一种抑菌抗衰洁阴护理湿巾及其制作方法与流程

[0001]
本发明涉及益生菌技术用于女性护理领域，更具体地涉及一种抑菌抗衰洁阴护理湿巾及其制作方法。


背景技术：

[0002]
湿巾是用来擦拭皮肤的湿润的纸巾。市场上的湿巾大致可以分为两类：一类是本身已经被消毒，但不能消毒其他物品，里面含有护肤的成分，只能做皮肤湿润保养的。另一类是不仅本身被消毒，而且对别的物品也可起到消毒作用的消毒湿巾，可以用做皮肤擦伤、划伤等的消毒或杀菌。
[0003]
女士护理湿巾是针对于女性私处清洁出品的湿巾，一般而言含有消毒成分，可扼制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等有害细菌。女士护理湿巾适合月事期间的护理，便于出差、旅行携带，ph4的弱酸性性质利于保持女性私处酸性环境；而且无纺织布料，一般不含酒精和色素。女士护理湿巾用于月经期间用于清洁私处，日常如厕护理，出差、旅游、产后不便洗澡的情况使用。女性阴部由于尿液残余易滋生细菌，而湿巾比干巾更彻底清洁，特别是使用含有特殊杀菌成份的湿巾，可最大可能避免妇科疾病的发生。有一定消费意识的消费者都会给自己的孩子使用，防止发生尿布疹。同样成年人使用后更清洁，舒爽。房事后使用，懒人们既免去洗澡的痛苦，同时保证了清洁卫生。
[0004]
目前市场上的女性护理湿巾往往功能单一，只具有清洁和消毒功能。本发明旨在提供一种抑菌抗衰洁阴护理湿巾及其制作方法。


技术实现要素：

[0005]
因此，针对上述的问题，本发明引入核心益生菌技术，提出一种抑菌抗衰洁阴护理湿巾及其制作方法。
[0006]
女性有性生活史后，感染妇科病的几率是90%的概率，只是有轻重之分。只要有性生活，妇科就像感冒一样非常正常。瘙痒、异味，甚至糜烂等妇科问题一直缠绕着已婚女性。不洁的性生活，是导致妇科炎症的罪魁祸首。使用不当的药品，不但不能护理私处，更可能破坏私处的ph值和菌落群，穿着不洁的贴身内裤，也能导致女性炎症。
[0007]
乳酸杆菌已经被公认是阴道正常菌群中最重要的益生菌成员之一，目前科学家已从阴道内分离出16种乳杆菌，其中乳酸杆菌在维持阴道自净及抗感染中有着非常关键性的作用。
[0008]
女性的阴道是弱酸性的，有一道天然的保护屏障，其实这一切有赖于阴道内的有益菌，有调查显示，通过对育龄女性的检查，发现近93%的人阴道内都有阴道乳酸杆菌，而更年期的女性乳酸杆菌的含量只有60%。研究发现，如果经常用各种阴道洗液，会导致阴道内的乳酸杆菌急剧减少。印尼的科学家曾经做过一项调查，结果发现经常用各种阴道洗液的女性更容易阴道感染，更容易患上性病，因为这些洗液破坏了阴道的酸碱平衡，换句话说是将阴道内的乳酸杆菌消灭，导致有害的病菌疯狂的生长，而如果经常用清水清洗阴道的女
性，反而阴道炎的发病率较低，这一切也证明了阴道内有乳酸杆菌的重要性。
[0009]
阴道乳酸杆菌主要的作用有两点：1、维持阴道粘膜的酸碱度。一般阴道是呈现弱酸性的环境。有利于阴道的自洁作用，维持阴道的正常生理功能。2、维持阴道内的正常的菌群平衡，可以有效的抑制阴道内有害细菌的生长。增加阴道的抵抗能力，抵御外来细菌的侵入。综上所述，阴道乳酸杆菌的作用对女性是非常重要的，它是女性生殖健康的卫士，我们一定不要人为的破坏阴道的环境。
[0010]
本公司研发团队进行了深入的研究，在对海量乳杆菌进行了筛选和测试后，发现活菌湿巾保存极其不易，非常不易进行推广使用，于是筛选合适的菌株制备发酵提取液用于女性湿巾的应用，并在此基础上进一步优化，最终得到了本发明的调节阴部菌群平衡，抑菌有害细菌能力强，并且还有显著的抗衰老效果的女性私处湿巾。
[0011]
中国酿造2008第16期总第193期的“泡菜纯种发酵优良乳酸菌的筛选及菌株特性研究”一文中从不同时期的新鲜泡菜汁中分离得到 18株乳酸菌, 筛选出 2株发酵萝卜产酸能力强、风味好、亚硝酸盐含量低的菌株, 经鉴定分别为肠膜明串珠菌肠膜亚种7#和戊糖乳杆菌10#。
[0012]
本发明研发团队发现该戊糖乳杆菌10#的发酵提取液具有显著的抑制有害杂菌的效果，且意外发现其有良好的抗老化效果，而一般的戊糖乳杆菌发酵提取液虽然大多具有良好的抑菌效果，但是没有发现显著的抗老化效果。
[0013]
本发明所用到的戊糖乳杆菌10#为华中农业大学研究人员赠送得到，本申请人承诺自申请日20年起向公众提供该菌株。
[0014]
为了进一步优化抗老化作用，本研发团队还对来自天然传统无害植物的天然化合物进行了研究，发现侧柏叶中的 1 个新苯丙素苷在戊糖乳杆菌10#发酵过程中应用，可以显著提高发酵提取液的抗衰老效果。
[0015]
侧柏叶又名扁柏、黄心柏，为常绿乔木，其嫩枝、叶及果皆可入药，其味苦、涩，性微寒，入肺、肝、大肠经，有凉血止血、乌须发、止咳喘的功效。主要用于血热妄行引起的出血病症，并有镇咳、祛痰、降压、防脱发等作用。其果实中的果仁则有养心安神、润肠通便之功效。现代人多将侧柏作为绿化观赏植物，而对它的养生价值却鲜有了解。在古代，侧柏的嫩枝嫩叶是备受道家推崇的延年上品。明代李时珍《本草纲目》中“乃多寿之本，所以可以入服食，道家以之点汤常饮”的记载，为侧柏叶的食疗养生价值做出了权威性的概括。
[0016]
中草药 chinese traditional and herbal drugs 第 51 卷第 3 期 2020 年 2 月的“侧柏叶中的1个新苯丙素苷”公开了一种新的化合物，命名为侧柏苷 a，其为4-o-(1
′
,3
′-
二羟基丙基
-ꢀ2′-
)-二氢松柏醇 9-o-β-d-葡萄糖苷（1），该化合物无 dpph 和 abts 自由基清除活性，该化合物结构如下：。
[0017]
侧柏苷 a虽然本身无 dpph 和 abts 自由基清除活性，但是在戊糖乳杆菌10#发酵中应用，却能显著提高其发酵提取液的抗衰老效果。
[0018]
本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。
[0019]
一种抑菌抗衰洁阴护理湿巾，其特征在于，在水刺无纺布中注入以下原料成分制成：戊糖乳杆菌10#的发酵提取液以及其他必要必要的辅剂。
[0020]
作为优选，所述戊糖乳杆菌10#的发酵提取液在发酵培养基中加入了侧柏苷 a。
[0021]
作为进一步优选，以重量份比计，所述原料为：戊糖乳杆菌10#的发酵提取液5份，甘油5份，90份纯化水。
[0022]
或者，以重量份比计，所述原料为：戊糖乳杆菌10#的发酵提取液5份，甘油5份，植物提取液5份，85份纯化水。
[0023]
所述植物提取液优选为芦荟提取液，蛇床子提取液，薰衣草提取液或者他们的混合物。
[0024]
所述戊糖乳杆菌10#的发酵提取液的制备方法为：（1）菌种活化：取一环戊糖乳杆菌10#接种到 mrs 固体培养基中划线，37℃厌氧培养24 h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至 mrs 液体培养基中活化，厌氧培养成1*108cfu/ml戊糖乳杆菌10#种子液，使用乳酸调节ph值5.0。
[0025]
（2）配置发酵培养基将戊糖乳杆菌10#种子液按照接种量10% v/v％接种至含有0.5%侧柏苷 a的mrs液体培养基中，37℃，200rpm下震荡摇床培养24小时得到发酵液；（3）制备发酵提取液：将步骤(2)所得的发酵液进行离心处理，离心转速6000r/min，时间40min，收集上清液，并过0.22um除菌过滤器，得到无菌的得到发酵提取液。
[0026]
本发明的优点：（1）本发明的选用来自食品的天然乳杆菌，安全可靠，不需要添加杀菌剂就可以抑制有害细菌，避免了杀菌剂影响阴部菌群平衡的问题，同时对多种病原菌具有很好的抑制效果。
[0027]
（2）天然乳杆菌发酵提取液能帮助维持阴部菌群平衡，促进阴部长期健康稳定，不易感染。本发明的成分不会破坏女性自有的正常的阴道菌群，不会打破阴道与菌群之间的生态平衡，非常适合女性长期护理使用。
[0028]
（3）本发明制备的湿巾还具有较为显著的抗衰老效果，可以对阴部皮肤进行有效的保养，促进阴部肌肤的年轻态。
[0029]
具体实施方式
[0030]
现结合具体实施例对本发明进一步说明。本发明实验均在本申请人黄新华作为法人代表的泉州市理身源生物科技有限公司进行。
[0031]
实施例一：戊糖乳杆菌10#的发酵提取液的制备方法为：（1）菌种活化：
取一环戊糖乳杆菌10#接种到 mrs 固体培养基中划线，37℃厌氧培养24 h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至 mrs 液体培养基中活化，厌氧培养成1*108cfu/ml戊糖乳杆菌10#种子液，使用乳酸调节ph值5.0。
[0032]
（2）配置发酵培养基将戊糖乳杆菌10#种子液按照接种量10% v/v％接种至含有0.5%侧柏苷 a的mrs液体培养基中，37℃，200rpm下震荡摇床培养24小时得到发酵液；（3）制备发酵提取液：将步骤(2)所得的发酵液进行离心处理，离心转速6000r/min，时间40min，收集上清液，并过0.22um除菌过滤器，得到无菌的得到发酵提取液。
[0033]
实施例二：将实施例1的发酵提取液溶于无血清dmem培养液中，配制5个样品，质量分数分别为0.5%，1%，5%，10%，20%，以无血清dmem培养液为阴性对照样品，20% dmso为阳性对照样品。每个样品设置3个重复。使用mtt法检测各组细胞的相对于阳性对照组的存活率。实验结果如表一所示：表一不同浓度提取液细胞存活率实验组的细胞相对存活率高于阳性对照组，说明较低剂量发酵提取液对细胞生长无影响，并且还可刺激细胞增殖；实施例三：设置对比例组：对比例1：实验方法同实施例一，但是培养基不含有0.5%侧柏苷 a；对比例2：配置只含有0.5%侧柏苷 a的mrs液体培养基；对比例3：实验方法同实施例一，但是将戊糖乳杆菌10#替换为卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）；对比例4：实验方法同实施例一，但是将戊糖乳杆菌10#替换为卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743），同时不含有0.5%侧柏苷 a。
[0034]
实施例四：比较实施例1和对比例1-4的抗氧化能力。
[0035]
按照本领域的常规方法，本实施例选择vc（维生素c）作为阳性对照，分别设置将实施例1组、对比例1-4组和v
c
组。
[0036]
各组均分别用纯净水稀释，分别配制成质量分数为0.5%，1%，1.5%，2%，2.5%样品溶
液，按照a、a1、a2的配置方法分别加入样品、feso4
·
7h2o 溶液（4.5mmol/l）、水杨酸-乙醇溶液和、h2o2溶液（4.4 mmol/l），然后混合均匀，于 37℃恒温水浴锅中避光温浴 30 min，测定 510 nm 处的吸光度； 羟自由基清除率（%）=[1-(a1-a2)/a0]
×
100%a0：1.0ml feso4
·
7h2o+1.0 ml 水杨酸+1.0 ml过氧化氢+1.0 mlh2oa1：1.0ml feso4
·
7h2o+1.0 ml 水杨酸+1.0 ml 过氧化氢+1.0 ml 样品a2：1.0ml feso4
·
7h2o+1.0 ml 水杨酸+1.0 ml h2o+1.0 ml 样品相关测试数据如表二所示：表二各组不同浓度对羟自由基清除能力从表中的测试数据可以看出，实施例1和使用vc的阳性实验组相比较，其对羟自由基清除能力更高；戊糖乳杆菌10#相对于卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）清除效果效果更好，当添加0.5%侧柏苷 a时候，效果明显增强，而0.5%侧柏苷 a对卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）没有明显的增强效果（没有统计学意义，p>0.05），单独的0.5%侧柏苷 a对羟自由基清除能力最弱。推测0.5%侧柏苷 a通过影响戊糖乳杆菌10#的代谢起到促进作用，然而并未发现其对卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）有任何促进作用。
[0037]
实施例五：选择粪肠球菌（gim1.1802）、大肠埃希菌（cgmcc1.12882）、白假丝酵母菌（gim 2.194）进行双层牛津杯法实验，比较实施例1和对比例1-4的发酵液抑菌能力。将实施例1和对比例1-3的发酵液（不稀释）上清液通过直径为 0.22
µ
m 滤膜。在琼脂平板上摆放 5 个无菌牛津杯，将约 30℃含有指示菌的软琼脂培养基（琼脂含量 0.7%）覆盖其上。待琼脂凝固后，分别将实施例1和对比例1-4的发酵液)各 200
µ
l 依次加入 1-4号牛津中,4℃扩散 8 小时，37℃厌氧培养 48 小时。结果如表三所示：表三不同组别对杂菌的抑制作用抑菌圈直径(单位：mm)粪肠球菌大肠埃希菌白色念珠菌实施例1组（mm）24.3
±
0.214.5
±
0.515.3
±
0.3对比例1组（mm）12.7
±
0.69.1
±
0.29.8
±
0.2对比例2组（mm）
---
对比例3组（mm）8.7
±
0.88.7
±
0.49.0
±
1.1对比例4组（mm）8.1
±
0.68.2
±
0.28.6
±
1.0注：抑菌圈直径包含牛津杯外径(7.8mm)，
“-”
代表抑菌圈直径低于8.0mm可见，戊糖乳杆菌10#相对于卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）抑制粪肠球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的生长效果更好（相对其他组有统计学意义，p<0.05），当添加0.5%侧柏苷 a时候，抑菌效果明显增强，而0.5%侧柏苷 a对卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）没有明显的增强效果（对比例3组和对比例4组没有统计学意义，p>0.05），单独的0.5%侧柏苷 a的mrs液体培养基不能抑制细菌生长，这也说明本发明消毒湿巾具有较好的抑菌效果。
[0038]
实施例六：比较不同组别提取液对非酶糖基化反应的抑制：向 100 ml ph = 7. 4 的 0. 2 mol /l 的磷酸盐缓冲液中加入19.2 g 葡萄糖，0. 4牛血清白蛋白和0. 4 g叠氮化钠，混匀后即形成反应液。取 6 支试管，分别向每支试管中依次加入 4 ml 反应液+0.5ml的实施例1或对比例1-4其中之一或者蒸馏水+0.5ml蒸馏水，试管中溶液总体积5 ml。用荧光分光光度计测定所有试样的初始荧光值，然后将所有试管置于37 ℃水浴中避光保存7天，再测定各试管中试样的荧光值，继续将所有试管在 37 ℃水浴中避光保存7天后测定荧光值。测试条件为: 激发波长 370 nm，狭缝 5 nm; 发射波长范围380-500 nm，狭缝 5 nm; 光源电压 700 v。加计算公式为：非酶糖基化抑制率（%）=[1-(a1-a2))/（a3-a4）]
×
100%（a1是加入提取液的试样培养了一段时间后的荧光发射值; a2是加入提取液的试样的初始荧光发射值; a3是只含有蒸馏水试样培养了一段时间后的荧光发射值; a4是只含有蒸馏水的试样的初始荧光发射值）。结果如表四所示：表四不同组别提取液不同时间对非酶糖基化的抑制率组别7天非酶糖基化抑制率（%）14天非酶糖基化抑制率（%）实施例1组（%）70.6
±
6.981.6
±
10.8对比例1组（%）53.2
±
5.756.2
±
6.8对比例2组（%）9.4
±
1.610.0
±
1.9对比例3组（%）19.2
±
5.920.2
±
6.8对比例4组（%）16.8
±
3.818.8
±
5.3可见，随着提取液含量的增加，提取液对非酶糖基化反应的抑制率逐渐增强。戊糖乳杆菌10#相对于卷曲乳杆菌（cgmcc1.2743）抑制效果更好（相对其他组有统计学意义，p<0.05），当添加0.5%侧柏苷 a时候，抑菌效果明显增强，并且随着时间的增加，添加0.5%侧柏苷 a的提取液抑制率还能进一步增加，而含有卷曲乳杆菌组并不能达到这样的效果。这说明戊糖乳杆菌10#提取液对蛋白质的非酶糖基化有着很好的抑制作用，侧柏苷 a能够协同戊糖乳杆菌10#提取液起作用。
[0039]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0040]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不
脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。