人面子叶提取物混悬剂及制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明人面子叶提取物混悬剂及制备方法和应用，属于中医药【技术领域】。人面子叶提取物混悬剂是通过将粉碎后的人面子叶药材用浓度为50％～70％的乙醇提取3次后对提取液进行减压抽滤并真空减压回收乙醇后获得人面子叶提取物；将人面子叶提取物进行真空干燥得到的干膏制备成水溶液后以蜂蜜为溶剂型载体，将人面子叶提取物和壳聚糖混悬于蜂蜜中，制得混悬剂。本发明还公开了人面子叶提取物混悬剂在制备治疗褥疮药物中的应用。本发明的人面子叶提取物混悬剂具有显著缩短伤口愈合时间，有效防止褥疮引起的细菌感染，将传统药物开发成现代剂型，使用方便疗效确切的优点。
【专利说明】人面子叶提取物混悬剂及制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中医药【技术领域】，具体涉及人面子叶提取物混悬剂及制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]褥疮是由于长时间的压力和组织收缩引起毛细血管阻塞和局部缺血，血液灌流的不充足和局部毒性代谢产物堆积增加了细胞死亡的机率，从而导致了皮肤及其皮下组织的溃疡，是难以完全避免的临床护理并发症。据不完全统计，住院患者的褥疮发生率为
5.1%?32.1%。褥疮的诱发因素有年龄、主动或被动卧床休息、瘫痪、强迫体位、肢体感觉障碍、糖尿病等。
[0003]褥疮容易引起感染，一旦恶化会给患者带来极大的痛苦，甚至会引发败血症导致死亡。因缺乏起效快且疗效显著的药物，大多数褥疮成为临床护理的难题。
[0004]人面子叶来源漆树科人面子属植物人面子Dracontomelon duperreanum Pierre的叶，《广西本草选编》记载，“治烂疮、褥疮，叶，煎水外洗。”
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于公开了人面子叶提取物混悬剂的制备方法。
[0006]本发明的第二个目的在于公开了由上述方法制备所得的人面子叶提取物混悬剂。
[0007]本发明的第三个目的在于公开了人面子叶提取物混悬剂的应用。
[0008]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
[0009]人面子叶提取物混悬剂的制备方法，包括下述步骤:
[0010](I)、称取人面子叶药材，粉碎；
[0011](2)、在人面子叶药材中加入浓度为50%?70%的乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液；其中人面子叶药材与乙醇的重量比为1:10;
[0012](3)、对步骤(2)中合并后的提取液减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，SP得人面子叶提取物；
[0013](4)、取步骤(3)得到的人面子叶提取物，40°C?60°C真空干燥，得到人面子叶提取物干膏；
[0014](5)、将步骤(4)得到的干膏加入蒸馏水制备成0.15g/mL水溶液；
[0015]￠)、以蜂蜜为溶剂型载体，将人面子叶提取物和壳聚糖以重量比3:1的比例混悬于蜂蜜中，制得混悬剂。
[0016]上述技术方案所述所述的制备方法，其中，步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤(2)中乙醇的浓度为50%。
[0017]上述技术方案所述所述的制备方法，其中，步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤(2)中乙醇的浓度为60%。
[0018]上述技术方案所述所述的制备方法，其中，步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤(2)中乙醇的浓度为70%。
[0019]上述技术方案所述所述的制备方法，其中，步骤￠)中蜂蜜的重量为人面子叶提取物和壳聚糖总重量的5倍。
[0020]人面子叶提取物混悬剂，其中，所述人面子叶提取物混悬剂是通过上述技术方案所述的制备方法制备得到。
[0021]上述技术方案所述的人面子叶提取物混悬剂在制备治疗褥疮药物中的应用。
[0022]本发明具有以下有益效果:
[0023]1、本发明指出了一定浓度范围的人面子叶乙醇提取物比水提物具有更有效地治疗褥疮的作用。
[0024]2、本发明提供了一种人面子叶提取物混悬剂，具有显著的缩短伤口愈合的时间，能有效防止褥疮引起的细菌感染，将传统药物开发成现代剂型，使用更加方便快捷，且混悬剂疗效确切，为开发一种治疗褥疮的中药新药奠定了基础。
【专利附图】
【附图说明】
:
[0025]1、图1为试验例二中模型组皮肤组织病理切片；
[0026]2、图2为试验例二中水提组皮肤组织病理切片；
[0027]3、图3为试验例二中50%乙醇组皮肤组织病理切片；
[0028]4、图4为试验例二中70%乙醇组皮肤组织病理切片。
【具体实施方式】
:
[0029]为使本发明的技术方案便于理解，以下结合实施例对本发明人面子叶提取物混悬剂及制备方法和应用作进一步的说明。
[0030]实施例1:人面子叶提取物(50%乙醇提取物)的制备:
[0031]精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，加10倍量50%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，即得人面子叶提取物。
[0032]实施例2:人面子叶提取物(60%乙醇提取物)的制备:
[0033]精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，加10倍量60%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，即得人面子叶提取物。
[0034]实施例3:人面子叶提取物(70%乙醇提取物)的制备:
[0035]精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，加10倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，即得人面子叶提取物。
[0036]实施例4:人面子叶提取物(50%乙醇提取物)干膏的制备:
[0037]取步骤I制备所得的人面子叶提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子叶提取物干膏，产率为15.29%，4°C冷藏备用。
[0038]实施例5:人面子叶提取物(60%乙醇提取物)干膏的制备:
[0039]取步骤2制备所得的人面子叶提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子叶提取物干膏，4°C冷藏备用。
[0040]实施例6:人面子叶提取物(70%乙醇提取物)干膏的制备:
[0041]取步骤3制备所得的人面子叶提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子叶提取物干膏，产率为15.32%，4°C冷藏备用。
[0042]实施例7:人面子叶提取物(50%乙醇提取物)的混悬剂的制备:
[0043]精密称取实施例4所得的人面子叶提取物干膏30g，加入200mL蒸馏水制备成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜为溶剂型载体，将9g人面子叶总醇提物和3g壳聚糖混悬于20g蜂蜜中，制成混悬剂。
[0044]实施例8:人面子叶提取物(60%乙醇提取物)的混悬剂的制备:
[0045]精密称取实施例5所得的人面子叶提取物干膏30g，加入200mL蒸馏水制备成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜为溶剂型载体，将9g人面子叶总醇提物和3g壳聚糖混悬于20g蜂蜜中，制成混悬剂。
[0046]实施例9:人面子叶提取物(70%乙醇提取物)的混悬剂的制备:
[0047]精密称取实施例6所得的人面子叶提取物干膏30g，加入200mL蒸馏水制备成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜为溶剂型载体，将9g人面子叶总醇提物和3g壳聚糖混悬于20g蜂蜜中，制成混悬剂。
[0048]以下结合具体试验例对人面子叶提取物混悬剂在治疗褥疮中的有益效果作进一步的说明。
[0049]一、实验材料
[0050]1、药物及试剂
[0051]人面子叶(购自广东省中药材市场)，为漆树科人面子属植物人面子Dracontomelon duperreanum Pierre 的叶。
[0052]壳聚糖，由山东东营海洋奥康生物科技开发有限公司提供，批号20121210 ;天然蜂蜜，由蜜蜂园市售；0.9%氯化钠注射液(NS，自制)；95%乙醇，由北京化工厂提供，批号20131109 ;造模实验装置，自制。
[0053]2、动物
[0054]清洁级SD小鼠64只，体重20 ± 2g，雄性；豚鼠60只，体重250 土 25g，雄性，清洁饲养。以上动物均来自解放军第三零二医院实验动物中心(合格证SCXK-(军)2007-004)。
[0055]二、实验项目
[0056]采用Excel 2007建立数据库，数据处理均以x± s表示。计量资料采用单因素方差分析，用LSD法进行组间比较，否则采用非参数秩和检验，计数资料采用X 2检验，P < 0.05表不有差异，P < 0.01表不有显著性差异。
[0057]试验例一:人面子叶水提取物干膏及不同浓度乙醇提取物干膏的制备:
[0058]精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收溶剂，40°C?60°C真空干燥，即得水提取物干膏，产率为18.90%，4°C冷藏备用。
[0059]按照实施例1和实施例4的步骤精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，力口10倍量50%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，40°C?60°C真空干燥，即得50%乙醇提取物干膏，产率为15.29%,4°C冷藏备用。
[0060]按照实施例3和实施例6的步骤精密称取人面子叶药材300g，粉碎，过24目筛，力口10倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，40°C?60°C真空干燥，即得70%乙醇提取物干膏，产率为15.32%,4°C冷藏备用。
[0061]试验例二:人面子叶不同提取物在治疗褥疮小鼠创面中的作用:
[0062]1、提取物配制、动物分组及实验装置:
[0063]精密称取试验例一中各人面子叶提取物干膏30g，加入200mL蒸馏水制备成
0.15g/mL水溶液。
[0064]清洁级SD小鼠64只，按体重随机分为4组，每组16只。分别为模型组、水提组、50%乙醇组、70%乙醇组。
[0065]参照“张丽蕊，阎翠兰，王玉浔，蒋艳茹，王会还，孙瑞军，闻红，安雅臣.血管内皮生长因子在火针治疗褥疮小鼠创面中的表达及作用[J].上海针灸杂志，2012，08:606-608”中的方法，实验装置由固定装置、加压装置两部分组成。固定装置由木架与离心管组成。简易木架，一块约10cmX 15cm长方形木板,两端用两块短板立起用钉固定，两短板上端两边用两根与长木板等长的木条钉成框架，两木条之间用短木条隔开，每个格子正好放入加压装置(塑料瓶)。小鼠固定装置，用50 mL塑料离心管64只，底部开直径约为±1.3cm圆孔，令小鼠口鼻伸出管外，便于加压期间呼吸进食；管口处开约3cmX0.6cm U形口，拉出小鼠右腿暴露于管外以便加压固定；管盖在中心处开直径约
0.5cm圆孔，令尾部伸出管外。为防止塑料管在木板上移动，在木板上做好固定槽，嵌入塑料管用胶带纸固定，以便加压重心稳定。加压装置选用空矿泉水塑料瓶64只。分别装入特定重量物品，用木制瓶塞，旋入拧紧4cm长木螺丝，钉帽直径8mm，总重量47.85g。加压时将瓶倒立，使钉帽下压在小鼠右腿大转子骨尖上，为使重力加压准确稳定，将塑料瓶固定在木架上。加压部分通过倒立的铁钉来完成，通过计算铁钉底面积，进而计算出木板上需加的重量，使小鼠大腿靠近膝关节处皮肤组织受到9.33kPa的压强。
[0066]2、小鼠褥疮模型的创建及确认:
[0067]分别于小鼠右腿股骨大转子处用8%硫化钠脱毛，装进塑料管内，拉出右腿及尾巴盖好盖胶带固定。再将管固定在固定装置的木板槽内，令股骨大转子脱毛处朝上对准加压装置，开始加压计时，持续加压12h，间断2次，每次lh。总加压时间10h。解压后各组受伤小鼠群养。
[0068]肉眼观患处水肿严重，表皮青紫溃破渗出，下肢肿胀粗大，小腿及爪红肿，关节不活动，拉腿爬行，符合III?IV度褥疮标准。模型建立48h后，每组各取I只切取患处全层组织病理检查，结果炎细胞浸润，组织水肿，溃疡坏死，确认褥疮模型创建成功。
[0069]3、提取物对小鼠褥疮创面的作用:
[0070]褥疮模型形成后第2天，模型组用NS清洁创面，作为对照；各给药组先用NS清洁创面，再根据创面大小分别擦拭本试验例步骤I制备的人面子叶提取物水溶液，每天2次。肉眼观察病理检查记录治疗后创面变化，15d判断效果。于15d之后处死实验动物，取创面组织，10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察创面组织病理变化。
[0071]根据褥疮分期标准，治愈为疮面消失，表皮愈合；好转为创面缩小80%，肉芽新鲜，生长好，水肿消退，渗液少；无效为疮面缩小50%，肉芽生长不良或有脓性渗液。
[0072]结果:所有小鼠在手术后精神状态变差，患处水肿严重，表皮青紫溃破渗出，关节不活动，拉腿爬行。模型组小鼠好转很慢，皮肤转为血黑色，没有皮肤生长恢复的情况。
[0073]与模型组相比，水提组小鼠精神状态好转，生长好，水肿有所消退，经X2检验(见表I)，P < 0.01，说明水提取物具有较好的治疗褥疮的作用。与水提组相比，50%乙醇组、70%乙醇组给药后，精神状态明显好转，患处水肿减轻褥疮恢复得很快，皮肤颜色由暗红转红润，创面已由表皮覆盖，能在12d内基本痊愈，经X 2检验(见表I)，P < 0.05，说明50 %?70%乙醇提取物比水提物具有更好的治疗褥疮的作用，差异具有统计学意义。
[0074]表I四组小鼠褥疮治疗效果及愈合天数比较
[0075]
疗效[例(%)]
组别动物数愈合天数 -
_η--__无效
模型组16---16
水提组1614.6±1.28 (50.0%)6(37.5%)2(12.5%)
50%乙醇组169.3±2.813(81.25%)3(18.75)O
70?乙醇组_16_8.8±1.5_14(87.5%)_2(12.5%)_O_
[0076]注:经X2 检验 X 2 = 9.23，P < 0.01 或 0.05。
[0077]创面皮肤组织病理检查结果如图1?4所示，其中图1为模型组皮肤组织病理切片，图2为水提组皮肤组织病理切片，图3为50%乙醇组皮肤组织病理切片，图4为70%乙醇组皮肤组织病理切片；图1?4表明:光镜下可见模型组的皮肤创面含大量炎症细胞的坏死组织，其皮下组织也有大量炎症细胞和少量的成纤维细胞，并可见血管充血；水提组可见含坏死组织的痂皮脱落，上皮开始向创面生长，其下组织中有一些新生血管和成纤维细胞；50%乙醇组、70%乙醇组上皮开始向创面生长，其下可见较多的新生血管和成纤维细胞，无水肿，炎症反应轻微，其下组织中仅有少量的炎症细胞，此两组的病理结果优于水提组。
[0078]综上所述，在治疗褥疮小鼠创面中，50%?70%乙醇提取物比水提物具有更好的治疗作用，差异具统计学意义。
[0079]试验例三:人面子叶提取物混悬剂的制备及药效学评价:
[0080]1、样品制备、动物分组:
[0081]将上述试验例一中的50%、70%乙醇提取物干膏研成粉末，混合得总醇提物，分两部分，分别用于配制水溶液和制备混悬剂。
[0082]精密称取醇提物30g，加入200mL蒸馏水制备成0.15g/mL水溶液。以蜂蜜为溶剂型载体，将9g人面子叶总醇提物和3g壳聚糖混悬于20g蜂蜜中，制成混悬剂。
[0083]雄性豚鼠60只，按体重随机分为3组，每组20只。分别为模型组、醇提组、混悬剂组。
[0084]2、豚鼠褥疮模型的创建及确认:
[0085]参照“周卫，徐国娟，李楠.复方车前草软膏治疗褥疮的实验研究[J].中国药业，2006，19:29-30”中的方法，分别对豚鼠进行麻醉、皮肤消毒，以俯卧位固定，在靠近背部脊柱的左侧切开一长约3cm的口子，植人经高压灭菌的4.0cmX 2.5cmX0.05cm不锈钢钢板，缝合切口，并包扎伤口，用绷带固定。豚鼠术后单笼喂养，观察Id。24 h后用
4.0cmX 2.25cmXl.0cm磁铁压迫创面(5h/d)，休息12h循环I次，总压迫时间1h0将动物单独分笼，喂养及管理条件一致。
[0086]肉眼观患处水肿严重，表皮青紫溃破渗出，符合III?IV度褥疮标准。模型建立48h后，每组各取I只切取患处全层组织病理检查，结果炎细胞浸润，组织水肿，溃疡坏死，确认褥疮模型创建成功。
[0087]3、混悬剂对豚鼠褥疮创面的药效学评价:
[0088]褥疮模型形成后第3天，模型组用NS清洁创面，碘伏消毒，作为对照；醇提组先用NS清洁创面，碘伏消毒，再根据创面大小擦拭制备的人面子叶醇提物水溶液，每天2次。混悬剂组先用NS清洁创面，碘伏消毒，再根据创面大小涂抹制备的混悬剂，每天换药一次。创面首先以无菌凡士林油纱布覆盖，再覆盖消毒纱布，胶布固定。肉眼观察记录治疗后创面变化,15d判断效果。
[0089]根据褥疮分期标准，治愈为疮面消失，表皮愈合；好转为创面缩小80%，肉芽新鲜，生长好，水肿消退，渗液少；无效为疮面缩小50%，肉芽生长不良或有脓性渗液。
[0090]结果:所有豚鼠术后患处水肿严重，表皮青紫溃破渗出，褥疮基本处在III期~IV期。模型组精神状态变差，食欲下降，皮肤转为血黑色，15d内没有皮肤生长恢复的情况。用醇提物、混悬剂治疗后，肉芽组织生长较快，腐败组织较少，III期以下的褥疮恢复较快，皮肤颜色变为红润，很快恢复生长，且动物精神状态明显好于模型组，能在1d内基本痊愈；IV期褥疮也在12d内基本恢复。
[0091]与模型组相比，醇提组、混悬剂组豚鼠生长好，水肿有所消退，经X2检验(见表2)，P < 0.01，说明醇提组、混悬剂组具有较好的治疗褥疮的作用。醇提组与混悬剂组比较，褥疮创面恢复均较快，经X 2检验(见表2)，P > 0.05，说明醇提组与混悬剂组具有相同的治疗褥疮的作用，差异无统计学意义。
[0092]表2三组豚鼠褥疮治疗效果及愈合天数比较
[0093]
【权利要求】
1.人面子叶提取物混悬剂的制备方法，包括下述步骤: (1)、称取人面子叶药材，粉碎； (2)、在人面子叶药材中加入浓度为50%?70%的乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液；其中人面子叶药材与乙醇的重量比为1:10 ; (3)、对步骤(2)中合并后的提取液减压抽滤，50°C?70°C真空减压回收乙醇，即得人面子叶提取物； (4)、取步骤(3)得到的人面子叶提取物，40°C?60°C真空干燥，得到人面子叶提取物干膏； (5)、将步骤(4)得到的干膏加入蒸馏水制备成0.15g/mL水溶液； (6)、以蜂蜜为溶剂型载体，将人面子叶提取物和壳聚糖以重量比3:1的比例混悬于蜂蜜中，制得混悬剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤⑵中乙醇的浓度为50%。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤⑵中乙醇的浓度为60%。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中的人面子叶药材粉碎后过24目筛；步骤⑵中乙醇的浓度为70%。
5.根据权利要求1?4所述的制备方法，其特征在于:步骤(6)中蜂蜜的重量为人面子叶提取物和壳聚糖总重量的5倍。
6.人面子叶提取物混悬剂，其特征在于:所述人面子叶提取物混悬剂是通过权利要求5所述的制备方法制备得到。
7.人面子叶提取物混悬剂，其特征在于:所述人面子叶提取物混悬剂是通过权利要求1?4所述的制备方法制备得到。
8.权利要求6或7所述的人面子叶提取物混悬剂在制备治疗褥疮药物中的应用。
【文档编号】A61P17/02GK104173396SQ201410361022
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年7月25日 优先权日:2014年7月25日
【发明者】赵艳玲, 肖小河, 王伽伯, 刘书显, 陈哲, 郑全福 申请人:中国人民解放军第三0二医院