一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物的制作方法

文档序号:13320750阅读:272来源:国知局
本发明涉及一种中成药,特别涉及一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物,属于药物化学领域。
背景技术
:蜈蚣三七属毛茛科银莲花属植物林荫银莲花的干燥根茎,《贵州民间药物》、《浙江天目山药物志》等书中均有记载,具有祛风湿、助筋骨、消肿止痛等功效,是治疗各种关节疼痛及炎症的常用药。早在上世纪40年代,鄂西北地区就将蜈蚣三七应用于ra的治疗,特别是在宜昌、恩施等类风湿性关节炎高发区,民间应用更是广泛。在长期应用中显示其对风湿疼痛、跌打损伤有良好的镇痛、消肿作用。80年代末期就对该药进行了研究,试验证明蜈蚣三七提取物有良好的抗炎免疫、镇痛镇静、抗过敏等作用,对类风湿性关节炎治疗的总有效率达95%。在临床前试验研究基础上于2004年9月获得蜈蚣三七提取物治疗类风湿性关节炎的临床试验批件。急、慢性毒性试验及1期临床研究均未见明显的毒性反应,2期临床研究证明蜈蚣三七提取物安全有效。技术实现要素:本发明的目的是:为了克服现有技术的缺陷,获得一种能够将蜈蚣提取物与蜈蚣三七合理组合,协同发挥药效,提高对肿瘤细胞的抑制率的药物,本发明提供了一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物。为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供的技术方案是:一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物,所述基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物的原料配方包括下列重量份的组分:优选的技术方案为:所述基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物的原料配方包括下列重量份的组分:由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有的优点是:1、本发明制得的基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物对多种肿瘤细胞具有良好的抑制作用。2、本发明制得的药物发挥了蜈蚣提取物与蜈蚣三七的协同作用,使得其对肿瘤细胞的抑制率与顺铂的作用相近。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式,熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。实施例1:一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物,按重量份计,所述药物的原料配方包括:蜈蚣提取物28份、蜈蚣三七25份、黄芪12份、党参9份、人参8份、白术7份、茯苓7份、半夏6份、杏仁5份、乳香4份、当归6份、陈皮4份、麝香3份。制备方法包括以下步骤:(1)取蜈蚣鲜活成虫,迅速置于液氮罐中,用液氮冷冻15分钟后取出研磨成粉末,并将粉末倒入离心管中,加入磷酸盐缓冲液,0.01倍体积(相对于粉末的体积)的蛋白酶k水溶液,52℃处理5分钟。蛋白酶k水溶液的浓度为50~100微克/毫升,在本实施例中为80微克/毫升。粉末、磷酸盐缓冲液和蛋白酶k水溶液的总体积为离心管的三分之二。(2)取步骤(1)处理后的产物,将离心管迅速置于沸水中煮5分钟,然后置于冰上冷却,上下摇匀后3000r/min离心5min,取上清液;(3)向步骤(2)获得的上清液中加入1倍体积的无水乙醇,上下混匀后在12000r/min离心15min,取上层蛋白液;重复上述步骤,合并上层蛋白液得到蜈蚣提取物,置于4℃中保存。(4)取杏仁、陈皮和麝香,加2倍水浸泡5小时,水蒸气蒸馏3小时,得到冷凝液和药渣,所述冷凝液经油水分离后得到挥发油和水溶液。(5)将步骤(4)所剩的药渣与蜈蚣三七、黄芪、党参、人参、白术、茯苓、半夏、乳香和当归混合,并向其中加入6倍水煎煮2次,每次1小时,合并煎液,过滤,收集滤液。(6)将步骤(5)收集的滤液浓缩至相对密度为1.15的清膏,向清膏中加入步骤(3)收集的蜈蚣提取物、步骤(4)收集的挥发油,混合均匀,减压干燥后粉碎得干燥浸膏粉,过50目筛。相对密度于60℃时测得;(7)取硬脂酸镁、步骤(6)获得的干燥浸膏粉混合,混匀、制粒、整粒、灌装硬胶囊,抛光,检验,分装,即可制得。硬脂酸镁的量为干燥浸膏粉的量的10%。实施例2:一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物,按重量份计,所述药物的原料配方包括:蜈蚣提取物48份、蜈蚣三七38份、黄芪21份、党参17份、人参14份、白术15份、茯苓13份、半夏15份、杏仁17份、乳香14份、当归14份、陈皮13份、麝香16份。制备方法包括以下步骤:(1)取蜈蚣鲜活成虫,迅速置于液氮罐中,用液氮冷冻30分钟后取出研磨成粉末,并将粉末倒入离心管中,加入磷酸盐缓冲液,0.04倍体积(相对于粉末的体积)的蛋白酶k水溶液,55℃处理12分钟。蛋白酶k水溶液的浓度为50~100微克/毫升,在本实施例中为80微克/毫升。粉末、磷酸盐缓冲液和蛋白酶k水溶液的总体积为离心管的三分之二。(2)取步骤(1)处理后的产物,将离心管迅速置于沸水中煮7分钟,然后置于冰上冷却,上下摇匀后4000r/min离心8min,取上清液;(3)向步骤(2)获得的上清液中加入1.4倍体积的无水乙醇,上下混匀后在13000r/min离心20min,取上层蛋白液;重复上述步骤,合并上层蛋白液得到蜈蚣提取物,置于4℃中保存。(4)取杏仁、陈皮和麝香,加3.5倍水浸泡9小时,水蒸气蒸馏5小时,得到冷凝液和药渣,所述冷凝液经油水分离后得到挥发油和水溶液。(5)将步骤(4)所剩的药渣与蜈蚣三七、黄芪、党参、人参、白术、茯苓、半夏、乳香和当归混合,并向其中加入9倍水煎煮3次,每次2.5小时,合并煎液,过滤,收集滤液。(6)将步骤(5)收集的滤液浓缩至相对密度为1.35的清膏,向清膏中加入步骤(3)收集的蜈蚣提取物、步骤(4)收集的挥发油,混合均匀,减压干燥后粉碎得干燥浸膏粉,过60目筛。相对密度于60℃时测得;(7)取硬脂酸镁、步骤(6)获得的干燥浸膏粉混合,混匀、制粒、整粒、灌装硬胶囊,抛光,检验,分装,即可制得。硬脂酸镁的量为干燥浸膏粉的量的5%。实施例3:一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物,按重量份计,所述药物的原料配方包括:蜈蚣提取物55份、蜈蚣三七50份、黄芪25份、党参22份、人参19份、白术23份、茯苓19份、半夏20份、杏仁22份、乳香18份、当归19份、陈皮16份、麝香22份。制备方法包括以下步骤:(1)取蜈蚣鲜活成虫,迅速置于液氮罐中,用液氮冷冻40分钟后取出研磨成粉末,并将粉末倒入离心管中,加入磷酸盐缓冲液,0.05倍体积(相对于粉末的体积)的蛋白酶k水溶液,58℃处理15分钟。蛋白酶k水溶液的浓度为50~100微克/毫升,在本实施例中为60微克/毫升。粉末、磷酸盐缓冲液和蛋白酶k水溶液的总体积为离心管的三分之二。(2)取步骤(1)处理后的产物,将离心管迅速置于沸水中煮10分钟,然后置于冰上冷却,上下摇匀后5000r/min离心10min,取上清液;(3)向步骤(2)获得的上清液中加入1.5倍体积的无水乙醇,上下混匀后在14000r/min离心25min,取上层蛋白液;重复上述步骤,合并上层蛋白液得到蜈蚣提取物,置于8℃中保存。(4)取杏仁、陈皮和麝香,加5倍水浸泡12小时,水蒸气蒸馏6小时,得到冷凝液和药渣,所述冷凝液经油水分离后得到挥发油和水溶液。(5)将步骤(4)所剩的药渣与蜈蚣三七、黄芪、党参、人参、白术、茯苓、半夏、乳香和当归混合,并向其中加入12倍水煎煮4次,每次3小时,合并煎液,过滤,收集滤液。(6)将步骤(5)收集的滤液浓缩至相对密度为1.45的清膏,向清膏中加入步骤(3)收集的蜈蚣提取物、步骤(4)收集的挥发油,混合均匀,减压干燥后粉碎得干燥浸膏粉,过100目筛。相对密度于60℃时测得;(7)取硬脂酸镁、步骤(6)获得的干燥浸膏粉混合,混匀、制粒、整粒、灌装硬胶囊,抛光,检验,分装,即可制得。硬脂酸镁的量为干燥浸膏粉的量的5%。对本发明制备获得的基于蜈蚣提取物的抗癌药物进行细胞试验:1、试验细胞人宫颈癌siha细胞、人胚肺hel细胞、人肝癌hep3bxibao。2、试验方法细胞复苏:从液氮罐中迅速取出所需细胞冻存管,放入37℃水浴箱中迅速解冻,然后离心,弃去冻存液,加入新鲜培养液洗2次,将细胞移至培养瓶中加入适量新鲜培养液,放置培养箱中培养,次日换液。取对数生长期细胞进行试验。取对数生长期的试验细胞1×105个/ml接种于96孔培养板,分别加入本发明所述基于蜈蚣提取物的抗癌药物、顺铂,每孔体积100μl,试验每组重复5孔,共重复5次;至37℃,体积分数5%二氧化碳培养箱中培养48小时后,每孔加入mtt液继续培养4小时,弃去孔内培养液,加入dmso振荡器振荡10分钟,用酶联免疫检测仪于570nm波长处测定各孔的od值,按下式求出细胞生长抑制率。细胞抑制率=(1-实验组od均值/空白对照组od均值)×100%3、结果表1本发明所述药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用本发明od值顺铂od值剂量(μg/ml)2525人宫颈癌siha细胞0.260.31人胚肺hel细胞0.320.35人肝癌hep3bxibao0.410.46细胞生长抑制率/%42.355.7实施例4:一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物一种基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物及其制备方法,所述基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物的原料配方包括下列重量份的组分:制备方法包括以下步骤:第一步:将鲜活蜈蚣成虫用液氮冷冻24分钟后取出研磨成粉末,并将粉末倒入一离心管中,向所述离心管中加入磷酸盐缓冲液和0.03倍体积的蛋白酶k水溶液,52℃条件下处理15分钟;第二步:将所述离心管置于沸水中煮6分钟,然后置于冰上冷却,摇匀后再4500r/min离心8min,取上清液;第三步:向所述上清液中加入1.3倍体积的无水乙醇,混匀后再13500r/min离心15~25min,取上层蛋白液;第四步:取杏仁、陈皮和麝香,加2倍体积的水浸泡10小时,水蒸气蒸馏5小时,得到冷凝液和药渣,所述冷凝液经油水分离后得到挥发油和水溶液;第五步:将第四步所得的药渣与蜈蚣三七、黄芪、党参、人参、白术、茯苓、半夏、乳香和当归混合,并向其中加入7倍体积的水煎煮4次,每次3小时,合并煎液过滤后得到滤液;第六步:将所述滤液浓缩至相对密度为1.35的清膏,向清膏中加入第三步制得的上层蛋白液、第四步制得的挥发油,混合均匀后减压干燥,粉碎后过80目筛得干燥浸膏粉;相对密度于60℃时测得;第七步:取硬脂酸镁,将其与所述干燥浸膏粉混匀后制粒、灌装得硬胶囊即为基于蜈蚣提取物和蜈蚣三七的抗癌药物。以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例,并非企图具以对本发明做任何形式上之限制,是以,凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更,皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。当前第1页12
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