保湿修复组合物及其应用的制作方法

本发明涉及化妆品领域,具体涉及一种保湿修复组合物及其应用。

背景技术：

皮肤是最直接与外界接触的器官，覆盖于整个体表，起到了重要的屏障作用。有学者形容皮肤屏障为“砖墙”结构，由“砖”与“灰土”的结构组成，角质层细胞为“砖块”，由占角质层80%的各种角蛋白相互交联而成，形成不溶性致密结构;而将水脂相间的多层夹心结构、脂溶性成分的细胞间质比喻为“灰土”;角质层最外层保护膜-皮脂膜比喻为“墙壁的保护层”。只有皮肤“砖”与“灰土”的完整性才能保证皮肤屏障功能的完整，一方面保护体内各种器官和组织免受外界有害因素的损伤(包括物理性损伤、化学性损伤及微生物损伤)，另一方面防止体内水分、电解质及营养物质的丢失，从而保持机体内环境的相对稳定。皮肤物理屏障受损将引起皮肤干燥，皮肤老化、特异性皮炎、湿疹、银屑病、鱼鳞病、日光性皮炎等多种皮肤疾病。因此，修复皮肤屏障功能一直以来都是护肤工作中关注热点。

水通道蛋白(aqp)是一类在细胞膜上与水分子、甘油及尿素等中性小分子通透性有关的转运蛋白，目前发现其在哺乳动物中有13个亚型，分别命名为aqp0~12，不同aqp亚型的分布具有组织、细胞、亚细胞特异性。aqp可分为三个亚家族，即经典的水选择通道亚家族、水-甘油通道亚家族、aqp超级通道即超aqp家族。aqp3属于水-甘油通道亚家族，对于皮肤的屏障功能具有重要意义，其表达量的变化及功能缺陷均会导致皮肤屏障功能受损而引起相关皮肤病，其中参考文献“黄树英,涂颖,何黎,纪超,程波.水通道蛋白3与皮肤屏障相关性研究进展[j].皮肤科学通报,2017,34(04):383-387+2”进行了详细的综述。

本发明的发明人在前面提到的关于皮肤屏障修复功效的护肤领域中所进行的大量研究工作之后，出乎意料地发现了，海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物和乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液的混合物能够提升表皮基底层中水通道蛋白3(aqp3)的表达，从而增强角质层的致密结构、皮肤酸碱缓冲能力，具有显著的皮肤屏障修复功效，从而完成了本发明。

技术实现要素：

为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种保湿修复组合物，所述的保湿修复组合物具有良好的皮肤屏障修复功效。

本发明的另一目的在于提供上述保湿修复组合物在化妆品中的应用。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物0.1-5份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液0.1-5份。

在其中一些实施例中，所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干粉按一定料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温至50-70℃，调节ph值至4.5-6.5，加入一定量酶，所用酶的活力为40-60u/mg，超声波提取，得提取液；

2）将提取液过滤，收取滤液，然后将滤液真空下浓缩至原滤液1/10，然后加入2-4倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置4-12h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加3-4倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物。

在其中一些实施例中，步骤1)中所述的海星枝管藻干粉为干燥至恒重后粉碎，40-80目过筛后所得干粉；所述料液比为1:5-50g/ml；所述酶为纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶中的一种，其用量按海星枝管藻干粉：酶为1g:60-100u的比例计算；所述超声提取为：45-70℃提取15-30min。

在其中一些实施例中，步骤2)中所述的过滤为200目过滤；所述的真空为真空度0.06-0.1mpa。

本发明保湿修复组合物具有提升表皮基底层中aqp3的表达，增强角质层的致密结构、皮肤酸碱缓冲能力，具有显著的皮肤屏障修复功效，添加护肤品常用的基质或载体，可制成保湿修复滋润水、膏霜、乳液、水剂等化妆品。

本发明还提供所述的保湿修复组合物在制备化妆品中的应用，所述的保湿修复组合物的用量为化妆品总质量的0.1-10wt％。

进一步的，所述的化妆品为保湿修复滋润水。

一种保湿修复滋润水，主要由如下质量百分含量的组分组成：

甘油1-5%，

甲基丙二醇1-5%，

peg/ppg-17/6共聚物0.1-1%，

edta二钠0.01-0.05%，

黄原胶0.01-0.15%，

尿囊素0.1-0.3%，

对羟基苯乙酮0.1-0.3%，

透明质酸钠0.01-0.1%，

甘油辛酸酯0.1-0.2%，

辛酰羟肟酸0.1-0.2%，

1,2-己二醇0.1-0.5%，

丙二醇0.1-1%，

细小裸藻（euglenagracilis）多糖0.1-0.5%，

果糖0.1-0.5%，

鼠李糖0.1-0.5%，

甘油葡糖苷0.1-2%，

β-葡聚糖0.1-0.5%，

葡糖醛酸0.1-0.5%，

甘露糖0.1-0.5%，

1,2-戊二醇0.1-1%，

茶（camelliasinensis）叶提取物0.1-1%，

光果甘草（glycyrrhizaglabra）根提取物0.1-1%，

母菊（chamomillarecutita）花提取物0.1-1%，

迷迭香（rosmarinusofficinalis）叶提取物0.1-1%，

上述保湿修复组合物0.1-10%，

水70-90%。

在其中一些实施例中，所述的保湿修复滋润水，还可以包括如下质量百分含量的组分：

翅荚决明（cassiaalata）叶提取物0.2-1%，

灯台树（cornuscontroversa）叶提取物0.2-1%。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

（1）本发明将海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物和乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液合用，实验证明，合用后的混合物能够提升表皮基底层中水通道蛋白3(aqp3)的表达，从而增强角质层的致密结构、皮肤酸碱缓冲能力，具有显著的皮肤屏障修复功效。

（2）本发明提供的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物的制备工艺，利用超声辅助酶解法提取海星枝管藻比超声波辅助法和酶解法提高了得率，这是因为酶酶解掉细胞壁中的纤维素，超声波的空化效应和振动作用，能促进细胞壁的破裂，有利于有效活性成分的溶出，同时超声波还有助于酶与细胞壁中纤维素充分作用。

（3）本发明所提供的保湿修复滋润水修复皮肤屏障受损，提升皮肤自身防御能力，还能给肌肤深层补水，能够滋润皮肤并防止肌肤水分蒸发、改善微循环，增强肌肤湿润度，维持肌肤与补水产品的良性互动。

附图说明

图1为rt-pcr检测不同组皮肤中aqp3mrna的表达量。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的作更详细的描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数或条件，可参照常规技术进行。

本发明所涉及的部分原料简介如下：

“海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物”表示从海星枝管藻的藻体得到的提取物，海星枝管藻富含褐藻酸和岩藻多糖等生物活性物质；对脯氨酰内肽酶有抑制，对调节血管紧张素、神经紧张素有益，还有抗氧化性，对透明质酸酶有抑制作用，可有效抑制透明质酸的分解（来源于王建新主编的《化妆品植物原料大全》p469页）。

“乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液”的inci名称/英文名称：lactobacillus/soymilkfermentfiltrate，是豆浆通过16个属，共35种乳酸杆菌发酵获得的过滤液。富含多种维生素和蛋白质，以及活性成分，有防护，舒缓，保湿，修复和美白效果。合适的乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液可以是来自法国axialys(欧雅斯)商品名为“奥婷敏”的原料。

“翅荚决明（cassiaalata）叶提取物”表示从豆科植物翅荚决明的叶得到的提取物，其可以含有或包括一种或多种生物活性分子，包括大黄酸(rhein)，大黄素(emodin)，4，5-二羟基-1-羟甲基蒽酮(4，5-dihydroxy-1-hydroxymethylanthrone)，4，5-二羟基-2-羟甲基蒽醌(4，5-dihydroxy-2-hydroxymethylanthraquinone)，异大黄酚(isochrysophanol)，大黄素甲醚-l-葡萄糖甙(physcion-l-glucoside)，可以修复受损dna，让皮肤恢复细腻光滑。合适的翅荚决明（cassiaalata）叶提取物可以是“对叶豆提取物”或“对叶豆粉”（来自于宁夏凯源生物技术有限公司）。

“灯台树（cornuscontroversa）叶提取物”表示从山茱萸科植物灯台树的叶得到的提取物，含有吲哚类生物碱，有小毒，入药具有镇静、消炎止痛、化痰、清热平肝、消肿止痛等功效（来源于《中华本草》）。合适的灯台树（cornuscontroversa）叶提取物可以是“灯台树（cornuscontroversa）叶提取物”（来自于西安森冉生物工程有限公司）。

“茶（camelliasinensis）叶提取物”表示从茶（学名：camelliasinensis(l.)o.ktze.）叶得到的提取物，可以是水或酒精为溶剂提取，茶叶的提取物为茶多酚，又名茶单宁、茶鞣质,是一类存在于茶叶中的多羟基酚类化合物的总称。具有健美肌肤、延缓皮肤衰老等功能，能够清除体内的各种自由基，达到抗氧化的效果，其中茶多酚具有收敛性，能够使蛋白质沉淀变性，故具有较强的抗菌作用。合适的茶（camelliasinensis）叶提取物可以是“绿茶提取物”（来自于西安小草植物科技有限公司）。

“光果甘草（glycyrrhizaglabra）根提取物”表示从豆科植物光果甘草（glycyrrhizaglabral.）的根得到的提取物，可以是水或酒精为溶剂提取，主要含有光果甘草素和光果甘草定。具有抗氧活性很强的皮肤脱色、淡化色斑的功能，用于美白，杀菌，淡化色斑，亦可用作香料，并有舒缓肌肤的效果（来源于王建新主编的《化妆品植物原料大全》p121、122页）。合适的光果甘草（glycyrrhizaglabra）根提取物可以是“光果甘草提取物（光甘草定）”（来自于西安天瑞生物技术有限公司）。

“母菊（chamomillarecutita）花提取物”表示从是菊科、母菊属一年生草本植物母菊的花得到的提取物，可以是水或酒精为溶剂提取，其含挥发油、黄酮类化合物、氨基酸、绿原酸和微量元素等，具有抗菌、抗氧化、抗炎、舒缓抗敏等生物活性，广泛应用于化妆品中，可起到预防过敏、保湿、防治粉刺和抗衰老等功效（来源于《化妆品植物原料手册》）。合适的母菊（chamomillarecutita）花提取物可以是“母菊（chamomillarecutita）花提取物”（来自于广州莱裕生物科技有限公司）。

“迷迭香（rosmarinusofficinalis）叶提取物”表示从唇形科植物迷迭香的叶得到的提取物，可以是水或酒精为溶剂提取，其可以含有或包括一种或多种生物活性分子，包括有迷迭香精油、鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸等,药理作用包括抗菌、抗氧化、抗抑郁、代谢调节、抗神经损伤、抗炎、抗肿瘤等（来源于王建新主编的《化妆品植物原料大全》p256、257页）。合适的迷迭香（rosmarinusofficinalis）叶提取物可以是“迷迭香（rosmarinusofficinalis）叶提取物”（来自于浙江绿州生物技术有限公司）。

实施例1

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物0.1份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液5份。

所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干燥至恒重后粉碎，40目过筛后得干粉，按1:5g/ml料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温至50℃，调节ph值至6.5，加入一定量半纤维素酶，其用量按海星枝管藻干粉：酶为1g:60u的比例计算，所用酶的活力为40-60u/mg，70℃下超声波提取30min，得提取液；

2）将提取液200目过滤，收取滤液；然后将滤液在真空度为0.06mpa下减压浓缩至原滤液1/10，然后加入2倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置4h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加4倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物，得率为8.6%。

实施例2

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物5份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液0.1份。

所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干燥至恒重后粉碎，80目过筛后得干粉，按1:50g/ml料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温至70℃，调节ph值至4.5，加入一定量木聚糖酶，其用量按海星枝管藻干粉：酶为1g:100u的比例计算，所用酶的活力为40-60u/mg，45℃下超声波提取15min，得提取液；

2）将提取液200目过滤，收取滤液；然后将滤液在真空度为0.1mpa下减压浓缩至原滤液1/10，然后加入4倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置12h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加3倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物，得率为8.8%。

实验一皮肤屏障指标测试和aqp3mｒna表达量比较

选取40人作为志愿受试者，志愿者有皮肤物理屏障受损引起的皮肤干燥，皮肤老化、特异性皮炎、湿疹、银屑病、鱼鳞病、日光性皮炎等两种或两种以上皮肤疾病。随机均分为四组，每组十人。

1.使用方法

实施例1-2所得保湿修复组合物的样品、海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液均用去离子水稀释100倍，然后每种样品溶液分组涂抹于志愿者皮肤物理屏障受损部位，每天早晚各一次，使用一周后进行测试。

2.检测指标

tewameter仪、submeter仪(courega+khazaka，德国)测定经表皮水分流失(tewl)、皮脂含量。sclar水分笔(sclar，日本)测定角质层含水量。测量时要求患者静坐、皮肤保持自然状态30min，室温控制在20～25℃，湿度在45%～65%，每项测量3次，取其平均值。

3.ｒt－pcｒ

采用tｒizol一步法提取总ｒna。取总ｒna3μg，采用ｒevertaidtm逆转录试剂盒完成逆转录。反应总体积为50μl，其中10×taqbuffer5.0μl，mgcl2(25mmol/l)5.0μl，dntpmix(10mmol/l)2μl，aqp3及gapdh上、下游引物(10μmol/l)各1μl，cdna5μl，taq酶(5u/μl)0．5μl，补足双蒸水至50μl。反应条件为:95℃预变性5min，94℃变性40s，55℃退火60s，72℃延伸60s，72℃终末延伸10min，共30循环。引物序列为:aqp3上游，5'－agacagccccttcaggattt－3'，aqp3下游，5'－tcccttgccctgaatatctg－3'，扩增片段长度为226bp;gapdh上游，5'－accacagtccatgccatcac－3';gapdh下游，5'－tccaccaccctgttgctgta－3';扩增片段长度为452bp。电泳后，用凝胶成像系统进行扫描拍照，分析目的条带的灰度值，按aqp3灰度值/gapdh灰度值的比值计算aqp3分子mｒna的相对含量。

4.统计学方法

采用spss13．0软件包对数据进行统计学分析，计数资料以百分率表示，用χ2检验，计量资料以x±s表示，用t检验。p＜0.05为差异有统计学意义。

5.结果

5.1四组皮肤屏障指标比较，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液组和海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物组角质层含水量、皮脂含量均较实施例1、实施例2这两组降低(p＜0.05)，经表皮水分流失两组增加(p＜0.05)(见表1)。

表1两组皮肤屏障指标比较x±s

5.2四组aqp3mrna表达量比较

乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液组和海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物组aqp3mrna的表达量分别为(0.156±0.091)、(0.152±0.087)，实施例1和实施例2分别为(0.405±0.128)、(0.409±0.132)，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液组和海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物组aqp3mrna较实施例1和实施例2明显降低(t=6.865，p＜0.05)(见图1)。

实施例3

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物2.5份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液2.5份。

所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干燥至恒重后粉碎，60目过筛后得干粉，按1:25g/ml料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温至60℃，调节ph值至5.5，加入一定量半纤维素酶，其用量按海星枝管藻干粉：酶为1g:80u的比例计算，所用酶的活力为40-60u/mg，60℃下超声波提取22min，得提取液；

2）将提取液200目过滤，收取滤液；然后将滤液在真空度为0.08mpa下减压浓缩至原滤液1/10，然后加入3倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置8h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加4倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物，得率为9.1%。

对比例1

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物2.5份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液2.5份。

所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干燥至恒重后粉碎，60目过筛后得干粉，按1:25g/ml料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温，60℃下超声波提取22min，得提取液；

2）将提取液200目过滤，收取滤液；然后将滤液在真空度为0.08mpa下减压浓缩至原滤液1/10，然后加入3倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置8h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加4倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物，得率为3.4%。

对比例2

一种保湿修复组合物，包括如下重量份的组分：海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物2.5份，乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液2.5份。

所述的的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物,通过如下步骤制备得到：

1）将海星枝管藻干燥至恒重后粉碎，60目过筛后得干粉，按1:25g/ml料液比加入到蒸馏水中，沸水搅拌浸提30min，然后降温至60℃，调节ph值至5.5，加入一定量半纤维素酶，其用量按海星枝管藻干粉：酶为1g:80u的比例计算，所用酶的活力为40-60u/mg，60℃下提取22min，得提取液；

2）将提取液200目过滤，收取滤液；然后将滤液在真空度为0.08mpa下减压浓缩至原滤液1/10，然后加入3倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于2℃冰箱静置8h，将其在3000r/min离心10min，得到沉淀物；

3）往沉淀物加4倍重量的蒸馏水，复溶，直接冷冻干燥得到提取物，得率为3.6%。

实验二保湿测试

制备如表2-3所示组成的保湿修复滋润水1-5和对比例3-8，由以下质量百分含量的组分组成：

表2

表3

其中，海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物由实施例3中所述方法制备而得。

测试样品：保湿修复滋润水1-5和对比例3-8

测试人群：挑选20-40岁550个人，男女各半，身体健康，生活规律，无皮肤病，随机分为11组，每组50人。

测试方法：受试对象清洁脸部皮肤后，擦干，涂抹测试样品15分钟，然后在测试环境温度为25℃，相对湿度为60％的环境中测定左脸的水分含量。在左脸上划出2个2cm×2cm的正方形实验区域，作为样品的测试区，采用多功能皮肤测试仪的corneometercm825探头进行皮肤含水量测试,该探头是通过测定皮肤的电容值反映皮肤水分的变化,cm值越高代表角质层含水量越高。多功能皮肤测试仪分别测定敷保湿修复滋润水前和敷保湿修复滋润水后2、4小时的脸部皮肤含水率，记录结果。具体结果见表4。比较后进行统计学分析，各组比较结果表明，p＜0.05，差异具有统计学意义。

表4保湿效果测试结果表

测试结果表明,保湿修复滋润水1-5对皮肤有显著保湿效果（相对初始cm值，使用2小时后cm值提高到62.47-78.87之间，4小时后，cm值在55.94-71.82之间），相对对比例3-6对皮肤保湿效果（相对初始cm值，使用2小时后cm值提高到30.12-55.35之间，4小时后，cm值在23.18-45.12之间），保湿效果更好。随时间的延长，使用保湿修复滋润水1-5后水分的散失也更慢。

由保湿修复滋润水1-3和对比例3-4对比可知，海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液合用时制得的保湿修复组合物添加到保湿修复滋润水中，保湿效果更好，保湿能力也更持久，单用时，效果不好。

由保湿修复滋润水1-3和对比例5-6对比可知，使用本发明提取方法制备得到的海星枝管藻（cladosiphonnovae-caledoniae）提取物，应用到保湿修复滋润水中，保湿效果更好。

由保湿修复滋润水4-5与保湿修复滋润水1-3对比可知，添加翅荚决明（cassiaalata）叶提取物、灯台树（cornuscontroversa）叶提取物极大提升了保湿效果，保湿能力也更持久。

对比例7-8与保湿修复滋润水4-5对比可知，翅荚决明（cassiaalata）叶提取物、灯台树（cornuscontroversa）叶提取物合用时具有协同增效作用，单用时，保湿效果提升不明显。

据受试者反应，使用本发明保湿修复滋润水，安全无刺激，无不良反应。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。