铜钻抗炎成分的分离提取及其抗炎活性的测试的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种铜钻抗炎成分的提取的方法,该方法的主要步骤：一、乙醇浸泡，二、提取浓缩得到浸膏,三、将浸膏溶于5%酒石酸，过滤，得到酸水不溶物。四、将酸水不溶物萃取。五、得到Frs．E1～E7共7个部分的抗炎成分,经试验该活性成分能够显著抑制LPS刺激的N9小胶质细胞NO(一氧化氮)释放，并且在其发挥抑制作用的浓度范围内不影响小胶质细胞存活率。为制备新药奠定了基础。
【专利说明】铜钻抗炎成分的分离提取及其抗炎活性的测试
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物的提取，具体是瑶药铜钻抗炎成分的分离提取及抗炎活性的测 试。
【背景技术】
[0002] 广西瑶医常用药材铜钻，为茶莱英科植物定也藤iot/oit/es Hand.-Mazz.的干燥藤茎。瑶语称"don曲nzunx"(铜钻），亦称黄钻、黄麻骨风、甜果藤。 功能主治巧风除湿，调经活血，止痛。用于风湿性关节炎，类风湿性关节炎，黄痘，跌打损伤， 月经不调，痛经，闭经；外用治外伤出血，毒蛇咬伤，为瑶医常用药材"十八钻"之一。经文献 资料检索，已经报道的国内外关于铜钻的研究文献只有少数几篇。周丽娜、戴斌发表了瑶药 铜钻的生药鉴定，进行了药材性状、显微组织及理化鉴别研究，为瑶药铜钻的鉴定、质量标 准及临床应用提供依据。2000年中山大学陈承声等从铜钻中分离到一种新倍半聰醇，通过 波谱方法和旋光度对比确定其为（-)-雪松醇，并应用2D NMR技术确定了其分子中C，H化 学位移的归属。尹文清、曾立等对铜钻的化学成分进行了进一步研究，利用娃胶色谱技术进 行分离和纯化，根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的化学结构，从铜钻中分离得到7个 化合物，均为首次从铜钻中分离得到；同时对铜钻中的酷性成分进行了研究，得到6个酷类 化合物；采用正交试验优选了铜钻中总黄丽提取与纯化工艺；研究了铜钻中总有机酸的最 佳提取工艺，采用电位滴定法测定了铜钻中总有机酸的含量。近几年亦有从铜钻中分离得 到生物碱类成分的报道，且部分生物碱具有较好的抗肿瘤活性。迄今为止，未见关于系统研 究瑶药铜钻抗炎有效成分及其相关抗炎产品的报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的提供一种瑶药铜钻抗炎成分的提取及抗炎活性的测试。
[0004] 实现本发明的技术方案是： 一种铜钻抗炎成分的提取方法，包括如下步骤： (1) 己醇浸泡；将铜钻的干燥茎切成小段，用体积分数为95%的己醇浸泡，加热回流提 取3次； (2) 提取浓缩得到浸膏； (3) 将浸膏溶于5%酒石酸，过滤，得到酸水不溶物； (4) 将酸水不溶物热溶于水，用己酸己醋萃取； (5) 将萃取物经娃胶柱色谱分离，W二氯甲焼与甲醇混合溶液梯度洗脱，得到化S. El?E7共7个组分。
[0005] 步骤（1)所述的回流提取时间为；第一次3 h，第二、第H次各2 h。
[0006] 步骤（5)所述的二氯甲焼与甲醇混合溶液的体积比为100 ;0?0 ;100。
[0007] 本发明的优点是；提供了从瑶药铜钻中提取抗炎成分的方法，为制备新药奠定了 基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0008] 图1为本发明的提取、分离工艺流程图 图2为实施例流程图。
【具体实施方式】
[0009] 参照图1、图2,本发明铜钻抗炎成分的提取方法，是将铜钻的干燥茎20 kg,切成 小段，用体积分数为95%的己醇浸泡3 h后，加热回流提取3次，第一次3 h，第二次第H次 各2 h，提取液减压浓缩得到浸膏1.2 kg。将浸膏溶于5%酒石酸，过滤，得到酸水不溶物460 g。酸水不溶物460g热溶于水，用己酸己醋萃取。己酸己醋萃取部分（110 g)经娃胶柱色谱 分离，W二氯甲焼与甲醇溶剂系统（体积比为100 ;〇?0 ;1〇〇)梯度洗脱，得到化EU3. 2 g)、化.E2(1.4 g)、化.E3(25. 0 g)、化.E4(40. 0 g)、化.E5(21. 1 g)、化.E6(10. 5 g)和 化.E7 (1.3 g)共7个部分。
[0010] 抗炎成分的活性检测 小胶质细胞活化介导的慢性炎症反应是神经退行性疾病的发生、发展过程中的重要环 节，抑制小胶质细胞的激活成为药物发现的一个新祀点。LI^激活小胶质细胞释放NO、促炎 症细胞因子和活性氧等。
[0011] 本实验通过建立体外LI^激活N9小胶质细胞异常活化的筛选模型，W激活小胶质 细胞释放NO为指标，筛选对小胶质细胞活化有抑制作用的成分。
[0012] 1.实验材料 (1)实验细胞株及来源；N9 ;小鼠小胶质细胞株。
[0013] (2)实验试剂与仪器：
【权利要求】
1. 一种铜钻抗炎成分的提取方法，其特征是：包括如下步骤： (1) 乙醇浸泡：将铜钻的干燥茎，切成小段，用体积分数为95%的乙醇浸泡，加热回流提 取3次； (2) 提取浓缩得到浸膏； (3) 将浸膏溶于5%酒石酸，过滤，得到酸水不溶物； (4) 将酸水不溶物热溶于水，用乙酸乙酯萃取； (5) 将萃取物经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷与甲醇溶剂系统梯度洗脱，得到Frs. El?E7共7个组分。
2. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（1)所述的回流提取时间为：第一 次3 h，第二、第三次各2 h。
3. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（5)所述的二氯甲烷与甲醇溶剂系 统的体积比为100 :〇?〇 :1〇〇。
4. 用权利要求1所述的提取方法提取得到的抗炎成分，其特征是： (1) 提取、分离的成分能够显著抑制LPS刺激的N9小胶质细胞NO释放，并且在其发挥 抑制作用的浓度范围（1?30 //g/ml)内不影响小胶质细胞存活率；提示以上样品能够抑 制LPS诱导的小胶质细胞活化，其可能具有减轻小胶质细胞活化介导的神经系统疾病(如 神经退行性疾病）的潜在作用； (2) 乙酸乙酯部位、Fr E3能够显著降低N9细胞存活率，提示这些样品可能具有潜在 的抗肿瘤作用。
【文档编号】A61K36/185GK104224865SQ201410465742
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月15日 优先权日:2014年9月15日
【发明者】梁东, 张贵杰, 胡峰, 潘英明 申请人:广西师范大学