一种抗菌中药组合物的制作方法

本发明归属于水产动物药物领域，具体涉及一种抗水产动物病原菌的中药组合物。

背景技术：

近年来，由于淡、海水资源环境的不断恶化，渔业资源量和捕捞量大大下降，为满足市场的需求，养殖业发展迅猛。但随着养殖种类和养殖密度的增加，疾病的类型日趋复杂化，病害暴发的几率逐年增加。在每年的渔业灾情经济损失中，因病害造成的损失约占20％。抗生素对水产动物细菌性疾病的防治效果明显。但近些年，抗生素的大量使用，导致药物残留、毒副作用甚至病原菌耐药性等问题凸显，给水产品的质量安全造成严重的影响，引起全社会的高度关注。

中草药作为天然物质，资源广泛，价格低廉，含有多种生物有效成分，具有较好抗菌性，且低毒副、无残留，不污染环境。既能抑制病原菌的繁殖，也能保证水产品的品质安全。因此，开发抗菌中药组合物来替代抗生素显得尤为重要。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种环保、经济且高效的防治水产动物细菌性疾病的中药组合物。

本发明采用以下技术方案实现：

1.中药组合物配伍及制备

一种抗菌中药组合物，按重量份计，包括以下组分：八角茴香1～4份，诃子1～4份，苏木1～4份，乌梅1～4份，五倍子1～4份。

将上述重量份的各中药粉碎后混匀，用纱布包裹置于煎煮壶中，进行三次煎煮，合并药液，并保存。

2.活性评价

药物敏感性试验：采用平板打孔法和微量二倍稀释法，以营养琼脂混合营养肉汤为培养基，对副溶血性弧菌和溶藻弧菌进行体外药物敏感性试验。结果表明，中药组合物对副溶血性弧菌和溶藻弧菌均有较好的抗菌活性。

本发明的优点：本发明的中药组合物抗菌效果明显，溶解性好，无提取溶剂残留，保证了水产品的质量安全，且成本低，制备工艺简单，便于产业化，具有良好的开发价值和市场前景。

附图说明

图1为96孔板的结构示意图；

图2为中药组合物及单方中药的抑菌圈直径对照图(注：图中“vp”代表副溶血性弧菌；“va”代表溶藻弧菌；“average”代表对两种菌抑菌圈直径平均值)。

具体实施方式

1、中药组合物制备

一种抗菌中药组合物，该组合物由以下各种粉碎后的原料药材按重量份数混合均匀而成：八角茴香1～4份，诃子1～4份，苏木1～4份，乌梅1～4份，五倍子1～4份。

具体见表1。

表116种中药组合物配比

实施中，首先将八角茴香、诃子、苏木、乌梅、五倍子分别粉碎；再按重量份数称取各种原料药材混匀；用纱布包裹置于煎煮壶中，加入10倍重量的水浸泡过夜，使用全自动煎药壶煎煮，放液；加入5倍重量的水进行二煎，放液；再加入5倍重量的水进行三煎，放液。合并药液，并定容至成生药浓度为1g/ml，4℃保存。

2、单方中药制备

分别称取粉碎后的八角茴香、诃子、苏木、乌梅、五倍子1份(重量份)，各自用纱布包裹后置于不同的煎煮壶中，制备方法同上，最终定容至生药浓度1g/ml，4℃保存。

3、抗菌活性评价

平板打孔法测定抑菌圈大小：取菌悬液，均匀涂布在营养琼脂平板上，用直径为6mm的无菌打孔器在平板上垂直打孔，每孔加入150μl药液，每味药设三个平行，28℃正置培养24h，十字交叉法测定抑菌圈大小。

微量二倍稀释法测定mic、mbc：在如图1所示的96孔板中各孔内先加培养基100μl，然后每行第1孔中加入中药(浓度为1g/ml)100μl，混匀后取出100μl移至第2孔中，依次进行倍比稀释至第10孔，混匀后弃掉100μl，然后每孔依次加菌液100μl(d1～d10、h1～h10不加菌液，作为阴性对照；第12列不加菌液作为空白对照)，药物最终浓度为250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.98、0.49mg/ml。置于28℃生化培养箱中培养24h。在有黑色背景的光源下观察孔内细菌生长情况，有菌生长呈弥漫性浑浊；澄清透明说明细菌生长受到抑制，无菌生长的各孔中，浓度最低者即为mic。从无菌生长的各孔中移出20μl，均匀涂布到营养琼脂培养基上，28℃培养24h，观察有无菌落生长。以无菌落生长的最低药物浓度为该试验药物对病原菌的最小杀菌浓度(mbc)。

抗菌活性结果：

由图2可知，16种中药组合物对两种菌的平均抑菌圈＞20mm，均表现为极敏，而单方中药仅有诃子和乌梅的平均敏感性表现为极敏，但相同浓度条件下，组合物中诃子和乌梅的实际使用量均远低于单方。由此可知，使用中药组合物抗菌意义高于单方中药。

从表2得知，中药组合物hc-3～10、hc-12～16对两株菌的平均mic均小于任一单方中药，而中药组合物hc-6的mic最小，为2.93mg/ml。mbc方面，中药组合物hc-3与诃子、乌梅、五倍子相同，均为23.44mg/ml；中药组合物hc-4与八角茴香相同，均为39.06mg/ml；中药组合物hc-6最小，为15.62mg/ml。

综合分析：抗菌中药组合物各原料药的最佳重量份数为：八角茴香2份，诃子2份，苏木1份，乌梅4份，五倍子3份。

表2单方中药及中药组合物mic、mbc

技术特征：

1.一种抗菌中药组合物，其特征在于，该组合物由按重量份数的以下原料药制成：八角茴香1～4份，诃子1～4份，苏木1～4份，乌梅1～4份，五倍子1～4份。

2.根据权利要求1所述的抗菌中药组合物，其特征在于，该组合物由按重量份数的以下原料药制成：八角茴香2份，诃子2份，苏木1份，乌梅4份，五倍子3份。

技术总结
本发明属于水产动物药物领域，具体涉及一种抗菌中药组合物，该组合物由按重量份数的以下原料药制成：八角茴香1～4份，诃子1～4份，苏木1～4份，乌梅1～4份，五倍子1～4份。本发明中药组合物适用于由副溶血性弧菌、溶藻弧菌引起的水产动物细菌性疾病，有很好的抗菌作用，而且无毒、无害、无药残，且成本低，制备工艺简单，便于产业化，具有良好的开发价值和市场前景。

技术研发人员：程长洪;陈小龙;郭志勋;冯娟;马红玲;邓益琴
受保护的技术使用者：中国水产科学研究院南海水产研究所
技术研发日：2019.09.23
技术公布日：2020.06.16