氟西汀在抗结核分枝杆菌药物中的应用的制作方法

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及氟西汀在抗结核分枝杆菌药物中的应用。

背景技术：

宿主抗结核免疫和炎症反应与结核菌感染的转归密切相关。因此，通过干预宿主功能来增加宿主抗结核免疫，可以达到清除结核菌的目的。这种策略被称为的基于宿主基因定向治疗结核病(hdt),hdt药物是通过提高宿主抗结核免疫来实现治疗结核病目的，从而为提高结核病治疗效果，克服耐药结核治疗问题提供了新的愿景。

盐酸氟西汀是第一种被称为选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssris)的抗抑郁药。氟西汀是r-和s-对映体的外消旋混合物，具有相同的药理活性。尽管该类化合物之间存在明显的结构差异，但ssri具有相似的药理学活性。ssris是神经元5-羟色胺再摄取的有效抑制剂。它们对去甲肾上腺素或多巴胺再摄取几乎没有影响，并且不拮抗α-或β-肾上腺素能，多巴胺d2或组胺h1受体。在急性使用期间，代谢为去甲氟西汀，氟西汀是一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)，它可以阻断神经元膜5-羟色胺再摄取泵中5-羟色胺的再摄取，增强血清素对5ht1a自身受体的作用。慢性使用导致体树突5-ht1a和末端自身受体的脱敏，认为情绪增加和焦虑减少的总体临床效果是由于神经元功能的适应性变化导致增强的5-羟色胺能神经传递。氟西汀可用于治疗重度抑郁症(mdd)，中度至重度神经性贪食症，强迫症(ocd)，经前焦虑症(pmdd)，伴有或不伴有广场恐怖症的恐慌症，以及与奥氮平联合治疗或双相i抑郁症，氟西汀是最厌食和刺激性的ssri。与三环类抗抑郁药相比，ssris对组胺，乙酰胆碱和去甲肾上腺素受体的亲和力显着降低。

氟西汀分子式为c15h15n30·c3h6o3·h2o，分子量为309.33，其结构式如下：

技术实现要素：

本发明的目的是研发高效的抗结核新药，发现了氟西汀的抗结核作用以及在抗结核分枝杆菌药物中的应用，安全性高，具有很好的开发价值。

本发明的技术方案主要为氟西汀在抗结核分枝杆菌药物中的应用。

进一步地，结核分枝杆菌具体为结核分枝杆菌h37rv。

本发明还提供了氟西汀在制备抗结核药物中的应用。

在本发明的一个实施例方案中，提供了一种有效成分为氟西汀的抗结核药物。这种抗结核药物能够应用于治疗结核病。

本发明的优点在于：

(1)本发明首次发现了氟西汀具有抗结核的作用，是一个潜在的靶向hdt的药物，这些药物都是fda已经批准，它们安全性已经多年实践验证，具有很好的开发价值；

(2)本发明首次提出了氟西汀在制备抗结核药物中的应用；

(3)本发明发现了氟西汀在细胞中可以显著增强细胞杀伤结核菌。

附图说明

图1为本发明实施例1中不同浓度氟西汀对细胞的存活率的影响；

图2为本发明实施例2中氟西汀对细胞中结核分枝杆菌存活率的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

本发明测定氟西汀在细胞内抗结核分枝杆菌的活性，结果显示氟西汀具有抗结核分枝杆菌的作用。

以下实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所有原料均为通用材料。

实施例1

1.u937巨噬细胞(编号bncc100967)的分化：将悬浮的u937巨噬细胞培养于含有10％fbs的rpmi-1640培养基中，并放置于温度为37℃，含有5％co2的细胞培养箱中培养，加入终浓度为20ng/ml的pma，培养过夜，将其分化成巨噬细胞，用pbs清洗两遍，利用胰酶消化、重悬后，加入96孔细胞培养板中，使每孔的细胞数为1x104个；

2.细胞存活率的测定：将上述u937巨噬细胞培养24h后，加入不同浓度的药物，使药物终浓度为10um、1um、0.1um，每个浓度分别重复3次实验，利用dmso作为平行对照实验，对照组中加入与药物体积相同的dmso，分别重复3次实验，在48h后每孔加入10ulwst-1溶液，在温度为37℃的条件下继续培养4h，利用酶标仪测定od450nm吸光值；

细胞存活率按照以下公式计算：

细胞存活率％＝[a/a0]×100；其中，a0为dmso对照的吸光值，a为不同浓度药物处理的吸光值。

图1表示不同浓度氟西汀对细胞的存活率的影响；其中，“**”代表具有显著性差异，“ns”代表没有统计学差异。

实验结果显示，氟西汀浓度为100um、10um、1um，对应的细胞存活率分别为：38％、89％、100％；当药物浓度为10um时，细胞存活率与对照组相比没有统计学差异。

实施例2：

1.u937巨噬细胞的分化：将悬浮的u937巨噬细胞培养于含有10％fbs的rpmi-1640培养基中，并放置于温度为37℃，含有5％co2的细胞培养箱中培养，加入终浓度为20ng/ml的pma，培养过夜，将其分化成巨噬细胞，用pbs洗两遍，利用胰酶消化、重悬后，加入96孔细胞培养板中，使每孔的细胞数为1x104个；

2.细胞内杀菌活性测定：将上述u937巨噬细胞培养24h后，加入氟西汀使其终浓度为1um，每个浓度分别重复3次实验，利用dmso作为平行对照实验，对照组中加入与药物体积相同的dmso，分别重复3次实验，在4h后吸去培养基，用pbs洗两遍，加入新鲜培养基72h后加入裂解液，梯度稀释后涂布于7h10平板上，3周后计算菌落；

结果如附图2所示，利用10um氟西汀处理细胞，其对细胞中结核菌的存活率相对于对照组只有14.2％，而且在这个浓度下没有明显的细胞毒性，可用于开发高效、低毒的抗结核药物。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求限定的范围中。

技术特征：

技术总结
本发明涉及氟西汀在抗结核分枝杆菌药物中的应用。盐酸氟西汀是第一种被称为选择性5‑羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)的抗抑郁药，氟西汀是R‑和S‑对映体的外消旋混合物，具有相同的药理活性；而本发明研究发现其具有抗结核的作用，具有很好的开发价值；本发明涉及的氟西汀在抗结核分枝杆菌药物中的应用以及氟西汀具有明显的抗结核分枝杆菌的作用属于首次公开。

技术研发人员：蔡毅;陈心春;欧阳琪
受保护的技术使用者：深圳大学
技术研发日：2019.07.03
技术公布日：2019.10.18