米氏海参皂苷a及制备和用途
【专利摘要】本发明提供一种米氏海参皂苷A，从海洋无脊椎动物米氏海参中提供渗漉、萃取、反相硅胶(ODS)柱层析分离得到米氏海参总皂苷，再经反相硅胶柱层析分离，减压浓缩得到米氏海参皂苷A。本发明的米氏海参皂苷A显著抑制大鼠脑胶质瘤C6、人脑胶质瘤U87-MG、U251和SHG-44多种细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，降低肿瘤细胞特征代谢过程中多个关键酶的蛋白水平表达，具有独特的多靶点抗胶质瘤的作用特性。因此，可在制备治疗脑胶质瘤药物中应用。米氏海参皂苷A的化学结构式为：。
【专利说明】米氏海参皂苷A及制备和用途
【技术领域】
[0001] 本发明属医药领域，涉及米氏海参皂苷A(M〇ebi〇Side A)，以及从海洋无脊椎动物 米氏海参ffiodii)中制备该抗肿瘤活性化合物米氏海参阜苷A (Moebioside A)的方法和在制备治疗脑胶质瘤药物方面的应用。
【背景技术】
[0002] 脑胶质瘤（脑胶质细胞瘤）是脑颅内最常见和最恶性的脑肿瘤，约占颅内肿瘤的 46%，占所有恶性脑肿瘤的70%。世界卫生组织统计数据表明：恶性胶质瘤是34岁以下肿瘤 患者的第2位死亡原因，是35?54岁患者的第3位死亡原因，严重危害人类的健康及生命。 手术后结合放疗和替莫唑胺化疗是目前治疗恶性胶质瘤最普遍方法。对新诊断的患者，替 莫唑胺目前是唯一可选择的单一治疗的化疗药。但是，包括替莫唑胺在内的现有治疗胶质 瘤药物的疗效有限，多有严重不足，突出表现为：（1)多为化学品，毒副作用大；（2)肿 瘤细胞对药物的严重耐药性；（3)血脑屏障阻碍了药物到达脑内发挥其疗效。因此，临床 上需要克服以上缺陷，疗效更好、安全性更高和作用机制独特的新型抗胶质瘤药物。
[0003] 研究证明，胶质瘤细胞表现出与正常细胞不同的代谢特征。胶质瘤细胞从微环境 中摄取大量葡萄糖在糖酵解环节由胶质瘤细胞高表达的多个关键酶包括己糖激酶2 (HK2)、 磷酸果糖激酶/果糖2, 6-二磷酸酶（PFKFB3)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和乳酸脱氢酶5(LDH5) 等共同参与产生大量中间产物和终产物乳酸。这些中间产物是肿瘤细胞合成生物大分子的 起始原料，而乳酸分泌至细胞外可抑制机体免疫细胞对肿瘤细胞的清除能力，可促进肿 瘤细胞扩散，高表达的糖酵解关键酶HK2还可提高肿瘤细胞对放疗和替莫唑胺化疗的抗 性。此外，谷氨酰胺酶（GLS)主导的旺盛的谷氨酰胺分解（供给氮源和碳源）、胶质瘤细胞 高表达脂肪酸合成酶（FASN)和活跃的脂类合成利于大量生物分子和细胞膜的生成，抑制 FASN活性具有抗肿瘤作用。不难理解，正是肿瘤细胞高度利用其代谢中间产物合成生物大 分子DNA、RNA、蛋白质和生物膜的能力促使其快速无限制地增殖，调控肿瘤代谢不同环节 的关键酶可有效抑制肿瘤细胞的增殖。因此，靶向胶质瘤代谢不同环节关键酶的多靶点作 用的药物具有更好的抗肿瘤疗效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种具有抗胶质瘤活性的化合物米氏海参皂苷A (Moebioside A,化合物1)，所述的米氏海参阜苷A的化学结构式为：
【权利要求】
1. 一种米氏海参皂苷A，其特征在于，具有以下化学结构式：
〇
2. 根据权利要求1所述的米氏海参皂苷A的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实 现： (1) 米氏海参总皂苷提取 将冷冻的米氏海参切块，用甲醇渗漉提取，甲醇渗漉液合并后经减压浓缩得到浓缩 的甲醇提取液，浓缩的甲醇提取液先后用环己烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，合并正丁醇萃 取液并经减压浓缩得到正丁醇萃取物浸膏，正丁醇萃取物浸膏溶于水中，水溶解物经大孔 树脂柱层析分离，分别用10%甲醇水和80%甲醇水依次洗脱，合并80%甲醇洗脱液并经减 压浓缩得到粗总皂苷组分，粗总皂苷溶于水中经反相硅胶柱层析分离，先用30%甲醇水洗 脱，再用70%甲醇水洗脱，每300毫升1份，分段收集70%甲醇洗脱液，各收集组分中所 含有的皂苷用反相硅胶薄层层析检测，甲醇/水，70:30,10%硫酸105 °C加热显色，将显紫 红色斑点的组分合并，减压浓缩得到米氏海参总皂苷； (2) 米氏海参皂苷A的提取分离纯化 米氏海参总皂苷溶于水中经反相硅胶柱层析分离，先用30%甲醇水洗脱，再用65%甲 醇水洗脱，每100毫升1份，分段收集65%甲醇洗脱液，各收集组分中所含有的米氏海参 皂苷A用反相硅胶薄层层析检测，甲醇/水，70:30, 10%硫酸105 °C加热显色，将显紫红色 斑点的相同组分合并，减压浓缩得到米氏海参皂苷A ; (3) 米氏海参皂苷A的理化性质和结构鉴定 根据米氏海参皂苷A的1Η谱，13C谱，COSY谱，HMQC谱，HMBC谱和高分辨质谱鉴定，米氏 海参皂苷A为无色粉末，分子式C43H65Na019S，溶于甲醇、乙醇、吡啶，不溶于氯仿、乙酸乙酯， Rf 值为 〇. 56。
3. 根据权利要求2所述的米氏海参皂苷A的制备方法，其特征在于，所述的渗漉提取 用的溶媒为甲醇、或乙醇，所述大孔树脂柱层析大孔树脂用量与样品量的比例是10-30毫 升：1克，所述反相硅胶柱层析0DS用量与样品量的比例是30-60克：1克。
4. 根据权利要求1所述的米氏海参皂苷A在制备治疗胶质瘤药物中的应用。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物为米氏海参皂苷A活性物质单独 或与其他药物或有效成分一起，与药学上可接受的赋形剂制成。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为液体制剂、固体制 剂。
【文档编号】A61K31/7048GK104045682SQ201410210807
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年5月19日 优先权日:2014年5月19日
【发明者】张治针, 虞斯然, 陈璐, 连晓媛 申请人:浙江大学