人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉及其制备和应用的制作方法

文档序号:11896396阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉,其特征在于,按质量百分比包括以下组分:人脐带间充质干细胞无血清培养液活性蛋白成分1~3%,磷脂15~60%,胆固醇1~12%,吐温-80 1~25%,脂溶性抗氧化剂0.5~10%,冻干保护剂10~60%,水1~5%,以上各组分的质量总和是100%。

2.根据权利要求1所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉,其特征在于,所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、氢化大豆磷脂、脑磷脂、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二肉豆寇酸磷脂酰胆碱、二月桂酸磷脂酰胆碱或二棕榈酸磷脂酰乙醇胺中的一种或几种的任意比例混合物;所述脂溶性抗氧化剂为维生素E、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、泛醌或叔丁基对苯二酚中的一种或几种的任意比例混合物;所述冻干保护剂为海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、棉籽糖、右旋糖苷、甘露醇、山梨醇或木糖醇中的一种或几种的任意比例混合物。

3.一种如权利要求1所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1,制备空白脂质体悬液;

首先将磷脂、胆固醇、吐温-80和脂溶性抗氧化剂溶于无水乙醇,得到原料溶液;再将该原料溶液缓慢加入到含有冻干保护剂的磷酸盐缓冲液中,进行水化,得到浅黄色乳浊液;然后去除乳浊液中的所有乙醇,最后对乳浊液进行超声整粒,得到空白脂质体悬液;

步骤2,制备人脐带间充质干细胞无血清培养液脂质体冻干粉;

将人脐带间充质干细胞无血清培养液加入空白脂质体悬液,在水浴和超声的条件下进行包封反应,包封反应结束后对产物进行过膜整粒,收集过膜后的产物,将产物依次经离心、洗涤、冻融、冷冻干燥后,得到人脐带间充质干细胞无血清培养液脂质体冻干粉。

4.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述人脐带MSC无血清培养液的制备方法为:取新生儿脐带,将静脉内血迹洗涤干净;去除表皮、两条动脉血管及一条静脉血管,将组织剪碎,加入含FBS的DMEM/F12培养基培养,得到原代人脐带间充质干细胞;当细胞融合度为80-90%时,胰蛋白酶消化细胞传代培养,取5-15代的传代细胞继续培养,当细胞融合度80-90%时,弃含FBS的培养上清,PBS洗涤细胞,加入无血清的DMEM/F12培养基继续培养48-72小时,收集无血清培养液。

5.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤1中磷脂、胆固醇、吐温-80、脂溶性抗氧化剂和乙醇的质量百分比为:磷脂5~30%,胆固醇1~10%,吐温-80 0.1~15%,脂溶性抗氧化剂0.1~5%,无水乙醇50~85%,以上各组分的质量总和是100%。

6.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤1原料溶液与冻干保护剂的质量关系为1:1-30:1,冻干保护剂的磷酸盐缓冲液中冻干保护剂的含量2-10%。

7.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤2中空白脂质体悬液中总固含量和人脐带间充质干细胞无血清培养液中总固含量的质量比为30:1。

8.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤2中包封反应具体为在30~35℃水浴中超声5-10min,超声功率200-300W。

9.根据权利要求3所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤4中的冻融为-80℃冷冻1h,20℃水浴解冻,一共冻融2~10次;冷冻干燥中预冻温度为-60℃±2℃,预冻时间6h以上,冷阱温度为-50~-56℃,真空度≤80mT,冻干时间24-36h。

10.如权利要求1所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉在化妆品中的应用,其特征在于,将权利要求1所述的人脐带MSC无血清培养液脂质体冻干粉水化后,直接加入化妆品中。

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