适用于溶瘤病毒的冻干保护剂及其应用的制作方法

本发明涉及溶瘤病毒，具体涉及一种适用于溶瘤病毒的冻干保护剂及其应用。

背景技术：

1、随着生命科研技术的提高，肿瘤癌症治疗出现了不少新型热门疗法，除了单/双抗、adc(抗体偶联药物)、pd-1/l1之外，细胞疗法、外泌体、溶瘤病毒等也都成为了该领域的治疗手段。其中，溶瘤病毒(oncolytic viruses,ovs)因其能够特异性地在肿瘤细胞内复制并造成肿瘤细胞裂解而不影响正常细胞，受到越来越多科研和产业的重视。溶瘤病毒是一类天然的或经基因工程改造的，可选择性地在肿瘤组织内复制，进而感染杀伤肿瘤细胞或导致肿瘤细胞裂解，但对正常组织无杀伤作用的病毒。根据其是否进行过基因改造，主要可以分为两类：一类是野生型病毒株和天然的弱毒病毒株，比如呼肠孤病毒，新城疫病毒等；另一类是经过基因改造只能在肿瘤细胞内进行增殖的病毒，主要有腺病毒、单纯疱疹病毒、牛痘病毒以及麻疹病毒等。

2、溶瘤病毒疗法(oncolytic virotherapy)是一种新型的肿瘤靶向疗法，它是利用肿瘤选择性、多杀伤途径的溶瘤病毒作为主要成分的抗肿瘤制剂，其能够直接杀伤肿瘤细胞达到溶瘤效果，并在肿瘤细胞裂解的过程中释放肿瘤特异性抗原，激活机体抗肿瘤免疫应答。溶瘤病毒可利用多种作用机制杀死癌细胞，所述机制包括细胞溶解、细胞凋亡、抗血管生成和细胞坏死。病毒感染肿瘤细胞然后开始复制。病毒继续复制直到最后“溶解”(裂解)宿主细胞的膜，肿瘤细胞不再能含有病毒。肿瘤细胞被摧毁并且新产生的病毒扩散到邻近的癌细胞继续该循环。值得注意的是所有溶瘤病毒仅在癌细胞中复制，其通过正常组织时不导致损害，这很重要。因此，一旦根除所有肿瘤细胞，溶瘤病毒不再具有复制的能力并且免疫系统能够将其从体内清除。

3、由于冻干制剂可以有效的保护产品，使其保持原有的生物学结构和物理性质，所以已经广泛应用到疫苗类生物制品中。然而，目前，很少有适用于溶瘤病毒的冻干保护剂的研究，大多数的冻干保护剂还是适用于传统的减毒或灭活疫苗，经传统冻干保护剂冻干后的溶瘤病毒的毒力变差，与冻干前相比滴度变差，并且冻干后的热稳定性变差，体现在冻干后的溶瘤病毒在用于体内治疗时溶瘤病毒在体内长时间存在时的滴度逐渐变差，进而影响溶瘤病毒对肿瘤的杀伤效果。因此目前市场上的溶瘤病毒制品均为液体制剂，相比冻干制剂，液体制剂缺点很多，如：保存和运输的成本高，通常需要-80℃超低温保存。风险也高，如果冷库或者冰箱故障，温度上升导致制品融化，滴度会下降一半左右，使制品报废。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种适用于溶瘤病毒的冻干保护剂及其应用。

2、本发明的第一目的在于提供一种适用于溶瘤病毒的冻干保护剂，其为具有功能成分的溶液，以工作浓度下的质量百分数计，所述功能成分包括：

3、蔗糖3％-10％、明胶0.3％-1.0％、人血清白蛋白(hsa)0.1％-1.0％和谷氨酸钠0.1％-1.0％

4、本发明的第二目的在于提供所述的冻干保护剂的制备方法，包括：

5、将灭菌后的各组分溶于溶剂中，混匀。

6、本发明的第三目的在于提供所述的溶瘤病毒冻干粉的制备方法，包括：

7、将溶瘤病毒与所述的冻干保护剂混合后再冻干。

8、本发明的第四目的在于提供所述的溶瘤病毒冻干粉的制备方法制备得到的溶瘤病毒冻干粉。

9、本发明的第五目的在于提供所述的溶瘤病毒冻干粉在制备用于杀伤肿瘤的药物中的应用。

10、本发明提出了一种用于制备溶瘤病毒的冻干粉制备的冻干保护剂，相比传统的溶瘤病毒液体制剂，其冻干制剂更容易保存，稳定性好。该冻干保护剂的功能成分为蔗糖、明胶、hsa、谷氨酸钠，或者还含有精氨酸、尿素、甘油。上述几种成分在合适的配比下相互配合，能够使得溶瘤病毒在冻干过程中其活性损失较小，冻干前后的滴度损减不大，并且重要的是，溶瘤病毒在使用本申请的冻干保护剂，冻干前后对肿瘤细胞的杀伤能力相差在+40％～-20％以内(+40％表示冻干后肿瘤杀伤能力提升了40％；-20％表示冻干后肿瘤杀伤能力降低了20％)。。而且，冻干后的制剂能够在机体温度下(37℃)长时间保持稳定性，有利于作为肿瘤杀伤药物应用于机体内，提高肿瘤杀伤的时间。

技术特征：

1.一种适用于溶瘤病毒的冻干保护剂，其特征在于，其为具有功能成分的溶液，以工作浓度下的质量百分数计，所述功能成分包括：

2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，以工作浓度下的质量百分数计，其还包括精氨酸0.1％-1.0％。

3.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，以工作浓度下的质量百分数计，其还包括尿素0.1％-1.0％。

4.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，以工作浓度下的质量百分数计，其还包括甘油0.01％-0.15％。

5.根据权利要求1～4任一项所述的冻干保护剂，其特征在于，以工作浓度下的质量百分数计，所述功能成分由以下组分组成：

6.根据权利要求1～4任一项所述的冻干保护剂，其特征在于，所述溶液的溶剂为水。

7.根据权利要求1～4任一项所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂还包括缓冲物质，所述冻干保护剂的工作酸碱度为ph6.8～7.4。

8.权利要求1～7任一项所述的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括：

9.一种溶瘤病毒冻干粉的制备方法，其特征在于，包括：

10.权利要求9所述的方法制备得到的溶瘤病毒冻干粉。

11.根据权利要求10所述的溶瘤病毒冻干粉，其特征在于，所述溶瘤病毒选自dna病毒或rna病毒。

12.如权利要求10～11任一项所述的溶瘤病毒冻干粉在制备用于杀伤肿瘤的药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种适用于溶瘤病毒的冻干保护剂，其为具有功能成分的溶液，以工作浓度下的质量百分数计，所述功能成分包括：蔗糖3％‑10％、明胶0.3％‑1.0％、人血清白蛋白(HSA)0.1％‑1.0％和谷氨酸钠0.1％‑1.0％。相比传统的溶瘤病毒液体制剂，其冻干制剂更容易保存，稳定性好，尤其是冻干后的滴度和肿瘤杀伤能力表现良好。

技术研发人员：赵海波,林康,刘小虎,马燕彬,王俊杰,贾为国,赵荣华
受保护的技术使用者：深圳复诺健生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13