本发明涉及一种总黄酮的提取方法，具体涉及一种在水飞蓟中提取总黄酮的方法，属于医药化工技术领域。
背景技术：
水飞蓟是一种菊科药用植物，原产于北非，上世纪七十年代引入我国后作为一种保肝药用植物被广泛推广种植。大量文献资料研究表明，水飞蓟中含有大量黄酮类化合物以及不饱和脂肪酸，其中黄酮类化合物中具有代表性的化合物-水飞蓟素，具有清除活性氧、对抗脂质过氧化、抗肝毒素、促进肝细胞修复、抗肿瘤、降血脂等药理学活性已经被人们广泛熟知。
黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。最早黄酮类化合物主要是指母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在则泛指两个苯环（a环与b环）通过中央三碳相互联接而成的一系列化合物。根据中央三碳的氧化程度、是否成环、b环的联接位点等特点，可将该类化合物分为多种结构类型。
现有的水飞蓟中的总黄酮类化合物的提取方法有溶剂提取法、微波萃取以及超声波提取等，溶剂提取分为浸渍和热回流，微波萃取与超声波提取对设备要求高，浸渍法需要时间久，热回流使用广泛，但是传统热回流缺点是使用热蒸汽能耗大、溶剂浪费较多。
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种方法简单、成本低、最终产物含量高的在水飞蓟中提取总黄酮的方法。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种在水飞蓟中提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
s1提取：将干燥后的水飞蓟药材粉碎，加入到5-15倍水飞蓟重量的提取剂中，提取得到提取液，浓缩至浸膏状，回收提取剂套用，重复相同的条件提取2-4次，合并浸膏；
s2萃取：将s1步骤中得到的浸膏用2-8倍浸膏重量的水溶解，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚、乙酸乙酯萃取液，并将萃取液在60-75℃的温度条件下浓缩至原萃取液体积的0.1-0.3倍；
s3层析：利用naoh溶液将s3步骤中得到的浓缩液的ph值调整为5-7，过滤后过大孔树脂柱,再用乙醇溶液洗涤大孔树脂柱，合并流出液和水洗液，在50-70℃的温度条件下浓缩至膏状；
s4干燥：将s3步骤中得到的膏状物冷冻干燥，得到淡黄色粉末黄酮类化合物。
进一步，在上述的s1步骤中，所述的提取剂为浓度为60-95%的乙醇溶液或浓度为60-85%的甲醇溶液，优选浓度为75-95%的乙醇溶液。
且s1步骤中，提取的具体步骤可以为：在60-90℃的温度条件下回流提取1-4小时，得到提取液，此为回流法。且优选条件为：首先将干燥后的水飞蓟药材粉碎，加入到8-12倍水飞蓟重量的提取剂中，在60-70℃的温度条件下回流提取2小时，重复2次后，合并浸膏。
s1步骤中的提取的具体步骤也可以为：在常温下浸泡48h，得到提取液，此为浸泡法，主要针对提取剂为乙醇的情况。
更进一步，上述方法的s3步骤中，naoh溶液的浓度为0.1mol·l-1。乙醇溶液的浓度为50-70%。且大孔树脂柱的型号为ab-8、d-101、xad-16、hpd-600和h3520中的任一种，优选hpd-600或d-101。
本发明的有益之处在于：本发明所述的方法简单、流程清晰、成本低，纯化得到的产品颜色好、得率和纯度高。水飞蓟中黄酮类化合物含量丰富，具有清除活性氧、对抗脂质过氧化、抗肝毒素、促进肝细胞修复、抗肿瘤、降血脂等药理学活性，同时由于其结构特点，可转化为多种具有特定生物活性的黄酮类化合物，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
实施例1
首先将干燥的水飞蓟药材粉碎，共10kg，加入到8倍水飞蓟药材重量、浓度为85%的乙醇溶液中，在70℃的温度条件下回流提取2小时，得到提取液，浓缩至浸膏状，回收提取剂套用，重复相同的条件提取2次，合并浸膏；然后，将上述浸膏用3倍浸膏重量的水溶解，用等体积的石油醚、乙酸乙酯依次萃取，萃取三次，合并得乙酸乙酯萃取液（石油醚回收套用，石油醚部位舍弃），并将萃取液浓缩至原萃取液的0.3倍，得到浓缩液；最后向上述浓缩液中加入浓度为0.1mol·l-1的naoh溶液，调整浓缩液的ph值为7，过滤后过d-101型大孔树脂柱,再用浓度为70%的乙醇溶液洗涤大孔树脂柱,合并流出液和水洗液,在70℃的温度条件下浓缩至膏状、并将膏状物冷冻干燥，得到淡黄色粉末325g，经hplc法检验，淡黄色粉末中黄酮类化合物的含量为89.8%。
实施例2
首先将干燥的水飞蓟药材粉碎，共10kg，加入到12倍水飞蓟药材重量、浓度为85%的乙醇溶液中，在70℃的温度条件下回流提取3小时，得到提取液，浓缩至浸膏状，回收提取剂套用，重复相同的条件提取3次，合并浸膏；然后，将上述浸膏用4倍浸膏重量的水溶解，用等体积的石油醚、乙酸乙酯依次萃取，萃取三次，合并得乙酸乙酯萃取液（石油醚回收套用，石油醚部位舍弃），并将萃取液浓缩至原萃取液的0.3倍，得到浓缩液；最后向上述浓缩液中加入浓度为0.1mol·l-1的naoh溶液，调整浓缩液的ph值为5，过滤后过hpd-600型大孔树脂柱,再用浓度为65%的乙醇溶液洗涤大孔树脂柱,合并流出液和水洗液,在70℃的温度条件下浓缩至膏状、并将膏状物冷冻干燥，得到淡黄色粉末355g，经hplc法检验，淡黄色粉末中黄酮类化合物的含量为88.4%。
实施例3
首先将干燥的水飞蓟药材粉碎，共10kg，加入到14倍水飞蓟药材重量、浓度为75%的乙醇溶液中，在65℃的温度条件下回流提取2小时，得到提取液，浓缩至浸膏状，回收提取剂套用，重复相同的条件提取3次，合并浸膏；然后，将上述浸膏用8倍浸膏重量的水溶解，用等体积的石油醚、乙酸乙酯依次萃取，萃取三次，合并得乙酸乙酯萃取液（石油醚回收套用，石油醚部位舍弃），并将萃取液浓缩至原萃取液的0.1倍，得到浓缩液；最后向上述浓缩液中加入浓度为0.1mol·l-1的naoh溶液，调整浓缩液的ph值为6，过滤后过hpd-600型大孔树脂柱,再用浓度为60%的乙醇溶液洗涤大孔树脂柱,合并流出液和水洗液,在70℃的温度条件下浓缩至膏状、并将膏状物冷冻干燥，得到淡黄色粉末325g，经hplc法检验，淡黄色粉末中黄酮类化合物的含量为91.4%。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。