所述缀合物是脑膜炎球菌的免疫原性缀合物，所述缀合物可引起针 对来自组A、C、W-135和Y的脑膜炎球菌多糖（PS)的免疫应答。在其他实例中，所述免疫原 性缀合物也可引起针对fHbp或NspA的免疫应答。在其他实例中，所公开的缀合物还表现 出针对脑膜炎球菌A、C、W-135、Y、B和X血清组的杀菌活性。在一些实例中，所述免疫原性 缀合物是多价免疫原性缀合物。
[0006] 还公开了改进的制备缀合物一一包括这类免疫原性缀合物一一的方法。在一些实 施方案中，所述方法包括将至少一种第一部分（例如PS、蛋白质、药物或其他化合物）与氰 基化试剂（cyanylation agent)在约2°C至约6°C下反应，形成氰酸醋-活化的第一部分， 并将所述氰酸酯-活化的第一部分与具有至少一个氨基基团或至少一个酰肼基团（例如酰 肼-活化的第二部分）的第二部分（例如PS、蛋白质、药物或其他化合物）在约2°C至约6°C 接触，得到包括至少一个在至少一个第一部分和至少一个第二部分之间形成的C-N键的缀 合物。
[0007] 在一些非限制性实施方案中，所述方法包括使至少一种多糖与氰基化试剂在约 2°C至约6°C反应，形成氰酸酯-活化的多糖，并将所述氰酸酯-活化的多糖与至少一种蛋白 质（例如fHbp或NspA)接触，得到包括至少一个在所述至少一种多糖和所述至少一种蛋白 质之间形成的C-N键的免疫原性缀合物。在一些实例中，本方法也包括将所述至少一种蛋 白质与肼、羰酰肼、盐酸肼（hydrazine chloride)、二酰肼或其混合物在约2°C至约6°C反 应，形成至少一种酰肼-活化的蛋白质溶液，并将所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与至少 一种蛋白质在约2°C至约6°C接触，使所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与所述至少一种酰 肼-活化的蛋白质反应，得到包括至少一个在所述至少一种多糖和所述至少一种蛋白质之 间形成的C-N键的免疫原性缀合物。
[0008] 从参照附图进行的以下详细描述中，所述公开内容的上述和其他特征会变得更加 清楚。

【专利附图】

【附图说明】
[0009] 图1A-1B是纯化的重组脑膜炎球菌因子H结合蛋白变体l(fHbpl)、变体2(fHbp2) 及其融合产物（fHbp (1+2))的一对数字图像。图IA是SDS-PAGE分析的数字图像：fHbpl在 泳道I ;fHbp2在泳道2 ;fHbp (1+2)在泳道3 ;分子量梯度在泳道4。图IB是用单克隆抗体 Jar 5(fHbpl特异性）和Jar ll(fHbp2特异性）进行蛋白质印记分析的数字图像。泳道1 和4中的fHbp (1+2)分别用单克隆抗体Jar5和Jar 11进行；泳道2中的fHbpl用单克隆 抗体Jar 5进行；泳道3中的fHbp2用单克隆抗体Jar 11进行。
[0010] 图2是缀合物产物的尺寸排阻HPLC图谱的图（在280nm监测），所述缀合物产 物是在原始缀合条件（底部印迹；室温）或改变的缀合条件（顶部印记；4°C )下制备的 fHbp (1+2)和脑膜炎球菌血清组C多糖（MCPS)的缀合物产物。
[0011] 图3A和3B是一组缀合物产物的HPLC图谱。图3A是在280nm鉴测的fHbpl，以 及fHbplMCPS、fHbp2MCPS和fHbp (1+2)MCPS的缀合物产品的HPLC图谱。缀合后，蛋白质信 号从低分子量洗脱时间（约23分钟）移动到高分子量位置（约17. 5分钟）。图3B是在 280nm鉴测的fHbp (1+2)，以及fHbp (1+2)和脑膜炎球菌血清组A多糖（MAPS)的缀合产物， fHbp (1+2)MCPS，fHbp (1+2)和脑膜炎血清组W-135多糖（MWPS)的缀合产物及fHbp (1+2)和 脑膜炎血清组Y多糖（MYPS)的缀合产物的HPLC图谱。缀合后，蛋白质信号从约22. 5分钟 移动到约15. 5-18. 5分钟。
[0012] 序列表
[0013] 本文中或随附的序列表中所列出的任何核酸和氨基酸序列是用37C. F. R. § 1. 822 中定义的核苷酸碱基和氨基酸的标准字母缩写示出的。在至少一些情况下，只示出了每个 核酸序列的一条链，但应该理解任意引用的所述示出的链都包含互补链。
[0014] SEQ ID NOs :1和2分别是示例性的NspA核酸和氨基酸序列。
[0015] SEQ ID Nos :3和4分别是示例性的fHbpl核酸和氨基酸序列。
[0016] SEQ ID NOs :5和6分别是示例性的fHbp2核酸和氨基酸序列。
[0017] SEQ ID NOs :7和8分别是示例性的fHbpl-fHbp2融合蛋白的核酸和氨基酸序列。
[0018] SEQ ID NOs :9和10分别是正向和反向fHbpl引物的核酸序列。
[0019] SEQ ID NOs :11和12分别是正向和反向fHbp2引物的核酸序列。
[0020] SEQ ID NOs : 13和14是另外的反向fHbpl引物的核酸序列。
[0021] SEQ ID NOs : 15和16是另外的正向fHbp2引物的核酸序列。

【具体实施方式】
[0022] Kohn和Wilchek首先介绍了 1-氰基-4-二甲氨基R比啶四氟硼酸盐（CDAP)作为 在PS树脂上的羟基基团的活化中CNBr的取代物（Appl. Biochem. Biotech. 9 :285-305， 1984)。随后将指定的蛋白质与所述活化的PS树脂混合并将其缀合至所述活化的PS树脂 用于亲和层析。该方法随后被用于活化可溶性PS以制备PS-蛋白质缀合物（例如Lees et al. ,Vaccine 26 :190-198,1996)。为实现缀合产品的最佳收率，该方法在pH9、室温下需要 2-2. 5分钟的PS活化时间。
[0023] 本文公开了缀合方法，其避免2-2. 5分钟PS活化时间的不方便的且难以控制的操 作。现已发现，PS可以由CDAP在约4°C活化1. 5-3小时，并实现与蛋白质缀合的更好的收 率。不囿于理论，可能是CDAP和所得的氰酸酯基团在更低温度（例如4°C)下比在室温下 具有更长的半衰期。相似的现象在4°C下PS缀合至在酰肼-活化的蛋白质中的酰肼基团时 观察到。因此，所述公开的方法提供制备多糖-蛋白质缀合物的优势，包括改善的控制性、 便利性和收率。这些特征对于缀合物的大规模制备（如商业疫苗制备）是特别有利的。
[0024] 所公开的改进的缀合方法不限于PS和蛋白质的缀合物的制备。这些改进的方法 可被用于任何氰酸酯-活化的部分与任意包括氨基基团的部分或任何酰肼-活化的部分的 缀合，提供了改进的便利性并且增加了所得缀合物的收率。例如，所述公开的方法可被用于 制备化学、生物化学的、医学的、药学的、诊断的和/或治疗的试剂。
[0025] I?缩写
[0026] ADH 己二酸二酰肼
[0027] APDO 1-氨基-2, 3-丙二醇
[0028] CAPS 3-(环己基氨基）-1-丙磺酸
[0029] CDAP 1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐
[0030] CHES (2-(N-环己基氨基）乙磺酸
[0031] EDC 1_[3_(二甲基氛基）丙基]_3_乙基碳二亚胺盐酸盐
[0032] fHbp因子H结合蛋白
[0033] fHbpl因子H结合蛋白1(亚家族B)
[0034] fHbp2因子H结合蛋白2 (亚家族A)
[0035] HEPES N- (2_ 羟乙基）哌嗪-N' - (2_ 乙磺酸）
[0036] MAPS脑膜炎球菌血清组A多糖
[0037] MCPS脑膜炎球菌血清组C多糖
[0038] MWPS脑膜炎球菌血清组W-135多糖
[0039] MYPS脑膜炎球菌血清组Y多糖
[0040] NspA奈瑟氏球菌表面蛋白A
[0041] PS 多糖
[0042] TT 破伤风类毒素
[0043] II ?术语
[0044] 除非另外解释，本文使用的所有的技术和科学术语具有与本公开内容所属的技术 领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。单数"一（a) "、"一个（an)"和"所述（the)"、 包括复数指示物，除非上下文另外清楚地指示。类似地，词语"或（or)"意在包括"和 (and) "，除非上下文另外清楚地指示。还应理解，为核酸或多肽给出的所有碱基大小或氨基 酸大小，及所有分子量或分子质量数值，都是近似值，并被提供用于描述。尽管在实施或测 试本公开内容时可以使用与本文记载的方法和材料相似的或等价的方法和材料，但是以下 描述了合适的方法和材料。术语"包含"指"包括"。本文提及的所有出版物、专利申请、专 利及其他参考文献均以引用的方式全文纳入本文用于所有目的。本文提及的所有GenBank 登记号的截止到2012年5月24日的全部内容以引用的方式纳入本文。在矛盾的情况下， 以本说明书 包括术语解释 为准。另外，材料、方法和实例仅为说明性的而不意欲进 行限制。
[0045] 除非另有说明，技术术语按照常规用法使用。分子生物学的常用术语的定 义可参见：Beniamin Lewin，Genes V，由 Oxford University Press 出版，1994 (ISBN 0-19-854287-9) ;Kendrew et al. (eds. )，The Encyclopedia of Molecular Biology，由 Blackwell Science Ltd.出版，1994 (ISBN 0-632-02182-9);和 Robert A. Meyers (ed.)， Molecular Biology and Biotechnology ：a Comprehensive Desk Reference, 由 VCH Publishers，Inc.出版，1995 (ISBN 1-56081-569-8)。
[0046] 为了有助于理解本公开内容的多个实施方案，提供了以下具体术语的释义：
[0047] 佐剂：非特异性地增强针对抗原的免疫应答的物质或赋形剂（vehicle)。佐剂可 包括吸附有抗原的矿物质（例如明矾、氢氧化铝或磷酸铝）的悬液，或抗原溶液乳化在矿物 油中的油包水乳液（例如弗氏不完全佐剂），有时包括灭活的分枝杆菌（弗氏完全佐剂）以 进一步增强抗原性。免疫刺激性寡核苷酸（例如包括CpG基序的那些）也可被用作佐剂（例 如，参见美国专利号 6, 194, 388、6, 207, 646、6, 214, 806、6, 218, 371、6, 239, 116、6, 339, 068、 6, 406, 705和6, 429, 199)。佐剂也包括生物分子，例如共刺激分子。示例性的生物佐剂包括 IL-2、RANTES、GM-CSF、TNF-a、IFN-y、G-CSF、LFA-3、CD72、B7-l、B7-2、0X-40I^P41BBL。
[0048] 抗原：可特异性地被具有特异性体液或细胞免疫性的产物一一例如抗体分子或 T-细胞受体一一结合的化合物、组合物或物质。抗原可以是任何类型的生物分子，包括，例 如简单中间代谢产物、糖类（例如寡糖）、脂质和激素以及大分子例如复杂的碳水化合物 (例如多糖）、磷脂、核酸和蛋白质。抗原的种类包括但不限于，病毒抗原、细菌抗原、真菌抗 原、原生动物及其他寄生虫抗原、肿瘤抗原，参与自身免疫性疾病、过敏和移植排斥的抗原， 毒素及其他各种抗原。
[0049] 载体：可与半抗原或抗原（例如多糖）结合或缀合的免疫原性分子。当结合或 缀合至载体时，该分子的免疫原性更强。选择载体从而提高所述结合的或缀合的分子的免 疫原性和/或引起针对所述载体的抗体，所述载体是诊断、分析和/或治疗上有益的。分 子与载体的共价连接可赋予增强的免疫原性和T-细胞依赖性（Pozsgay et al.，PNAS96 : 5194-97,1999 ;Lee et al.，J. Immunol. 116 :1711_18,1976 ;Dintzis et al.，PNAS 73 : 3671-75,1976)。有用的载体包括聚合物载体，其可以是含有一个或多个可连接至反应物部 分的官能团的天然的（例如来自细菌或病毒的蛋白质）、半合成的或合成的材料。
[0050] 用作载体的细菌产物的实例包括细菌毒素，例如炭疽芽孢杆菌（B.anthracis)保 护性抗原（包括含有至少一个抗原表位的片段和能够引起免疫应答的类似物或衍生物）、 致死因子和致死毒素及其他细菌毒素和类毒素，例如破伤风毒素/类毒素、白喉毒素/类毒 素、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)外毒素/类毒素、百日咳毒素/类毒素，和产气荚膜梭菌 (C. perfringens)外毒素/类毒素。如本文公开的，脑膜炎球菌因子H结合蛋白或NspA蛋 白也是有用的载体蛋白。病毒蛋白，例如乙型肝炎表面抗原和核心抗原也可用作载体。
[0051] 缀合（缀合的）：将第一单元偶合至第二单元。其包括但不限于，将一个分子共价 结合到另一分子（例如，直接地或通过连接物分子）、将一个分子非共价的结合到另一分子 (例如，静电结合）（参见，例如美国专利号6921496,其公开了用于静电缀合的方法）、通过 氢键将一个分子非共价地结合到另一分子、通过范德华力将一个分子非共价地结合到另一 分子，及这类偶合的任何或全部组合。在一个实施方案中，缀合包括多糖与蛋白质的共价键 连接。所述共价键连接可以是直接的或间接的，例如通过间隔物分子连接。
[0052] 共价键：两个原子间的原子间键，其特征在于由所述各原子共享一个或多个电子 对。术语"共价结合"或"共价连接"是指使两个独立的分子成为一个相连的分子。
[0053] 有效量：特定试剂的量，其足以在用该试剂治疗的受试者中达到理想的效果。例 如，其可以是在提高抵抗、预防、减轻和/或治疗受试者中的感染和由细菌感染引起疾病中 有用的免疫原性缀合物（例如脑膜炎球菌PS-fHbp缀合物）的量。试剂的治疗有效量可包 括足以提高抵抗、预防、减轻和/或治疗受试者中的感染或由感染引起的疾病的量，而不会 引起所述受试者中严重的细胞毒性效应。对于提高抵抗、预防、减轻和/或治疗受试者中的 感染和/或由感染引起的疾病有用的试剂的有效量或治疗有效量取决于被治疗的受试者、 痛苦的严重性和组合物的给药方式。
[0054] 因子H结合蛋白（fHbp):-种脑膜炎球菌的表面蛋白，也被称为GNA1870或 LP2086(Masignani et aL. , J.Exp. Med. 197 :789-799,2003 ；Fletcher et al. , Inf, Immun. 72 :2088-2100, 2004)。fHbp与因子H--其为在C3b切割成iC3b过程中的辅因 子一一结合，阻止因子B与C3b结合从而减慢旁路C3转化酶的形成，并且一旦C3转化酶形 成便不可逆地将其分解。存在两个fHbp亚家族，亚家族A (也被称为fHbp2)和亚家族B (也 被称为fHbpl)。所述fHbp蛋白在脑膜炎奈瑟氏球菌菌株中表现出大量的序列变异，但所有 都与因子H结合。
[0055] fHbp核酸和蛋白质序列是公开可得的。示例性的fHbp核酸序列包括GenBank登 记号 NC_003112 (1975218-1976180)、AY330353、AY330354、AY330363、AY330361、AY330367、 AY330370、AY330375、AY330398、AY330399、AY330400、AY330401、AY330406、AY330407、 AY330408、AY330409、AY330411、JN580522及相关的氨基酸序列，所有这些的存在于2012年 5月24日GenBank中的序列以引用的方式纳入本文。本领域技术人员可鉴定另外的fHbp 核酸和蛋白质序列。
[0056] 免疫应答：免疫系统的细胞例如B-细胞、T-细胞、巨噬细胞或多形核细胞对刺激 的应答。免疫应答可包括参与宿主防御反应的身体的任何细胞，例如，分泌干扰素或细胞因 子的上皮细胞。免疫应答包括但不限于，先天性免疫应答或炎症。
[0057] 免疫原：能够在适当条件下在受试者中刺激产生抗体或T-细胞应答的化合物、组 合物或物质，包括注射或吸收到受试者中的组合物。
[0058] 免疫原性缀合物或组合物：可用于在受试者中刺激或引起特异性免疫应答（或免 疫原性应答）的组合物。在一些实施方案中，该免疫应答是保护性的或提供保护性免疫，因 为其使受试者更好地抵抗来源于所述免疫原性组合物所针对的生物体的感染和疾病发展。 免疫原性组合物的一个具体实例是疫苗。
[0059] 免疫原性不同的多糖：一种多糖，其引起的免疫应答与另一类多糖引起的免疫应 答不同。免疫原性不同的多糖可以是两种或多种来自不同的有荚膜的细菌的多糖。例如与 脑膜炎球菌多糖相比，肺炎球菌多糖是一种免疫原性不同的多糖。免疫原性不同的多糖也 包括两种或多种来自不同血清组或血清型的多糖。例如，与血清组C的脑膜炎球菌多糖相 比，血清组A的脑膜炎球菌多糖是一种免疫原性不同的多糖。
[0060] 抑制或治疗疾病："抑制"疾病指抑制疾病或病症的完全发生，例如，在有患疾病如 脑膜炎球菌性脑膜炎的风险的受试者中。疾病的抑制的范围可为所述疾病的部分抑制至基 本上完全抑制（预防）。在一些实例中，术语"抑制"指降低或延缓疾病的发生或进展。"治 疗"指在疾病已经开始发生后，减轻疾病或病理状况的征象或症状的治疗性干预。如本文使 用的，关于疾病、病理状况或症状的术语"改善"，指治疗的任何可观察的有益效果。所述有 益效果可以通过以下证明，例如在易得病的受试者中延缓疾病的临床症状的发生、疾病的 一些或全部临床症状的严重性降低、疾病进展更慢、疾病复发的次数降低、受试者的总体健 康或健康改善，或通过本领域已知的对特定疾病而言特异性的其他参数。
[0061] 多价免疫原性缀合物或多价缀合物疫苗：包括多于一种抗原表位的分子或缀合 物。一类多价免疫原性缀合物包括不同分子的混合物，每种分子包含不同的免疫原性不同 的多糖，其中每个不同的免疫原性不同的多糖缀合到单独的蛋白质载体（其可以是相同的 或不同的蛋白质载体）。另一类多价免疫原性缀合物是其中多个免疫原性不同的多糖缀合 到单个蛋白质分子或单个蛋白质构建体（所述蛋白质构建体自身包括多于一个不同蛋白 质）上的分子。另一类多价免疫原性缀合物包括第一类缀合物和第二类缀合物的混合物。 第一类多价免疫原性缀合物的实例可被描述为由下式代表的不同结构的混合物：
[0062] P1-PS1 ;P IPS2和 P IPS3
[0063] 其中P1是载体蛋白；并且PS^PS2和PS 3为各自免疫原性不同的多糖。
[0064] 第二类多价免疫原性缀合物的实例可被描述为由下式代表的结构：
[0065]

【权利要求】
1. 制备免疫原性缀合物的方法，包括 在约2°C至约6°C下将至少一种多糖与氰基化试剂反应，得到氰酸酯-活化的多糖；及 使至少一种氰酸醋-活化的多糖与至少一种蛋白质在pH约5至约8,约2°C至约6°C下 接触，使得所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与所述至少一种蛋白质反应，得到包括至少 一个在所述至少一种多糖和所述至少一种蛋白质之间形成的C-N键的免疫原性缀合物。
2. 权利要求1的方法，还包括： 在将所述至少一种氰酸酯-活化的多糖与所述至少一种蛋白质接触前，将所述至少一 种蛋白质与肼、羰酰肼、盐酸肼、二酰肼或其混合物在约2°C至约6°C反应，产生至少一种酰 肼-活化的蛋白质溶液。
3. 权利要求2的方法，其中将所述至少一种蛋白质与肼、羰酰肼、琥珀酰二酰肼、己二 酸二酰肼或其混合物在碳二亚胺盐酸盐的存在下、在pH约6至约7下反应，得到酰肼-活 化的蛋白质溶液。
4. 权利要求3的方法，其中所述碳二亚胺包括1-[3-(二甲氨基）丙基]-3-乙基碳二 亚胺盐酸盐。
5. 权利要求1-4中任一项的方法，其中所述氰基化试剂包括1-氰基-4-二甲氨基吡啶 四氟硼酸盐（CDAP)、1-氰基-4-吡咯烷基吡啶四氟硼酸盐（CPIP)、溴化氰、对-硝基苯基氰 酸酯（pNPC)或四氟硼酸N-氰基-N，N，N-三乙基铵（CTEA)。
6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述至少一种多糖包括脑膜炎球菌组A多糖、脑 膜炎球菌组C多糖、脑膜炎球菌组W-135多糖、脑膜炎球菌组Y多糖，或其两种以上的组合。
7. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述至少一种蛋白质包括fHbp亚家族 A(fHbp2)蛋白或其一部分、fHbp亚家族B(fHbp2)蛋白或其一部分，或其组合。
8. 权利要求7的方法，其中所述fHbp蛋白包括fHbp融合蛋白，所述fHbp融合蛋白包 括fHbp 1的至少一部分和fHbp2的至少一部分。
9. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述至少一种蛋白质包括奈瑟球菌表面蛋白A 或其免疫原性部分。
10. 通过权利要求1-9中任一项的方法制备的免疫原性缀合物。
11. 免疫原性缀合物，其包括至少一种多糖或至少一种蛋白质或其免疫原性部分，以及 至少一种奈瑟球菌表面蛋白，其中所述至少一种多糖或所述至少一种蛋白质通过至少一个 连接基团被连接到所述奈瑟球菌表面蛋白。
12. 权利要求11的免疫原性缀合物，其中所述至少一种奈瑟球菌表面蛋白包括至少一 种奈瑟球菌因子H结合蛋白（fHbp)或至少一种奈瑟球菌表面蛋白A(NspA)。
13. 权利要求11或权利要求12的免疫原性缀合物，其中所述至少一种多糖包括脑膜炎 球菌多糖、肺炎球菌多糖、B型流感嗜血杆菌多糖、伤寒沙门菌Vi多糖，或组B链球菌多糖。
14. 权利要求3的免疫原性缀合物，其中所述至少一种多糖是选自以下的脑膜炎球菌 多糖：脑膜炎球菌组A多糖、脑膜炎球菌组C多糖、脑膜炎球菌组W-135多糖、脑膜炎球菌组 Y多糖，以及其两种以上的组合。
15. 权利要求2-4中任一项的免疫原性缀合物，其中所述至少一种fHbp包括fHbp亚家 族A(fHbp2)蛋白、fHbp亚家族B(fHbp2)蛋白，或其组合。
16. 权利要求15的免疫原性缀合物，其中所述至少一种fHbp包括fHbp融合蛋白，所述 fHbp融合蛋白包括fHbpl的至少一部分和fHbp2的至少一部分。
17. 药物组合物，其包含一种或多种权利要求11-16中任一项的免疫原性缀合物及可 药用载体。
18. 权利要求17的药物组合物，其还包含佐剂。
19. 在受试者中引起针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答的方法，包括向所述受试者给 予有效量的一种或多种权利要求11-16中任一项的免疫原性缀合物或权利要求17或权利 要求18的组合物，从而在所述受试者中引起针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答。
20. 权利要求19的方法，其中所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答包括针对脑膜炎 球菌血清组A、脑膜炎球菌血清组B、脑膜炎球菌血清组C、脑膜炎球菌血清组W-135、脑膜炎 球菌血清组Y、脑膜炎球菌血清组X或其两种以上的组合的免疫应答。
21. 权利要求19或权利要求20的方法，其中所述免疫应答包括杀菌活性。
22. 权利要求19-21中任一项的方法，其中所述受试者是人。
23. 权利要求11-16中任一项的免疫原性缀合物或权利要求17或权利要求18的药物 组合物，用于在受试者中引起针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答。
【文档编号】A61P31/04GK104428008SQ201380037403
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年5月23日 优先权日:2012年5月24日
【发明者】C-H·R·李, V·B·品托 申请人:美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表), 美国政府（由陆军部部长代表）