一种低剂量重楼皂苷调节TNBS免疫应答的方法与流程

本发明属于生物，尤其涉及一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法。

背景技术：

1、炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,ibd)是累及肠道的慢性非特异性炎症性疾病；主要包括两类疾病，即溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,uc)与克罗恩病(crohn’sdisease,cd)；其主要临床表现为腹痛，腹泻，粘液脓血便，消瘦等；ibd的发病机制尚未明确，可能与免疫、遗传及环境等因素密切相关；其中，toll样受体(tlr)2&4/核因子kappa-b(nf-κb)与ibd密切相关，激活tlr2&4/nf-κb信号通路可触发级联反应，调控结肠粘膜，进而影响ibd的发生和发展；目前ibd的治疗，临床常予氨基水杨酸类，糖皮质激素类，免疫抑制剂类及生物制剂类等治疗方案，其在治疗疾病时常常会有潜在的不良反应及严重的并发症，而中医药在治疗ibd方面具有一定独特优势；其中，重楼中的重楼皂苷(rpts)具有清热解毒、消肿止痛等功效，值得关注；重楼是云南白药、季德胜蛇药片及宫血宁胶囊等中药制剂的主要组成成分，也是导师传承国医大师徐景藩教授治疗难治性ibd的经验用药；研究发现以重楼为主的复方提取物可以缓解实验性结肠炎小鼠的症状并且发挥了良好的治疗作用，但其机制尚不明确，因此，亟需一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法来解决以上问题。

技术实现思路

1、针对上述存在的技术不足，本发明的目的是提供一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，以解决背景技术中提出的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，包括以下步骤：

4、s1、将若干只雄性spf级balb/c小鼠，随机分为正常对照组、tnbs模型组、美沙拉嗪组及重楼总皂苷组；

5、s2、采用tnbs建立小鼠急性实验性结肠炎模型，共11天；

6、s3、每天监测体质量、粪便性状、生存率指标，通过比较终点生存率、疾病活动指数评分、结肠宏观损伤指数评分、结肠组织学损伤指数评分指标，评估rpts对小鼠急性实验性结肠炎的治疗作用；

7、s4、采用实时定量聚合酶链反应方法检测结肠组织tlr2&4/nf-κb、il-1β、tnf-α的mrna水平及免疫组化方法检测tlr2&4/nf-κb的蛋白表达水平；

8、s5、并应用luminex多功能液相芯片分析系统，对血清中的细胞因子进行定量检测。

9、优选地，一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，还包括以下步骤：

10、s11、将若干只雄性spf级sd大鼠，随机分为正常对照组、tnbs模型组、美沙拉嗪组、重楼总皂苷低剂量组及重楼总皂苷高剂量组；

11、s22、采用tnbs建立大鼠急性实验性结肠炎模型，共14天；

12、s33、每天监测体质量、粪便性状、生存率指标，通过比较终点生存率、疾病活动指数评分、结肠宏观损伤指数评分、结肠组织学损伤指数评分指标，进一步探究rpts对大鼠急性实验性结肠炎的量效关系；

13、s44、再检测全血细胞中白细胞计数、中性粒细胞百分比、单核细胞百分比指标；

14、s55、采用rt-pcr方法检测结肠组织中il-1β及tnf-α的mrna水平。

15、本发明的有益效果在于：rpts能够改善tnbs诱导急性实验性结肠炎模型鼠的症状，具有良好的治疗作用，提高了模型鼠的终点生存率；实验结果提示rpts低剂量组治疗作用较好，其机制与rpts下调结肠黏膜局部tlr2&4/nf-κb炎性信号通路，调节相关细胞因子及炎性指标有关；通过适度免疫调节对机体起到保护作用，缓解模型鼠的全身炎症及免疫反应。

技术特征：

1.一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：所述步骤s1中雄性spf级balb/c小鼠总数为40只，正常对照组、tnbs模型组、美沙拉嗪组及重楼总皂苷组均为10只雄性spf级balb/c小鼠，所述正常对照组为nc组，所述tnbs模型组为tm组，所述美沙拉嗪组为me组，所述重楼总皂苷组为rs组。

3.如权利要求1所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：所述步骤s3中疾病活动指数评分为dai评分，所述结肠宏观损伤指数评分为cmdi评分，所述结肠组织学损伤指数评分为tdi评分，所述步骤s4中聚合酶链反应方法为rt-pcr方法，所述免疫组化方法为ihc方法。

4.如权利要求1所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：所述步骤s5中细胞因子为15种分别为：il-1α，il-12p70，il-17，tnf-α，fas ligand/tnfsf6，tnfrii/tnfrsf1b，tweak/tnfsf12，rankl/tnfsf11，baff/tnfsf13b，cxcl10/ip-10，ccl3/mip-1α，ccl4/mip-1β，ccl19/mip-3β，ccl20/mip-3α，icam-1/cd54。

5.如权利要求1所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：还包括以下步骤：

6.如权利要求5所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：所述步骤s11中雄性spf级sd大鼠总数为50只，正常对照组中雄性spf级sd大鼠为7只、tnbs模型组中雄性spf级sd大鼠为13只、美沙拉嗪组中雄性spf级sd大鼠为10只，重楼总皂苷低剂量组中雄性spf级sd大鼠为10只，重楼总皂苷高剂量组中雄性spf级sd大鼠为10只，所述正常对照组为nc组，所述tnbs模型组为tm组，所述美沙拉嗪组为me组，所述重楼总皂苷低剂量组为rl组，所述重楼总皂苷高剂量组为rh组。

7.如权利要求5所述的一种低剂量重楼皂苷调节tnbs免疫应答的方法，其特征在于：所述步骤s33中疾病活动指数评分为dai评分，所述结肠宏观损伤指数评分为cmdi评分，所述结肠组织学损伤指数评分为tdi评分。

技术总结
本发明公开了一种低剂量重楼皂苷调节TNBS免疫应答的方法，包括以下步骤：S1、将若干只雄性SPF级BALB/c小鼠，随机分为正常对照组、TNBS模型组、美沙拉嗪组及重楼总皂苷组；S2、采用TNBS建立小鼠急性实验性结肠炎模型；S3、比较终点生存率、结肠宏观损伤指数评分、结肠组织学损伤指数评分指标，评估RPTS对小鼠急性实验性结肠炎的治疗作用。本发明优点在于：RPTS能够改善TNBS诱导急性实验性结肠炎模型鼠的症状，具有良好的治疗作用，提高了模型鼠的终点生存率；实验结果提示RPTS低剂量组治疗作用较好，其机制与RPTS下调结肠黏膜局部TLR2&4/NF‑κB炎性信号通路，调节相关细胞因子及炎性指标有关；通过适度免疫调节对机体起到保护作用，缓解模型鼠的全身炎症及免疫反应。

技术研发人员：吴静,王卯,刘可心,吴星星,吴琪
受保护的技术使用者：南京鼓楼医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15