化橘红石油醚萃取物的制备方法及抗肿瘤药物中的应用

本发明涉及生物医学，更具体地说，它涉及化橘红石油醚萃取物的制备方法及抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

1、肺癌是目前世界范围内最为常见的恶性肿瘤类型之一。2020年肺癌在全球的新增病例数仅次于乳腺癌，高居全球癌症新增病例数第二位，而且2020年肺癌在全球的死亡病例则高居癌症死亡首位。肺癌也是我国发病和死亡占比最高的恶性肿瘤。目前治疗肺癌的方法主要包括手术切除、放化疗，免疫治疗和特异性分子靶向治疗及其上述治疗方法的组合疗法。尽管目前肺癌的治疗手段已经取得飞跃式的进步，但总体治愈率和生存率仍然很低。开发新的治疗药物，对肺癌病人的治疗具有重大意义。

2、p27是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子，也是skp2-scf e3泛素连接酶的主要底物。p27与cycline/cdk2或其他cyclin/cdk复合物结合可诱导细胞g0/g1期阻滞。在人类癌症中，p27蛋白水平低表达，这会导致细胞周期从g1期到s期调控异常以及细胞增殖失控，是癌症不良预后的标志。skp2是s期激酶相关蛋白，是scf复合物的f-box蛋白，与skp1、cul1和rbx1相互作用形成skp2-scf e3泛素连接酶复合物，诱导p27经泛素蛋白酶体途径降解。skp2的表达在正常细胞周期发展过程中受到严格调控，而skp2过表达存在于多种肿瘤类型中，且与较短的总生存期、肿瘤转移和肿瘤耐药相关。针对skp2这个靶点的抑制剂主要通过阻断skp1-skp2相互作用，使得skp2的底物蛋白(如p27)不被泛素化降解，形成g0/g1期阻滞，抑制癌细胞的生长。

3、化橘红是《中华人民共和国药典》收载的中药品种，是广东省化州道地药材，属于首批岭南中药材八大保护品种之一。化橘红(exocarpium citri grandis)又称化州橘红，是芸香科植物化州柚(citrus grandis‘tomentosa’)或柚(citrus grandis(l.)osbeck)的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。化橘红性味辛、苦、温，归肺、脾经，具有理气宽中、燥湿化痰的功效。主要用于咳嗽痰多、食积伤酒、呕恶痞闷的治疗。中医药作为我国具有独特优势的医疗体系，已成为肺癌辅助治疗不可或缺的重要组成部分，对肺癌的预后及改善发挥了巨大作用。肺癌在中医中可归属于“痰饮”范畴，痰既是肺癌发病的原因，也是其病理产物，肺癌的发生发展甚至转移均与“痰”密切相关。辛能散能行、苦能燥湿，脾为生痰之源，肺为贮痰之器。化橘红能行气燥湿化痰，并能温肺化痰散结，可用于肺癌的治疗。在本发明中，我们证明化橘红石油醚萃取物能显著降低skp2蛋白表达并促进p27蛋白升高，化橘红石油醚萃取物具有诱导细胞周期g0/g1期阻滞作用，因此能有效抑制肺癌细胞增殖，在体内实验中经口服给药表现理想的抗肺癌效果，具有广泛的临床应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种化橘红石油醚萃取物的制备方法及其应用，解决了背景技术中提到的技术问题。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种化橘红石油醚萃取物的制备方法，包括以下步骤：

3、s1：用无水乙醇浸泡化橘红干燥样品粉末然后进行超声提取；

4、s2：对提取液进行过滤，在过滤药渣中再加入无水乙醇浸泡超声；

5、s3：多次重复s2操作；

6、s4：对所有过滤提取液减压蒸发乙醇并浓缩至稠膏，冷冻干燥即得化橘红乙醇提取物粉末；

7、s5：取化橘红乙醇提取物粉末，加入蒸馏水重悬，并用石油醚萃取，经浓缩和冷冻干燥后，得到化橘红石油醚萃取物浸膏。

8、进一步的：所述s1中无水乙醇体积与化橘红干粉的质量比为10：1，所述s5中蒸馏水体积与化橘红乙醇提取物粉末的质量比为10：1。

9、进一步的：所述s5中采用石油醚萃取的次数为3次。

10、本发明还提供了化橘红石油醚萃取物在制备抗肿瘤药物中的应用，该药物用于治疗细胞周期异常相关肿瘤疾病，包括但不限于肺癌。

11、进一步的：所述化橘红石油醚萃取物能阻滞肺癌细胞周期于g0/g1期。

12、进一步的：所述化橘红石油醚萃取物通过影响skp2/p27信号通路诱导细胞周期阻滞。

13、进一步的：抗肿瘤药物包括化橘红石油醚萃取物和药学上可接受的药物辅料。

14、综上所述，本发明具有以下有益效果：

15、1、本发明的化橘红石油醚萃取物制备方法简单，抗肿瘤效果显著，安全无毒，有作为新的抗肺癌药物开发研究的潜力。在临床上具有抗肺癌以及其他skp2/p27信号通路异常相关癌症的应用前景；

16、2、化橘红石油醚萃取物能通过影响skp2/p27信号通路将肺癌细胞阻滞在g0/g1期，进而抑制肺癌细胞增殖，干预肺癌进展，可以经口服给药，而且对小鼠肝肾等主要器官无明显毒副作用。

技术特征：

1.一种化橘红石油醚萃取物的制备方法，其特征是：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种化橘红石油醚萃取物的制备方法，其特征是：所述s1中无水乙醇体积与化橘红干粉的质量比为10：1；所述s5中蒸馏水体积与化橘红乙醇提取物粉末的质量比为6:1-10：1。

3.根据权利要求1所述的一种化橘红石油醚萃取物的制备方法，其特征是：所述s5中采用石油醚萃取的次数为3次。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的制备方法所制备的化橘红石油醚萃取物在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是：所述化橘红石油醚萃取物能阻滞肺癌细胞周期于g0/g1期。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征是：所述化橘红石油醚萃取物通过影响skp2/p27信号通路诱导细胞周期阻滞。

7.根据权利要求4所述应用，其特征在于，抗肿瘤药物包括化橘红石油醚萃取物和药学上可接受的药物辅料。

技术总结
本发明公开了化橘红石油醚萃取物的制备方法及抗肿瘤药物中应用，涉及生物医学技术领域，其技术方案要点是：包括以下步骤：S1：用无水乙醇浸泡化橘红干燥样品粉末然后进行超声提取；S2：对提取液进行过滤，在过滤药渣中再加入无水乙醇浸泡超声；S3：重复S2操作两次；S4：对所有过滤提取液减压蒸发乙醇并浓缩至稠膏，冷冻干燥即得化橘红乙醇提取物粉末；S5：取化橘红乙醇提取物粉末，加入蒸馏水重悬，并用与蒸馏水悬浊液等体积的石油醚萃取，经浓缩和冷冻干燥后，得到化橘红石油醚萃取物浸膏。化橘红石油醚萃取物能通过影响Skp2/p27信号通路将肺癌细胞阻滞在细胞周期G0/G1期，进而抑制肺癌细胞增殖，干预肺癌进展，而且对小鼠肝肾等主要器官无明显毒副作用。

技术研发人员：刘永强,詹若挺,黄达,徐晖,刘昌辉
受保护的技术使用者：广州中医药大学(广州中医药研究院)
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14