连翘酯苷H在制备抗冠状病毒产品中的应用

连翘酯苷h在制备抗冠状病毒产品中的应用
技术领域
1.本发明属于医药领域，具体涉及连翘酯苷h在制备抗冠状病毒产品中的应用。


背景技术：

2.冠状病毒是目前已知rna病毒中基因组最大的病毒，由病毒的包膜上的棘突形成的类似日冕的形状而得名。新型冠状病毒covid
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19是目前已知的可以感染人的冠状病毒，已成为国际关注的突发公共卫生事件，目前针对抗新型冠状病毒的药物的发现是亟待解决的问题。
3.新型冠状病毒主要通过表达spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna
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dependent rna polymerase等蛋白（ science，2020，368: 779
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782；biochem j，2011，436: 53；science，2020，367: 1444
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1448）而侵袭人体。以新型冠状病毒spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna
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dependent rna polymerase等为靶点进行分子对接发现抑制剂，进一步通过阻断s蛋白与ace2的复合物形成为抑制covid
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19对人体的侵袭，采用动力学测定亲和力参数，并采用细胞实验检测病毒抑制能力，是目前发现新型冠状病毒covid
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19抑制剂的重要途径。
4.以新型冠状病毒spike蛋白rbd结构域与ace2的复合物、3cl水解酶以及rna
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dependent rna polymerase等为靶点蛋白进行分子对接，采用动力学测定亲和力参数，采用细胞实验检测病毒抑制能力，从天然植物中发现冠状病毒的抑制剂。发明人发现了具有明显抑制活性的化合物连翘酯苷h。
5.连翘酯苷h，属于咖啡酰基苯乙醇苷类化合物，英文名称forsythoside h，主要存在于木樨科等植物中，具有抗氧化（molecules，2011，16：5674）作用及抗菌（molecules，2011，16：5674）作用。
6.目前，未见连翘酯苷h抗病毒的研究报道。


技术实现要素：

7.本发明以分子对接，亲和力测定以及细胞抑制实验作为发现冠状病毒抑制剂的手段。采用以新型冠状病毒s蛋白与ace2的复合物为靶点蛋白进行分子对接，采用动力学测定亲和力参数，采用细胞实验检测病毒抑制能力，从天然植物中发现连翘酯苷h对冠状病毒具有显著的抑制作用。
8.本发明的目的是提供连翘酯苷h在制备冠状病毒产品中的应用。
9.连翘酯苷h 是如附图1所示结构式的化合物。
10.连翘酯苷h与s蛋白具有较强亲和力，通过抑制冠状病毒s蛋白与ace2的结合，在制备抑制冠状病毒制剂中的应用。
11.本发明采用分子对接、动力学测定及细胞抗病毒实验评价连翘酯苷h对冠状病毒的抑制作用，连翘酯苷h能剂量依赖地抑制。采用细胞实验评价连翘酯苷h 的抗病毒作用，连翘酯苷h 对冠状病毒有显著的抑制作用。
3.5 软件对对接结果进行可视化分析。对接结果限时fh与新型冠状病毒rna
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dependent rna polymerase具有明显的结合，结合自由能为9.67 kcal/mol。
18.实施例4 采用动力学测定与s蛋白rbd结构域亲和力参数实验芯片为 cm5，运行缓冲液为 hepes
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ep+。首先s蛋白rbd结构域固定在cm5 芯片上，待蛋白在芯片表面固定好之后，采用多循环动力学检测分析物与蛋白的亲和力。在运行正式样品前，用运行缓冲液替代分析物样品运行 3 个 startup 循环让系统在开始阶段模拟运行样品，以达到稳定的基线和系统状态。分析物浓度梯度为625、1250、2500、5000、10000μm，流速为 30μl/min，结合时间为 180 s，解离为 320 s。0.75 mm naoh 再生 30 s，流速为20 μl/min，再生之后稳定 60 s。实验结果显示连翘酯苷h在15 μm到500 μm范围内与s蛋白rbd结构域具有较强的亲和力。
19.实施例5 采用动力学测定与ace2亲和力参数实验芯片为 cm5，运行缓冲液为 hepes
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ep+。首先ace2固定在cm5 芯片上，待蛋白在芯片表面固定好之后，采用多循环动力学检测分析物与蛋白的亲和力。在运行正式样品前，用运行缓冲液替代分析物样品运行 3 个 startup 循环让系统在开始阶段模拟运行样品，以达到稳定的基线和系统状态。分析物浓度梯度为625、1250、2500、5000、10000μm，流速为 30μl/min，结合时间为 180 s，解离为 320 s。0.75 mm naoh 再生 30 s，流速为20 μl/min，再生之后稳定 60 s。实验结果显示连翘酯苷h在15 μm到500 μm范围内与ace2具有较强的亲和力。
20.实施例6采用细胞实验检测病毒抑制能力vero9细胞的96孔板上24小时，每孔接种50微升100 tcid50的病毒液，于37℃吸附90 min，弃病毒上清。根据细胞毒性实验的结果，在无毒浓度范围内，加入不同浓度的药物，并设正常细胞对照组和病毒对照组。然后将抗培养板置37 ℃，5%co2培养，每日观察cpe。cpe记录方法为[1]:
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为无cpe；+为25%细胞出现cpe；++为50%细胞出现cpe；+++为75%细胞出现cpe；++++为100%细胞出现cpe。约在病毒对照+++~++++时用mtt法，测各孔570nm波下od值，并按下述公式计算药物对病毒抑制率。病毒抑制率=(药物处理组od值
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病毒对照组od值)/(细胞对照组od值
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病毒对照组od值)*100%。实验结果显示，fh在1 μm到50 μm范围内对冠状病毒具有显著的抑制作用，效果与剂量呈现量效关系。


技术特征：
1.连翘酯苷h在制备抗冠状病毒产品中的应用，其特征在于，所述连翘酯苷h是如下结构的化合物：。2.包含一种或多种权利要求1中所述连翘酯苷h或其可药用的盐与可药用载体的药物。3.权利要求2的用途，预防和/或治疗由冠状病毒引起的感染。4.权利要求2的用途，预防和/或治疗由新型冠状病毒引起的感染。5.权利要求3及4的用途，其中所述受试者是人、猫、狗、猪或鸡。6.权利要求3的用途，其中所述药物是以口服方式给药：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、口服液、混悬液、溶液以及缓释或控释制剂。7.权利要求4的用途，其中所述药物是以口服方式给药：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、口服液、混悬液、溶液以及缓释或控释制剂。8.权利要求3的用途，其中所述药物是以吸入方式给药：气雾剂以及缓释或控释制剂。9.权利要求4的用途，其中所述药物是以吸入方式给药：气雾剂以及缓释或控释制剂。10.权利要求3的用途，其中所述药物是以静脉方式给药：注射剂、注射乳剂、冻干粉针以及缓释或控释制剂。11.权利要求4的用途，其中所述药物是以静脉方式给药：注射剂、注射乳剂、冻干粉针以及缓释或控释制剂。

技术总结
本发明公开了连翘酯苷H在制备抗冠状病毒产品中的应用，属于医药领域的应用。采用分子对接技术证实连翘酯苷H对COVID


技术研发人员：赵文华 高伟 王丽雪
受保护的技术使用者：首都医科大学
技术研发日：2020.11.09
技术公布日：2021/12/21