一种丹参冲剂的制备方法及其检测方法
【专利摘要】本发明提供一种丹参冲剂的制备方法及其检测方法，该制备方法是以丹参为原料，使用乙醇浸泡提取，制成清膏，加入辅料制粒而得产品，其方法简单，有效成分保留完全，含量较高，成本低廉，能保证所制得的丹参冲剂的质量，也适合工业化生产。该检测方法中的成分检测是用丹参对照药材、丹参酮ⅡA对照品、隐丹参酮对照品、丹参素对照品、丹酚酸B对照品、原儿茶醛对照品为对照进行有效成分检测，含量测定是以丹酚酸B为对照品，所采用的成分检测方法专属性强，含量测定准确度高，其有效成分保留完全，含量稳定，保证了所制得的丹参冲剂的质量，从而保证了丹参中的各成分发挥协同增效的作用，保证了丹参冲剂的疗效，保护了群众的健康。
【专利说明】一种丹参冲剂的制备方法及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种以丹参为原料制备成冲剂的方法以及该冲剂的检测方法，特别涉 及一种丹参冲剂的制备方法和检测方法。
【背景技术】
[0002] 丹参冲剂（丹参颗粒）原标准收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第六册，标 准编号为WS3-B-1107-92,是一种纯中药的中成药单方制剂，有活血化瘀的作用，临床主要 用于冠心病引起的心绞痛症的治疗。随着人们生活水平的提高，心血管方面的疾病呈上升 趋势，有心绞痛症的人也越来越多。但是，人们发现，本来应该对治疗此类疾病有很好的作 用的丹参冲剂，其作用却不尽如人意，效果很不稳定，究其原因，丹参冲剂（丹参颗粒）原 标准是上个世纪80年代制定的，是1992年收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第六册 的，限于当时科技水平，当时的标准很低，检测方法中仅有一个分光光度法检查、两个显色 反应。这几个方法的专属性都不强，没有更加全面的检测方法，也没有含量检测措施。另外， 丹参冲剂的制备方法也有很大的问题，限于原标准制定时对丹参主要成分和相应成分的性 质和作用的认知水平，也没有先进的设备设施，所以没有很好地监测丹参的提取和颗粒的 制备过程的温度、时间、提取溶剂和压强等工艺条件，以至于提取有效成分不完全。另外因 为提取的时间过长，浓缩的温度过高等原因，最后留下的有效成分不全面和含量不高，最终 造成冲剂的质量不好，最后表现为最终制成的冲剂的治疗作用不尽如人意，效果很不稳定。
[0003] 现代研究表明，丹参中含有丹参酮II A、隐丹参酮、丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛等 多种成份，这些成分都有扩张冠状动脉、改善冠状动脉循环、抑制血栓等作用，这些成分合 在一起具有协同增效作用，所以丹参具有活血化瘀，理气止痛的功效，对心血管系统有很好 的作用，如加强心肌收缩力、改善心脏功能、扩张冠脉、增加心肌血流量、抗血栓形成、降低 血粘度等，总体表现出丹参的养血、活血、化瘀、止痛、生新血等作用与功效。但是丹参的主 要有效成分丹参酮II A和丹酚酸B等性质均不稳定，不耐高温，甚至于在高于60°C的温度时 低浓度下受热20分钟左右即损失50%以上。
[0004] 所以，原标准的制备方法存在很大的问题，所制成的冲剂也没有好的成分、含量检 测方法，不能保证产品的质量，不能保证产品的疗效，对资源是一种浪费，对患者的治疗也 是一种延误。
[0005] 对于丹参有效成分的提取方法，目前都存在很大的缺陷，如提取过程中有效成分 损失很大、提取后无法制成高浓度浸膏、提取过程太繁琐、提取过程有易燃易爆危险等。所 以，找到一种能解决以上问题，保证药品质量，保证药品安全有效的制备方法和检测方法， 让患者早日康复，保护群众健康，是人们的期盼和愿望。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种丹参冲剂的制备方法及其检测方法，该制备方法能够有 效的保持丹参中丹参酮II A和丹酚酸B等有效成分的活性，而检测方法针对制备的丹参冲 剂进行成分检测和含量检测，以此有效的监测丹参冲剂中有效成分的含量及活性，保证药 品的疗效。
[0007] 本发明采用的技术方案如下：
[0008] 本发明所述的丹参冲剂是这样构成的：丹参IOOOg和适量辅料制备而成。
[0009] 丹参冲剂的制备方法：
[0010] 取丹参lOOOg，粉碎成粗粉，置渗滤罐中，取40?70 %的乙醇4000?5000ml，加入 渗滤罐中，至乙醇液面正好高出丹参粗粉2?10厘米为止，于10?30°C浸泡20?40小时， 然后以每分钟30?IOOml的速度由渗滤罐底端放出渗滤液，收集备用，在开始由渗滤罐底 端放出渗滤液的同时，将剩余乙醇从渗滤罐的顶端以同底端放出速度一样的速度加入，力口 完为止，继续收集渗滤液，待渗滤罐中的渗滤液放尽为止，将以上收集的全部渗滤液滤过， 滤液于45?55°C减压回收乙醇，制成相对密度为1. 25?1. 30的清膏，加入重量为清膏重 量4?5倍的蔗糖粉，再加入枸橼酸10g、香精适量，混合均匀，制成颗粒，置于沸腾干燥器中 85?95°C进行干燥，即得。
[0011] 其中：所述浸泡温度优选25°C。
[0012] 所述乙醇优选55%的乙醇。
[0013] 所述乙醇用量优选4500ml。
[0014] 所述乙醇高出丹参粗粉6厘米。
[0015] 所述乙醇浸泡时间优选30小时。
[0016] 所述放出渗滤液的速度优选每分钟60ml。
[0017]丹参冲剂的检测方法，该检测方法包括性状、成分检测和含量检测项目中的部分 或全部，其中：
[0018](1)性状：本品应为黄掠色至掠褐色的颗粒；
[0019] (2)成分检测：
[0020] 取本品2g，研细，加乙醚5ml，振摇，放置1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯 Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0021] 取丹参对照药材lg，研细，加乙醚5ml，振摇，放置1小时，滤过，滤液挥干，残渣加 乙酸乙酯Iml使溶解，作为对照药材溶液；
[0022] 吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯的体 积比=17?21 : 0.7?1.3为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应位置上，应显相同颜色的斑点；
[0023] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=82:18为流动相A，以乙腈：水： 甲酸的体积比=26:73:1为流动相B，按照下述方式进行梯度洗脱，流动相A与流动相B之 比以体积百分比计，流速为每分钟〇. 8ml，柱温为30°C，检测波长为280nm，理论板数按丹参 酮II A峰计算应不低于5000;
[0024] 0?25分钟，流动相A(% ) :89?58,流动相B(% ) :11?42
[0025] 25?27分钟，流动相A(% ) :58?0,流动相B(% ) :42?100
[0026] 27?50分钟，流动相A(%):0,流动相B(%):100
[0027]取本品0. 5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在 功率为120W，频率为59KHZ的条件下超声处理20分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足 减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0028] 取丹参酮II A对照品、隐丹参酮对照品、丹参素对照品、丹酚酸B对照品、原儿茶 醛对照品，精密称定，分别加甲醇制成每Iml含丹参酮II A15 y g、隐丹参酮15 y g、丹参素 0. 18mg、丹酚酸BO. 15mg、原儿茶醛0. IOmg的溶液，即得对照品溶液；
[0029] 分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 Ul，注入液相色谱仪，测定，记录50 分钟色谱图，即得；
[0030] 供试品色谱图中，应分别呈现与对照品色谱保留时间相应的色谱峰；
[0031] (3)含量检测：
[0032] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：乙腈：甲酸：水的体积比= 30:10:1:59为流动相，检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000;
[0033] 取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每Iml含0. 14mg的溶液，即得对照品溶液；
[0034] 取本品0. 4g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入75%甲醇50ml，称定重量，在 功率为120W，频率为50KHZ的条件下超声处理20分钟，取出，放冷，再称定重量，用75%甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0035] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
[0036] 本品每袋含丹酚酸B (C36H3tlO16)不得少于80mg。
[0037] 其中：步骤⑴所述的展开剂苯：乙酸乙酯的体积比=19 : 1。
[0038] 为了确保本发明的制法和质量检测方法科学、合理、可行，本 申请人:对方法中成分 检测、含量检测方法进行了研究，具体实验资料如下：
[0039](一）不同制备方法有效成分含量的比较
[0040] 发明人用传统丹参冲剂的制备方法和本发明的丹参冲剂的制备方法分别用质量 一致的同一批丹参药材（丹参酮II A含量为0.21%，丹酚酸B含量为4.9% )各制备了 3 批次，共6批次丹参冲剂（每1克冲剂含丹参药材1克），然后分别测定其主要有效成分丹 参酮II A、丹酚酸B的含量。
[0041] 原丹参冲剂的制备方法（标准编号：WS3-B-1107-92,卫生部药品标准《中药成方 制剂》第六册）是：
[0042] 取丹参lOOOg，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1. 5小时，滤过，合并滤 液，浓缩至500ml，加等量乙醇，充分搅拌，静置沉淀12小时，取上清液回收乙醇，浓缩至相 对密度为1. 30?1. 40 (热测），加入枸橼酸10g、香精与蔗糖适量制成颗粒，干燥，即得。
[0043] 本发明的丹参冲剂的制备方法是：
[0044] 取丹参lOOOg，粉碎成粗粉，置渗滤罐中，压紧，取55%的乙醇4500ml，加入渗滤罐 中，至乙醇液面正好高出丹参粗粉6厘米为止，于25°C浸泡30小时，然后采用渗漉的动态提 取方法，以每分钟60ml的速度由渗滤罐底端放出渗滤液，收集备用；在开始由渗滤罐底端 放出渗滤液的同时，将剩余乙醇从渗滤罐的顶端以同底端放出速度一样的速度加入，加完 为止，继续收集渗滤液，待渗滤罐中的渗滤液放尽为止，将以上收集的全部渗滤液滤过，滤 液于50°C减压回收乙醇,制成相对密度为1. 25?1. 30的清膏,加入重量为清膏重量4?5 倍的蔗糖粉，再加入枸橼酸l〇g、香精适量，混合均匀，制成颗粒，置于沸腾干燥器中90°C进 行干燥，即得。
[0045] 含量测定方法是：
[0046] 丹参酮II A的含量测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇：水的体积比= 75:25为流动相，检测波长为270nm ;理论板数按丹参酮II A峰计算应不低于2000 ;
[0047] 精密称取丹参酮II A对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精 密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每Iml中含丹参酮II A 16 iig 的对照品溶液；取本品〇. 5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重 量，经功率120W、频率59KHZ超声处理15?25分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减 失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
[0048] 丹酚酸B的含量测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：乙腈：甲 酸：水的体积比=30:10:1:59为流动相，检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应 不低于2000 ;
[0049] 取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每Iml含0. 14mg的溶液，即得对照品溶液；
[0050] 取本品0. 5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重 量，功率120W、频率59KHZ超声处理20分钟，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0051] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测定，即得；
[0052] 实验结果如表1所示：
[0053] 表1原丹参冲剂的制备方法和本发明的丹参冲剂的制备方法所制得的丹参冲剂 有效成分含量比较
[0054]
【权利要求】
1. 一种丹参冲剂的制备方法，其特征在于： 取丹参lOOOg，粉碎成粗粉，置渗滤罐中，取40?70%的乙醇4000?5000ml，加入渗滤 罐中，至乙醇液面正好高出丹参粗粉2?10厘米为止，于10?30°C浸泡20?40小时，然 后以每分钟30?100ml的速度由渗滤罐底端放出渗滤液，收集备用，在开始由渗滤罐底端 放出渗滤液的同时，将剩余乙醇从渗滤罐的顶端以同底端放出速度一样的速度加入，加完 为止，继续收集渗滤液，待渗滤罐中的渗滤液放尽为止，将以上收集的全部渗滤液滤过，滤 液于45?55°C减压回收乙醇，制成相对密度为1. 25?1. 30的清膏，加入重量为清膏重量 4?5倍的蔗糖粉，再加入枸橼酸10g、香精适量，混合均匀，制成颗粒，置于沸腾干燥器中 85?95°C进行干燥，即得。
2. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述浸泡温度为25°C。
3. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述乙醇为55%的乙醇。
4. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述乙醇用量为4500ml。
5. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述乙醇高出丹参粗粉6 厘米。
6. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述乙醇浸泡时间为30小 时。
7. 根据权利要求1所述丹参冲剂的制备方法，其特征在于：所述放出渗滤液的速度为 每分钟60ml。
8. -种权利要求1至7中任意一项所述丹参冲剂的检测方法，该检测方法包括性状、成 分检测和含量检测项目中的部分或全部，其特征在于： (1)成分检测： 取本品2g，研细，加乙醚5ml，振摇，放置1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml 使溶解，作为供试品溶液； 取丹参对照药材lg，研细，加乙醚5ml，振摇，放置1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸 乙酯lml使溶解，作为对照药材溶液； 吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯的体积比 =17?21 : 0.7?1.3为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 位置上，应显相同颜色的斑点； 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=82:18为流动相A，以乙腈：水：甲酸 的体积比=26:73:1为流动相B，按照下述方式进行梯度洗脱，流动相A与流动相B之比以体 积百分比计，流速为每分钟0. 8ml，柱温为30°C，检测波长为280nm，理论板数按丹参酮II A 峰计算应不低于5000 ; 0?25分钟，流动相A (%) :89?58,流动相B (%) :11?42 25?27分钟，流动相A (%) :58?0,流动相B (%) :42?100 27?50分钟，流动相A (%) :0,流动相B (%) :100 取本品0. 5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率 为120W，频率为59KHZ的条件下超声处理20分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失 重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液； 取丹参酮II A对照品、隐丹参酮对照品、丹参素对照品、丹酚酸B对照品、原儿茶醒对 照品，分别加甲醇制成每lml含丹参酮II A15Pg、隐丹参酮15呢、丹参素0. 18mg、丹酚酸 BO. 15mg、原儿茶醛0? 10mg的溶液，即得对照品溶液； 分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各1〇沿，注入液相色谱仪，测定，记录50分钟 色谱图，即得； 供试品色谱图中，应分别呈现与对照品色谱保留时间相应的色谱峰； (2)含量检测： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：乙腈：甲酸：水的体积比=30:10:1:59 为流动相，检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ; 取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每lml含0. 14mg的溶液，即得对照品溶液； 取本品0. 4g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入75%甲醇50ml，称定重量，在功率 为120W，频率为50KHZ的条件下超声处理20分钟，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液； 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇沿，注入液相色谱仪，测定，即得； 本品每袋含丹酚酸B(C36H3Q016)不得少于80mg。
9.根据权利要求8所述丹参冲剂的检测方法，其特征在于：步骤（1)所述的展开剂苯： 乙酸乙酯的体积比=19 : 1。
【文档编号】A61K9/16GK104474016SQ201410815298
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月24日 优先权日:2014年12月24日
【发明者】钟茂团, 黎黎, 邹波, 何德中, 常小平, 杨辉 申请人:九寨沟天然药业集团有限责任公司