红景天苷在调节衰老细胞外泌体中的新用途的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体是一种红景天苷在调节衰老细胞外泌体中的新用途。

背景技术：

1、细胞衰老(cellularsenescence)是个体衰老的关键因素，与衰老相关疾病有紧密联系。衰老相关分泌表型(senescence-associatedsecretoryphenotype,sasp)是衰老细胞的关键特征之一。随着年龄的增长，机体内衰老细胞不断积累，持续分泌大量sasp，从而形成特定衰老炎性微环境影响周围组织细胞，将衰老表型扩散至局部或其他器官，促进整体衰老。基于衰老细胞sasp大部分发挥的是促进慢性炎症及衰老相关疾病进展的作用，以衰老细胞为靶标的药物治疗研究受到了高度重，目前已经报道的包括可以选择性诱导衰老细胞死亡的senolytics，如达沙替尼+槲皮素组合物等【niedernhoferlj,robbinspd.senotherapeuticsforhealthyageing.naturereviewsdrugdiscovery2018；17:377.】。然而，由于在研的senolytics药物的不良反应，如骨髓抑制等，严重限制了其临床应用。因此，寻找调节衰老细胞外泌体进而改善其sasp的药物是干预衰老的另一有效途径，具有良好的临床应用前景。外泌体是小细胞外囊泡(smallextracellularvesicles,sevs)的一种，直径一般为30-150nm，是sasp的重要组成成分。【kadotat,fujitay,yoshiokay,arayaj,kuwanok,ochiyat.emergingroleofextracellularvesiclesasasenescence-associatedsecretoryphenotype:insightsintothepathophysiologyoflungdiseases.molecularaspectsofmedicine2018；60:92-103.】相比年轻细胞，衰老的成纤维细胞和上皮细胞等分泌的sevs显著增多【takasugim.emergingrolesofextracellularvesicles incellularsenescenceandaging.agingcell2018；17.】。分泌外泌体或sevs既是衰老细胞维持自身稳态、与其他细胞相互通讯的重要途径，也是改变微环境而诱导其他细胞早衰的一种作用方式。因此，调控衰老细胞外泌体的分泌及其内含物的改变是调节sasp的一种有效手段。

2、红景天(rhodiolaroseal.)是一种具有多种功效的中药，被誉为“高原人参”，唐朝孙思邈著《千金翼方》言其“味苦酸平，无毒，……久服通神不老”，红景天苷(salidroside，sal)是其主要有效成分之一。研发其新功能是促进中药现代化的重要内容之一。人胚肺二倍体成纤维2bs细胞是一种衰老研究的经典模型，其在pd30及以下时为年轻细胞，当传达培养至pd55及以上时为衰老细胞【jli,zzhang,ttongtheproliferativeresponseandanti-oncogene expressioninold2bscellsaftergrowthfactorstimulation.mechageingdev.1995apr21；80(1):25-34.doi:10.1016/0047-6374(94)01557-3.】。

3、调控衰老细胞外泌体的分泌及其内含物的改变是调节sasp的一种有效手段，而通过药物从外泌体角度来改善sasp进而干预衰老是潜在的有效途径。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种红景天苷在调节衰老细胞外泌体中的新用途。

2、本发明提供了红景天苷在调节衰老细胞外泌体分泌中的应用。

3、进一步地，本发明提供了红景天苷在制备调节衰老细胞外泌体分泌的药物中的应用。

4、本发明所述的衰老细胞为pd55的人胚肺成纤维二倍体2bs细胞，年轻细胞为pd30的人胚肺成纤维二倍体2bs细胞。

5、年轻细胞、衰老细胞以及红景天苷处理的衰老细胞分泌的外泌体在粒径大小和分布上没有明显差异，为130-140nm左右，符合外泌体粒径范围；同时，经westernblot检测，年轻细胞、衰老细胞以及红景天苷处理的衰老细胞分泌的外泌体均存在外泌体标志物cd63、tsg101和alix，鉴定了本方法所分离获得的外泌体。

6、进一步地，红景天苷对衰老细胞(pd55)分泌的外泌体调节包括外泌体数量及外泌体总蛋白含量的调节。与年轻对照组细胞(pd30)，衰老细胞(pd55)分泌的外泌体数量显著高于年轻对照组(约5倍)，而红景天苷(sal)作用衰老细胞后能显著降低其外泌体分泌的数量及外泌体总蛋白含量(p<0.05)。

7、进一步地，红景天苷对衰老细胞(pd55)分泌的外泌体调节包括外泌体中炎症因子白介素6(il-6)水平的调节。il-6在红景天苷处理的衰老细胞外泌体中的水平下降约30％。

8、进一步地，红景天苷对衰老细胞(pd55)分泌的外泌体调节包括其诱导年轻细胞发生衰老样改变的活性显著减弱，表现为与衰老对照组细胞分泌的外泌体比较，红景天苷处理的衰老细胞外泌体作用年轻细胞(pd30)后衰老相关分子p53和p16表达水平下降。

9、本发明具有如下有益效果：本发明提供了红景天苷调节衰老细胞外泌体的新用途，为制备调节衰老细胞外泌体分泌的药物提供了新的应用前景，同时为开发以衰老细胞为靶标的干预策略提供了新思路，同时为进一步开发中药的新功能提供了研究策略，将促进中药的现代化发展。

技术特征：

1.红景天苷在调节衰老细胞外泌体分泌中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于红景天苷在制备调节衰老细胞外泌体分泌的药物中的应用。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述调节衰老细胞外泌体分泌是红景天苷降低衰老细胞外泌体分泌数量。

4.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述调节衰老细胞外泌体分泌是红景天苷降低衰老细胞外泌体总蛋白含量。

5.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述调节衰老细胞外泌体分泌是红景天苷降低衰老细胞外泌体中炎症因子白介素6水平。

6.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述调节衰老细胞外泌体分泌是红景天苷减弱衰老细胞外泌体诱导年轻细胞发生衰老样改变的活性。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述调节衰老细胞外泌体分泌是红景天苷降低衰老细胞外泌体作用年轻细胞后衰老相关分子p53和p16表达水平。

8.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的衰老细胞为pd55的人胚肺成纤维二倍体2bs细胞。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的年轻细胞为pd30的人胚肺成纤维二倍体2bs细胞。

技术总结
本发明涉及红景天苷在调节衰老细胞外泌体中的应用，所述调节涉及外泌体的粒径和数量、外泌体蛋白浓度、外泌体包含炎症因子以及调节衰老的功能。红景天苷处理的衰老细胞外泌体中炎症相关因子显著下调，诱导年轻细胞发生衰老样的功能下降。本发明提供了红景天苷调节衰老细胞外泌体的新用途，为制备调节衰老细胞外泌体分泌的药物提供了良好的应用前景。

技术研发人员：毛根祥,徐小刚,王三应,万晓青,苏慧丽,林萍,周叙强
受保护的技术使用者：浙江医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12