一种治疗性纳米粒子及其制备方法

一种治疗性纳米粒子及其制备方法
【专利摘要】本公开提供一种治疗性纳米粒子及其制备方法。本公开的治疗性纳米粒子包含活性成分和人血清白蛋白，其中治疗性纳米粒子中人血清白蛋白和活性成分的重量比为0.01∶1至1∶1。本公开还提供一种药物组合物，含有上述的治疗性纳米粒子。本公开还提供一种制备上述治疗性纳米粒子和组合物的方法。
【专利说明】一种治疗性纳米粒子及其制备方法

【技术领域】
[0001] 本公开涉及制药领域，更具体而言涉及一种含人血清白蛋白与疏水性药物的纳米 粒子及其制备方法，特别是涉及特定物理属性药物的白蛋白纳米粒子及其制备方法。

【背景技术】
[0002] 紫杉醇作为一种抗癌药物，属有丝分裂的微管抑制剂，其具有聚合和稳定细胞内 微管的作用。有丝分裂阶段，紫杉醇使微管不能分开，从而将细胞阻断于细胞周期G2与M 期。因此，紫杉醇致使快速分裂的肿瘤细胞被固定在有丝分裂阶段，使细胞复制受阻断而死 亡。紫杉醇对多种癌症（例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、膀胱癌等）具有重要的临床活性。
[0003] 然而，由于水溶性较差，紫杉醇在人体的用药上遇到了困境。为了使紫杉醇适宜静 脉内注射，百时美施贵宝（Bristol-Myers Squibb,BMS)开发了泰素 ⑨,在其中表面活性剂 聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor? el)和无水乙醇共同作为溶剂以增大紫杉醇的溶解度。 泰素对卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食管癌和头颈癌具有显著活性。然而，已经显示出泰素能够诱 导与给药有关的毒性，以及显著的急性和累积毒性，如骨髓抑制、中性粒细胞减少性发热、 过敏反应等。这些副作用与所用的表面活性剂聚氧乙烯菌麻油有关（Anantbhushan等人， Asia Pac J Clin Oncol. 2013;9:176-181)。根据临床研究报告及上市后安全性资料，泰素 过敏反应的总体发生率约为39%。目前在使用泰素时，需预先给与患者抗组胺药和类固醇 类激素以减弱表面活性剂引起的副作用。
[0004] 也有研究人员为了改进紫杉醇的水溶解度，使用能够赋予较高水溶解度的官能团 对其结构进行修饰，例如磺化衍生物（Kingston et al.，U.S. Patent 5059699(1991))和氨 基酸酯衍生物（Mathew et al.，J. Med Chem. 35 :145-151(1992))显示出明显的生物活性。 然而，这种修饰会增加药物制剂成本，并且可能诱发不需要的副反应或降低药物疗效。
[0005] 为了避免上述紫杉醇药物制剂使用中的各种不利影响，维沃RX药物公司（Vivorx Pharmaceuticals，Inc.)于1997年提交的中国专利申请CN1237901A，公开了一种含有水不 溶性药理活性物质（如紫杉醇）的药物输送体系。这一体系中不含有乳化剂或增溶剂，因 此可以避免由乳化剂或增溶剂而引起过敏反应。在这一药物输送体系中，水不溶性药理活 性物质能够以微米颗粒或纳米颗粒输送。该输送体系中，含有药理活性物质和白蛋白。白 蛋白出现在胶体药物颗粒表面（在除去有机溶剂时形成）上，由于电排斥和空间稳定的合 并作用，促进了能长时间稳定的胶体分散体的形成。在这一药物输送体系中，一部分药理活 性物质分子与蛋白质（例如，人血清白蛋白）结合形成复合物。其他部分的药理活性物质 包含在蛋白质包裹的纳米颗粒内。该专利申请还公开了能在生理盐水中容易重组的粉末形 式亚微米颗粒。这种粉末是在除去水分后经冷冻干燥得到的。
[0006] 阿布拉西斯生物科学有限责任公司（Abraxis Bioscience，LLC.)在Vivorx Pharmaceuticals，Inc.的研发成果基础之上，于2006年提交了美国专利US7820788。 US7820788公开了一种含有活性成分和药学可接受的载体的药物组合物，其中药学可接受 的载体包括白蛋白。US7820788进一步明确了组合物中白蛋白和活性成分的比率。白蛋白和 活性成分的比率（w/w)为0.01 : 1至约100 : 1;更优选地，比率为0.02 : 1至约40 : 1。 通常二者的比率为约18 : 1或更小。更优选地，比率为约0.2 : 1至约12 : 1，最优选地， 比率为约I : 1至约9 : 1。该专利还进一步具体公开了一种含有紫杉醇和药学可接受的 载体的注射用药物组合物，其中药学可接受的载体包括白蛋白，白蛋白和紫杉醇形成粒子， 粒径小于200nm，白蛋白和紫杉醇的比率（w/w)为I : 1至9 : 1。
[0007] Abraxis Bioscience，LLC.还申请了多件相关美国专利，其中US7923536公开了 以US7820788所保护的药物组合物治疗癌症的方法；US8314156公开了以US7820788所保 护的药物组合物用于治疗肺癌和胰腺癌的方法。
[0008] 人血清白蛋白（HSA)是高度可溶的球蛋白，由585个氨基酸组成。HSA是血浆中最 丰富的蛋白质，并且占人血浆胶体渗透压的70-80%。HSA的氨基酸序列包含总共17个二 硫键和一个游离的巯基。静脉内施用HSA溶液已经用于预防和治疗低血容量性休克。HSA 具有多个疏水结合位点，这些位点可结合各种各样的药物，特别是中性或带负电的疏水化 合物。
[0009] 目前FDA批准上市销售的紫杉醇白蛋白纳米粒制剂Abraxane?就是Abraxis Bioscience，LLC.的产品，其每个单剂量产品中含有紫杉醇IOOmg和人血清白蛋白900mg。 Abraxane?是一种无菌冻干粉末，不含任何溶剂，使用时以2〇mi生理盐水进行重组 (re-constitution)〇
[?σι?] Abraxane?在临床应用中可以避免Cremophor? el引起的不良反应，从而 可以使给药剂量由175mg/m2提高到260mg/m2。并且，由于给药剂量的提高，对肿瘤的治疗 效果显著提高。在用紫杉醇注射液进行的两项随机对照临床研究中，在注射紫杉醇（白蛋 白结合型）的欧美患者组中，确认的疗效为21.5% (95%可信区间：16. 2%至26. 7% )，而 紫杉醇注射液组确认的疗效为11. 1% (95%可信区间：6. 9%至15. 1% );注射紫杉醇（白 蛋白结合型）的中国患者组中确认的疗效为54% (95%可信区间：44. 3%至63. 4%)，紫杉 醇注射液组确认的疗效为29% (95%可信区间：20· 6%至37.9% )(参见Abraxane?'说 明书）。美国和欧盟的药品监管机构已经批准其用于治疗乳腺癌、胰腺癌和非小细胞肺癌， 另有黑色素瘤、卵巢癌、膀胱癌等处于临床研究阶段。
[0011] 虽然Abraxane⑨.具有上述优势,但其仍有很多不足之处：
[0012] 首先，其大量使用人血清白蛋白。已有初步研究表明，不同人种甚至不同个体的白 蛋白可能有差异，这种差异不是来自于白蛋白一级结构（氨基酸顺序）的差异，而是来自白 蛋白表达后修饰的差异。因此含大量白蛋白的制剂可能造成特定群体出现过敏反应。这与 (,remophor? EL引起的过敏反应不同，是由同种异体白蛋白引起的。
[0013] 其次，目前人血清白蛋白的来源仍是人类的血液，尚无基因工程的产品上市。由于 血液采集、储存等过程中可能存在污染，使得血液制品的安全性存在隐患。因此，亦不希望 在紫杉醇白蛋白制剂中过多使用人血清白蛋白。
[0014] 第三，白蛋白价格高昂，在中国约为600元/10g，在制剂中大量使用白蛋白，会造 成产品成本增加。对于一个患者而言，按照紫杉醇260mg/m 2的剂量给药，每次治疗需要5-6g 白蛋白，6个疗程的治疗则需要30-36g白蛋白。在没有需要的情况下，额外增加了约2000 元的白蛋白费用，这也是一种浪费。
[0015] 第四，很多疾病需要使用白蛋白进行治疗，然而中国很多地区的医院都面临人血 清白蛋白短缺的窘境。在紫杉醇制剂中大量使用白蛋白造成对医疗资源的抢夺，不利于公 众健康。


【发明内容】

[0016] 本公开的一些实施方式提供了一种治疗性纳米粒子，其包含活性成分和人血清白 蛋白或由其组成。在一些实施方式中，在治疗性纳米粒子的制备过程中，除去有机溶剂时， 使得白蛋白出现在治疗性纳米粒子的表面。因此，在一些具体的实施方式中，活性成分包裹 在人血清白蛋白内。
[0017] 在一些实施方式中，治疗性纳米粒子中人血清白蛋白和活性成分的重量比选 自 0.01 : 1、0.02 : 1、0.04 : 1、0.05 : 1、0.06 : 1、0.07 : 1、0.08 : 1、0.09 : 1、 0· 10 : 1、0· 11 : 1、0· 12 : 1、0· 13 : 1、0· 14 : 1、0· 15 : 1、0· 16 : 1、0· 17 : 1、0· 18 : 1、 0.19 : 1、0.2 : 1、0.21 : 1、0.22 : 1、0.23 : 1、0.24 : 1、0.25 : 1、0.26 : 1、0.27 : 1、 0.28 : 1、0.29 : 1、0.3 : 1、0.31 : 1、0.32 : 1、0.33 : 1、0.34 : 1、0.35 : 1、0.36 : 1、 0.37 : 1、0.38 : 1、0.39 : 1、0.4 : 1、0.41 : 1、0.42 : 1、0.43 : 1、0.44 : 1、0.45 : 1、 0.46 : 1、0.47 : 1、0.48 : 1、0.49 : 1、0.5 : 1、0.51 : 1、0.52 : 1、0.53 : 1、0.54 : 1、 0.55 : 1、0.56 : 1、0.57 : 1、0.58 : 1、0.59 : 1、0.6 : 1、0.65 : 1、0.70 : 1、0.75 : 1、 0.8 : 1、0.85 : 1、0.9 : 1、0.95 : 1、1 : 1、1.5 : 1、2 : 1、2.5 : 1、3 : 1、3.5 : 1、 4 : 1、4.5 : 1、5 : 1、5.5 : 1、6 : 1、6.5 : 1、7 : 1、7.5 : 1、8 : 1、8.5 : 1 或上述 任意两个比例之间的范围。在一些具体的实施方式中，人血清白蛋白和活性成分的重量比 选自 0.03 : 1、0.04 : 1、0.05 : 1、0.06 : 1、0.07 : 1、0.08 : 1、0.09 : 1、0.10 : 1、 0· 11 : 1、0· 12 : 1、0· 13 : 1、0· 14 : 1、0· 15 : 1、0· 16 : 1、0· 17 : 1、0· 18 : 1、0· 19 : 1、 0.2 : 1、0.21 : 1、0.22 : 1、0.23 : 1、0.24 : 1、0.25 : 1、0.26 : 1、0.27 : 1、0.28 : 1、 0.29 : 1、0.3 : 1、0.31 : 1、0.32 : 1、0.33 : 1、0.34 : 1、0.35 : 1、0.36 : 1、0.37 : 1、 0.38 : 1、0.39 : 1、0.4 : 1、0.41 : 1、0.42 : 1、0.43 : 1、0.44 : 1、0.45 : 1、0.46 : 1、 0.47 : 1、0.48 : 1、0.49 : 1、0.5 : 1、0.6 : 1、0.7 : 1、0.8 : 1、0.9 : 1或上述任意两个 比例之间的范围，例如0.03 : 1至0.19 : 1、0. 21 : 1至0.9 : 1。更具体地，人血清白蛋 白和活性成分的重量比是 0.043 : 1、0.071 : 1、0.13 : 1、0.15 : 1、0.16 : 1、0.17 : 1、 0. 18 : 1、0. 24 : 1、或0. 57 : 1、或上述任意两个比例之间的范围，例如0. 043 : 1至 0.071 : 1、0.043 : 1 至 0.13 : 1、0.043 : 1 至、0.043 : 1 至 0.15 : 1、0.043 : 1 至 0.16 : 1、0.043 : 1 至0.17 : 1、0.043 : 1 至0.18 : 1、0.043 : 1 至0.24 : 1、0.043 : 1 至 0.57 : 1、0.071 : 1 至 0.13 : 1、0.071 : 1 至 0.15 : 1、0.071 : 1 至 0.16 : 1、 0.071 : 1 至 0.17 : 1、0.071 : 1 至 0.18 : 1、0.071 : 1 至 0.24 : 1、0.071 : 1 至 0.57 : 1、0.13 : 1至0.15 : 1、0.13 : 1至0.16 : 1、0.13 : 1至0.17 : 1、0.13 : 1至 0.18 : 1、0.13 : 1至0.24 : 1、0.13 : 1至0.57 : 1、0.15 : 1至0.16 : 1、0.15 : 1至 0.17 : 1、0.15 : 1至0.18 : 1、0.15 : 1至0.24 : 1、0.15 : 1至0.57 : 1、0.16 : 1至 0.17 : 1、0.16 : 1至0.18 : 1、0.16 : 1至0.24 : 1、0.16 : 1至0.57 : 1、0.17 : 1至 0.18 : 1、0.17 : 1 至0.24 : 1、0.17 : 1 至0.57 : 1、0.18 : 1 至0.24 : 1、0.18 : 1 至 0.57 : 1 或者 0.24 : 1 至 0.57 : 1。
[0018] 在一些实施方式中，适于被包裹在人血清白蛋白中的活性成分应具有以下特性： 水中不溶或微溶、在特定有机溶剂中可溶或易溶，其中特定有机溶剂为：水中溶解度低、沸 点低的纯溶剂或者其与乙醇、叔丁醇、异丙醇等小分子醇类的混合溶剂，包括但不限于三氯 甲烷、二氯甲烷等。尤其适用于本公开的活性成分是紫杉烷类药物，其包括但不限于紫杉 醇、多西他赛、卡巴他赛、多西他赛亲脂衍生物；大环内酯类药物，其包括但不限于雷帕霉素 及其衍生物、埃博霉素B及其衍生物，坦螺旋霉素及其衍生物等；喜树碱类药物，其包括但 不限于10-羟基喜树碱、SN38及其衍生物等；蒽环类药物，其包括但不限于阿柔比星、吡柔 比星等；以及其他活性成分包括秋水仙碱及其衍生物、硫代秋水仙碱二聚体、胺碘达隆、碘 塞罗宁、环孢菌素、依西美坦、氟他胺、氟维司群、罗米地辛、司莫司汀、长春碱、布洛芬等等。 在一些实施方式中，活性成分选自紫杉醇和多西他赛中的一种或多种，在另一些实施方式 中，活性成分是多西他赛、雷帕霉素及其衍生物、依西美坦、氟他胺、氟维司群等。
[0019] 在一些实施方式中，治疗性纳米粒子的平均粒径选自30、40、50、60、70、80、90、 100、110、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、 137、138、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、 157、158、159、160、165、170、175、180、185、190、195、200nm、或上述任意两个数值之间的范 围。技术人员理解，可以使用任何现有的或未来适当方法测量粒子的粒径，包括但不限于沉 降法、筛分法、显微镜观察、或激光粒度测量仪。还应当理解的是，当本公开的治疗性纳米粒 子是多个时，并非每一个治疗性纳米粒子的粒径都是一致的，只要其平均粒径满足上述限 定，也包含在本公开所涵盖的范围内。在一些具体的实施方式中，粒径是采用激光粒度测 定仪确定的；治疗性纳米粒子的平均粒径在选自50、60、70、80、90、100、110、120、125、126、 127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、140、141、142、143、144、145、146、 147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160nm、或上述任意两个数值 之间的范围。
[0020] 在一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血清 白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.043 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为140nm。
[0021] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.071 : 1，治 疗性纳米粒子的平均粒径为134nm。
[0022] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.13 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为125nm。
[0023] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.15 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为136nm。
[0024] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.16 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为133nm。
[0025] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.17 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为136nm。
[0026] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.18 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为138nm。
[0027] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.24 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为141nm。
[0028] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含紫杉醇和人血 清白蛋白，紫杉醇包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和紫杉醇的重量为0.57 : 1，治疗 性纳米粒子的平均粒径为145nm。
[0029] 在另一个具体的实施方式中，提供了一种治疗性纳米粒子，其包含多西他赛和 人血清白蛋白，多西他赛包裹在人血清白蛋白内；人血清白蛋白和多西他赛的重量为 〇. 1 : 1，治疗性纳米粒子的粒径在110至150nm范围内。
[0030] 在某些【具体实施方式】中，本发明的治疗性纳米粒子是经过分离和/纯化的治疗性 纳米粒子，优选地其基本上不包含作为支撑剂的人血清白蛋白和/或其基本上仅包含与活 性成分一起构成纳米粒子的人血清白蛋白，即本发明的治疗性纳米粒子所包含的人血清白 蛋白基本上不以支撑剂的形式存在和/或基本上全部与活性成分一起构成纳米粒子。更优 选地，所述分离和/纯化是通过离心、透析或柱层析实现的。
[0031] 另一方面，本公开的一些实施方式提供了一种药物组合物，其含有根据本公开的 治疗性纳米粒子。在一些实施方式中，以液体形式提供药物组合物，包括但不限于适于向受 试者注射施用的形式。在一个具体的实施方式中，药物组合物制备成注射液。在另一些实 施方式中，以固体的形式提供药物组合物，包括但不限于干粉或冻干粉。
[0032] 在某些【具体实施方式】中，本发明的纳米粒子或者药物组合物不含去铁胺或其盐， 例如去铁胺甲磺酸盐。
[0033] 在某些具体实施方案中，本发明的纳米粒子或者药物组合物不含额外的稳定剂。
[0034] 当药物组合物以液体形式提供时，药物组合物包含本公开的治疗性纳米粒子和可 药用载体。治疗性纳米粒子悬浮于可药用载体中。可药用载体包括但不限于缓冲液、防腐 齐IJ、注射用水、生理盐水、等渗溶液。在一些具体的实施方式中，治疗性纳米粒子在液体形式 的药物组合物中的浓度为5mg/ml。
[0035] 当药物组合物以固体形式提供时，药物组合物包含或由如下组成：本公开的治疗 性纳米粒子和冻干赋形剂。在一些具体的实施方式中，冻干赋形剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、 麦芽糖、海藻糖、右旋糖酐、人血清白蛋白中的一种或多种。在某些具体的实施方式中，治疗 性纳米粒子悬浮于5%至10%的冻干赋形剂溶液中，然后经冻干制备成冻干粉形式的药物 组合物。在具体的实施方式中，冻干赋形剂溶液选自5%甘露醇溶液、10%蔗糖溶液、5%右 旋糖酐溶液、10 %乳糖溶液、10 %海藻糖溶液、10 %麦芽糖溶液、10 %人血白蛋白溶液中的 一种或多种。在一些具体的实施方式中，治疗性纳米粒子在固体形式的药物组合物中的含 量为按重量计4. 8% -10%。
[0036] 本发明还提供了制备本发明治疗性纳米粒子的方法，其包括：（1)通过将活性成 分与人血清白蛋白相接触制备含治疗性纳米粒子的混悬液，和（2)分离和/纯化上述混悬 液得到基本上纯的治疗性纳米粒子。
[0037] 本发明还提供了制备本发明治疗性纳米粒子的方法，其包括：（1)通过将活性成 分相（例如在有机溶剂中的油相）与人血清白蛋白相（例如在水中的水相）相混合制备含 治疗性纳米粒子的混悬液，和（2)分离和/纯化上述混悬液得到基本上纯的治疗性纳米粒 子。
[0038] 另一方面，本发明还提供了由本发明的方法制得的治疗性纳米粒子。
[0039] 另一方面，本公开的一些实施方式提供了一种制备治疗性纳米粒子的方法，包括 或由如下步骤组成：
[0040] 1)将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水 相；
[0041] 2)将油相和水相形成水包油的乳剂；
[0042] 3)去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液；
[0043] 4)分离获得治疗性纳米粒子。
[0044] 技术人员能够根据活性成分的性质选择适当的有机溶剂。在一些具体的实施方式 中，当活性成分是紫杉烷类药物时，可用的有机溶剂选自氯仿和乙醇中的一种或多种。更具 体而言，当活性成分是紫杉醇或多西他赛时，可用的有机溶剂是氯仿和乙醇的混合体系。在 一些具体的实施方式中，氯仿和乙醇的体积比在I : 1至20 : 1范围内；例如选自1 : 1、 4 : 1、9 : 1和11 : 1。在一些具体的实施方式中，人血清白蛋白在水相中的浓度在2% 至10% w/v范围内；例如选自2%、4%、5%和10%。在一些实施方式中，油相中的活性成分 与有机溶剂的比例在〇. 3-7. 5g/15-20ml范围之间。在一些具体的实施方式中，油相中的活 性成分与有机溶剂的比例选自：〇· 3g/15ml、0. 6g/15ml、lg/20ml、l. 25g/15ml、l. 8g/15ml、 2g/15ml、2. 5g/15ml、3g/20ml、3g/15ml、5g/15ml、7. 5g/15ml、或上述任意两个数值之间的 范围。
[0045] 当油相和水相形成水包油的乳剂时，油相和水相的体积比选自I : 10至1 : 100 的范围内。在一些实施方式中，油相和水相的混合比例是3 : 100或1 : 25。采用本领域 已知的方法形成水包油的乳剂，包括但不限于均质法。在具体的实施方式中，采用高剪切分 散机将油相和水相的混合物进行匀浆，然后采用高压均质机进行均质，得到水包油的乳剂。 在具体的实施方式中，采用高剪切分散机将油相和水相的混合物匀浆2-10分钟，然后采用 高压均质机在10000-20000psi下进行均质，得到水包油的乳剂。
[0046] 任何适当的方法均可用于去除乳剂中的有机溶剂。在一些实施方式中，采用旋转 蒸发的方法去除乳剂中的有机溶剂。在具体的实施方式中，用旋转蒸发仪将乳剂在40°C下， 以40mbar减压去除乳剂中的有机溶剂。去除有机溶剂之后，得到的混悬液中即包含了本公 开的治疗性纳米粒子。然而，此时的混悬液中还包含了过量的白蛋白，而这些白蛋白实际上 并没有参与纳米粒子的构成。
[0047] 因此，随后需要将其从混悬液中分离出来而获得本公开的纯或基本上纯的治疗性 纳米粒子。在一些实施方式中，分离是通过选自如下的方法进行的：离心、透析、和排阻色 谱。在具体的实施方式中，去除有机溶剂之后得到的混悬液可以直接进行分离处理。或者， 也可以也留待后续使用。本公开所涉及的治疗性纳米粒子是希望通过静脉输注的方式给 药，因此需保证产品的无菌。纳米粒子以及人血清白蛋白均是温度敏感的，因此无法通过加 热灭菌的方式除菌，可行的除菌方案包括全程无菌生产，或通过除菌过滤。在这种情况下， 去除有机溶剂之后得到的混悬液经过滤膜过滤除菌，随后进行冷冻干燥而得到固体。将这 种固体重悬于氯化钠溶液中。在一些实施方式中，将这种固体重悬于0.9%氯化钠溶液中， 使紫杉醇调整至5mg/ml附近。
[0048] 当采用离分方式分离治疗性纳米粒子时，在21000Xg下离心60分钟或等同的离 心条件。
[0049] 当采用透析方式分离治疗性纳米粒子时，采用超滤膜对根据本发明的方法所得到 的纳米粒子液体进行透析。在具体的实施方式中，采用截留分子量为300K的再生纤维素超 滤膜，以5%甘露醇为透析液对根据本发明的方法所得到的纳米粒子液体进行等体积透析， 透析倍数为5倍。
[0050] 当采用排阻色谱的方式分离治疗性纳米粒子时，采用排阻色谱柱分离治疗性纳米 粒子。在具体的实施方式中，采用琼脂糖凝胶色谱柱对根据本发明的方法所得到的纳米粒 子液体进行分离，收集对应于治疗性纳米粒子的洗脱峰。
[0051] 另一方面，本公开的一些实施方式还提供了一种制备包含治疗性纳米粒子的药物 组合物的方法，包括或由如下步骤组成：
[0052] 1)将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水 相；
[0053] 2)将油相和水相形成水包油的乳剂；
[0054] 3)去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液；
[0055] 4)分离获得治疗性纳米粒子；
[0056] 5)用含有可药用载体的溶液将治疗性纳米粒子重悬，得到所述药物组合物；
[0057] 6)任选地，当制备固体形式的药物组合物时，还包括冻干的步骤。
[0058] 在一些实施方式中，含有可药用载体的溶液是含有冻干赋形剂的溶液。在一些具 体的实施方式中，冻干赋形剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、右旋糖酐、人血清 白蛋白中的一种或多种。在【具体实施方式】中，治疗性纳米粒子悬浮于5%至10%的冻干 赋形剂溶液中。任选地，然后经冻干制备成冻干粉形式的药物组合物。在具体的实施方 式中，冻干赋形剂溶液选自5%甘露醇溶液、10%蔗糖溶液、5%右旋糖酐溶液、10%乳糖溶 液、10%海藻糖溶液、10%麦芽糖溶液、10%人血白蛋白溶液中的一种或多种。在一些具 体的实施方式中，治疗性纳米粒子在液体形式的药物组合物中的含量为〇. 1% -30%，优 选0.2% -10%，更优选0.5% -5%，例如1%。在一些具体的实施方式中，本发明的液体 形式药物组合物中活性药物（例如紫杉醇）的含量为〇· l-l〇〇mg/ml，优选0· 5-50mg/ml， 更优选l-20mg/ml，例如5mg/ml。治疗性纳米粒子在固体形式的药物组合物中的含量为按 重量计0· 1% -80%，优选0· 5% -50%，更优选1% -30%，例如2% -10%。在一些具体的 实施方式中，本发明的液体形式药物组合物中活性药物（例如紫杉醇）的含量为按重量计 0· 1% -80%，优选 0· 5% -50%，更优选 1% -30%，例如 2% -10%。
[0059] 作为一个替代，还可以采用另一种透析方式制备本公开的药物组合物，方法包括 或由如下步骤组成：
[0060] 1)将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水 相；
[0061] 2)将上述油相和水相形成水包油的乳剂；
[0062] 3)去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液；
[0063] 4)使用含有可药用载体的溶液对去除有机溶剂后得到的混悬液进行透析，得到所 述药物组合物；
[0064] 5)任选地，当制备固体形式的药物组合物时，还包括冻干的步骤。
[0065] 在一些实施方式中，含有可药用载体的溶液作为透析液，其是含有冻干赋形剂的 溶液。在一些具体的实施方式中，冻干赋形剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、右 旋糖酐、人血清白蛋白中的一种或多种。在【具体实施方式】中，治疗性纳米粒子悬浮于5 %至 10 %的冻干赋形剂溶液中。任选地，然后经冻干制备成冻干粉形式的药物组合物。在具体的 实施方式中，冻干赋形剂溶液选自5 %甘露醇溶液、10 %蔗糖溶液、5 %右旋糖酐溶液、10 % 乳糖溶液、10%海藻糖溶液、10%麦芽糖溶液、10%人血白蛋白溶液中的一种或多种。在一 些实施方式中，采用300k的超滤膜进行透析。
[0066] 另一方面，本公开的一些实施方式还提供了治疗性纳米粒子在制备用于治疗癌症 的药物中的用途。癌症选自肝癌、前列腺癌和肺癌。
[0067] 另一方面，本公开的一些实施方式还提供了治疗性纳米粒子，其用于治疗癌症。优 选地，所述癌症选自肝癌、前列腺癌和肺癌。
[0068] 另一方面，本公开还提供了一种药盒，其含有根据本公开的治疗性纳米粒子或药 物组合物。根据需要，药盒还包含使用说明书、包装、容纳治疗性纳米粒子或药物组合物的 容器。
[0069] 另一方面，本公开还提供了一种治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效 量的所述治疗性纳米粒子或所述药物组合物的步骤。在【具体实施方式】中，受试者是哺乳动 物，包括但不限于人类、犬、小鼠、大鼠。
[0070] 本发明人出人意料地发现，白蛋白与活性成分形成的初始纳米粒子（或者组合 物）实际上是少量粒子分散（或者镶嵌）于大量支撑剂（白蛋白）中，而通过分离或者纯 化的手段就能够得到性质更加优异的纯或基本上纯的纳米粒子。
[0071] 本发明人出人意料地发现，与现有技术中的教导不同，即便大大降低人血清白蛋 白与活性成分的比例，仍然能够得到稳定且具有功能的治疗性纳米粒子。相比于高血清白 蛋白：活性成分比例的组合物，本发明的治疗性纳米粒子大大降低了致敏性，降低了副作 用，改善或者至少保持稳定性、药代动力学性质。
[0072] 进一步地，本发明人还出人意料地发现，通过将初始纳米粒子分离和/纯化成为 纯或基本上纯的纳米粒子，就进一步改善了纳米粒子的性能，例如大大降低了致敏性，降低 了副作用，改善或者至少保持稳定性、药代动力学性质。优选地，所述纯化通过离子、透析、 柱层析等方式进行。
[0073] 在一些方面，本发明的纳米粒子具有特定的粒径，例如30nm-200nm，优选 50-190nm。优选地，所述粒径是基本均一的。这些性质至少部分地贡献于本发明粒子的优 异性能。
[0074] 在另一些方面，本发明的纳米粒子具有较高的zeta电位，使得本发明的纳米粒子 十分稳定。

【专利附图】

【附图说明】
[0075] 图1.实施例5的样品的电镜扫描照片。
[0076] 图2.从实施例5的样品制得的纳米粒子的电镜扫描照片。
[0077] 图3.紫杉醇的X衍射图谱。
[0078] 图4.白蛋白冻干粉的X衍射图谱。
[0079] 图5.对应于实施例2的紫杉醇白蛋白纳米粒子的X衍射图谱。
[0080] 图6.对应于实施例4的紫杉醇白蛋白纳米粒子的X衍射图谱。
[0081] 图7.对应于实施例6的紫杉醇白蛋白纳米粒子的X衍射图谱。
[0082] 图8.对应于实施例8的紫杉醇白蛋白纳米粒子的X衍射图谱。
[0083] 图9.不同制剂纯粒子的体外释放曲线。
[0084] 图10.纯粒子与普通制剂体外释放曲线。
[0085] 图11.纯粒子与普通制剂的犬药代动力学曲线。

【具体实施方式】
[0086] 定义
[0087] 除非另有定义，本文使用的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同 含义。
[0088] 尽管本发明的广义范围所示的数字范围和参数近似值，但是具体实施例中所示的 数值尽可能准确的进行记载。然而，任何数值本来就必然含有一定的误差，其是由它们各 自的测量中存在的标准偏差所致。另外，本文公开的所有范围应理解为涵盖其中包含的任 何和所有子范围。例如记载的"1至10"的范围应认为包含最小值1和最大值10之间（包 含端点）的任何和所有子范围；也就是说，所有以最小值1或更大起始的子范围，例如1至 6. 1，以及以最大值10或更小终止的子范围，例如5. 5至10。另外，任何称为"并入本文"的 参考文献应理解为以其整体并入。
[0089] 另外应注意，如本说明书中所使用的，单数形式包括其所指对象的复数形式，除非 清楚且明确的限于一个所指对象。术语"或"可与术语"和/或"互换使用，除非上下文另 有清楚指明。
[0090] 本文使用的术语"纳米粒子"表示在至少一个维度（例如一个、两个或三个维度） 上具有纳米级尺寸的粒子，例如约lnm、约10nm、约IOOnm级别的尺寸。
[0091] 本文使用的术语"治疗性纳米粒子"表示可用于治疗或预防疾病的纳米粒子，所述 疾病例如癌症，优选肝癌、前列腺癌和肺癌。
[0092] 本文使用的术语"活性成分"表示药物活性成分。特别地，所述活性成分表示能 够起到治疗作用（例如治疗、预防、缓解或抑制任何疾病和/或病症）的任何物质或实体 (entity)，其包括但不限于：化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、热治疗剂（thermally therapeutic agent)等。例如氨鲁米特、硫唑噪呤、硫酸博来霉素、白消安、卡莫司汀、苯丁 酸氮芥、顺钼、环磷酰胺、环孢霉素、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、紫杉醇、依托泊 苷、氟尿嘧啶、干扰素-α、洛莫司汀、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米托坦、盐酸丙卡巴肼、硫鸟嘌呤、 硫酸长春碱和硫酸长春新碱。
[0093] 根据本发明的药物组合物、疫苗或者药物制剂可通过任何适宜的途径施用，例如 可口服、鼻、皮内、皮下、肌内或静脉内施用。
[0094] 实施例
[0095] 下述实施例旨在为了更好的揭示本公开的治疗性纳米粒子及药物组合物，而非限 制本公开的任何方面。
[0096] 实施例1
[0097] 将3g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在20ml的 氯仿/乙醇（9 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（5% w/v) (CAS : 70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（型号F22E，上 海弗鲁克流体机械制造有限公司）匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号 M110-EH30K，美国MFIC公司）在10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移 至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热,40mbar减压蒸发去除 溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇白蛋白纳米粒子平均直径为136nm，混悬液呈半透明状。
[0098] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0099] 实施例2
[0100] 将〇. 32g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml 的氯仿/乙醇（11 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS :70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（型号F22E， 上海弗鲁克流体机械制造有限公司）匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号 M110-EH30K，美国MFIC公司）在10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移 至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热,40mbar减压蒸发去除 溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇白蛋白纳米粒子平均直径为145nm，混悬液呈半透明状。
[0101] 混悬液可顺利经〇. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0102] 实施例3
[0103] 将0. 63g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml 的氯仿/乙醇（11 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS :70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20)匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司） 在10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞 士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热,40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂,产生的紫杉 醇白蛋白纳米粒子平均直径为141nm，混悬液呈半透明状。
[0104] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0105] 实施例4
[0106] 将I. 25g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml 的氯仿/乙醇（11 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS :70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（F22Z型， fluko)匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司） 在10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞 士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热,40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂,产生的紫杉 醇白蛋白纳米粒子平均直径为138nm，混悬液呈半透明状。
[0107] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0108] 实施例5
[0109] 将I. 88g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml 的氯仿/乙醇（11 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS :70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20)匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司） 在10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞 士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热,40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂,产生的紫杉 醇白蛋白纳米粒子平均直径为133nm，混悬液呈半透明状。
[0110] 混悬液可顺利经〇. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0111] 实施例6
[0112] 将2. 5g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml的 氯仿/乙醇（11 : l，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS : 70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20) 匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司）在 10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热，40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇 白蛋白纳米粒子平均直径为125nm，混悬液呈半透明状。
[0113] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0114] 实施例7
[0115] 将5g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml的 氯仿/乙醇（11 : l，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS : 70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20) 匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司）在 10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热，40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇 白蛋白纳米粒子平均直径为134nm，混悬液呈半透明状。
[0116] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0117] 实施例8
[0118] 将7. 5g的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在15ml的 氯仿/乙醇（11 : l，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（4% w/v) (CAS : 70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20) 匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司）在 10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热，40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇 白蛋白纳米粒子平均直径为140nm，混悬液呈半透明状。
[0119] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0120] 实施例9
[0121] 将Ig的紫杉醇（CAS :33069-62-4,云南汉德生物技术有限公司）溶解在20ml的 氯仿/乙醇（4 : 1，v/v)中，然后上述溶液加入500ml的人血白蛋白溶液（2% w/v) (CAS : 70024-90-7,广东双林生物制药有限公司），将混合物采用高剪切分散机（fluko FZ-20) 匀浆2分钟，形成初乳液，然后采用高压均质机（型号M110-EH30K，美国MFIC公司）在 10000-20000psi下进行均质，得到纳米乳，将纳米乳转移至旋转蒸发仪（型号R-210,瑞士 Buchi公司）中，于40°C水浴加热，40mbar减压蒸发去除溶液中的有机溶剂，产生的紫杉醇 白蛋白纳米粒子平均直径为136nm，混悬液呈半透明状。
[0122] 混悬液可顺利经0. 22微米的除菌滤膜（德国赛多利斯公司）过滤，滤后粒子粒径 未发生显著改变，混悬液室温放置48小时未见有显著变化。将混悬液分装后置于冻干机 (型号LD-85S，美国Millrock公司）中冷冻干燥24小时，得到稳定的类白色饼块。
[0123] 实施例10.人血白蛋白和紫杉醇含量的测定方法
[0124] 人血白蛋白含量测定采用HPLC法。在228nm的检测波长下，使用配有Tosohaas TSK G3000SWXL凝胶色谱柱的紫外检测器（1260VWD G1314B，Agilent technologies)，流动 相为0. lmol/L磷酸氢二钾溶液，进样体积10 μ 1，采用外标法计算白蛋白含量。
[0125] 供试品溶液制备：米用0. 9%氣化纳溶液将待测溶液稀释至白蛋白浓度低于3mg/ ml,作为供试品溶液。
[0126] 紫杉醇含量测定采用HPLC法。使用配有C18反相色谱柱的紫外检测器（1260VWD G1314B，Agilent technologies),检测波长 228nm，流动相为乙腈-水（I : l，v/v)，进样体 积1〇μ 1，采用外标法计算紫杉醇含量。
[0127] 供试品溶液制备：采用乙腈将待测溶液稀释至紫杉醇完全溶解，浓度20-200 μ g/ ml,作为供试品溶液。
[0128] 实施例11
[0129] 取实施例1所得产品加入0. 9%氯化钠溶液复溶得到样品1，使得紫杉醇含量为 5mg/ml。然后，使用含5 %白蛋白的模拟血浆稀释样品1，使得紫杉醇含量至20 μ g/ml，得到 样品2(该条件下粒子已完全崩解，无紫杉醇和人血清白蛋白结合的粒子存在）。分别取样 品1和样品2各lml，在21000Xg条件下离心不同时间。采用实施例10中的方法测定上清 液中紫杉醇和白蛋白浓度，结果见表1。
[0130] 表1.不同离心时间上清液中紫杉醇和白蛋白浓度
[0131]

【权利要求】
1. 一种治疗性纳米粒子，其包含活性成分和人血清白蛋白，其中所述治疗性纳米粒 子中人血清白蛋白和活性成分的重量比选自0.01 : 1、〇. 02 : 1、0. 04 : 1、0. 05 : 1、 0.06 : 1、0.07 : 1、0.08 : 1、0.09 : 1、0.10 : 1、0.11 : 1、0.12 : 1、0.13 : 1、0.14 : 1、 0.15 : 1、0.16 : 1、0.17 : 1、0.18 : 1、0.19 : 1、0.2 : 1、0.21 : 1、0.22 : 1、0.23 : 1、 0.24 : 1、0.25 : 1、0.26 : 1、0.27 : 1、0.28 : 1、0.29 : 1、0.3 : 1、0.31 : 1、0.32 : 1、 0.33 : 1、0.34 : 1、0.35 : 1、0.36 : 1、0.37 : 1、0.38 : 1、0.39 : 1、0.4 : 1、0.41 : 1、 0.42 : 1、0.43 : 1、0.44 : 1、0.45 : 1、0.46 : 1、0.47 : 1、0.48 : 1、0.49 : 1、0.5 : 1、 0.51 : 1、0.52 : 1、0.53 : 1、0.54 : 1、0.55 : 1、0.56 : 1、0.57 : 1、0.58 : 1、0.59 : 1、 0.6 : 1、0.65 : 1、0.70 : 1、0.75 : 1、0.8 : 1、0.85 : 1、0.9 : 1、0.95 : 1、1 : 1、 1.5 : 1、2 : 1、2.5 : 1、3 : 1、3.5 : 1、4 : 1、4.5 : 1、5 : 1、5.5 : 1、6 : 1、6.5 : 1、 7 : 1、7. 5 : 1、8 : 1、8. 5 : 1或上述任意两个比例之间的范围。
2. 如权利要求1所述的治疗性纳米粒子，其中人血清白蛋白和活性成分的重量比选自 0.03 : 1、0.04 : 1、0.05 : 1、0.06 : 1、0.07 : 1、0.08 : 1、0.09 : 1、0.10 : 1、0.11 : 1、 0.12 : 1、0.13 : 1、0.14 : 1、0.15 : 1、0.16 : 1、0.17 : 1、0.18 : 1、0.19 : 1、0.2 : 1、 0.21 : 1、0.22 : 1、0.23 : 1、0.24 : 1、0.25 : 1、0.26 : 1、0.27 : 1、0.28 : 1、0.29 : 1、 0.3 : 1、0.31 : 1、0.32 : 1、0.33 : 1、0.34 : 1、0.35 : 1、0.36 : 1、0.37 : 1、0.38 : 1、 0.39 : 1、0.4 : 1、0.41 : 1、0.42 : 1、0.43 : 1、0.44 : 1、0.45 : 1、0.46 : 1、0.47 : 1、 0.48 : 1、0.49 : 1、0.5 : 1、、0.6 : 1、0.7 : 1、0.8 : 1、0.9 : 1 或上述任意两个比例之 间的范围，例如0.03 : 1至0.19 : 1或0.21 : 1至0.9 : 1。
3. 如权利要求1所述的治疗性纳米粒子，其中所述活性成分具有以下特性：水中不溶 或微溶、在特定有机溶剂中可溶或易溶。
4. 如权利要求3所述的治疗性纳米粒子，其中所述活性成分选自紫杉烷类药物，其包 括但不限于紫杉醇、多烯紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、多西他赛亲脂衍生物；大环内酯类药 物，其包括但不限于雷帕霉素及其衍生物、埃博霉素 B及其衍生物，坦螺旋霉素及其衍生物 等；喜树碱类药物，其包括但不限于10-羟基喜树碱、SN38及其衍生物等；蒽环类药物，其包 括但不限于阿柔比星、吡柔比星等；以及其他活性成分包括秋水仙碱及其衍生物、硫代秋水 仙碱二聚体、胺碘达隆、碘塞罗宁、环孢菌素、依西美坦、氟他胺、氟维司群、罗米地辛、司莫 司汀、长春碱、布洛芬等。
5. 如权利要求4所述的治疗性纳米粒子，其中所述活性成分选自紫杉烷类，优选地选 自紫杉醇和多西他赛中的一种或多种。
6. 如权利要求3所述的治疗性纳米粒子，其中所述特定有机溶剂为水中溶解度低、沸 点低的纯溶剂或者其与乙醇、叔丁醇、异丙醇等小分子醇类的混合溶剂，包括但不限于三氯 甲烷、二氯甲烷等。
7. 如权利要求1所述的治疗性纳米粒子，其中所述活性成分包裹在人血清白蛋白内。
8. 如权利要求1所述的治疗性纳米粒子，其中治疗性纳米粒子的平均粒径选自：30、 40、50、60、70、80、90、100、110、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、 132、133、134、135、136、137、138、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、 152、153、154、155、156、157、158、159、160、165、170、175、180、185、190、195、200nm、或上述 任意两个数值之间的范围。
9. 一种治疗性纳米粒子，其包含活性成分和人血清白蛋白，活性成分包裹在人血清白 蛋白内；人血清白蛋白和活性成分的重量比在0.03 : 1至0.7 : 1之间；治疗性纳米粒子 的平均粒径在50nm至190nm之间。
10. -种药物组合物，其含有如权利要求1-9任一项所述的治疗性纳米粒子。
11. 如权利要求10所述的药物组合物，其中所述药物组合物为液体或冻干粉形式。
12. 如权利要求10所述的药物组合物，当所述药物组合物为冻干粉形式时，还含有冻 干赋形剂。
13. 如权利要求12所述的药物组合物，其中所述冻干赋形剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、 麦芽糖、海藻糖、右旋糖酐、人血清白蛋白中的一种或多种。
14. 一种制备如权利要求1-9中任一项所述的治疗性纳米粒子的方法，含有如下步骤： 1) 将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水相； 2) 将上述油相和水相形成水包油的乳剂； 3) 去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液； 4) 分离获得治疗性纳米粒子。
15. 如权利要求14所述的方法，其中所述有机溶剂选自氯仿和乙醇中的一种或多种。
16. 如权利要求14所述的方法，其中步骤4)中所述分离是通过选自如下的方法进行 的：离心、透析、和排阻色谱。
17. -种制备如权利要求10-13中任一项所述的药物组合物的方法，含有如下步骤： 1) 将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水相； 2) 将上述油相和水相形成水包油的乳剂； 3) 去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液； 4) 分离获得治疗性纳米粒子； 5) 采用含有赋形剂的溶液将治疗性纳米粒子重悬； 6) 任选地冻干，得到所述药物组合物。
18. -种制备如权利要求10-13中任一项所述的药物组合物的方法，含有如下步骤： 1) 将活性成分溶解于有机溶剂中形成油相，将人血清白蛋白溶解于水中形成水相； 2) 将上述油相和水相形成水包油的乳剂； 3) 去除乳剂中的有机溶剂，得到含治疗性纳米粒子的混悬液； 4) 使用含有赋形剂的溶液对去除有机溶剂后得到的混悬液进行透析； 5) 任选地冻干，得到所述药物组合物。
19. 一种治疗癌症的方法，其包括： 向受试者施用治疗有效量的如权利要求1-9任一项所述治疗性纳米粒子或如权利要 求10-13任一项所述药物组合物的步骤。
【文档编号】A61K45/00GK104434808SQ201410652037
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月17日 优先权日:2014年7月3日
【发明者】李春雷, 李彦辉, 梁敏, 王彩霞, 王世霞, 陈东健, 李永丰 申请人:石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司