γ-氨基丁酸在葛根素注射剂中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及γ-氨基丁酸在葛根素注射剂中的医药应用，该注射剂将γ-氨基丁酸与葛根素相互配伍制成含葛根素的注射剂，或者γ-氨基丁酸注射剂与葛根素联注射剂联合应用，有效克服了含有葛根素注射剂的偶发性溶血不良反应，提高了葛根素注射给药的安全性。
【专利说明】Y-氨基丁酸在葛根素注射剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及氨基丁酸的医药新用途，具体涉及在葛根素注射剂中的应用。
【背景技术】
[0002] γ-氨基丁酸（简称GABA)，是一种四碳非蛋白氨基酸，广泛存在于动植物中。据文 献记载，早在1949年就从土豆中发现了 GABA，1950年又在动物大脑中发现GABA。在神经中 枢中，1/3的神经突触部位都是以GABA为递质，与大脑皮质、垂体、下丘脑、生殖器官、肝脏 和肾脏等存在着密切的关系。它对人体存在诸多益处，如对心肺血管有直接或间接作用，调 节血压与心率；营养神经系统的发育，促进膜蛋白的合成；广泛应用于癫痫、帕金森、亨廷 顿氏病等疾病的治疗；促进细胞新陈代谢，提高脑活力；抑制谷氨酸脱羧反应，降低血氨， 保护肝脏；降低神经元活性，镇静神经，抑制焦虑等症；还具有保护肾脏、抗衰老、促进生长 激素分泌、预防肥胖、促进酒精代谢等功效。具有保肝、利肾、健脑、延缓衰老等多种生理活 性，应用于医药、保健食品、新资源食品和饲料添加剂等领域（见杨晶晶、曲媛、崔秀明撰写 的《Y -氨基丁酸的制备方法与含量测定研究进展》，食品工业科技，2014, 35 (3) :351-356 页）。
[0003] 葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的单体-异黄酮化合物，4'，7 -二羟 基-8-i3_D葡萄糖基异黄酮。临床上广泛用于心血管疾病的治疗。目前应用于临床的含有 葛根素的药物制剂主要是注射剂。随着葛根素的广泛使用，近年来有关葛根素不良反应的 报道也越来越多，引起医药界广泛关注。通过分析近20年中药不良反应，葛根素注射液位 列第18位。国家药品不良反应监测中心曾在2003年1月第3期《药品不良反应信息通报》 中通报了葛根素注射液的不良反应。大多数研究者认为，葛根素注射液是以50%丙二醇为 溶媒配制而成，不可避免因提取工艺、技术等方面的差异产生纯度不够，引入杂质而导致各 种反应（见徐向辉撰写的《对临床使用葛根素注射液出现不良反应的分析》，上海中医药杂 志，2006,40(8) :71-72 ;和徐世国撰写的《葛根素的临床应用及不良反应》，时珍国医国药， 2005,16 (12) :1307-1308)。在对2000-2004年国内主要医药期刊报道的63例葛根素不良 反应进行分析后发现，男40例，女23例；年龄34?81 (57. 5±23. 5)岁。所有病例均为静 脉滴注给药。给药剂量为0. 4?0. 6g，药品稀释液均为5%葡萄糖液、生理盐水、5%葡萄糖 盐水等。反应发生时间最快者为3min，最慢者为13d，均发生在给药过程中。首次给药出现 反应者47例，重复给药出现反应者16例。统计显示，常见不良反应有变态反应（发热、颤 抖等，24例）、过敏性休克（4例）、溶血性贫血（13例）、肝损害、肾损害（7例）、药物热（10 例）、死亡（5例）。所有病例均无过敏史，反应发生后停药经对症处理均恢复（死亡病例 除外）。用药剂量及所用稀释液在药品说明书提示范围内，所有反应均肯定为葛根素所致。 不良反应的发生与所患疾病无关，与年龄、性别无关，与药物稀释液无多大联系。与患者体 质差异有关，特别是年老体弱者易发生。反应发生时间的长短与中药制剂起效缓慢程度有 关（见全心荣撰写的《葛根素不良反应63例文献分析》，现代中西医结合杂志，2005,14 (1): 140)。一患者静滴葛根素约lOmin，即出现为急性肾功能不全，溶血性贫血（见关铭华撰写 的《葛根素致溶血性贫血》，药物不良反应杂志，2003, 5 :291)。因此，葛根素引起的溶血性贫 血是葛根素本身所致。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供氨基丁酸药物的新用途，即氨基丁酸在葛根素注 射剂中的应用，氨基丁酸可有效防治葛根素诱发的血管内溶血不良反应。
[0005] 实际上，本发明涉及Y -氨基丁酸在制备葛根素注射用复方制剂时的应用，也可 以和葛根素注射剂以注射和输液的方式临时配合应用，或者在以注射和输液的方式应用 Y-氨基丁酸后再接着应用葛根素注射剂。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：Y -氨基丁酸在制备葛根素注射剂 的新用途。氨基丁酸和葛根素注射剂以注射和输液的方式临时配合应用。在以注射和 输液的方式应用氨基丁酸后再接着应用葛根素注射剂。
[0007] 上述技术方案中的有关内容解释如下：
[0008] 1、上述方案中，所述的注射剂，含有以下重量份药物：氨基丁酸1?50份，葛 根素1?500份。
[0009] 2、上述方案中，所述的注射剂，还含有辅料1?50重量份，注射用水1?10000重 量份。所述的辅料为碳酸氢钠溶液、葡萄糖液、丙二醇液、葡萄糖盐水、氯化钠注射液或生理 盐水。
[0010] 3、上述方案中，所述的注射剂可以是临床上可接受的注射液、粉针或输液。
[0011] 4、上述方案中，所述的注射剂的制备方法如下所述：
[0012] 所述的粉针，由氨基丁酸和葛根素混合、灭菌制得；或者由氨基丁酸、葛根 素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用盐酸或碳酸氢钠溶液调整pH值至5. 0-8. 5,过滤， 滤液灭菌后灌封在粉状安瓿中再次灭菌制得；
[0013] 所述的注射剂，由氨基丁酸、葛根素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用盐 酸或碳酸氢钠溶液调整pH值5. 0-8. 5,过滤，滤液灌封在安瓿中灭菌制得。或氨基丁 酸由5%葡萄糖液，5%葡萄糖盐水，丙二醇液（由丙二醇与生理盐水按体积比（1 : 1)配 置而成，内含丙二醇〇. 5mL/mL)，氯化钠注射液或生理盐水溶解，再与葛根素注射剂混合，过 滤，滤液灌封在安瓿中灭菌制得。
[0014] 所述的输液，由氨基丁酸、葛根素和氯化钠混合，加注射用水溶解，再用盐酸 或碳酸氢钠溶液调整pH值5. 0-8. 5,溶解，过滤，滤液灌封在盐水玻璃瓶中灭菌制得。或 氨基丁酸由5%葡萄糖液，5%葡萄糖盐水，丙二醇液（由丙二醇与生理盐水按体积比 (1 : 1)配置而成，内含丙二醇〇.5mL/mL)，氯化钠注射液或生理盐水溶解，再与葛根素注射 剂混合，过滤，滤液灌封在安瓿中灭菌制得。
[0015] 5、上述方案中，所述的临时配合应用是指在医院，在应用葛根素注射剂的同时与 Y-氨基丁酸混合一同输液或注射。
[0016] 6、上述方案中，所述的在以注射和输液的方式应用氨基丁酸后再接着应用葛 根素注射剂，是指在医院，以注射和输液的方式应用Y -氨基丁酸后，再接着以注射和输液 的方式应用葛根素注射剂。
[0017] 葛根素具有有扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量，改善微循环和抗血小板 聚集的作用。临床上用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、视网膜动静脉阻塞、突发性耳 聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等。葛根素还可以与氨基丁酸配伍制 成复方葛根素注射剂用于防治多种疾病，如用于防治糖尿病周围神经病变、高血压合并糖 尿病、糖尿病肾病、急性脑梗死、稳定型心绞痛、下肢深部静脉血栓形成以及椎基底动脉供 血不足性眩晕等。但是，含葛根素注射剂中的葛根素极易引起血管内溶血。氨基丁酸不 仅具有保肝、利肾、健脑、延缓衰老等多种生理活性，本
【发明者】经过研究证实Y-氨基丁酸 还具有拮抗由葛根素诱发的血管内溶血不良反应，提高葛根素注射给药的安全性。
[0018] 下面结合一些试验进一步来说明本发明的目的和所能达到的效果。
[0019] 本实验参考《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》对溶血试验进 行预试验，发现8mM葛根素能够引起1 %的绵羊红细胞溶血10 %，体外溶血试验发生概率为 100%，溶血试验结果均得到重现，说明方法可重复。该方法可用于发现注射剂的潜在的偶 发溶血现象，是进行注射剂新药开发判断是否存在偶发性溶血的可行试验方法，有利于减 少不良反应的发生，提高注射剂的安全性。
[0020] 一、氨基丁酸拮抗含有葛根素的注射剂溶血不良反应的作用及效果
[0021] (一）葛根素注射剂溶血试验
[0022] 研究氨基丁酸与葛根素合用对绵羊红细胞的影响。取10只小尾寒羊的红细 胞，分别加入一定剂量的Y -氨基丁酸与葛根素，l〇min后，观察红细胞的状态和溶血发生 率，用X2检验统计分析实验结果，探寻Y -氨基丁酸对葛根素注射剂偶发性溶血的对抗作 用。现将结果报告如下：
[0023] 1实验材料
[0024] 1. 1受试药物
[0025] Y -氨基丁酸（Y -Aminobutyric acid，GABA)注射剂①：γ -氨基丁酸购自 BAOXIN 公司，CASNumber :56-12-2。用电子天平准确称取GABA1.031g，溶于生理盐水溶液，用10mL 容量瓶将GABA溶液定容至10mL，此为注射剂①，浓度为1M。用微孔滤膜（0. 22 μ m)过滤除 菌，4°C保存。
[0026] 注射剂②：用灭菌生理盐水将注射剂①稀释至100mM，10mL，4°C保存备用。
[0027] 注射剂③：用灭菌生理盐水将注射剂①稀释至10mM，10mL，4°C保存备用。
[0028] 葛根素注射剂④：由浙江康恩贝制药股份有限公司提供，2mL，产品批号090501， 每mL注射剂含葛根素50mg。
[0029] 葛根素注射剂（250mM)⑤：用电子天平精确称取葛根素粉末（购自江苏天晟药品 有限公司）l.〇41g，用40%二甲基亚砜（DMS0，DZ0231，AMRESC0)溶解，超声助溶，生理盐水 溶液稀释至9mL，容量瓶定容至10mL，溶液颜色呈无色（配置环境：超净工作台中进行）。溶 剂为40% DMS0溶液。用微孔滤膜（0. 22 μ m)过滤除菌，4°C保存。
[0030] 复方葛根素注射剂⑥：取注射剂①0. 04mL，注射剂④0. 27mL，混匀，共0. 31mL，组 成注射剂⑥。每mL注射剂含葛根素43. 55mg、γ-氨基丁酸1330mg。
[0031] 复方葛根素注射剂⑦：取注射剂②0. 04mL，注射剂④0. 27mL，混匀，共0. 31mL，组 成注射剂⑦。每mL注射剂含葛根素43. 55mg、γ -氨基丁酸1. 33mg。
[0032] 复方葛根素注射剂⑧：取注射剂③0. 04mL，注射剂④0. 27mL，混匀，共0. 31mL，组 成注射剂⑧。每mL注射剂含葛根素43. 55mg、γ -氨基丁酸0. 133mg。
[0033] 复方葛根素注射剂⑨：取注射剂①0. 04mL，注射剂⑤0. 13mL，混匀，共0. 17mL，组 成注射剂⑨。每mL注射剂含葛根素79. 61mg、γ -氨基丁酸24. 26mg。
[0034] 复方葛根素注射剂⑩：取注射剂②0. 04mL，注射剂⑤0. 13mL，混匀，共0. 17mL，组 成注射剂⑩。每mL注射剂含葛根素79. 61mg、γ -氨基丁酸2. 426mg。
[0035] 复方葛根素注射剂? :取注射剂③0. 04mL，注射剂⑤0. 13mL，混匀，共0. 17mL，组 成注射剂〇。每mL注射剂含葛根素79. 61mg、氨基丁酸0. 2426mg。
[0036] 1. 2实验动物
[0037] 小尾寒羊10只（20?30Kg)，由西北农林科技大学动物实验中心提供。在室温 15?25°C，相对湿度50%条件下饲养。
[0038] 1.3试剂、仪器
[0039] 氯化钠注射剂，批号：31213042402,石药银湖制药有限公司生产；注射用水，自 制；TGL-16B高速离心机，湖南星科科学仪器有限公司；HPY-01B生化培养箱，黄石恒丰医疗 器械有限公司；BI0-RAD680酶标仪；酶标条购由江苏海门三和兴亚医疗器械厂生产，购自 陕西省杨凌宝鑫器材有限公司。
[0040] 2 方法
[0041] 2. 1红细胞悬浮液的制备
[0042] 小尾寒羊10只，分别进行溶血实验。每只绵羊采颈静脉血10mL，肝素钠（江苏万 邦生化医药股份有限公司）160IU抗凝后，置于刻度离心管内，以2000转/分钟离心10分 钟，弃去血浆，加入适量的氯化钠注射剂洗涤，离心弃去上清液及白细胞层。再加适量生理 盐水摇匀、离心，如此反复洗涤3次，至离心后上清液呈无色透明为止。将所得压积红细胞 用生理盐水稀释成11% (体积比）的红细胞悬液。至此，红细胞悬液准备完毕。
[0043] 2. 2葛根素溶液体外溶血实验设计
[0044] 设葛根素溶液作用于红细胞的浓度为8mM(0. 00333g ^171)。设阴性对照组，溶剂 对照组（用DMS0代替葛根素溶液作用于红细胞），药物处理组及阳性对照组。用METTLER TOLEDO台式pH计测定葛根素溶液的pH值为7. 16。
[0045] 按照下表1中所示，分别往试管里加入相应成分，注意加样顺序。每加完一种成分 后，都轻轻摇匀。等体系中所有成分都加入体系中后，轻轻震荡混匀，放置37°C的生化培养 箱温育。lOmin后观察溶血和凝聚反应。凝聚反应判定方法：若溶液中有红棕色或棕红色 絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝集发生，若凝聚物振摇后又能均匀分散，则为假 凝集，若凝聚物不被摇散者则为真凝集。接着各管按照5000rpm/min条件离心，肉眼观察上 清液颜色。取上清液，于540nm波长处检测光吸收值（0D值）。根据2005年《中药、天然药 物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》，按公式计算各组各管的溶血率:
[0046] 溶血率（％ )=(药物处理组0D值-阴性对照组0D值）八阳性对照组00值-阴 性对照组0D值）
[0047] 参考评价标准：溶血率> 5%表明有溶血现象发生，并进行统计学处理。
[0048] 表1葛根素溶液与Y -氨基丁酸（GABA)体外溶血实验分组设计
[0049]
【权利要求】
1. 氨基丁酸在葛根素注射剂中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：Υ-氨基丁酸可以和葛根素注射剂做成复 方注射剂应用，也可以和葛根素注射剂以注射和输液的方式临时配合同时应用，或者在以 注射和输液的方式应用Υ-氨基丁酸后再接着应用葛根素注射剂。
3. 根据权利要求2所述的同时应用，其特征在于：葛根素注射剂和γ-氨基丁酸注射 剂在为患者应用前混匀，再以注射和输液的方式应用。
4. 根据权利要求2所述的以注射和输液的方式应用γ-氨基丁酸后再接着应用葛根 素注射剂，其特征在于：先为患者应用氨基丁酸注射剂结束后，再接着应用葛根素注射 剂。
5. 根据权利要求1、2、3、4所述的注射剂和注射剂的应用，其特征在于：含有以下重量 份药物：Υ -氨基丁酸1?50份，葛根素1?500份。
6. 根据权利要求1、2、3、4、5所述的注射剂和注射剂的应用，其特征在于：可以含有辅 料1?50重量份、注射用水1?10000重量份。
7. 根据权利要求1、2、3、4、5、6所述的注射剂和注射剂的应用，其特征在于：所述的辅 料可以为碳酸氢钠溶液、葡萄糖液、葡萄糖盐水、丙二醇液、氯化钠注射液或生理盐水注射 液。
8. 根据权利要求1、2、3、4、5、6或7所述的注射剂和注射剂的应用，其特征在于：所述 的注射剂和注射剂的应用可以是临床上可接受的注射液、粉针或输液。
【文档编号】A61K31/197GK104042603SQ201410248193
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年5月28日 优先权日:2014年5月28日
【发明者】李新平, 周博, 宁利华, 曹统 申请人:西北农林科技大学