红景天苷抗哮喘的新用途
【专利摘要】本发明公开了一种红景天苷抗哮喘的新用途，整体动物和分子细胞水平的相关实验研究表明，红景天苷对实验性哮喘具有一定的保护作用，其作用机制可能与抑制炎症反应，调节Th1/Th2细胞的平衡有关；提示其具有开发辛的抗哮喘药物的前景。
【专利说明】红景天苷抗哮喘的新用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药红景天有效成分红景天苷在抗哮喘方面的新用途。
【背景技术】
[0002]支气管哮喘(简称哮喘)是以可逆性气道阻塞、气道炎症、气道高反应性和气道重建为特征的疾病。它的发病原因和机制比较复杂，发病的主要危险因素是个体应变体质和环境因素。是全球范围内严重威胁公众健康的一种慢性疾病，涉及各个年龄组，世界许多国家都已开展对哮喘的研究，但其发病率和病死率并未下降，反而有所上升。其表现为发作性咳嗽、胸闷及呼吸困难，发作时的严重程度和持续时间个体差异很大；症状的特点是可逆性；可引起下呼吸道和肺部感染、水电解质和酸碱失衡，严重者会引起特异性超敏反应、闭锁肺、心律失常、猝死。
[0003]红景天拉丁文学名Rhodiola rosea,英文名Roseroot,是景天科多年生草木或灌木植物，生长在海拔800-2500米高寒无污染地带的珍稀野生植物，大多分布在北半球的高寒地带，大多数都生长在海拔3500—5000米左右的高山流石或灌木器丛林下。由于其生长环境恶劣，如缺氧、低温干燥、狂风、受紫外线照射、昼夜温差大，因而具有很强的生命力和特殊的适应性。
[0004]红景天的化学成分 有苷类、黄酮类、香豆素类、生物碱类、氨基酸和微量元素等。现代药理研究表明，红景天具有明显的抗衰老、抗寒冷、抗疲劳、抗微波福射、抗缺氧、抗肿瘤等作用。
[0005]红景天苷是从红景天属植物红景天中提取出来的一种苯乙醇类化合物，是其主要活性成分之一，药理活性广泛，具有抗缺氧、抗疲劳、抗福射、抗癌、延缓衰老、调节机体免疫等作用，还具有对神经系统、内分泌系统的调节作用和防止心血管以及多种老年性疾病的作用，有研究表明它与运动员的运动能力和运动成绩的提高也有密切的关联。本发明涉及红景天苷在抗哮喘方面的作用和功效，尚未见相关报道。
【发明内容】
[0006]本发明提供了红景天苷抗哮喘的系列生物学实验，为开拓红景天抗哮喘的新用途提供了依据。具体生物学实验研究结论包括以下方面:
[0007]1.通过甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导建立BALB/C小鼠哮喘模型，研究红景天苷对模型动物的影响
[0008]本发明以TDI诱导BALB/C小鼠建立哮喘模型动物，研究红景天苷对血中嗜酸性粒细胞的影响，对血液和肺泡灌洗液中各类白细胞比例，Th2细胞产生的IL-4、IL-6、IL-13，Thl细胞产生的IFN-Y等炎症因子的影响，制作小鼠肺组织的病理切片，观察气道炎症和炎症细胞浸润状况。结果表明，血液和肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞明显减少，Th2细胞产生的炎症因子如IL-4、IL-6、IL-13明显降低，而Thl细胞产生的IFN-Y增加，肺组织中炎症细胞的浸润情况也得到改善。[0009]2.通过OVA (卵清蛋白)诱导建立BALB/C小鼠哮喘模型，研究红景天苷对模型动物的影响
[0010]本发明以OVA诱导小鼠哮喘模型。研究红景天苷对小鼠的呼吸道反应性、支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种白细胞的数量及细胞因子IL-4和IFN-Y的水平、IL-4和IFN-Y在肺组织中的mRNA含量和组织学进行了检测。结果表明，与假治疗组相比，红景天苷治疗几乎能够消除气道高反应性，显著降低嗜酸性粒细胞百分比，明显降低支气管肺泡灌洗液(BALF)中11^-4，升高正^￥水平，减轻炎症和水肿。
[0011]发明效果:
[0012]有益效果:本发明的优点和积极效果在于，通过生物学研究发现，红景天苷对实验性哮喘具有一定的保护作用，其作用机制可能与抑制炎症反应，调节Thl/Th2细胞的平衡有关。提示其具有开发辛的抗哮喘药物的前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为红景天苷对TDI诱导的哮喘小鼠血中嗜酸性粒细胞的影响图；
[0014]图2为红景天苷对 肺组织的病理的影响对比图；
[0015]图3为红景天苷对气道阻力的影响
[0016]图4为红景天苷对BALF中不同白细胞的影响对比图；
[0017]图5为红景天苷对BALF中细胞因子IL_4、IFN- Y的作用图；
[0018]图6为红景天苷对肺组织的病理的影响对比图。
【具体实施方式】
[0019]以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0020]<实施例1>红景天苷对TDI诱导的BALB/C小鼠哮喘模型的影响
[0021]1.试验方法
[0022]1.1分组和建立模型
[0023]将60只8周龄的雌性BALB/C小鼠随机分为6组，每组10只。分别为:正常对照组，溶媒组(A00组)，模型组，阳性药组，红景天苷低剂量组(24mg/kg)，红景天苷高剂量组(48mg/kg)。在第1、8天模型组、阳性药组、红景天苷低剂量组、红景天苷高剂量组每只鼠腹腔和皮下各注射20ul TDI (0.3%,AOO:2体积的丙酮和3体积的橄榄油)致敏，溶媒组(A00组)的每只鼠腹腔和皮下各注射20ul的AOO ;在第15、18、21天模型组、阳性药组、红景天苷低剂量组、红景天苷高剂量组每只鼠滴鼻给与TDI20ul (0.01%,AOO:1体积的丙酮和4体积的橄榄油)激发，溶媒组每只鼠滴鼻给予A0020ul，激发前半小时灌胃给药，15-21连续7天灌胃给药，正常对照组和溶媒组给予PBS，阳性药组给予2mg/kg的地塞米松(Dex)，红景天苷低剂量组给予24mg/kg的红景天苷,红景天苷高剂量组给予48mg/kg的红景天苷。
[0024]1.2检测指标
[0025]1.2.1血液细胞学的检查
[0026]在最后一次激发的24小时之后收集血液，取20ul的血液与0.38ml的嗜酸性粒细胞计数液混匀，然后涂片，置于光学显微镜下计数嗜酸性粒细胞数；取一滴血于玻璃片上，涂片固定，然后用瑞姬氏染液染色，置于光学显微镜下，放大40倍，计数200个细胞，算出200个细胞中不同白细胞所占的比例。剩余的血液3000r/min离心10分钟，收集上清，冻存于_80°C，用于进一步的检测。
[0027]1.2.2肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞的检测
[0028]在最后一次激发后的24小时之后，取完血后，打开胸腔，结扎左支气管肺门部，分离出气管，在气管环状软骨的下方剪一 V型的切口，插入气管插管，用线结扎固定，将1.5ml的PBS分成3次灌洗肺,每次0.5ml。取一滴肺泡灌洗液置于血细胞计数池中，静置后置于显微镜下读取白细胞总数。将收集的肺泡灌洗液4°C 1000r/min离心10min，吸出上清，冻存于-80°C，用于进一步的研究；沉淀用PBS重悬涂片固定，用瑞姬氏染液染色，置于显微镜下放大40倍读取200个白细胞，统计各类白细胞的个数，算出各类白细胞所占的百分比。
[0029]1.2.3气道组织、肺组织的病理检查
[0030]从小鼠中将气道和肺组织分离出来溶于10%的中性福尔马林溶液中，过夜，然后将组织固定包埋于石蜡中，切成4_厚的切片。然后去石蜡，用苏木素-伊红染液染色(HE染色)，来观察炎症细胞的浸润情况。
[0031]1.2.4ELISA试剂盒检测血清以及肺泡灌洗液中的炎症因子:IL_4、IL-6, IFN-y的含量按照试剂盒说 明，检测血清中炎症因子IL-4、IL-6、IFN-Y的含量，以及肺泡灌洗液中的炎症因子IL-4、IL-6、IL-13、IFN-Y的含量。
[0032]1.3统计方法
[0033]所有的实验数据均以来表示，组间比较采用t检验来分析，P〈0.05具有
统计学意义。
[0034]2 结果
[0035]2.1红景天苷对TDI诱导的哮喘小鼠血中嗜酸性粒细胞的影响
[0036]如表1和图1，正常组与溶媒组血中嗜酸性粒细胞没有什么差异，模型组与正常组之间有很大的差异(p〈0.01)，说明造模较成功。与模型组相比，阳性药组(地塞米松2mg/kg)和红景天苷组(24mg/kg, 48mg/kg)明显减少血中嗜酸性粒细胞数(P〈0.01)。
[0037]表1.红景天苷对血中嗜酸性粒细胞的影响
[0038]
【权利要求】
1.红景天苷在制备抗哮喘药物中的应用。
2.含红 景天苷为活性成分的药物组合在制备抗哮喘药物中的应用。
【文档编号】A61K31/7032GK103919793SQ201410172694
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月25日 优先权日:2014年4月25日
【发明者】何文捷, 朱凌鹏, 肖露, 王静 申请人:南京禾安医药科技有限公司