各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种大黄总蒽醌及其组合物在治疗胆囊炎方面的用途。本发明所述大黄总蒽醌包括：游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等或它们的混合物。
【专利说明】各种成分比例稳定均一的大黄总蔥醒及其组合物用于治疗 胆囊炎
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种中药提取物制剂的治疗用途，特别涉及一种各种成分比例稳定均 一的大黄总意酿及其组合物用于治疗胆囊炎。
【背景技术】：
[0002] 大黄为常用中药之一，系寥科多年生草本植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄 的干燥根和根茎。
[0003] 大黄味苦，性寒，具有泻下攻击，清热泻火，凉血解毒，逐癒通经之功效。现代化学 研究证明大黄的主要化学成分为意酿类化合物；大黄有效成分的提取分离方法主要有：煎 煮法（水提法）：煎煮法为大黄有效成分的传统提取方法，由于游离意酿类的极性小，故用 煎煮法对游离意酿类成分的提取效果不佳；而其结合意酿巧类极性较其巧元较大，故可用 水提取。醇提法：由于大黄中活性成分的极性分布很广，因此就总意酿类的提取而言，醇提 法的效率要明显高于煎煮法。目前较常用的醇提法有己醇回流法和渗漉法。
[0004] 大黄化学成分复杂，化学结构已被阐明的至少已有136种，但其主要成分为意酿 类化合物，总含量在2%?5%，其中游离的轻基意酿类化合物只占1/10?1/5,主要为大黄 酷、大黄素、芦菩大黄素、大黄素甲離和大黄酸等，为大黄的主要抗菌成分。结合性意酿衍生 物为游离意酿的葡萄糖巧（即大黄酷葡萄糖巧、大黄素葡萄糖巧、芦菩大黄素葡萄糖巧、大 黄酸葡萄糖巧等）和双意丽巧类，系大黄的主要泻下成分，其中双意丽巧为：番泻巧A、B、 C、D、E等。番泻巧A与番泻巧B互为异构体；番泻巧C与番泻巧D互为异构体。此外尚含 有大黄素、芦菩大黄素和大黄酷的双葡萄糖巧。大黄亦含有稼质类化合物约5%，其中有没 食子醜葡萄糖、没食子酸、d-儿茶素及大黄四聚素等，为收敛止血有效成分。
[0005] 大黄及大黄总意酿的药物作用在许多文献中有报道，主要的作用有：
[000引（1)巧肿及口腔炎，似下腿溃瘍（赚疮），做肠胀气，（4)传染性湿疹样皮炎， 妨咳嗽做急性胃十二指肠出血，（7)慢性肾功能不全，做拔牙术后出血（9)烧伤，（10) 急性坏死性小肠炎致肠麻瘍，（11)胆道蝴虫，（12)急性黄痘型肝炎，（13)胃癌出血，（14) 急性膜腺炎，（15)乳蛾（急性化賊性扁桃体炎），（1巧流行性腮腺炎，（17)新生儿不吃奶， (18)慢性前列腺炎，（19)鼻出血，（20)慢性便秘，（21)小儿厌食症，倘）肝性脑病，似） 脑出血急性期，（24)胆道出血，（25)脑外伤性颇内出血，（26)高脂血症，（27)慢性肾功能 衰竭，（28)急性胆囊炎，（29)急性肠梗阻，（30)阔尾賊肿，（31)张力性水疮，（32)腹膜后 血肿，（33)带状疮疹，（34)排卵功能失调，（35)急性淋病，（36)银屑病，（37)急性软组织损 伤，（38)甲沟炎，（39)淋己结核，（40)老年单纯性服胖症，（41)中风便秘，（42)瘍闭，（43) 预治大面积烧伤并发症，（44)重型肝炎，（45)流行性出血热消化道出血。
[0007] 总之，大黄及其意酿提取物具有多种多样的药物作用，是近年来研究最多的中药 之一。
[0008] 用大黄制备的药物已经上市多年，现有的大黄制剂有新清宁片和新清宁胶囊，其 主要成分是熟大黄。具有清热解毒。活血化癒，缓下功效。用于内结实热，蓝肿，汪痛，目赤， 便秘，下痴，感染性炎症，发烧等证。
[0009] 因大黄的主要活性成分为大黄总意酿，因此W大黄总意酿作为药物成分W及相应 的提取分离方法多有报道，大黄总意酿提取自大黄的根茎，其颜色形状为踪黑色浸膏或踪 色粉状结晶，是游离意酿、结合意酿、意丽、糖、稼质等混合物。
[0010] 已经上市的大黄总意酿制剂有大黄总意酿胶囊，其主要成分为大黄提取物。【功能 主治】用于治疗湿热型黄痘肝炎。
[0011] 中国专利申请号：200810107381.8申请日：2008-11-13公开了一种治疗湿热型黄 痘肝炎大黄总意酿胶囊的制备方法，其中大黄总意酿胶囊的主要成份为大黄活性成分组 合物大黄总意酿，并按大黄总意酿18% -22%，淀粉78% -82%的配比进行制备
[0012] 本发明人对大黄总意酿制剂的适应症进行了研究，意外的发现，本发明的大黄总 意酿制剂可W用于胆囊炎的治疗，并取得了令人满意的效果。
【发明内容】
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[0013] 本发明提供一种大黄总意酿制剂的新的治疗应用，本发明所述大黄总意酿包括任 何一种方法制备的大黄意酿物质，包括游离意酿、结合意酿、意丽、糖、稼质等或它们的混合 物。特别包括W下中国专利中提及的大黄总意酿、大黄意酿或大黄意酿类衍生物：
[0014] 99114211.x 一种提取大黄总游离蔥酿的方法 OOl巧405. 7 -种从大黄中提取游离蔥酿的浸膏及制备方法 01113574. 3 从大黄中提取游离意酿的方法及其药用新用途 01134161.0 大黄总蔥酿的提取纯化方法及其在治巧肾衰药品中的应用 02114573.3 大黄属植物地上部分蔥酿类物质的提取工艺 州日610057160.日一种超临界二氧化碳萃取大黄总蔥酿的方法 200610001899. 4 超临界酸水解提取大黄粉游离蔥酿的方法 200610128443. 4 细胞超声破碎提取大黄中的蔥酿类成分的最佳王艺 200610067506. X 一种大黄素的合成改良方法 200710068891. 4 一种采用超临界C02萃取高纯度大黄游离蔥酿的方法 200810059316. 2 一种萃取分离大黄总蔥酿类化合物的方法 200810107377. 1 一种从大黄提取大黄总蔥酿的方法 200810135343. 3 一种大黄总游离蔥酿提取物的制备方法 200910巧巧09. 0 从大黄根茎中提取高纯大黄醋的方法 200910307312.6 大黄结合型蔥酿与大黄辖质的分离方法 20091027巧08. 6 -种高纯度大黄素的分离方法 200910巧7905. 9 -种大黄提取物及其制备和应用 201110086108.3 一种超声提取大黄蔥酿类成分的方法 201110112289.2 一种大黄意酿类成分的提取和分离方法 201310292063.4 一种大黄药材自身酶解法游离大黄蔥酿类的方法 20111011229化日 超临界流体提取中药大黄中的大黄总意酿的方法 201310191913. 1 一种大黄提取物及其应用 201310110849. X 一种用共结晶分离大黄素的方法 2013102姑667. X -种从新鲜大黄中提取总蔥酿的方法
[0015] 本发明所述大黄总意酿，最优选的是采用W下方法制备的大黄总意酿：
[0016] 其制备方法如下；步骤1，
[0017] 取大黄lOOOg，照中国药典2010年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉 法，用己醇作溶剂，浸溃48小时后，W每公斤药粉每分钟1?1. 5ml的速度缓缓渗漉，收集 初漉液5000ml备用；继续渗漉，收集续漉液IOOOOml减压回收己醇至6(TC相对密度0. 90? 0. 9,，放冷，静置，滤过，得析出物I，滤液1备用；
[001引 步骤2，
[0019] 取初漉液加50%己醇稀释至含醇量75%，用10%氨氧化轴的65%己醇溶液碱化 至漉液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调节抑值至6. 0?7. 0,减压回收 己醇至6(TC相对密度1. 00?1. 02,放冷，静置，滤过，得沉淀物1和滤液2，
[0020] 步骤 3，
[0021] 滤液2与滤液1合并，减压浓缩至8(TC相对密度1. 40?1. 45,加6倍稠膏重量的 己醇回流2次，每次0. 5小时，滤过，滤液用10%氨氧化轴的65%己醇溶液碱化至溶液中无 没食子酸斑点，静置12小时，滤过，滤液调节抑值至6. 0?7. 0,减压回收己醇，浓缩至8(TC 相对密度为1. 45?1. 48,并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量0. 5%氨氧化轴 水溶液溶解，浓盐酸调节抑值至6. 0?7. 0,加入0. 2倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至 8(TC相对密度为1. 40?1. 45,趁热缓缓加入4倍量己醇，加热揽拌至明胶析出，滤过，收集 沉淀和滤液，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，使8(TC相对密度为1. 40?1. 45,趁热缓缓加 入4倍量己醇，加热揽拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀再重复操作1次，合并3 次滤液，减压回收己醇至6(TC相对密度0. 95?0. 97,放冷，滤过，收集析出物II和滤液3， [002引 步骤4，
[0023] 滤液3检查稼质至阴性，加4倍量己醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收己醇，蒸干， 85°C，0. 07MPa减压干燥，粉碎，加6倍干固物重量己醇回流2次，每次0. 5小时，合并己醇 液，减压回收己醇，得残留物，
[0024] 步骤 5，
[00巧]残留物与析出物I、析出物II合并，混匀，65C W下减压干燥，即得本发明的大黄 总意酿。
[0026] 本发明的大黄总意酿，其检测方法如下：
[0027] 其【性状】为褐黄色粉末，气微，味微苦。
[0028] 其【鉴别】方法如下：取本发明的大黄总意酿0. Ig,加H氯甲焼40ml超声处理10 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取芦菩大黄素、大黄酷、大黄素甲離、大黄素、大黄酸对 照品，加甲醇溶解，分别制成每Iml含0. 2mg、0. Img, 0. Img, 0. Img, 0. 2mg的溶液作为对照溶 液，照薄层层析法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种供试品和对照品 溶液各5?10 y 1分别点于同一 W駿甲基纤维素纳为黏合剂的娃胶H薄层板上（新活化）， W石油離（30?6(TC) -甲酸己醋一甲酸（15:5: Dicrcw下放置的上层溶液为展开剂，在 25CW下展开，取出，瞭干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的英光斑点。
[002引其【检查】方法如下：
[0030] 没食子酸的检查；取本发明的大黄总意酿细粉25mg，置5ml量瓶中，加甲醇4? 5ml超声处理30分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 另取没食子酸对照品，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法 (中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 y 1分别点于同一娃胶G 薄层板上，W甲苯一己酸己醋一甲酸巧:4:1)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W 1%H氯化 铁己醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点颜色应不得深于对 照品斑点的颜色。
[0031] ±大黄巧的检查；取本发明的大黄总意酿0. 2g，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取 上清液IOul点于滤纸上，W 45%己醇展开，取出，瞭干，放置10分钟，置紫外光灯（365nm) 下检视，不得显持久的亮紫色英光。
[0032] 其【含量测定】方法如下：
[0033] (1)、总意酿
[0034] 对照品溶液的制备
[00巧]取大黄素对照品约IOmg,精密称定，置IOOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即 得。
[0036] 标准曲线的制备；精密量取对照品溶液0ml、0. lml、0. 2ml、0. 4ml、0. 8ml、l. 2ml、 I. 6ml置IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0. 8%醋酸镇甲醇溶液IOml使溶 解，摇匀，W第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在 SlOnm的波长处测定吸光度，W吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
[0037] 测定法：取本品约40mg，精密称定，置IOOml园底烧瓶中，加8%盐酸溶液20ml，再 加H氯甲焼20mL置沸水浴中加热回流1小时，冷却，置分液漏斗中，用少量H氯甲焼洗涂 容器至无色，并入分液漏斗中，分取H氯甲焼层，酸液再用H氯甲焼提取3次（20ml、15ml、 IOml)，合并H氯甲焼提取液置IOOml量瓶中，加H氯甲焼稀释至刻度，摇匀。精密量取 0. 4ml置IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0. 8 %醋酸镇甲醇溶液IOml使溶 解，摇匀，W第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)， 在SlOnm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中总意酿的量， 计算，即得。
[003引本品按干燥品计算，含总意酿W大黄素咕5町。05计，应为50% -60% )。
[00測 （2)、游离意酿
[0040] 对照品溶液的制备
[0041] 取大黄素对照品约IOmg,精密称定，置IOOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即 得。
[0042] 标准曲线的制备；精密量取对照品溶液0ml、0. lml、0. 2ml、0. 4ml、0. 8ml、l. 2ml、 1. 6ml置IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0. 8%醋酸镇甲醇溶液IOml使溶 解，摇匀，W第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在 SlOnm的波长处测定吸光度，W吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
[004引巧Ij定法；取本品约40ml，精密称定，置IOOml锥形瓶中，加立氯甲焼约60ml超声处 理（功率250W，频率25KHZ) 40分钟，放冷，滤过，用H氯甲焼冲洗滤器及锥形瓶，并入滤液 中，滤液转移至IOOml量瓶中，加H氯甲焼稀释至刻度，摇匀。精密量取0. 4ml置IOml具塞 试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8%醋酸镇甲醇溶液IOml使溶解，摇匀，W第一份 为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测 定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中游离意酿的量，计算，即得。
[0044] 本品按干燥品计算，含游离意酿W大黄素咕5町。〇5)计，应为48% -58%。
[0045] (3)、芦菩大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酷、大黄素甲離总量；照高效液相色谱法 (中国到典2010年版一部附录VID)测定。
[0046] 色谱条件与系统适用性试验W十八化基娃化键合娃胶为填充剂；W甲醇-0. 1% 磯酸溶液巧5:15)为流动相：检测波长为44化m。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
[0047] 对照品溶液的制备取芦菩大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酷、大黄素甲離对照品 适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含芦菩大黄素、大黄酸、大黄素各IOy g、大黄素甲離 20 U g、大黄酷50 y g的混合溶液，即得。
[004引供试品溶液的制备；取本品约15mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入甲醇适量，超 声处理（功率250W，频率25KHZ) 30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密量取续滤液IOml (剩余滤液备用），置烧瓶中，挥去溶剂，加8 %盐酸溶液20ml再加 H氯甲焼20ml加热回流2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量H氯甲焼洗涂容器，并入分液 漏斗中，分取H氯甲焼层，酸液再用H氯甲焼振摇提取3次，每次10时，合并H氯甲焼液，减 压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取 续滤液，即得。
[0049] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 y 1注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0050] 本品按干燥品计算，含芦菩大黄素咕化。化)、大黄酸咕化〇6)、大黄素咕化。化)、 大黄酷（(：品。〇4)、大黄素甲離（CieHi2〇5)的总量不得少于50%。
[0051] (4)游离芦菩大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酷、游离大黄素甲離总量 照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定。
[0052] 照高效液相色谱法（中国到典2010年版一部附录VID)测定。
[0053] 色谱条件与系统适用性试验W十八化基娃化键合娃胶为填充剂；W甲醇-0. 1% 磯酸溶液巧5:15)为流动相：检测波长为440nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
[0054] 对照品溶液的制备取芦菩大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酷、大黄素甲離对照品 适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含芦菩大黄素、大黄酸、大黄素各10 y g、大黄素甲離 20 U g、大黄酷50 y g的混合溶液，即得。
[005引供试品溶液的制备；取本品约15mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入甲醇适量，超 声处理（功率250W，频率25KHZ) 30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤 过，滤液的一部分作为供试品溶液。
[0056] 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 y 1注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0057] 本品按干燥品计算，含游离芦菩大黄素咕化化)、游离大黄酸（Cl品〇e)、游离大黄 素（CisHiuOs)、游离大黄酷（Cl品。〇4)、游离大黄素甲離（CieHi2〇5)的总量不得少于40%。
[0058] 本发明的大黄总意酿，其中，
[0059] 含总意酿W大黄素计，为50% -60%。
[0060] 含游离意酿W大黄素计，为48% -58%。
[006。 按干燥品计算，含芦菩大黄素咕5恥05)、大黄酸咕5&06)、大黄素咕化。05)、大黄 酷（CisHi004)、大黄素甲離（CieHi205)的总量不少于50%。
[0062] 按干燥品计算，含游离芦菩大黄素（Cl化化)、游离大黄酸（Cl化〇6)、游离大黄素 (Cl品。〇5)、游离大黄酷（CisHiA)、游离大黄素甲離（CieHi2〇5)的总量不少于40%。
[0063] 本发明的大黄总意酿可W制备成片剂，胶囊等口服药物形式，也可W制备成外用 和注射用药物形式，如含有W下重量比例的组分制备的片剂或胶囊剂：
[0064]
【权利要求】
1?大黄总蒽醌及其组合物在制备治疗胆囊炎的药物中的应用。
2. 权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌包括任何一种方法制备的大黄蒽醌物 质，包括游离惠醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、縣质等或它们的混合物。
3. 权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌是采用以下方法制备的大黄总蒽醌： 步骤1， 取大黄lOOOg，照中国药典2010年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用 乙醇作溶剂,浸渍48小时后，以每公斤药粉每分钟1?I. 5ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液 5000ml备用；继续渗漉，收集续漉液10000ml减压回收乙醇至60°C相对密度0. 90?0. 9,， 放冷，静置，滤过，得析出物I，滤液1备用； ^ 步骤2， 取初漉液加50%乙醇稀释至含醇量75%，用10%氢氧化钠的65%乙醇溶液碱化至漉 液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调节pH值至6. 0?7. 0，减压回收乙醇 至60°C相对密度I. 00?1. 02,放冷，静置，滤过，得沉淀物1和滤液2， 步骤3， 滤液2与滤液1合并，减压浓缩至80°C相对密度L 40?L 45,加6倍稠膏重量的乙醇 回流2次,每次0? 5小时，滤过，滤液用10%氢氧化钠的65%乙醇溶液碱化至溶液中无没食 子酸斑点，静置12小时，滤过，滤液调节pH值至6. 0?7. 0，减压回收乙醇，浓缩至80°C相对 密度为1_ 45?L 48,并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量〇? 5%氢氧化钠水溶 液溶解，浓盐酸调节pH值至6. 0?7. 0,加入0? 2倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至8(TC 相对密度为1. 40?1. 45,趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀 和滤液，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，使80°C相对密度为1. 40?1. 45,趁热缓缓加入4 倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀再重复操作1次，合并3次滤 液，减压回收乙醇至 6〇°C相对密度0. %?0? 97,放冷，滤过，收集析出物II和滤液3， 步骤4， 滤液3检查鞣质至阴性，加4倍量乙醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收乙醇，蒸干，85。〇， 0? O7MPa减压干燥，粉碎，加6倍干固物重量乙醇回流2次，每次0? 5小时，合并乙醇液，减压 回收乙醇，得残留物， 步骤5， 残留物与析出物I、析出物II合并，混匀，65°C以下减压干燥，即得。 4?权利要求3所述的应用，其中所述大黄总蒽醌含总蒽醌以大黄素计，为50% -60%， 含游离蒽醌以大黄素计，为48% -58%，按干燥品计算，含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大 黄酚、大黄素甲醚的总量不少于50%，按干燥品计算，含游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离 大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚的总量不少于40%, 其【性状】为褐黄色粉末，气微，味微苦， 其【鉴别】方法如下：取本发明的大黄总蒽醌〇? Ig,加三氯甲烷40ml超声处理10分钟， 滤过，滤液作为供试品溶液，另取芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸对照品， 加甲醇溶解，分别制成每Iml含0? 2mg、0. lmg，〇? lmg，0? lmg，0? 2mg的溶液作为对照溶液，照 薄层层析法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种供试品和对照品溶液 各5?10 U 1分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶H薄层板上（新活化），以石 油醚（30?6〇°C) -甲酸乙酯一甲酸（15:5:1) 10°C以下放置的上层溶液为展开剂，在251： 以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的荧光斑点， 其【检查】方法如下： 没食子酸的检查：取本发明的大黄总蒽醌细粉25mg，置5ml量瓶中，加甲醇4?5ml 超声处理30分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，另取 没食子酸对照品，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（中 国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 u 1分别点于同一娃胶G薄 层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁 乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点颜色应不得深于对照 品斑点的颜色，土大黄苷的检查：取本发明的大黄总蒽醌〇.2g，加甲醇2ml，温浸10分钟， 放冷，取上清液IOul点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置1〇分钟，置紫外光灯 (365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光， 其【含量测定】方法如下： (1) 、总蒽醌 对照品溶液的制备 取大黄素对照品约l〇mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得， 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0. lml、0. 2ml、0. 4ml、0. 8tnl、I. 2ml、I. 6ml 置IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8%醋酸镁甲醇溶液10ml使溶解， 摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在 510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线， 测定法：取本品约40mg，精密称定，置IOOml园底烧瓶中，加8%盐酸溶液20ml，再加三 氯甲烷20mL置沸水浴中加热回流1小时，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器至 无色，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次（20ml、15ml、10ml)， 合并三氯甲烷提取液置IOOml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇勻，精密量取〇. 4ml置 IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8%醋酸镁甲醇溶液IOml使溶解，摇匀， 以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典 2〇10年版一部附录VA)，在510nm的 波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中总蒽醌的量,计算，即得， (2) 、游离蒽醌 对照品溶液的制备 取大黄素对照品约l〇mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得， 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0. lml、0. 2ml、0. 4ml、0. 8ml、l. 2ml、l. 6ml 置IOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入〇? 8%醋酸镁甲醇溶液10ml使溶解， 摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2〇10年版一部附录VA)，在 5IOntn的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线， 测定法：取本品约40ml，精密称定，置IOOml锥形瓶中，加三氯甲烷约60ml超声处理 (功率250W,频率25KHz) 40分钟，放冷，滤过，用三氯甲烷冲洗滤器及锥形瓶，并入滤液中， 滤液转移至IOOml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取0? 4ml置IOml具塞试管 中，蒸发至干，残渣分别精密加入0? 8%醋酸镁甲醇溶液IOml使溶解，摇匀，以第一份为空 白，照紫外一可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸 光度，依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品中游离蒽醌的量，计算，即得， (3) 、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量：照高效液相色谱法（中国 到典2〇10年版一部附录 VID)测定， 色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-0. 1%磷酸 溶液（85:15)为流动相：检测波长为440mn，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000， 对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精 密称定，加甲醇制成每Iml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各IOy g、大黄素甲醚20 u g、大黄 酚50 u g的混合溶液，即得， 供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入甲醇适量，超声处 理（功率250W，频率25KHz) 30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过， 精密量取续滤液IOml (剩余滤液备用），置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液20ml再加三 氯甲烷20ml加热回流2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏 斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次10时，合并三氯甲烷液，减压 回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续 滤液，即得， 测定法f别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 P 1注入液相色谱仪，测定，即得， (4) 游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚总量照高 效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定， 照高效液相色谱法（中国到典2010年版一部附录VID)测定， 色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-〇. 1%磷酸 溶液（85:15)为流动相：检测波长为440nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000， 对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精 密称定，加甲醇制成每Iml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10 U g、大黄素甲醚2〇 u g、大黄 酚50 g的混合溶液，即得， 供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加入甲醇适量，超声处 理（功率25〇W，频率25KHz) 3〇分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度,摇匀，滤过， 滤液的一部分作为供试品溶液， 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 u 1注入液相色谱仪，测定，即 得。 5?权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌组合物为大黄总蒽醌的片剂，胶囊剂。 6?权利要求5所述的应用，其中所述大黄总蒽醌胶囊剂，其配方如下：
制备方法如下： 1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀； 2) 将聚维酮用95% (v/v)的乙醇溶解，制备成含有10%的聚维酮溶液（10份重量的聚 维酮溶解到95%的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液）； 3) 将10%的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥， 颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，装1000粒胶囊，或上压片机压1000片，再包衣即可。
【文档编号】A61K36/708GK104224951SQ201410503241
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】付诚, 付志高 申请人:江西百神药业股份有限公司