芳香酯类化合物用于制备抗ADV病毒抑制剂的制作方法

本发明涉及属于抗病毒药物技术领域，具体涉及芳香酯化合物WY113，WY130 和WY143用于制备抗ADV病毒抑制剂。

背景技术：

腺病毒(ADV)是从手术切除的扁桃体组织分离培养得到的一种DNA病毒,主要在细胞核内繁殖,常引起人上呼吸道和眼部上皮细胞感染。腺病毒作为普通的机会性病原体长期存在于人群中,免疫功能低下的病人感染腺病毒的机率较大。腺病毒作为无包膜的DNA病毒,在低pH值条件下可稳定存在,有很强的耐物理和化学试剂的作用,腺病毒可对胃肠分泌物和胆汁产生耐受,可在胃肠内复制,产生很高的病毒载量。

腺病毒可通过呼吸道分泌物,粪-口途径和污物在人与人之间传播,许多婴儿出生后5年内至少感染过一种腺病毒,且这种感染常发生在人群居住较密集的地方,腺病毒感染可发生全年的任何时间,但疫情的爆发通常都集中在冬季、春季和初夏。腺病毒常在咽、结膜、肠道及淋巴组织内繁殖,并导致各种各样的临床症状,如呼吸系统的感染、结膜炎、胃肠炎、肝炎、出血性膀胱炎、神经系统的紊乱等。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受到关注,因此研发一种新的抗腺病毒药物势在必行。

酯类化合物是一类重要的精细化工产品，广泛应用于药物、材料、食品、增塑剂、溶剂等化工行业。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述现状，旨在提供芳香酯类化合物用于制备抗ADV病毒抑制剂。

本发明目的的实现方式为，芳香酯类化合物用于制备抗ADV病毒抑制剂，芳香酯类化合物为以下化学结构式：

的化合物，芳香酯化合物WY113、WY130和WY143浓度为40μg/mL时，对于ADV导致细胞病变效应的抑制率分别为94％,95％,22％；用于制备抗ADV病毒抑制剂。

本申请人通过大量的生物学实验，发现芳香酯化合物WY113、WY130和WY143 具有抗ADV病毒的活性。具体表现为可以强烈抑制ADV病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率。强烈抑制ADV病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量，保护细胞免受ADV感染引发的凋亡。由此表明芳香酯化合物WY113，WY130和 WY143有潜力用于制备抗ADV感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

本发明具有以下优点：

1、芳香酯化合物WY113，WY130和WY143合成工艺简单，经济快速，易于大规模生产推广。

2、从与芳香酯化合物WY113，WY130和WY143结构相似的化合物中寻找抗ADV 药物，易于通过构效关系研究寻找到其作用靶点，为进一步制备药物开发提供有价值的导向作用。

附图说明

图1是芳香酯化合物WY113、WY130和WY143对于ADV作用的RD细胞存活率的影响图。

图2a、b、c分别RD、ADV及ADV+WY143对于ADV引起的RD细胞凋亡的抑制作用图。

具体实施方式

本申请人自主合成了具有新型结构的芳香酯化合物WY113、WY130和WY143，并于2015年在期刊Tetrahedron Letters公开了这几种芳香酯化合物的制备方法，但未对其生物学活性进行评价。

制备方法具体以过渡金属钯为催化剂，在吡啶的邻位诱导作用下，在芳环的邻位用高价碘苯作用，进行芳酰氧基化，得到最终芳香酯类化合物。

芳香酯化合物WY113，WY130和WY143能强烈抑制ADV在宿主细胞RD产生的细胞病变效应(CPE)，增强细胞存活率。强烈抑制ADV病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量，保护细胞免受ADV感染引发的凋亡。表明芳香酯化合物 WY113，WY130和WY143可用于制备有效治疗抗ADV感染的药物，抗ADV病毒抑制剂。

制备的抗ADV病毒抑制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂、悬浮剂或乳剂。

本申请人对芳香酯化合物WY113，WY130和WY143进行了抗ADV活性研究实验，实验情况如下：在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

1、试验内容：

化合物抗ADV活性分析：本发明将结合细胞病变效应分析和MTT测定细胞存活率检测方法，对具有新型结构的芳香酯化合物WY113，WY130和WY143的抗ADV活性进行评估。

2、试验方法：

2.1.1芳香酯化合物WY113，WY130和WY143对于宿主RD细胞的毒性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度芳香酯化合物WY113，WY130和WY143的细胞维持液继续培养，48h后显微镜目测并分别记录其细胞毒性，MTT法测定细胞存活率。SPSS 11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(Median cyctoxic concentration，CC50)。细胞存活率＝(药物组平均OD492值/细胞对照组平均OD492值)×100％。

2.1.2芳香酯化合物WY113，WY130和WY143对于ADV的抑制活性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去培养液，100TCID50的ADV病毒液感染细胞1h，加入不同浓度的芳香酯化合物 WY113，WY130和WY143(利巴韦林作为阳性对照药物)孵育细胞。待继续培养约 48h，病毒对照孔出现90％左右的CPE病变时，显微镜下观察细胞病变效应 (CPE)。CPE的观察记录方法：无细胞病变记做-，25％以下细胞病变记做+，25％- 50％细胞病变记做++，50％-75％细胞病变记做+++，75％以上细胞病变记为++++。

CPE观察完毕后，利用MTT方法检测药物对ADV的抑制率。具体步骤为：每孔加入MTT 50μL(5mg·mL^-1)，孵育3-4h后去掉上清液，加入等体积的DMSO溶解沉淀。用酶标仪在492nm处读取所对应的吸光度(OD492值)。利用如下公式计算药物对ADV的抑制率。用SPSS 11.5软件计算药物的半数有效浓度 (Concentration for 50％of maximal effect，EC50)。

2.1.3药物的治疗指数(SI)

SI＝CC50/EC50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。

3、芳香酯化合物WY113，WY130和WY143细胞毒性及抗ADV活性试验结果见表 1，芳香酯化合物WY113，WY130和WY143对于ADV作用的RD细胞存活率的影响见图1。

表1芳香酯化合物细胞毒性及抗ADV活性

本发明检测到芳香酯化合物WY113，WY130和WY143对于ADV有强的抑制活性。其中芳香酯化合物WY130有更好的抑制效果，芳香酯化合物WY143抗ADV活性有所下降，但毒性也明显降低，所以芳香酯化合物WY130和WY143有较高且相似的治疗指数。芳香酯化合物WY113，WY130和WY143抑制ADV引起的RD细胞CPE效应如图2所示。ADV 感染的RD细胞变圆，从细胞板壁脱离，芳香酯化合物WY113，WY130和WY143(40μ g/mL)处理对于其病变效应有一定的抑制作用，芳香酯化合物WY130有强的抑制效果，可以几乎完全抑制ADV引起的RD细胞病变效应，抑制率达96％。

本申请人进一步实施了芳香酯化合物WY113，WY130和WY143对于ADV引起的 RD细胞凋亡的抑制作用试验，试验情况如下：

1、试验内容

ADV感染RD细胞后，在细胞内增殖破坏细胞正常的生命活动，最终导致细胞凋亡。因此本申请人进一步检测在ADV感染RD细胞后，芳香酯化合物WY143对于ADV引起的RD细胞凋亡的抑制作用。

2、试验方法

对数生长期的RD细胞铺板24孔板，长满单层后100TCID50ADV感染细胞， 37℃孵育1.5h后移去病毒液，加入含40μg/mL芳香酯化合物WY143的细胞维持液。大约48h后，收集细胞，运用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒在流式细胞仪上进行细胞凋亡的检测。

3、试验结果

实验结果表明，40μg/mL芳香酯化合物WY143可以有效抑制ADV导致的细胞凋亡。在病毒对照组细胞凋亡率为97.6％(图2-b)，正常未处理细胞凋亡率 0.59％的情况下(图2-a)，40μg/mL芳香酯化合物WY143处理的细胞凋亡率和存活率分别有12.5％和62.5％(图2-c)。可见芳香酯化合物WY143可以有效保护ADV 导致的细胞凋亡。