三七叶苷的用途
【专利摘要】本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及三七叶苷的用途。本发明通过实验证明三七叶苷有抗老年焦虑症的作用，其作用与改善海马内GABA、BDNF水平有关。地西泮作为焦虑症的标准治疗药物，长期给药可影响学习记忆能力，而三七叶苷具有改善老龄小鼠的空间学习能力的作用，是其治疗老年焦虑症的优势。
【专利说明】三七叶苷的用途
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及三七叶苷的用途。
【背景技术】
[0002] 焦虑症（anxiety disorder)是以持续性紧张、担心、恐惧或发作性惊恐为特征的 情绪障碍，并伴有植物神经系统症状和运动不安等行为特征，为晚年多发病之一。Meta分析 显示中国老年焦虑症的患病率为6. 79%，焦虑症状的患病率为22. 11%。焦虑症往往与心 脑血管系统疾病共存，临床上老年焦虑症患者心脑血管系统疾病的风险可增加2倍；同时 患有焦虑障碍的老年人对药物治疗的顺应性降低，导致身体健康状态恶化，从而影响其他 疾病如中风后的功能恢复，严重威胁着老年人的健康。2008年我国60岁以上的老年人口比 例已高达12%，随着社会人口的老龄化，其发病率也将进入一个高峰时期，提高老年人的生 活质量，已经成为全社会研宄的迫切课题。
[0003] 然而临床上焦虑症的治疗却正处于瓶颈时期：治疗焦虑症的两大类主要代表药物 苯二氮卓类（BDZ)、选择性5 - HT重摄取抑制剂（SSRIs)均因其不良反应而不能被依重。 BDZ能促进γ-氨基丁酸（γ-amino-butylic acid，GABA)与其受体结合，加快Cl-通道开 放频率，Cl-内流增加产生抑制效应，从而发挥抗焦虑作用。因其起效快，从1960s开始就是 主要的抗焦虑药，后由于其存在嗜睡、认知障碍以及潜在的依赖性等不良反应，限制了临床 应用；继BDZ之后的SSRIs主要是通过增加脑内5 -羟色胺（5 - HT)的水平发挥作用，因 活性广、耐受性好及适合长期使用等优点被作为目前治疗焦虑症的一线药物。但SSRIs起 效慢、治疗初期有兴奋和致焦虑的风险以及增加性功能障碍、诱发老年人缺血性脑卒中的 危险，临床上还有部分患者对该类药物治疗无应答等原因，实际上仍不能成为理想的抗焦 虑药，例如5-羟色胺重摄取抑制剂吉哌隆就未获得FDA批准。
[0004] 脑内GABA能神经可塑性障碍是老年焦虑症发病机制研宄的最新领域。脑源性神 经营养因子（BDNF)是介导脑内神经可塑性的重要信号分子，而老年时期脑内由于BDNF水 平下降可导致焦虑行为的产生。老年时期BDNF不足可导致GABA能神经可塑性障碍，因此 通过增加脑内BDNF水平恢复GABA能神经可塑性是治疗老年焦虑症的重要途径。三七是五 加科植物三七（Panax notoginseng F. H. chen)的根莖，是云南省的道地药材。三七的传统 功效是活血止血，消肿定痛。根据现代研宄表明，三七的主要有效成份是三七皂苷（Panax notoginseng saponins, PNS)，对心脑血管系统、免疫系统，血液系统都有一定的药理活性， 现代临床上主要是用于脑卒中的治疗或辅助治疗，可增加急性脑梗死患者BDNF、NGF的表 达，促进受损神经细胞功能恢复。三七的传统药用部位是地下部分，地上部分通常不入药， 造成了极大的资源浪费。三七叶苷（LPNS)是从三七茎叶及花、果梗中经提取、多步分离、纯 化，精制得到的总皂苷。LPNS对老年焦虑症的研宄国内外尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供三七叶苷的新用途，可有效解决焦虑症的用药治疗问题。
[0006] 本发明所采取的技术方案是一种三七叶苷在制备治疗焦虑症的药物中的用途。
[0007] 本发明还提出一种三七叶苷在制备治疗老年焦虑症的药物中的用途。
[0008] 优选的，所述三七叶苷包括人参皂苷RbU人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷RcL
[0009] 优选的，所述人参皂苷Rbl的重量百分比为1%?5%、人参皂苷Rc的重量百分 比为8%?14%、人参皂苷Rb2的重量百分比为1 %?5%、人参皂苷Rb3的重量百分比为 14%?20%、人参皂苷Rd的重量百分比为2%?6%。
[0010] 特别优选的，所述人参皂苷Rbl的重量百分比为2%?3%、人参皂苷Rc的重量百 分比为10%?12%、人参皂苷Rb2的重量百分比为2%?3%、人参皂苷Rb3的重量百分比 为16%?18%、人参皂苷Rd的重量百分比为3%?4%。
[0011] 优选的，所述药物包括三七叶苷和药学上可接受的辅料。
[0012] 本发明三七叶苷可取三七茎叶经过水提，水提液上样于大孔吸附树脂，采用乙醇 洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得。当然，也可通过市售获得。
[0013] 优选的，所述药物的剂型为口服制剂、注射剂、栓剂或吸入剂。
[0014] 优选的，所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、微囊剂、丸剂、汤剂、膏剂、分 散粉末、露剂、口服液、滴丸剂或脂质体。
[0015] 优选的，所述注射剂为粉针剂或注射液。
[0016] 所述药学上可接受的辅料包含水果粉、食用香精、甜味剂、酸味剂、填充剂、润滑 剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的一种或两种以上的混 合物。
[0017] 作为优选，水果粉为桔子粉、橙粉、柠檬粉、樱桃粉、苹果粉或椰粉中的一种或两者 以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的水果粉均在本发明的保护范围之内，水果粉 种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0018] 作为优选，食用香精为桔子香精、橙香精、柠檬香精、樱桃香精、薄荷脑、苹果香精 或椰香精中的一种或两者以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的食用香精均在本发 明的保护范围之内，食用香精种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0019] 为增加药物的甜度，易于服用。作为优选，甜味剂为三氯蔗糖、AK糖、阿斯巴甜或 罗汉果甜苷中的一种或两者以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的甜味剂均在本发 明的保护范围之内，甜味剂种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0020] 作为优选，酸味剂为柠檬酸、苹果酸、乳酸或枸橼酸中的一种或两者以上的混合 物。但本领域技术人员认为可行的酸味剂均在本发明的保护范围之内，酸味剂种类并不局 限于此，本发明在此不做限定。
[0021] 填充剂是指用以增加片剂的重量和体积，利于压片的辅料。用作片剂的填充剂要 求流动性、可压性好，结合力强，对药物有较大的容纳量。作为优选，填充剂为果糖、糖醇类、 蔗糖、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素或糊精中的一种或两者以上的混合物。但本领域技术 人员认为可行的崩解剂均在本发明的保护范围之内，填充剂种类并不局限于此，本发明在 此不做限定。
[0022] 润滑剂是指能降低片剂与冲模壁间摩擦力的辅料，以防止摩擦力大而使压片困 难，可使压片时压力分布均匀，并使片剂的密度均匀，还可以改善片剂的外观，使片剂表面 光亮、平整。作为优选，润滑剂为滑石粉、硬脂酸镁、二氧化硅或硬脂酸中的一种或两者以上 的混合物。但本领域技术人员认为可行的润滑剂均在本发明的保护范围之内，润滑剂种类 并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0023] 作为优选，防腐剂为苯甲酸钠、苯甲酸钾、山梨酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或对羟 基苯甲酸苯酯中的一种或两者以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的防腐剂均在本 发明的保护范围之内，防腐剂种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0024] 作为优选，助悬剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠或蜂蜡中的一种或两者以上的混 合物。但本领域技术人员认为可行的助悬剂均在本发明的保护范围之内，助悬剂种类并不 局限于此，本发明在此不做限定。
[0025] 作为优选，食用色素为焦糖色素、栀子黄、姜黄色素或叶绿素中的一种或两者以上 的混合物。但本领域技术人员认为可行的食用色素均在本发明的保护范围之内，食用色素 种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0026] 作为优选，稀释剂为食用植物油、丙二醇或分子量为400?6000的聚乙二醇中的 一种或两者以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的稀释剂均在本发明的保护范围之 内，稀释剂种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0027] 作为优选，乳化剂为S-40、硬脂酰乳酸钠/钙、双乙酰酒石酸单甘油酯、蔗糖脂肪 酸酯、分子量为400?6000的聚乙二醇或蒸馏单甘酯中的一种或两者以上的混合物。但本 领域技术人员认为可行的乳化剂均在本发明的保护范围之内，乳化剂种类并不局限于此， 本发明在此不做限定。
[0028] 崩解剂的主要作用在于消除因粘合剂或由加压而形成片剂的结合力使片剂迅速 崩解，使片剂能迅速发挥药效。作为优选，崩解剂为干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤 维素、交联聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素钠中的一种或两者以上的混合物。但本领域技 术人员认为可行的崩解剂均在本发明的保护范围之内，填充剂种类并不局限于此，本发明 在此不做限定。
[0029] 作为优选，增塑剂为甘油、羧甲基纤维素钠、山梨醇或油酸酰胺磺酸钠中的一种或 两者以上的混合物。但本领域技术人员认为可行的增塑剂均在本发明的保护范围之内，增 塑剂种类并不局限于此，本发明在此不做限定。
[0030] 本发明提供了三七叶苷的新用途，通过实验证明三七叶苷有抗老年焦虑症的作 用，其作用与改善海马内GABA、BDNF水平有关。地西泮作为焦虑症的标准治疗药物，长期给 药可影响学习记忆能力，而三七叶苷具有改善老龄小鼠的空间学习能力的作用，是其治疗 老年焦虑症的优势。
【具体实施方式】
[0031] 为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产 实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
[0032] 1、采用的材料和仪器如下：
[0033] L 1 药物
[0034] 安定（地西泮片）：江苏济川制药有限公司，批号：080411。
[0035] 百忧解（盐酸氟西汀胶囊）：礼来苏州制药有限公司，批号：2061AA。
[0036] 生理盐水（氯化钠注射液）：昆明南疆制药有限公司，批号：C120734K。
[0037] 蛋白定量测定试剂盒：南京建成，货号：A045-2。
[0038] GABA Elisa试剂盒：南京建成，货号：H168-96T。
[0039] BDNF Elisa试剂盒：武汉华美生物科技有限公司，批号：C16012673
[0040] 三七叶苷：取三七茎叶经过水提，水提液上样于大孔吸附树脂，采用乙醇洗脱，收 集洗脱液，浓缩干燥，即得。三七叶苷也可通过具有合法资质的厂商获得。利用高效液相 色谱对其主要成分含量进行测定：人参皂苷Rbl的重量百分比为2. 3%、人参皂苷Rc的重 量百分比为10. 9%、人参皂苷Rb2的重量百分比为2. 7%、人参皂苷Rb3的重量百分比为 17. 1 %、人参皂苷Rd的重量百分比为3. 2%。
[0041] 1.2 动物
[0042] 昆明种小鼠，雄性，12月龄，由四川省医学科学院实验动物研宄所提供，合格证 号：0016699。
[0043] L 3 仪器
[0044] 高架十字迷宫，Morris水迷宫：Panlab。
[0045] SMARTUPG V2. 5小动物行为记录分析系统：Panlab。
[0046] 电子天平：余姚市金诺天平仪器有限公司，型号：TD10001。
[0047] 高速离心机：HITACHI CENTRIFUGE，型号：CF16RX II。
[0048] 内切式匀浆机：宁波新芝生物科技有限公司，型号：XHF- I。
[0049] 酶标仪：Tecan Austria GmbH0
[0050] 2、方法
[0051] 2.1分组及给药
[0052] 实验选用12个月老龄小鼠随机分成隔离组和群养组。群养组每笼10只，在实验 中作为正常对照组。隔离组小鼠在不透明笼内且单笼单只隔离饲养，复制社会隔离焦虑症 模型，共4周。将其随机分为5个组，分别为：模型组、地西泮组、氟西汀组、LPNS低剂量组 (100mg/kg)和 LPNS 高剂量组（500mg/kg)。
[0053] 实验动物均于造模后一周开始给药，连续给药三周，三周后的行为学实验检测过 程中，仍继续给药。
[0054] 2. 2高架十字迷宫实验
[0055] 连续给药的第21天，给药半小时后开始实验。实验前，应先将实验小鼠提前一天 放置在实验室，使其适应实验环境。高架十字迷宫主要由一条开臂和一条闭臂垂直交叉组 成，开臂长（30cmX 2,宽6cm)。闭臂（长30cmX 2,宽6cm，高IOcm)距离地面50cm，两条臂 相交处有一中央平台（5cmX5cm)，两臂的底面和侧面全为黑色。实验过程中尽量保持安静， 不要随意走动。将灯光调至摄像机能拍到的最低能见度，并保持其亮度。操作者将小鼠置 于高架十字迷宫的中央平台，头朝开臂释放，释放后，由SMARTUPG V2. 5小动物行为记录分 析系统自动记录5min内小鼠进入开臂次数（OE)和闭臂次数（CE)及开臂时间（OT)和闭臂 时间（CT)。每只小鼠在实验结束后，用棉花清除高架十字迷宫上的粪便，并喷洒20%的酒 精，擦拭待其挥干，用以掩盖小鼠留下的气味，以免影响到下一只老鼠而使实验结果出现误 差。实验中，若有小鼠从高架十字迷宫上掉落，应将小鼠放回原笼中，记录掉落的小鼠，待其 他老鼠测试结束后，重新对该小鼠进行测试。高架十字迷宫实验的指标通常为开臂时间百 分比（OT% )和开臂次数百分比（OE% )。
[0056] 2. 3 Morris水迷宫实验
[0057] 实验时有一摄像头放置于水迷宫水池中央的上方约2m处，自动采集动物游泳图 像，所收集信号直接输入计算机，由图像自动采集和分析系统自动分析和处理。水迷宫的圆 形水池直径90cm，高50cm，内壁为黑色，池壁上标有东西南北4个标记，将水池等分为4个 象限。目标象限中心有一圆柱平台，直径l〇cm，高35cm，水池内注水使水平面高于圆柱平台 Icm0
[0058] Morris水迷宫实验分为两个部分，即定位航行实验和空间搜索实验。
[0059] ①定位航行实验
[0060] 该实验部分总共分为5天，两个阶段。第1、2天作为学习记忆训练，第3、4、5天为 正式实验并记录测试结果。
[0061] 阶段一：该阶段只是作为小鼠的学习记忆训练阶段，不需要记录数据。测试时，小 鼠进入水池的位置为站台所对象限和所邻象限，于象限边1/2弧度处将小鼠头朝水池壁入 水，小鼠找到并爬上平台则结束该次实验，若小鼠不能找到平台，持续记录180s则实验结 束，引导小鼠至平台位置，放置30s并引导其学习与记忆。每天训练2次，每次3个象限都 要训练，每个象限训练间隔30秒，持续训练2天。
[0062] 阶段二：该阶段是正式实验，需要记录实验数据。实验操作方法与阶段一相同，但 若小鼠在180s之内没有找到平台，不需要对其进行引导。该部分也是每天训练2次，每次3 个象限都要训练，每个象限训练间隔30秒，持续进行3天。并将各组小鼠3天的游泳时间 和距离作为衡量其学习能力的指标。
[0063] ②空间搜索实验
[0064] 完成定位航行实验后，第6天从圆形水池中撤去逃避平台，小鼠入池位置固定为 平台所对象限，于象限边1/2弧度处将小鼠头朝池壁入水，考察小鼠对原平台的记忆。连续 记录小鼠的游泳轨迹60s，计算机软件分析并计算出动物在各象限所用时间和各象限轨迹 长度。计算小鼠在原平台所在象限游泳时间占逃避潜伏期的百分比、在原平台象限的轨迹 长度占搜索距离百分比；并记录小鼠在60s内搜索平台的路线图。将各组小鼠在平台所在 象限的搜索时间和距离占总搜索时间和距离的百分比对作为衡量其空间位置记忆的能力。
[0065] 测试结束后立即颈椎脱臼处死，冰上分离海马与皮层，冻存于_80°C冰箱待测。
[0066] 2. 4 Elisa法测脑组织神经递质含量
[0067] 颈椎脱臼处死后，参照George Paxinos所著《The RatBrain》图谱（第5版），在 冰上迅速分离双侧海马及皮层，用预冷的4°C生理盐水清洗，滤纸吸干水分，装入I. 5mlEP 管内，储存于-80°C冰箱待测。取海马迅速称重，按重量（g):体积（mL) = 1:9的比例加入 9倍体积的生理盐水，冰浴条件下组织机械匀浆，按2500转/分离心10分钟，仔细收集上清 作为样品。分装后，一份待检测，其余冷冻备用。
[0068] 待测样品按考马斯亮兰法测定蛋白浓度，根据测定结果调整待测样品蛋白浓度一 致后，按试剂盒说明进行GABA和BDNF的含量测定。
[0069] 2. 5数据处理
[0070] 采用Graphpad Prism 5统计软件对数据进行统计学处理。采用单因素方差分析 (One way AN0VA)进行检验，各组与对照组比较，用 Tukey' s Multiple Comparison Test 统计。
[0071] 3、结果
[0072] 3. I LPNS对老龄小鼠高架十字迷宫实验中OT%和OE%的影响
[0073] 如表1所示，与空白组相比，模型组小鼠开臂停留时间百分比（0T% )缩短。与模 型组相比，地西泮组小鼠0T%增加，差异有显著性意义（P〈0. 05) ;LPNS500组小鼠的0T%增 加，差异有非常显著性意义（P〈〇. 01)。
[0074] 表I LPNS对老龄小鼠高架十字迷宫实验中0T%的影响p ±S)
[0075]
【权利要求】
1. 一种三七叶苷在制备治疗焦虑症的药物中的用途。
2. -种三七叶苷在制备治疗老年焦虑症的药物中的用途。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述三七叶苷包括人参皂苷Rbl、人参皂 苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述人参皂苷Rbl的重量百分比为1 %? 5%、人参皂苷Rc的重量百分比为8%?14%、人参皂苷Rb2的重量百分比为1%?5%、人 参皂苷Rb3的重量百分比为14%?20%、人参皂苷Rd的重量百分比为2%?6%。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述人参皂苷Rbl的重量百分比为2%? 3%、人参皂苷Rc的重量百分比为10%?12%、人参皂苷Rb2的重量百分比为2%?3%、 人参皂苷Rb3的重量百分比为16%?18%、人参皂苷Rd的重量百分比为3%?4%。
6. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述药物包括三七叶苷和药学上可接受 的辅料。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述药物的剂型为口服制剂、注射剂、栓 剂或吸入剂。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉 剂、微囊剂、丸剂、汤剂、膏剂、分散粉末、露剂、口服液、滴丸剂或脂质体。
9. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述注射剂为粉针剂或注射液。
10. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述药学上可接受的辅料包含水果粉、 食用香精、甜味剂、酸味剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩 解剂或增塑剂中的一种或两种以上的混合物。
【文档编号】A61K31/704GK104434938SQ201410647489
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】周宁娜, 林青, 宋波, 淤泽溥, 孙晓菲, 杨云 申请人:云南中医学院