(22反式)-3β-羟基-胆甾-5,22-二烯-24-酮在神经保护药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种化合物(22反式)-3β-羟基-胆甾-5,22-二烯-24-酮及其制备方法和用途。该化合物是从总状蕨藻中采用提取、减压浓缩、萃取、硅胶柱色谱法以及凝胶柱色谱法纯化而得到的，其结构是由理化常数测定及波谱数据分析而确定的。经多次体外SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用实验证明：该化合物对β-淀粉样蛋白25–35(Aβ25-35)损伤的SH-SY5Y细胞具有显著的保护作用，可用于制备神经保护剂和防止阿尔茨海默症药物。
【专利说明】(22反式）-3β-羟基-胆留-5, 22-二烯-24-酮在神经保 护药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从总状蕨藻中提取（22反式）-3β-羟基-胆甾-5,22-二 烯-24-酮及其制备方法和用途；本发明还涉及该化合物为对Aβ25_35损伤的SH-SY5Y细胞 具有保护作用的活性成分，从而它可用于制备神经保护药物和防止阿尔茨海默症药物。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默症（Alzheimer，sdisease,AD)是一种中枢神经系统原发性退行性 疾病，全世界超过3500万人罹患此症。其临床表现为进行性记忆障碍、运动障碍、认知 障石寻等（Prince,M.eral,World Alzheimer Report 2013.,Alzheimer'sDisease International:London,UK, 2013;pp1-92)。我国现有AD患者约有 800 万之多。由 于晚期AD患者生活不能自理，并常伴有严重的精神、神经症状，不但严重降低了老年人的 生活质量，还给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担。AD作为老年期痴呆的主要类型， 是继心脏病、癌症、中风之后的第四位死因。因此，对AD的防治已引起医药学界乃至全社会 的广泛关注。针对AD进行的新型先导化合物的发现及其作用机理的研究，已成为中西医药 学工作者致力研究的重要课题。
[0003]总状藏藻 racefflosa(ForsskAl)J.Agardh系绿藻门（Chlorophyta) 绿藻纲（Chlorophyceae)管藻目（Siphonales)蕨藻科（Caulerpaceae)蕨藻属 (CaWerjDa)海洋植物,主要分布于热带和亚热带海域,生长在潮间带以下的岩石、珊瑚礁上 或者中、低潮带的沙地上。在我国海域也有广泛分布，主要集中于福建东山、台湾、海南、西 沙、广东沿海。国内外研究表明，总状蕨藻中含有倍半萜类、二萜类、留体类、甘油酯类、芳香 类、酰胺类及生物碱类等成分（Alarif,W.M.etal, 5bi7,Xir,Faier, 2010， 38(5-6), 548 - 557 ；Wang,H.etal,Botanica Marina,2007, 50(3), 185 - 190; Ayyad,S. -Ε.Ν.etal,Alexandria Journal of Pharmaceutical Sciences,1994, 8(3), 217-219;Anjaneyulu,A.S.R.etal,Journal of Natural Products,1992, 55(4)，496 - 499)。其中多数萜类化合物含有天然界罕见的1，4-二乙酰氧基(醛基)丁二烯 结构片断，而生物碱类则为结构奇特的双吲哚类化合物。现代药理学研究表明，从总状蕨藻 中发现的次级代谢产物经常表现出很强的抗菌、抗炎、抗病毒、杀虫、抗肿瘤及毒鱼等多样 的生物活性（Anjaneyulu,A.S.R.etal, 1991，30(9)，3041-3042; Anjaneyulu,A.S.R.etal,Journal of the Indian Chemical Society,1991, 68(8), 480;Capon,R.J.Phytochemistry,1983, 22(6), 1465-1467;Nielsen,P. G.etal,Phytochemistry,1982, 21(7), 1643 - 1645;Doty,M.S.etal,Nature, 1966， 211(5052)， 990)。
[0004] (22 反式）-3β-羟基-胆甾-5, 22-二烯-24-酮，英文名为（2览)-3,-hydroxy _cholesta-5, 22-dien-24-〇ne，分子式为C27H4202。（22 反式）-3β_ 轻基-胆留-5, 22-二 烯-24-酮为一种白色粉末，熔点114~116°C。鉴于该留体化合物支链的特异性，合成化学 家米用不同的合成方法对其进行了全合成（Koch,P.etal，及/Beii/?ofe/a5bci<9i<9Chimique de France,1983, (7-8,Pt. 2), 189 - 194;Khripach,V.A.etal, Zhurnal Organicheskoi Khimii,1993, 29 (7), 1368 - 1371;崔建国等，中///丈学学液 (,2000, 39(2), 46 - 50;Litvinovskaya,R.P.etal,Russian Journal of Organic Chemistry (Translation of Zhurnal Organicheskoi Khimii), 2002, 38(3), 355 - 360;Morisaki,N.etal,Chemical & Pharmaceutical Bulletin,2002, 50(7)，935 - 940;Cui,J.-G.etal,汾eroiife, 2002，67(13-14), 1015-1019)。这 是首次在海洋藻类中分离得到（22反式）-3β-羟基-胆留-5, 22-二烯-24-酮。并且，迄 今为止，尚未见有关化合物（22反式）-3β-羟基-胆留-5, 22-二烯-24-酮的生物活性的 研究报道。
【发明内容】
[0005] 本发明在于提供一种化合物（22反式）-3β-羟基-胆甾-5, 22-二烯-24-酮及 其制备方法和用途。该化合物是从总状蕨藻中采用提取、减压浓缩、萃取、硅胶柱色谱法以 及凝胶柱色谱法纯化而得到的（22反式）-3β-羟基-胆留-5, 22-二烯-24-酮，其结构是 由理化常数测定及波谱数据分析而确定的。经药理试验研究表明，该化合物对Aβ25_35损伤 的SH-SY5Y细胞具有显著的保护作用。
[0006] 因此，本发明的一个目的是提供一种从总状蕨藻中制备化合物（22反式）-3β-羟 基-胆留-5, 22-二烯-24-酮的方法。
[0007] 本发明的另一个目的是提供化合物（22反式）_3β-羟基-胆甾-5, 22-二 烯-24-酮的用途。具体地说，该化合物对Aβ25_35损伤的SH-SY5Y细胞具有显著的保护作 用，可用于制备神经保护剂和防止阿尔茨海默症的药物。
[0008] 根据本发明的第一个目的，本发明提供一种从总状蕨藻中采用提取、减压浓缩、萃 取、硅胶柱色谱法以及凝胶柱色谱法制备化合物（22反式）_3β-羟基-胆留-5, 22-二 烯-24-酮的方法，具体步骤如下： 1) 制备提取物浸膏 将冷冻的总状蕨藻(C )常温下解冻，用乙醇按常规渗漉提取三次，每次渗漉 1天，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏； 2) 分离纯化 (1) 将上述粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇 分别萃取三次，所得萃取液减压浓缩分别得到石油醚提取浸膏、乙酸乙酯提取浸膏和正丁 醇提取浸膏； (2) 将乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚/丙酮梯度洗脱，收集的分离组分利 用硅胶薄层层析检测，成份相同的分离组分合并、浓缩后得到A、B、C、D、E五个分离组分；其 中组分C即石油醚/丙酮体积比8:2和7:3洗脱部分经S印hadexLH-20凝胶柱层析以二 氯甲烷/甲醇洗脱，硅胶柱层析以石油醚/二氯甲烷梯度体积比为7:3洗脱，反相高效液相 色谱法使用C18柱（10μm，250X10mm)，以甲醇：水=83:17 (V/V)作为流动相梯度洗脱， 流速为3111171^11，21〇11111波长下检测】，得到化合物（22反式）-33-羟基-胆甾-5,22-二 烯-24-酮，化学结构式为：
【权利要求】
1. (22反式）-3 0 -轻基-胆留-5, 22-二烯-24-酮在制备保护经A0 25_35损伤的 SH-SY5Y细胞的药物中的用途。
2. (22反式）-3 0 -羟基-胆留-5, 22-二烯-24-酮在制备神经保护药物和防止阿尔 茨海默症药物的用途。
【文档编号】A61P25/00GK104398523SQ201410608112
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月3日 优先权日:2014年11月3日
【发明者】毛水春, 章海燕, 郭跃伟, 刘定权 申请人:南昌大学