SARS-CoV-2和SFTSV病毒治疗的靶点及应用

本发明属于生物医学，具体涉及一种sars-cov-2和sftsv病毒治疗的靶点及应用。

背景技术：

1、受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(ripk3,receptor-interacting serine/threonine protein kinases 3)是受体相互作用蛋白激酶(receptor interactingprotein kinase)家族成员之一，与受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(ripk1,receptor-interacting serine/threonine protein kinases 1)形成蛋白复合物，它们通过其c端rip同型相互作用基序(rhim)的异寡聚结合形成功能性淀粉样蛋白，激活下游的混合系激酶区域样蛋白(mlkl,mixed lineage kinase domain-like)，诱发细胞坏死性凋亡以及炎症反应。ripk3作为细胞坏死性凋亡的关键调控分子，介导坏死性凋亡和炎症信号的传递。ripk3的血浆浓度在多种病患中显著升高，包括脓毒症急性肾损伤病人、脓毒症和脑创伤导致的急性呼吸窘迫综合征以及危重新冠感染病人。ripk3的血浆浓度也显示出与危重症病人死亡率和器官衰竭的高度相关性。在临床前动物模型中，敲除ripk3能够有效缓解多种免疫和退行性疾病症状，包括脓毒症引起的急性肾损伤、肺气肿、慢性阻塞性肺病等。

2、坏死性凋亡是生物体抗击病毒的一种重要免疫机制，这反映在缺乏坏死性凋亡效应物的小鼠存在病原体清除缺陷，以及多种病原体可编码蛋白来抑制坏死性凋亡的发生。在动物体内，坏死性细胞裂解可通过将病原体和损伤相关的分子模式释放到细胞外环境中，引发消除感染的免疫反应，从而阻止病原体复制。尽管坏死性凋亡与多种人类疾病的病理相关，但靶向坏死性凋亡的疗法尚未达到临床水平，且坏死性凋亡在多大程度上促进疾病病理的发生仍不完全清楚。从机制上讲，坏死性凋亡不同于典型的程序性细胞死亡途径，因为它是一种裂解形式的细胞死亡方式，并且不依赖于caspase蛋白酶家族。坏死性凋亡信号由各种炎症信号引发，包括通过激活跨膜toll样受体(tlr)、细胞内核酸传感器如z-dna结合蛋白1(zbp1)或通过连接死亡受体来识别病原体。极端环境条件，如热休克、高渗透压或高细胞内ph值近期也被确认为坏死性细胞凋亡的诱导因素。

3、作为坏死性凋亡机制的重要介导者，宿主ripk3的功能被病毒抑制的例子多有报道。比如，牛痘病毒通过病毒蛋白vird特异性降解宿主ripk3蛋白；hsv1和hsv2通过r1蛋白特异性抑制ripk3与ripk1蛋白复合体的形成。诸如痘病毒的多种病毒通过抑制ripk3的功能来抑制宿主细胞的坏死性凋亡和炎症相关因子的释放，在感染早期，通过降低宿主的免疫对抗，提升病毒的感染效率。然而，sftsv和新冠病毒感染的重症患者往往受累于过度炎症反应和细胞因子风暴，我们团队在已故新冠病人的病理切片中也证实了过度炎症反应所导致的肺组织和细胞的坏死性凋亡。

4、目前没有在临床使用或开展临床实验的特异性ripk3抑制剂。多个ripk3小分子抑制剂处于临床前研究，试图通过抑制ripk3的激酶活性来降低靶细胞的坏死性凋亡，但失去激酶活性的ripk3蛋白骨架依然行使重要的信号功能，ripk3蛋白骨架功能尚未在sars-cov-2或sftsv病毒引发的细胞坏死性凋亡有过报道。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是通过直接靶向ripk3蛋白，探寻治疗ripk3相关疾病的技术方案。

2、为实现以上目的，基于本发明的研究结果，本发明提供以下技术方案：

3、采用敲低、敲除或抑制ripk3蛋白表达的物质制备用于抗sars-cov-2和sftsv病毒感染产品或者制备用于治疗sars-cov-2和sftsv病毒引发疾病的产品。

4、作为一些更具体的实施方式，敲低、敲除或抑制ripk3蛋白表达可以采用：降解ripk3蛋白的产品；降解ripk3蛋白mrna的产品；在基因水平上抑制ripk3蛋白转录的产品。

5、作为一个更具体的实施方式，敲低ripk3基因表达的物质为sirna，所述sirna包括sense：gaacuguuuguuaacguaaac；anti-sense：uuacguuaacaaacaguucug或sense：gcugcugucuccacgguaaag；anti-sense：uuaccguggagacagcagcau。

6、作为一个更具体的实施方式，稳定敲降ripk3表达的物质为用于敲降ripk3表达的shrna；其特异性靶序列为：ctgagagacaaggcatgaact和/或gcactctcgtaatgatgtcat。

7、进一步的，作为一些实施方式，检测ripk3的蛋白表达水平的试剂可以用于筛选用于抗sars-cov-2和sftsv病毒感染药品或者筛选用于治疗sars-cov-2和sftsv病毒引发疾病的药品。

8、作为一个更具体的实施方式，检测ripk3、il-1β、tnf-α、il-6、ccl2和cxcl8表达水平的试剂或者单独检测ripk3的试剂，可用于筛选通过敲低、敲除或抑制ripk3表达的抗sars-cov-2和/或sftsv病毒药品。

技术特征：

1.敲低、敲除或抑制ripk3蛋白表达物质在如下任一中的应用：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述敲低、敲除或抑制ripk3蛋白表达物质包括如下任一一种：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述降解表达ripk3蛋白mrna的产品为sirna。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，敲低ripk3基因表达的物质为sirna，所述sirna包括sense：gaacuguuuguuaacguaaac；anti-sense：uuacguuaacaaacaguucug或sense：gcugcugucuccacgguaaag；anti-sense：uuaccguggagacagcagcau。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，稳定敲降ripk3表达的物质为用于敲降ripk3表达的shrna；其特异性靶序列为：ctgagagacaaggcatgaact和/或gcactctcgtaatgatgtcat。

6.检测ripk3蛋白表达水平的试剂在如下任一中的应用：

7.检测ripk3、il-1β、tnf-α、il-6、ccl2或cxcl8一种或多种物质表达水平的试剂在筛选通过敲低、敲除或抑制ripk3表达的抗sftsv病毒药品中的应用。

8.检测ripk3、il-1β、tnf-α、il-6、ccl2或cxcl8一种或多种物质表达水平的试剂在筛选通过敲低、敲除或抑制ripk3表达的抗sars-cov-2病毒药品中的应用。

技术总结
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种SARS‑CoV‑2和SFTSV病毒治疗的靶点及应用，所述靶点为RIPK3，具体应用为制备用于抗SARS‑CoV‑2和SFTSV病毒感染产品或制备用于治疗SARS‑CoV‑2和SFTSV引发疾病的产品时采用敲低、敲除或抑制RIPK3蛋白表达物质，本发明的研究结果表明，RIPK3在SARS‑CoV‑2和SFTSV诱导的炎症反应和组织病理损伤中起着关键作用，为SARS‑CoV‑2和SFTSV感染如何触发炎症反应和器官损伤提供了新的见解，并揭示了靶向RIPK3治疗COVID‑19和发热伴血小板减少综合征(SFTS)的治疗潜力。

技术研发人员：彭珂,李淑芬,张玉兰
受保护的技术使用者：中国科学院武汉病毒研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12