一种含有总黄酮和总皂苷的提取物及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种含有总黄酮和总皂苷的提取物及其制备方法与应用，本发明通过将忧遁草用碳酸钠盐80～100℃温度下用水提取数次获得滤液，将滤液减压浓缩后酸调节pH值至4～6得到酸性溶液，用水饱和正丁醇对酸性溶液进行萃取得到萃取液，最后将萃取液减压浓缩成60℃测比重为1.3～1.5的稠膏并结果干燥粉碎过筛后得到包含总黄酮和总皂苷的忧遁草提取物。在此基础上，本发明提供了由上述提取物制备得到的不同制剂，以及上述提取物在抗氧化和神经保护方面的应用。本发明生产成本低，提取效果好，活性成分含量高，并且提取过程中正丁醇可循环利用，对环境污染小，便于规模化工业生产。
【专利说明】一种含有总黄酮和总皂苷的提取物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药提取制剂领域，尤其涉及一种含有总黄酮和总皂苷的提取物及其 制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 忧遁草（Clinacanthus nutans (Burm. f.) Lindau)，又名优遁草、鳄嘴花，属于爵床 科忧遁草属，是东南亚传统药物中广泛应用的药用植物，分布在中南半岛、马来半岛以及中 国大陆的广西、广东、云南、海南等地。在马来西亚，泰国等地，忧遁草作为一种传统的药材 治疗精神紧张，糖尿病，类风湿性关节炎，蛇叮咬，肝炎以及抗病毒。忧遁草叶子的提取物可 以作为消炎药治疗蚊虫叮咬，作为补救措施治疗皮肤疱疹和病毒病变的水痘带状疱疹。忧 遁草中的叶绿素 a和叶绿素 b衍生物有抗疱疹病毒的活性。
[0003] 现代医学研究发现，忧遁草的主要成分主要包括豆留醇，羽扇豆醇，谷留醇，桦 木醇以及皂苷成分，6种碳苷黄酮，牡荆素，异牡荆素，夏佛塔苷，荭草素，异荭草素，5种含 硫糖苷，两种甘油糖脂，脑苷脂。其中，羽扇豆醇、桦木醇等三萜类成分具有抗肿瘤、抗炎作 用，牡荆素，荭草素等碳苷黄酮成分具有良好的抗炎、抗氧化和神经保护作用。本发明拟提 供忧遁草总黄酮和总皂苷的提取、制剂以及在抗氧化和神经保护方面的应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种含有总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法，旨在同时 获取忧遁草中对肿瘤具有良好抗性的总黄酮和总皂苷的简便方法。
[0005] 本发明的另一目的在于提供由上述方法提取到的含有总黄酮和总皂苷的提取物。
[0006] 本发明的再一目的在于提供上述提取物的在制备常规中药制剂剂型中的应用。
[0007] 本发明的目的还在于提供上述提取物在抗氧化和神经保护方面的应用。
[0008] 本发明是这样实现的，一种包含总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法其特征在于 包括以下步骤：
[0009] (1)将忧遁草切段并加入其质量的1?5%碳酸钠盐，在80?100°C温度下用水提 取数次，每次提取用水的量为所述忧遁草质量的6?12倍，合并滤液；
[0010] (2)将所述滤液减压浓缩至所述忧遁草质量的1?2倍后，加酸调节滤液pH值至 4?6,得到酸性溶液；
[0011] (3)将所述酸性溶液用正丁醇进行萃取，得到萃取液；其中，所述正丁醇的加入量 为酸性溶液体积的0. 5?1倍；
[0012] (4)将所述萃取液减压浓缩成60°C测比重为1. 3?1. 5的稠膏，该稠膏经真空超 声减压干燥后粉碎，过100目筛，即得提取物。
[0013] 优选地，在步骤（1)中，所述碳酸钠盐为碳酸钠或碳酸氢钠。
[0014] 优选地，在步骤（2)中，所述酸为质量浓度为34%盐酸。
[0015] 优选地，在步骤（4)中，所述正丁醇为水饱和正丁醇。
[0016] 本发明进一步提供了一种通过上述的方法提取到的含有总黄酮和总皂苷的提取 物。
[0017] 本发明进一步提供了上述含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂 型中的应用，往所述提取物中加入其质量的5?10%糊精、5?10%乳糖，并用体积浓度为 60?70%的乙醇作为粘合剂制成软材，经制粒、干燥、整粒、总混、分装，即得颗粒制剂；其 中所述乙醇加入量为所述提取物与所述糊精、乳糖质量之和的1. 〇?1. 2倍。
[0018] 本发明进一步提供了上述含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂 型中的应用，往所述提取物中喷入羟丙甲基纤维素溶液，经湿法制粒、干燥、整粒，并加入所 述提取物质量的0. 5?1 %的微粉硅胶，混合均匀后填充胶囊，即得胶囊制剂；其中，所述羟 丙甲基纤维素溶液是指将羟丙甲基纤维素与体积浓度为40%的乙醇配制成质量体积比为 3?5%的溶液，所述羟丙甲基纤维素为所述提取物质量的1?2%。
[0019] 本发明进一步提供了上述含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂 型中的应用，往所述提取物中加入其质量的3?5%糊精、3?5%淀粉，混合均匀后用体积 浓度为60?70%的乙醇经湿法制粒、干燥、整粒，并加入所述提取物质量的0. 1?0. 3%的 滑石粉混合均匀，压片，即得片剂。
[0020] 本发明进一步提供了上述含有总黄酮和总皂苷的提取物在神经保护方面的应用。
[0021] 本发明进一步提供了上述含有总黄酮和总皂苷的提取物在在抗氧化方面的应用， 用于清除DPPH自由基和ABTS自由基。
[0022] 本发明克服现有技术的不足，提供了一种含有总黄酮和总皂苷的提取物及其制备 方法与应用，通过将忧遁草用碳酸钠（或碳酸氢钠）在80?100°C温度下用水提取数次获 得滤液，将滤液减压浓缩后酸调节pH值至4?6得到酸性溶液，用水饱和正丁醇对酸性溶 液进行萃取得到萃取液，最后将萃取液减压浓缩成60°C测比重为1. 3?1. 5的稠膏并结果 干燥粉碎过筛后得到包含总黄酮和总皂苷的忧遁草提取物。在本发明中，提取溶剂选用碳 酸钠的水溶液为溶媒，有效地降低了生产成本，采用水饱和正丁醇进行萃取，使得有效成分 提取完全；此外，本发明采用正丁醇进行萃取，而正丁醇相对其它有机溶剂有着沸点高、毒 性小的优点，因此，正丁醇在使用过程中可循环利用，对环境污染小，便于规模化工业生产。 本发明方法提取到的提取物不但保留了忧遁草中的主要活性成分（总黄酮和总皂苷），而 且该活性成分的含量高。在此基础上，本发明还进一步提供了由上述提取物制备得到的不 同制剂，能很方便给不同年龄人群的服用。另外，本发明的含有总黄酮和总皂苷的提取物 不仅在传统抗癌领域有着非常广泛的用途，而且在抗氧化和神经保护方面也有着显著的功 效。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1是本发明效果实施例中MTT法测样品对BV-2细胞存活率的影响结果图；
[0024] 图2是本发明效果实施例中样品对BV-2细胞N0释放的抑制率结果示意图；
[0025] 图3是本发明效果实施例中BV-2细胞在倒置显微镜下的形态观察图。
【具体实施方式】
[0026] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并 不用于限定本发明。
[0027] 实施例1
[0028] 从忧遁草中同时提取总黄酮和总皂苷的方法，包括以下步骤：
[0029] (1)将100kg忧遁草切段，投入浙江凯迪设备厂生产的2000L不锈钢反应釜中，力口 入lkg碳酸钠，再加入水，在80°C温度下提取1?2h，管道过滤，滤渣同法提取2次，过滤， 合并滤液；其中每次加水量为忧遁草质量的6倍。
[0030] (2)将滤液用浙江凯迪设备厂生产的单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩 (50°C，-0· 06MPa)至100L，加质量浓度为34%的盐酸调节pH值至4,得到酸性溶液。
[0031] (3)将酸性溶液放入常州宇通干燥设备有限公司生产的CQT150型液液连续萃取 塔内，并加入50L水饱和正丁醇进行萃取，收集正丁醇层，得到萃取液。
[0032] (4)萃取液用浙江凯迪设备厂生产的单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩 (60°C，-0. 06MPa)成10kg稠膏（60°C热测，比重为1. 3)，并回收正丁醇。该稠膏经常州宇通 干燥设备有限公司生产的FZ-15型微波真空减压干燥机（60°C，-0. 06MPa)后粉碎，过100 目筛，即得4kg忧遁草提取物1。
[0033] 实施例2
[0034] 从忧遁草中同时提取总黄酮和总皂苷的方法，包括以下步骤：
[0035] (1)将100kg忧遁草切段，投入2000L不锈钢反应釜中，加入2. 5kg碳酸氢钠，再加 入水，在90°C温度下提取1?2h，管道过滤，滤渣同法提取2次，过滤，合并滤液；其中每次 加水量为忧遁草质量的9倍。
[0036] (2)将滤液用单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩（50°C，-0· 06MPa)至150L， 加质量浓度为34%的盐酸调节pH值至5,得到酸性溶液。
[0037] (3)将酸性溶液放入CQT150型CQT150型液液连续萃取塔内，并加入112. 5L水饱 和正丁醇进行萃取，收集正丁醇层，得到萃取液。
[0038] (4)萃取液用单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩（60°C，-0· 06MPa)成12kg 稠膏（60°C热测，比重为1. 4)，并回收正丁醇。该稠膏经FZ-15型真空（微波）减压干燥机 (60°C，-0. 06MPa)后粉碎，过100目筛，即得4. 8kg忧遁草提取物2。
[0039] 实施例3
[0040] 从忧遁草中同时提取总黄酮和总皂苷的方法，包括以下步骤：
[0041] (1)将100kg忧遁草切段，投入2000L不锈钢反应釜中，加入5kg碳酸钠，再加入 水，在100°C温度下提取1?2h，管道过滤，滤渣同法提取2次，过滤，合并滤液；其中每次加 水量为忧遁草质量的12倍。
[0042] (2)将滤液用单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩（50°C，-0· 06MPa)至200L， 加质量浓度为34%的盐酸调节pH值至6,得到酸性溶液。
[0043] (3)将酸性溶液放入CQT150型液液连续萃取塔内，并加入200L水饱和正丁醇进行 萃取，收集正丁醇层，得到萃取液。
[0044] (4)萃取液用单效浓缩器（蒸发量200kg/h)减压浓缩（60°C，-0· 06MPa)成14kg 稠膏（60°C热测，比重为1. 5)，并回收正丁醇。该稠膏经FZ-15型微波真空减压干燥机 (60°C，-0. 06MPa)后粉碎，过100目筛，即得5. 8kg忧遁草提取物3。
[0045] 实施例4
[0046] 无糖型的颗粒制剂1的制备，具体过程如下：
[0047] 往4kg实施例1所得的忧遁草提取物1中加入其质量的5%糊精、5%乳糖（即各 0. 2kg)，并用4. 4kg体积浓度为60?70%的乙醇作为粘合剂，在南京群帮干燥设备有限公 司生产的CH-300型槽型混合机中混合制成软材。
[0048] 采用南京群帮干燥设备有限公司生产的YK-160型摇摆式制粒机制粒，将颗粒用 南京群帮干燥设备有限公司生产的RXH-B-II型热风循环干燥箱在60?75°C温度下干燥 后，用南京群帮干燥设备有限公司生产的ZS-350型振荡筛（三出口）整粒，经天津市三桥 包装机械有限责任公司生产的DXDK40II型自动颗粒分装机分装，即得4. 2kg颗粒制剂1。
[0049] 实施例5
[0050] 无糖型的颗粒制剂2的制备，具体过程如下：
[0051] 往4. 8kg实施例2所得的忧遁草提取物2中加入其质量的7. 5%糊精、7. 5%乳糖 (即各0. 36kg)，并用6. 07kg体积浓度为60?70 %的乙醇作为粘合剂，在CH-300型槽型混 合机中混合制成软材。
[0052] 采用YK-160型摇摆式制粒机制粒，将颗粒用RXH-B-II型热风循环干燥箱在60? 75°C温度下干燥后，用ZS-350型振荡筛（三出口）整粒，经DXDK40II型自动颗粒分装机分 装，即得5. 3kg颗粒制剂2。
[0053] 实施例6
[0054] 无糖型的颗粒制剂3的制备，具体过程如下：
[0055] 往5. 8kg实施例3所得的忧遁草提取物中加入其质量的10%糊精、10%乳糖（即 各0. 58kg)，并用8. 35kg体积浓度为60?70 %的乙醇作为粘合剂，在CH-300型槽型混合 机中混合制成软材。
[0056] 采用YK-160型摇摆式制粒机制粒，将颗粒用RXH-B-II型热风循环干燥箱在60? 75°C温度下干燥后，用ZS-350型振荡筛（三出口）整粒，经DXDK40II型自动颗粒分装机分 装，即得6. 8kg颗粒制剂3。
[0057] 实施例7
[0058] 无糖型的胶囊制剂1的制备，具体过程如下：
[0059] 往4. 0kg实施例1得到的忧遁草提取物1中喷入羟丙甲基纤维素溶液，依次用 常州宇通干燥设备有限公司生产的GHL150型高速混合制粒机制粒、用常州宇通干燥设备 有限公司生产的GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用南京群帮干燥设备有限公司生产的 ZS-350型振荡筛（三出口）整粒后，并加入忧遁草提取物1质量的0.5%的微粉硅胶（即 0. 02kg)，用南京群帮干燥设备有限公司生产的SH600混合机混合均匀后北京嘉福瑞科技 有限公司生产的JP2000A硬胶囊填充机充填胶囊，即得忧遁草胶囊制剂1，胶囊制剂内容物 为 4. 0kg。
[0060] 其中，羟丙甲基纤维素溶液是指将羟丙甲基纤维素与体积浓度为40%的乙醇配制 成质量体积比（kg/ml)为3%的溶液，羟丙甲基纤维素为忧遁草提取物1质量的1% (即 0· 04kg)。
[0061] 实施例8
[0062] 无糖型的胶囊制剂2的制备，具体过程如下：
[0063] 往4. 8kg实施例2得到的忧遁草提取物2中喷入羟丙甲基纤维素溶液，依次用 GHL150型高速混合制粒机制粒、用GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用ZS-350型振荡筛（三 出口）整粒后，并加入优遁草（忧遁草）提取物质量的0.75%的微粉硅胶（即0.036kg)， 用SH600混合机混合均匀后JP2000A硬胶囊填充机充填胶囊，即得忧遁草胶囊制剂2,胶囊 制剂2中内容物为4.8kg。
[0064] 其中，羟丙甲基纤维素溶液是指将羟丙甲基纤维素与体积浓度为40 %的乙醇配制 成质量体积比（kg/ml)为4%的溶液，羟丙甲基纤维素为忧遁草2提取物质量的1.5% (即 0. 072kg) 〇
[0065] 实施例9
[0066] 无糖型的胶囊制剂3的制备，具体过程如下：
[0067] 往5. 8kg实施例3所得的忧遁草提取物3中喷入羟丙甲基纤维素溶液，依次用 GHL150型高速混合，制粒机制粒、用GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用ZS-350型振荡筛 (三出口）整粒后，并加入优遁草（忧遁草）提取物质量的1. 0%的微粉硅胶（即〇· 058kg)， 用SH600混合机混合均匀后JP2000A硬胶囊填充机充填胶囊，即得优遁草（忧遁草）胶囊， 胶囊内容物为5.9kg。
[0068] 其中，羟丙甲基纤维素溶液是指将羟丙甲基纤维素与体积浓度为40 %的乙醇配制 成质量体积比（kg/ml)为5 %的溶液，羟丙甲基纤维素为忧遁草提取物3质量的2 % (即 0. 116kg)。
[0069] 实施例10
[0070] 无糖型的片剂1的制备，具体过程如下：
[0071] 往4. 0kg实施例1所得的忧遁草提取物1中加入其质量的3%糊精、3%淀粉（即 各0. 12kg)，混合均匀后用体积浓度为60?70%的乙醇为粘合剂，依次用常州宇通干燥设 备有限公司生产的GHL150型高速混合制粒机制粒、用常州宇通干燥设备有限公司生产的 GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用南京群帮干燥设备有限公司生产的ZS-350型振荡筛（三 出口）整粒，并加入忧遁草提取物1质量的0. 1 %滑石粉（即0. 004kg)，用南京群帮干燥设 备有限公司生产的SH600混合机混合均匀，用上海天祥生产的ZP-35型压片机压片，即得 4. 0kg忧遁草片剂1。
[0072] 实施例11
[0073] 无糖型的片剂2的制备，具体过程如下：
[0074] 往4. 8kg实施例2所得的忧遁草提取物2中加入其质量的4%糊精、4%淀粉（即 各0. 192kg)，混合均匀后用体积浓度为60?70 %的乙醇为粘合剂，依次用GHL150型高速 混合制粒机制粒、用GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用ZS-350型振荡筛（三出口）整粒， 并加入忧遁草提取物2质量的0. 2%滑石粉（即0. 096kg)，用SH600混合机混合均匀，用 ZP-35型压片机压片，即得4. 9kg忧遁草片剂2。
[0075] 实施例12
[0076] 无糖型的片剂3的制备，具体过程如下：
[0077] 往5. 8kg实施例3所得的忧遁草提取物3中加入其质量的5%糊精、5%淀粉（即 各0. 29kg)，混合均匀后用体积浓度为60?70%的乙醇为粘合剂，依次用GHL150型高速混 合制粒机制粒、用GFG150型高效沸腾干燥机干燥、用ZS-350型振荡筛（三出口）整粒，并加 入忧遁草提取物3质量的0. 3%滑石粉（即0. 017kg)，用SH600混合机混合均匀，用ZP-35 型压片机压片，即得6. 0kg忧遁草片剂3。
[0078] 效果实施例
[0079] 1、提取物中总黄酮和总皂苷含量的鉴定
[0080] (1)总黄酮含量的测定
[0081] 以芦丁为标准品绘制标准曲线，得回归方程：A = 0. 0113C-0. 0011 (R2 = 0. 9999)， 线性范围为12. 9-103. 2mg/L。准确称量25mg样品，定容至25mL容量瓶中。采用 Al(N0)3-NaN02比色法，于510nm处测定吸光度，计算实施例1中提供的提取物中总黄酮含 量。
[0082] (2)总皂苷含量测定
[0083] 采用香草醛-高氯酸比色法来测定总皂苷含量，以熊果酸为标准品绘制标准曲 线，得回归方程：程A = 0. 036C-0. 0094 (R2 = 0. 9993)。精密吸取对照品溶液和供试品溶 液于具塞试管中，挥干溶剂，再分别加入5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL和高氯酸0. 8mL，密 塞摇勾，直60 C恒温水浴锅中显色15min，取出后立即以冰水冷却5min，加入冰醋酸4mL，摇 匀，静置lOmin后，以空白试管中的溶液作空白对照，于470nm波长处测定吸光度，计算实施 例1中提供的提取物中总皂苷含量。
[0084] (3)测定结果
[0085] 实施例1中提取物总黄酮含量和总皂苷含量的测定结果如下表1所示：
[0086] 表1忧遁草提取物中总黄酮和总皂苷的含量
[0087]
【权利要求】
1. 一种包含总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将忧遁草切段并加入其质量的1?5%碳酸钠盐，在80?100°C温度下用水提取数 次，每次提取用水的量为所述忧遁草质量的6?12倍，合并滤液； (2) 将所述滤液减压浓缩至所述忧遁草质量的1?2倍后，加酸调节滤液pH值至4? 6,得到酸性溶液； (3) 将所述酸性溶液用正丁醇进行萃取，得到萃取液；其中，所述正丁醇的加入量为酸 性溶液体积的0. 5?1倍； (4) 将所述萃取液减压浓缩成60°C测比重为1. 3?1. 5的稠膏，该稠膏经真空超声减 压干燥后粉碎，过1〇〇目筛，即得提取物。
2. 如权利要求1所述的包含总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法，其特征在于，在步 骤（1)中，所述碳酸钠盐为碳酸钠或碳酸氢钠。
3. 如权利要求2所述的包含总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法，其特征在于，在步 骤（2)中，所述酸为质量浓度为34%盐酸。
4. 如权利要求3所述的包含总黄酮和总皂苷的提取物的制备方法，其特征在于，在步 骤（4)中，所述正丁醇为水饱和正丁醇。
5. -种由权利要求1至4任一项所述的方法提取到的含有总黄酮和总皂苷的提取物。
6. 权利要求5所述的含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂型中的应 用，其特征在于，往所述提取物中加入其质量的5?10%糊精、5?10%乳糖，并用体积浓度 为60?70%的乙醇作为粘合剂制成软材，经制粒、干燥、整粒、总混、分装，即得颗粒制剂； 其中所述乙醇加入量为所述提取物与所述糊精、乳糖质量之和的1. 〇?1. 2倍。
7. 权利要求5所述的含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂型中的应 用，其特征在于，往所述提取物中喷入羟丙甲基纤维素溶液，经湿法制粒、干燥、整粒，并加 入所述提取物质量的〇. 5?1 %的微粉硅胶，混合均匀后填充胶囊，即得胶囊制剂；其中，所 述羟丙甲基纤维素溶液是指将羟丙甲基纤维素与体积浓度为40 %的乙醇配制成质量体积 比为3?5%的溶液，所述羟丙甲基纤维素为所述提取物质量的1?2%。
8. 权利要求5所述的含有总黄酮和总皂苷的提取物在制备常规中药制剂剂型中的应 用，其特征在于，往所述提取物中加入其质量的3?5%糊精、3?5%淀粉，混合均匀后用体 积浓度为60?70%的乙醇经湿法制粒、干燥、整粒，并加入所述提取物质量的0. 1?0. 3% 的滑石粉混合均匀，压片，即得片剂。
9. 权利要求5所述的含有总黄酮和总皂苷的提取物在神经保护方面的应用。
10. 权利要求5所述的含有总黄酮和总皂苷的提取物在抗氧化方面的应用，其特征在 于，用于清除DPPH自由基和ABTS自由基。
【文档编号】A61K36/19GK104042653SQ201410070179
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年2月28日 优先权日:2014年2月28日
【发明者】黄丹民 申请人:黄丹民