一种局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶及其制备方法与流程

本发明属于药物制剂和皮肤护理用品领域，具体涉及一种局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶及其制备方法与在治疗疤痕上的应用。

背景技术：

羟基积雪草苷是伞形科植物积雪草(centellaasiatica(l.)urban)中主要的三萜皂苷成分之一。羟基积雪草苷具有抗炎、抗氧化、促进伤口愈合等广泛的药理学活性，用于治疗皮肤损伤、烧伤烫伤和修复疤痕。因限于其极性大分子的特点，羟基积雪草苷很难直接透过皮肤角质层及表皮。

脂质体是一种类似于细胞膜的，由磷脂双子层组成的球状体。脂质体的内部可以包裹各种脂溶性或者水溶性的药物，进而提高药物的稳定性和利用率。包裹有水溶性药物的脂质体，可以通过细胞膜间隙透过皮肤，也可以与细胞膜融合，进而将药物递送到细胞内部。脂质体溶液在治疗皮肤伤口时，因其流动性强，易于流失，造成了药物的浪费，进而增加了皮肤用药量。

凝胶剂是具有凝胶特性的半固体或黏稠液体制剂。凝胶剂一般由凝胶基质、ph调节剂、透皮促进剂以及保湿剂等组成。制备凝胶剂的方法操作简单，在局部使用时对皮肤伤害小，有较好的黏性及延展性，且具备控制药物缓慢释放的特性，延长了给药时间，缩短皮肤愈合时间。

技术实现要素：

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶。为使羟基积雪草苷充分发挥修复疤痕、伤口愈合的疗效，本发明提供一种脂质体凝胶。

本发明所述的脂质体凝胶采用纳米脂质体制备技术，使羟基积雪草苷包封在脂质体中，再加入凝胶剂基质及超纯水形成半固体凝胶态药物。所述脂质体凝胶其半固体凝胶态的特点，药物在伤口处有很好的贴合效果，保证了给药时间，更好的起到药物缓释作用，达到更好的抗菌消炎作用，更有利于伤口愈合；另一方面，该脂质体凝胶可促进脂质体有效透过皮肤，使得更多的羟基积雪草苷成分停留在真皮层，药效更明显。

本发明的另一目的在于提供上述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶的制备方法。

针对脂质体水溶液流动性强，用作药物载体，施用于皮肤容易流失的问题，通过本发明制备皮肤贴合性好的羟基积雪草苷脂质体凝胶剂。本发明中羟基积雪草苷脂质体凝胶剂通过以下步骤实现：先在超纯水中加入促渗剂、保湿剂和凝胶剂，充分搅拌，形成空白凝胶，然后加入羟基积雪草苷脂质体溶液，调节ph值，搅拌均匀，制成稳定性强、贴合效果好的羟基积雪草苷脂质体凝胶。

本发明的再一目的在于提供上述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶，所述脂质体凝胶主要由羟基积雪草苷脂质体、凝胶剂和超纯水组成；所述脂质体具有双分子层结构，所述羟基积雪草苷包封于脂质体中；所述羟基积雪草苷脂质体的质量占脂质体凝胶总质量的1～60％，所述凝胶剂的质量占脂质体凝胶总质量的1～30％。

优选的，所述羟基积雪草苷脂质体的质量占脂质体凝胶总质量的20％，所述凝胶剂的质量占脂质体凝胶总质量的6％；

上述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液；

(2)制备空白凝胶：在超纯水中加入促渗剂、保湿剂和凝胶剂基质，充分搅拌，形成空白凝胶；

(3)将羟基积雪草苷脂质体溶液加入至步骤(2)得到的空白凝胶中，ph调节剂调节ph值，搅拌成均匀的凝胶，即局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶，置于4℃下保存。所述的羟基积雪草苷脂质体凝胶稳定性好，色度均匀，质地细腻，黏性适中。

优选的，步骤(1)中，

羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占总质量的0.1～60％，磷脂的质量占总质量的10～90％；进一步的，羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占总质量的1.41～22.22％，磷脂的质量占总质量的55.56～70.42％；

羟基积雪草苷脂质体溶液的制备方法为薄膜分散法，乙醇注入法，冷冻干燥法，乳化法；优选为乳化法；羟基积雪草苷溶液浓度为1～160mg/ml，优选为1～20mg/ml，更优选为20mg/ml。

按质量比取磷脂和胆固醇溶于有机溶剂中，加入适量抗氧剂，过滤，旋转蒸发除去有机溶剂成薄膜，然后加入一定浓度的羟基积雪草苷水溶液或pbs溶液，加入玻璃珠后高速搅拌或直接超声波处理，得到混悬液，混悬液可进一步用微孔滤膜过滤，即得羟基积雪草苷脂质体溶液；

或者按质量比取磷脂和胆固醇溶于有机溶剂中，加入适量抗氧剂，过滤，旋转蒸发除去有机溶剂成薄膜，将一定浓度羟基积雪草苷水溶液或pbs溶液加入上述有机溶剂中，加入适量冻结保护剂，混匀，真空冷冻干燥，即得羟基积雪草苷脂质体溶液。

或者按质量比取磷脂和胆固醇溶于有机溶剂中，将其注入至已配好的一定浓度的羟基积雪草苷水溶液或pbs溶液中，一边滴加一边搅拌，同时减压除去有机溶剂，得到混悬液，混悬液可进一步用微孔滤膜过滤，即得羟基积雪草苷脂质体溶液。

或者质量比取磷脂和胆固醇溶于有机溶剂中，加入适量抗氧剂，加入一定浓度羟基积雪草苷水溶液或pbs溶液，在一定条件下乳化形成w/o乳剂，再将上述w/o乳剂再加入到一定浓度的羟基积雪草苷水溶液或pbs溶液中，再一次在一定条件下乳化，复乳后减压蒸发除去有机溶剂，可用微孔滤膜过滤，即得羟基积雪草苷脂质体溶液。

所述的磷脂为天然磷脂或合成磷脂；优选为蛋黄卵磷脂。

所述的磷脂与胆固醇的的质量比为1:1～10:1。

所述的抗氧化剂为维生素c或维生素e醋酸酯。

所述的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、环己烷、乙醚等，优选二氯甲烷。

优选的，步骤(2)中，

促渗剂为氮酮、薄荷醇、月桂氮卓酮或聚乙烯基吡咯烷酮，优选为氮酮，终质量分数为0.1～5％，优选为1％；保湿剂为甘油或丙二醇，优选为丙二醇，终质量分数为1～50％，优选为15％；凝胶剂基质为羧甲基纤维素钠、卡波姆、海藻酸钠、羟丙甲纤维素等，优选为羧甲基纤维素钠，终质量分数为1～30％，优选为1～10％，更优选为4～6％，最优选为6％。

优选的，步骤(3)中，调节ph值为5～9，优选ph为7。

上述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶在医药和皮肤护理用品领域的应用。

优选的，所述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶在治疗疤痕上的应用，

优选的，所述局部外用的羟基积雪草苷脂质体凝胶在修复瘢痕和促进伤口愈合上的应用。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明的羟基积雪草苷脂质体凝胶包封率可达到70％以上，优选为70.2～79％，15天sd大鼠烫伤实验结果显示，羟基积雪草苷脂质体凝胶组的愈合效果明显优于空白对照组。羟基积雪草苷脂质体凝胶具有显著的缓释效果，药物在伤口表面贴合效果良好，且对皮肤无刺激作用，高效安全，解决了羟基积雪草苷溶液或其脂质体溶液在皮肤给药过程中，流动性强、稳定性差、药物利用度低的问题，可作为一种优良的修复瘢痕和促进伤口愈合缓释制剂。

(2)本发明制剂与裸药相比，具有明显的缓释效果，治疗周期缩短；解决了羟基积雪草苷溶液或其脂质体溶液流动性强、皮肤贴合效果差等问题；可作为一种优良的伤口愈合、修复疤痕外用缓释剂。

附图说明

图1是实施例2制得的羟基积雪草苷脂质体的粒径大小分布图。

图2是不同羧甲基纤维素钠用量下羟基积雪草苷脂质体凝胶外观图；其中，a：2％羧甲基纤维素钠(实施例1)；b：4％羧甲基纤维素钠(实施例2)；c：6％羧甲基纤维素钠(实施例3)。

图3是羟基积雪草苷脂质体凝胶离心前后对比图；其中，a：离心前；b：离心后。

图4是羟基积雪草苷脂质体凝胶施用于sd大鼠皮肤效果图。

图5是空白对照组和羟基积雪草苷脂质体凝胶组sd大鼠皮肤烫伤愈合效果对比图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml二氯甲烷中将其配制成有机溶液；旋转蒸发除去有机溶剂成薄膜，将20mg/ml羟基积雪草苷溶液加入薄膜中，加入适量玻璃珠50℃下搅拌1h，探头超声30min，再过0.22μm水性滤膜，得羟基积雪草苷脂质体溶液。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占22.22％，蛋黄卵磷脂的质量占55.56％。

(2)制备空白凝胶：在8ml水中加入质量分数0.1g氮酮，1.5g丙二醇，再加入0.2g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂。

(3)将步骤(1)中2ml羟基积雪草苷脂质体溶液加入步骤(2)中空白凝胶剂中，充分搅拌均匀，用5％的naoh溶液调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。羟基积雪草苷脂质体凝胶形态外貌如图2所示。

所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为71％。

实施例2

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml乙醇中将其配制成有机相溶液；将上述有机相溶液逐滴加入15mg/ml羟基积雪草苷溶液中，一边滴加一边搅拌直到溶剂除净，过0.22μm油性滤膜，得羟基积雪草苷脂质体溶液。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占17.65％，蛋黄卵磷脂的质量占58.82％。

(2)制备空白凝胶：在7.5ml水中加入质量分数0.1g氮酮，2.0g丙二醇，再加入0.4g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂。

(3)将步骤(1)中2.5ml羟基积雪草苷脂质体溶液加入步骤(2)中空白凝胶剂中，用7％的naoh溶液调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。所制得的羟基积雪草苷脂质体平均粒径为200nm，如图1所示。羟基积雪草苷脂质体凝胶形态外貌如图2所示。

所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为73％。

实施例3

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml二氯甲烷中将其配制成有机溶液；旋转蒸发除去有机溶剂成薄膜，将10mg/ml羟基积雪草苷溶液加入薄膜中，旋转水化得脂质体溶液，加入0.005g甘露醇，混匀，真空中冷冻干燥，将脂质体冻干粉用pbs振摇分散，得羟基积雪草苷脂质体溶液。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占12.42％，蛋黄卵磷脂的质量占62.11％。

(2)制备空白凝胶：在7ml水中加入质量分数0.1g氮酮，1.8g丙二醇，再加入0.6g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂。

(3)将步骤(1)中2ml羟基积雪草苷脂质体溶液加入步骤(2)中空白凝胶剂中，用7％的naoh溶液调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。所制得的羟基积雪草苷脂质体平均粒径为180nm，不同凝胶剂量制备出的羟基积雪草苷脂质体凝胶外观如图2所示。

从图2中可知，终浓度2％的羧甲基纤维素钠制备的凝胶流动性还是很强，而浓度为4％和6％的羧甲基纤维素钠制备的凝胶流动性差很多，浓度为6％的羧甲基纤维素钠制备的凝胶效果最好，非流动性强，粘附力大。

所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为78％。

实施例4

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml二氯甲烷中将其配制成有机相溶液；将20mg/ml羟基积雪草苷溶液溶于上述有机相溶液中；以500转/min第一次搅拌3min，形成w/o乳剂；将上述w/o乳剂加入到20mg/ml羟基积雪草苷溶液中，以500转/min第二次搅拌5min，形成w/o/w复乳；将复乳转移到茄形瓶中，通过旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂；再将茄形瓶放入真空干燥箱内干燥，除去乳液中的剩余有机溶剂，超声60s后，过0.22μm水性滤膜，得羟基积雪草苷脂质体溶液，并置于4℃下保存。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占22.22％，蛋黄卵磷脂的质量占55.56％。

(2)制备羟基积雪草苷脂质体凝胶：在8ml水中加入质量分数0.1g氮酮，2.5g丙二醇，再加入0.6g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂；然后加入2ml羟基积雪草苷脂质体溶液，调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为79％。

高速离心后羟基积雪草苷脂质体凝胶没有分层现象，稳定性好，如图3所示。

伤口皮肤表面贴合效果如图4所示，结果表明该条件下制备的脂质体凝胶在皮肤伤口表面的贴合效果好，利于药物在伤口上缓慢释放。

实施例5

1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml三氯甲烷中将其配制成有机溶液；旋转蒸发除去有机溶剂成薄膜，将5mg/ml羟基积雪草苷溶液加入薄膜中，加入适量玻璃珠50℃下搅拌1h，探头超声30min，再过0.22μm水性滤膜，得羟基积雪草苷脂质体溶液。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占3.45％，蛋黄卵磷脂的质量占68.97％。

(2)制备空白凝胶：在8ml水中加入质量分数0.1g氮酮，1.5g丙二醇，再加入0.2g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂。

(3)将步骤(1)中2ml羟基积雪草苷脂质体溶液加入步骤(2)中空白凝胶剂中，充分搅拌均匀，用5％的naoh溶液调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。羟基积雪草苷脂质体凝胶形态外貌如图2所示。

所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为70.2％。

实施例6

(1)制备羟基积雪草苷脂质体溶液：称取蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、ve醋酸酯0.1g溶于10ml二氯甲烷中将其配制成有机相溶液；将1mg/ml羟基积雪草苷溶液溶于上述有机相溶液中；以500转/min第一次搅拌3min，形成w/o乳剂；将上述w/o乳剂加入到1mg/ml羟基积雪草苷溶液中，以500转/min第二次搅拌5min，形成w/o/w复乳；将复乳转移到茄形瓶中，通过旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂；再将茄形瓶放入真空干燥箱内干燥，除去乳液中的剩余有机溶剂，超声60s后，过0.22μm水性滤膜，得羟基积雪草苷脂质体溶液，并置于4℃下保存。所述羟基积雪草苷脂质体溶液中，羟基积雪草苷的质量占1.41％，蛋黄卵磷脂的质量占70.42％。

(2)制备羟基积雪草苷脂质体凝胶：在8ml水中加入质量分数0.1g氮酮，2.5g丙二醇，再加入0.6g的羧甲基纤维素钠，充分搅拌，得到空白凝胶剂；然后加入2ml羟基积雪草苷脂质体溶液，调节ph值为7既得羟基积雪草苷脂质体凝胶。所述羟基积雪草苷脂质体凝胶的包封率为72％。

高速离心后羟基积雪草苷脂质体凝胶没有分层现象，稳定性好，如图3所示。

伤口皮肤表面贴合效果如图4所示，结果表明该条件下制备的脂质体凝胶在皮肤伤口表面的贴合效果好，利于药物在伤口上缓慢释放。

实施例7

大鼠二级烫伤模型建立：取sd大鼠2只(约300g)，麻醉后剃去大鼠背部毛，再用9％的硫化钠溶液将毛除净。将直径为1.4cm的螺钉放入沸水(约100℃)中加热1分钟后，置于老鼠背部保持20s以形成二级烫伤的伤口，每只大鼠背部共造6个伤口，作为平行样。然后用纱布给大鼠包扎至伤口结痂。

将2只大鼠分为空白对照组和羟基积雪草苷脂质体凝胶组，其中空白对照组使用pbs缓冲液，每天上药早晚两次，并在第0、3、6、9、12和15天时用测量伤口面积，拍照记录观察伤口的变化。

图5可以看出羟基积雪草苷脂质体凝胶组的大鼠伤口在第6至9天明显减小，愈合效果最好。良好的贴合效果增加了羟基积雪草苷脂质体的释放时间，起到持续给药的效果，使羟基积雪草苷更好的发挥消炎、伤口愈合、修复疤痕等功效。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。