一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素及其制备方法和应用

本发明属于医药，具体涉及一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素及其制备方法和应用。

背景技术：

1、胰高血糖素(gcg)是一种由胰脏胰岛α-细胞分泌的一种肽类激素，临床用药的主要缺点是在体内快速降解，这导致生物分布和药代动力学特征差，并且胰高血糖素通过胰高血糖素受体(gcgr)对相应细胞发挥作用。胰高血糖素受体属于gpcr的b类家族，是分泌素家族的肽激素受体，广泛用于许多人类疾病的药物靶点，包括糖尿病、癌症、神经变性、心血管疾病和其他疾病，但胰高血糖素单一疗法尚未在临床试验中直接测试。

2、结直肠癌是发生在结肠部位的恶性肿瘤，我国结直肠癌发病率、死亡率在全部恶性肿瘤中分别位居第三位及第五位，也是近年最常见的癌症死亡原因之一。目前治疗晚期结直肠癌的主要手段是手术切除结合化疗联合用药，但多种化疗药物的联用的疗效并不理想。

3、5fu(5-氟尿嘧啶)是嘧啶类的抗代谢类肿瘤药物，对增殖性癌细胞有杀伤性作用，是结直肠癌首选且疗效较高的化疗药物。但是5fu口服生物利用率低，毒副作用明显，半衰期短，易被酶代谢。临床上通过频繁和高剂量静注给药来达到有效浓度，但这样的给药方式顺应性差，极大限制了临床应用和治疗效果。

4、前期研究发现胰高血糖素通过与胰高血糖素受体(gcgr)结合可以增加5fu的敏感性。但是gcgr主要在肝脏中表达，全身其他部位也有分布，如肾脏、脂肪组织、胰腺、脾脏、成淋巴细胞、大脑、胃肠道和肾上腺。这就导致临床上直接用药的利用率较差，且临床上并没有优化gcg递送方式的案例。综上，如何提供一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素制备方法或药物组合疗法，在增加药物稳定性、降低毒副作用的同时更有效的治疗结直肠癌，具有重要的临床意义。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明提供一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素及其制备方法和应用，以对癌症、特别是结直肠癌进行有效治疗。

2、为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是，提供一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素，包括脂质体和包载于脂质体内的胰高血糖素或胰高血糖素与化疗药物的混合物；脂质体为中性脂质体、负电荷脂质体或正电荷脂质体。

3、本发明还公开了上述具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素的制备方法，制备方法包括但不限于薄膜水化法、滤膜挤出法、反复冻融法、有机溶剂注入法、反向蒸发法、超声分散法等。

4、进一步，本申请采用薄膜水化法来制备具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素，具体包括以下步骤：

5、s1：将氢化大豆卵磷脂、胆固醇和靶向物dspe-peg2000-靶头共溶于有机溶剂中，再蒸除溶剂，得到磷脂薄膜；或者是将氢化大豆卵磷脂、胆固醇、dspe和靶向物gcg-peg2000-靶头共溶于有机溶剂中，再蒸除溶剂，得到磷脂薄膜；

6、s2：将磷脂薄膜置于胰高血糖素水溶液中，再超声水化，得到脂质体溶液；

7、s3：对脂质体溶液进行透析，得到具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素gcg@lfa。

8、在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

9、进一步，氢化大豆卵磷脂、胆固醇和靶向物dspe-peg2000-靶头的摩尔比为80～90:5～15:3～6；氢化大豆卵磷脂、胆固醇、dspe和靶向物gcg-peg2000-靶头的摩尔比为80～90:5～15:5～10:3～6；胰高血糖素水溶液的浓度范围为0.3～1mg/ml。

10、进一步，有机溶剂为氯仿；蒸除溶剂的方式为旋蒸，旋蒸温度为35～40℃，旋蒸时间为30～60min。

11、进一步，超声水化的超声功率为200～500w，超声时间为10～15min；透析为用截留分子量为7000da的透析袋透析5～8次，每次间隔时间2h；透析过程中所用透析液为pbs缓冲液。

12、进一步，靶向物为dspe-peg2000-fa或gcg-peg2000-fa。其中，fa是具有增加肿瘤靶向的靶头，也可以是其他通用肿瘤靶向配体，或者针对特定肿瘤标志物的靶向分子。靶头与dspe-peg相连位于磷脂双分子层上，如以dspe-peg2000-靶向分子为原料形成磷脂双分子层，也可以与gcg直接通过peg相连，如靶头-peg-gcg。

13、本发明还公开了具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素在制备防治结直肠癌的药物或提升化疗药物敏感性的制剂中的应用。所制备的防治结直肠癌的药物为具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素和5-fu的联合药物；联合药物为注射剂，其中具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素的释放量为0.2～2μg/kg/天，5-fu的释放量为0.1～1mg/kg/两天。

14、本发明的有益效果是：

15、1.本发明中的用于肿瘤治疗的纳米粒以氢化大豆卵磷脂(hspc)、胆固醇和dspe-peg2000-fa为基本原料，其中，hspc所形成的脂质体提供了具有高渗透性和低稳定性的双层结构，而胆固醇可以防止脂质体聚集，调节膜流动性和通透性，使膜的内聚力增加，磷脂双层的稳定性提高。peg具有高柔韧性、良好的亲水性和生物相容性，peg末端修饰的脂质体作为治疗癌症和感染性疾病的被动靶向给药载体，在增加药物的体循环时间、将活性分子输送到作用部位以及防止健康组织受到毒性作用的损害方面优于其他载体。叶酸偶联的化合物能够将纳米颗粒递送给病理细胞而不对正常组织造成伤害，特异性的将胰高血糖素递送至肿瘤细胞微环境部位，抑制肿瘤的增殖，达到抗肿瘤的目的。

16、2.本发明中的纳米粒为脂质体药物递送系统，可通过改变封装药物的药代动力学和生物分布模式将抗癌药物选择性递送至实体瘤，安全性和有效性得以保障。

17、3.本发明中脂质体化后的胰高血糖素稳定性得到提升，可延长胰高血糖素活性。

18、4.本发明中将gcg@lfa纳米粒与5-fu联合使用，gcg@lfa纳米粒中的胰高血糖素可以对5-fu起到增敏效果，能够显著抑制肿瘤的发展，有效抑制小鼠肿瘤的生长，并使肿瘤内部血管生成拟态减少，提高结直肠癌的治疗效果，且不会出现化疗抵抗的现象。

19、5.与目前常用于治疗结直肠癌的药物相比，本发明提供的用于治疗结直肠癌的化疗药物的剂量较小(例如，用于小鼠的5-fu给药剂量为5～25mg/kg，按照小鼠使用的剂量是人使用的剂量的25倍或者50倍计算，用于人体的5-fu给药剂量低至0.1～1mg/kg)，副作用较小。

技术特征：

1.一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素，其特征在于：包括脂质体和包载于所述脂质体内的胰高血糖素或胰高血糖素与化疗药物的混合物；所述脂质体为中性脂质体、负电荷脂质体或正电荷脂质体。

2.如权利要求1所述的具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素的制备方法，其特征在于，所述制备方法为薄膜水化法、滤膜挤出法、反复冻融法、有机溶剂注入法、反向蒸发法或超声分散法。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述薄膜水化法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氢化大豆卵磷脂、胆固醇和靶向物dspe-peg2000-靶头的摩尔比为80～90:5～15:3～6；所述氢化大豆卵磷脂、胆固醇、dspe和靶向物gcg-peg2000-靶头的摩尔比为80～90:5～15:5～10:3～6；所述胰高血糖素水溶液的浓度范围为0.3～1mg/ml。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为氯仿；蒸除溶剂的方式为旋蒸，旋蒸温度为35～40℃，旋蒸时间为30～60min。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述超声水化的超声功率为200～500w，超声时间为10～15min；所述透析为用截留分子量为7000da的透析袋透析5～8次，每次间隔时间2h；透析过程中所用透析液为pbs缓冲液。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述靶头为叶酸，所述靶向物为dspe-peg2000-fa或gcg-peg2000-fa。

8.如权利要求1所述的具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素在制备防治结直肠癌的药物或提升化疗药物敏感性的制剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述防治结直肠癌的药物为具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素和5-fu的联合药物。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述联合药物为注射剂，其中具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素的释放量为0.2～2μg/kg/天，5-fu的释放量为0.1～1mg/kg/两天。

技术总结
本发明公开了一种具有肿瘤靶向功能的脂质体化胰高血糖素及其制备方法和应用，制备时先将氢化大豆卵磷脂、胆固醇和靶向物共溶于有机溶剂中，再蒸除溶剂得磷脂薄膜；再将磷脂薄膜置于胰高血糖素水溶液中超声水化，得到脂质体溶液；最后对脂质体溶液进行透析，得GCG@LFA。本发明中的GCG@LFA为脂质体药物递送系统，可通过改变封装药物的药代动力学和生物分布模式将抗癌药物选择性递送至实体瘤，安全性和有效性得以保障。GCG@LFA纳米粒与化疗药物5‑FU联合使用，能够显著抑制肿瘤的发展，有效抑制小鼠肿瘤的生长，并使肿瘤内部血管生成拟态减少，提高结直肠癌的治疗效果，且不会出现化疗抵抗的现象。

技术研发人员：魏鹏飞,田梗,徐玉雪,倪飞雪,吴晓俊,孙大系,邓庆
受保护的技术使用者：滨州医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13