高纯度闰年霉素a4的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种高纯度闰年霉素A4的制备方法，该方法包括以下步骤：a、将闰年霉素A4发酵液过滤得到菌丝体，然后用极性溶剂浸泡菌丝体并进行固液分离，得闰年霉素A4浸提液；b、将闰年霉素A4浸提液浓缩后用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩干燥得到闰年霉素A4粗粉；c、将闰年霉素A4粗粉加入有机溶剂溶解，用0.45μm滤膜过滤，得到上样液；d、将上样液加入装有C18的中压层析柱中，加入洗脱溶剂，收集HPLC含量≥98.5％的洗脱液，浓缩，过滤，真空干燥得到高纯度闰年霉素A4产品。本发明所述化合物闰年霉素A4的制备方法操作简便，样品回收率高，适合高纯度抗耐药抗生素的生产。
【专利说明】高纯度闰年霉素 A4的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物化学【技术领域】，涉及一种大环内酯类化合物的制备方法，更确切 的说是涉及闰年霉素 A4的制备方法。
【背景技术】
[0002] 闰年霉素 A4是通过指孢囊菌发酵产生的一种18元环结构的新型大环内酯类抗生 素，属于窄谱型抗菌化合物，对革兰氏阳性需氧及厌氧菌具有优良的抗菌作用。其分子式为 C51H72C12O18，分子量为1044. 04,结构式如式I所示：
[0003]
【权利要求】
1. 一种高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤： a、 常温下将闰年霉素 A4发酵液过滤得到菌丝体，然后用极性溶剂浸提菌丝体并进行 固液分离，得闰年霉素 A4浸提液； b、 将闰年霉素 A4浸提液减压浓缩，得到浓缩液，然后用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩干 燥后得到闰年霉素 A4粗粉； c、 将闰年霉素 A4粗粉加入有机溶剂溶解，用0. 45 y m滤膜过滤，得到上样液； d、 将上样液加入装有C18的中压层析柱中，加入洗脱溶剂，收集HPLC含量> 98. 5%的 洗脱液，然后减压浓缩、过滤、真空干燥后得到高纯度闰年霉素 A4产品。
2. 根据权利要求1所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：a步骤所述的极 性溶剂为体积百分浓度为80?95%的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液，浸提时间为 2?4h，极性溶剂的加入量为每千克菌丝中加入2?4升。
3. 根据权利要求1或2任一项所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：c步 骤所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈中任意一种，有机溶剂的毫升数与闰年霉素粗粉克数的 比例为3:1至5:1。
4. 根据权利要求1或2任一项所述高纯度闰年霉素的制备方法，其特征在于：d步骤所 述洗脱溶剂为甲醇、乙醇、乙腈中任意一种与有机酸和水的混合液，有机酸为三氟乙酸或乙 酸，有机酸与水的体积比例为1:10000至5:10000。
5. 根据权利要求1或2任一项所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：d步 骤所述真空干燥，是将滤饼置于30?50°C、真空度彡0. 08Mpa条件下，真空干燥4?12h。
6. 根据权利要求1所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：d步骤所述反相 硅胶C18的粒径为30 ii m，用量为闰年霉素 A4粗品质量的50?100倍。
7. 根据权利要求1所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：b步骤所述乙酸 乙酯萃取时，乙酸乙酯与浓缩液的体积比例为1:1至3:1，萃取时间为2?4小时。
8. 根据权利要求1所述高纯度闰年霉素 A4的制备方法，其特征在于：b步骤、d步骤所 述减压浓缩，浓缩温度为35?50°C，真空度大于0. 08Mpa，浓缩至有机溶剂浓度低于10%。
【文档编号】A61P31/04GK104497079SQ201410687825
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】张雪霞, 李晓露, 任风芝, 王海燕, 高月麒, 林旸, 张丽, 段宝玲 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司