一种针对鸡血藤药效有效提取的炮制方法与流程

本发明涉及与鸡血藤相关的中药酒炮制、鸡血藤药效提取以及抗氧化活性领域的研究。

背景技术：

鸡血藤是一种沿用千年的活血化瘀中药,其性温,味苦、甘,归肝、肾经。有补血、活血、通络的功效,用于治疗月经不调、血虚萎黄、风湿痹痛等。现代药理研究表明鸡血藤具有降血压、抗癌、抑菌、抗放射线的功效。

鸡血藤主要涉及其中的几大组成成分：黄酮类化合物：含黄酮类化合物的鸡血藤原植物主要有密花豆藤、香花崖豆藤以及丰城崖豆藤。从这3种植物中分离得到的黄酮类化合物主要包括异黄酮类、黄酮类、异黄烷类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、黄烷(醇)类、查尔酮类及紫檀烷类化合物。异黄酮类化合物共有26个；萜类化合物：含有萜类化合物的鸡血藤原植物有豆科白花油麻藤、丰城崖豆藤以及五味子科铁箍散等。白花油麻藤含有的萜类化合物包括表木栓醇、羽扇豆醇。丰城崖豆藤含有的萜类化合物包括无羁萜－3β－醇。五味子科铁箍散含有的萜类化合物包括泽泻醇、匙叶桉油烯醇；甾醇类化合物：甾醇类化合物主要存在于豆科来源的鸡血藤原植物[4，9]，主要包括豆甾醇、β－谷甾醇、胡萝卜苷、7－酮基谷甾酮、豆甾醇－3－o－β－d－葡萄糖苷等；蒽醌类化合物：蒽醌类化合物主要存在于豆科来源的鸡血藤原植物，如密花豆[4]含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素等蒽醌类化合物；木脂素类化合物：木脂素类化合物主要存在于五味子科来源的鸡血藤原植物，其中铁箍散所含木脂素为:五味子酯i、五味子酯f、propinquanina、propinquanin

然而，在鸡血藤的传统用药中，出现众多的炮制品，涉及酒泡、水煮、煎服等常见使用方法，而对于不同做法所达到的效果，却没有得到很好的论证。因此，如何使传统鸡血藤使用方法达到最佳疗效，提高鸡血藤的药性最大利用率，发明一种针对鸡血藤药效有效提取的炮制方法可以解决这一问题。

技术实现要素：
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发明内容：本发明内容通过对于不同炮制方法提取的鸡血藤，进行药效的研究对比，得出一种使鸡血藤的药效达到最佳状态的提取方式，并发明出一种针对鸡血藤药效有效提取的炮制方法。即使用乙醇溶液进行炮制萃取相比于水萃取，得到的抗氧化活性较高。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种高效提取鸡血藤抗氧化活性的制备方法，它包括以下制备步骤：

1)、取适量鸡血藤研磨成粉末状，取3-5g鸡血藤粉末与140-180ml80％的乙醇溶液混合，进行120-140r/min摇床50-70小时充分震荡；

2)、将步骤(1)震荡之后的枣提取液经过旋转蒸发萃取，得到干燥提取物，加以100ml80％的乙醇溶液将残渣转移至锥形瓶；

3)、将步骤2)的提取液以92％-97％乙醇溶液配制成1mg/ml的母液，存放于3-6℃环境下备用；

4)、将步骤3)中的母液以92％-97％乙醇分别稀释成浓度为5个的样品液，分别取1ml与ph8.0-8.4的tris-缓冲溶液5ml进行测定，并加入3.5-3.9ml去离子水，混匀，置于带塞试管中；

5)、将步骤4)的带塞试管置于25-29℃水浴中保温15-20min，取出后立即加入同在25-29℃水浴中保温15-25min的3mmol/l邻苯三酚0.3ml，摇匀，倒入比色皿；

6)、将步骤5)的比色皿置于可见分光光度计中，并在318.5-320.5nm波长处，每隔0.5-1.5min测定一次吸光值，一共反应3-5min，完成提取。

7)用水代替无水乙醇以相同的方法提取鸡血藤中，测定其吸光度值。根据公式得出，乙醇提取的抗氧化活性高于水提取的鸡血藤。

进一步地，所述步骤1中取4g鸡血藤粉末与160ml80％的乙醇溶液混合于锥形瓶中，进行130r/min摇床60小时充分震荡。

进一步地，所述步骤3中提取液以95％乙醇溶液配制成1mg/ml的母液，存放于4℃环境下备用。

进一步地，所述步骤4中母液以95％乙醇分别稀释成浓度为2、4、6、8、10、20ug/ml的样品液，分别取1ml与ph8.2的tris-缓冲溶液5ml进行测定，并加入3.7ml去离子水，混匀，置于带塞试管中。

进一步地，所述步骤5中带塞试管置于27℃水浴中保温20min，取出后立即加入同在27℃水浴中保温20min的3mmol/l邻苯三酚0.3ml，摇匀，倒入比色皿。

进一步地，所述步骤6中比色皿置于可见分光光度计中，并在319.5nm波长处，每隔1min测定一次吸光值，一共反应4min。

本发明与现有技术相比的优点或者效果：

本发明证明了乙醇炮制的鸡血藤要比水炮制的抗氧化活性高，药效好。炮制方法简单易行，也可证实在实际生活中药酒炮制与水煎煮提取的抗氧化活性，药酒炮制品效果更佳。此方法适用于实际生活，高效环保，大大提高了鸡血藤的药效，且产生的副作用很少。

附图说明

图1为本发明的实验结果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1。

其炮制品使鸡血藤药效达到较佳状态，尤其是针对鸡血藤中的主要药效——抗氧化活性的最佳提取方法。

1)、取适量鸡血藤研磨成粉末状，取4g鸡血藤粉末与160ml80％的乙醇溶液混合于锥形瓶中，进行130r/min摇床60小时充分震荡。

2)、将步骤(1)震荡之后的枣提取液经过旋转蒸发萃取，得到干燥提取物。加以100ml80％的乙醇溶液将残渣转移至锥形瓶。

3)、将步骤2)的提取液以95％乙醇溶液配制成1mg/ml的母液，存放于4℃环境下备用。

4)、将浓度为1mg/ml的不同极性相母液，以95％乙醇稀释为200、400、600、800、1000μg/ml的样品液。

5)依次往试管中加入9mmol/l乙醇－水杨酸2ml、9mmol/lfeso42ml、样品液2ml、8.8mmol/lh2o22ml，每加一种溶液立即摇匀。

6)以蒸馏水调零测定ax，以蒸馏水代替样品测定ao，以无水乙醇代替乙醇－水杨酸测定ax0。平行3次取平均值，以vc做对照。

7)羟自由基清除率公式如下:rsa·oh(％)＝a0－(ax－ax0)a0×100式中:a0－空白吸光度，ax－样品吸光度，ax0－无水乙醇代替乙醇－水杨酸吸光度。

如图1所示，点22.93/25.04/29.72/31.38/33.01为蓝点(图上颜色没有表示，实验室数据中显示的颜色)，表示水炮制品清除率；其余的点表示红点，表示乙醇炮制品清除率。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种针对鸡血藤药效有效提取的炮制方法，涉及乙醇炮制法，抗氧化物活性技术领域，尤其涉及鸡血藤抗氧化活性的提取及抗氧化活性强度研究方法，该制备方法包括以下制备步骤：将鸡血藤研磨成粉末状；2)将乙醇、水溶液与鸡血藤粉末以40:1的料液比混合；3)将混合液，放入摇床使其溶解充分；4)将步骤3)反应后的溶液进行蒸发萃取；5)将步骤4)的萃取液进行抗氧化活性测定，并以水代替乙醇溶液进行相同萃取实验，最终测定比较得出乙醇溶液提取的鸡血藤炮制品中的抗氧化活性较水溶液炮制品的更高。使用乙醇炮制能使鸡血藤药效达到最佳状态的炮制方法，其可操作性强，原料普遍，制作方式简单，运用范围较广，达到最佳疗效。

技术研发人员：周桂;韦蓓蓓;夏远涛;龚燕妮;黄丽霖;黄小誉
受保护的技术使用者：广西民族大学
技术研发日：2018.07.10
技术公布日：2018.11.23